学术投稿

肠出血性大肠杆菌O157:H7的紧密黏附素基因eae的测序及生物信息学分析

吴仲鑫;周勇;贡树基;彭丽娟;仲华;万成松

关键词:大肠杆菌O157:H7, eae基因, 克隆, 序列测定, 生物信息学分析
摘要:目的 克隆编码肠出血型大肠杆菌O157:H7的紧密黏附素eae基因,并对其进行测序及生物信息学分析,为研究EHEC与宿主细胞相互作用奠定基础.方法 利用PCR技术扩增eae基因,经过纯化,将其定向插入克隆载体PMD19-T simple vector并进行测序,应用生物信息学软件分析其生物学特性.结果 用PCR方法扩增eae基因,大小为2802 bp,编码934个氨基酸,用DNAstar5.0软件分析紧密黏附素(Intimin)蛋白的生物活性,在202~210、510~520、716~735个氨基酸残基的肽链上,显示该蛋白具有良好的亲水性,在175~220、300~315、550~610、710~780、825~880个氨基酸残基的肽链上具有良好的柔韧性,在220~300、615~710个氨基酸残基的肽链上,显示该蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究用PCR法扩增出了O157:H7的eae基因,成功构建了肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密黏附素eae基因的重组质粒,并分析了黏附素蛋白的亲水性、柔韧性、抗原性,为进一步研究大肠杆菌O157:H7黏附素的致病机制奠定了基础,为下一步表达出Intimin蛋白,进一步研究该蛋白与宿主细胞的粘附、免疫原性、抗原抗体反应提供了理论依据.
热带医学杂志相关文献
  • 深圳市某小学一起不明原因发热暴发现场的流行病学调查

    目的 了解某小学不明原因发热的疫情特征,探讨其危险因素、传播模式和病原体,制定控制措施.方法 制定病例定义:临床病例发热≥37.5℃、扁桃体肿大,并有咽痛、乏力、咳嗽、头晕、头痛、畏寒、皮疹症状之一者.开展病例对照研究和回顾性队列研究,用血平板及生化实验进行细菌培养及鉴定,用PCR进行流感检测.结果 共搜索43例发热病例,罹患率为3.3%(43/1313),发病高峰在5月15 日;主要临床症状为:100%发热和扁桃体肿大、97.7%咽痛和乏力、9.3%出现皮疹、咳嗽和头晕、7.0%出现畏寒、4.7%出现头痛;58.1%病例集中发生在二年级一班,该班级的罹患率为45.5%.病例对照研究:和病例接触是危险因素(OR=5.23,95%CI=1.20~28.38),进食前洗手是保护性因素(OR=0.22,95%CI=0.05~0.82).实验室检验:鉴定病原体为α-溶血性链球菌,在对照人群没有培养出优势菌株.流感病毒PCR检测均为阴性.结论 经过流行病学调查、临床表现和实验室检测,可以确定此起小学发生不明发热的暴发由α-溶血性链球菌引起的.因此控制措施的重点应为培养学生进食前洗手、定期更换牙刷等良好的卫生习惯;落实学生晨检制度,及时发现、及时隔离和治疗病例,从源头上预防疾病的发生.

    作者:梅树江;马汉武;张廷禄;曹彬;王兰;谢旭 刊期: 2008年第02期

  • 围手术期心跳骤停的危险因素分析

    目的 探讨围手术期心跳骤停的危险因素,为有效预防围手术期心跳骤停提供科学依据.方法 采用病例对照研究,选取1996-2006年菏泽市立医院16例围手术期心脏骤停病人为病例组,同时选择同期、性别、年龄匹配的60例未发生心跳骤停的病人作为对照组,对相关危险因素进行单因素和多因素Logistic回归分析.结果 术前心脏功能差、术中缺氧、失血性休克、电解质紊乱、迷走神经反射是围手术期病人发生心跳骤停的危险因素,OR值分别为2.625、1.055、1.901、6.337和6.507.结论 在围手术期心跳骤停的预防工作中,改善择期手术病人的心脏功能;术中注意给氧,输血,维持电解质平衡,避免牵拉迷走神经是有效的预防措施.

    作者:韩翠珍 刊期: 2008年第02期

  • 间期荧光原位杂交对骨髓增生异常综合征患者5号和7号染色体异常的检测

    目的 筛选经济、实用的探针组合提高MDS染色体异常的检出率;比较常规细胞遗传学分析(CCA)及荧光原位杂交(FISH)两种技术在MDS染色体异常检测中的灵敏度和特异性.方法 采用CCA法和FISH法分析48例患者骨髓细胞的染色体异常情况.结果 CCA检出染色体异常18例(37.5%),其中复杂异常4例(8.3%),+8异常8例(16.6%)、-5/5q-异常5例(10-4%),-7/7q-异常5例(10.4%)、20q-异常2例(4.6%)、不一致的易位3例(6.2%).FISH除证实CCA发现的-5/5q-和-7/7q-各5例外,还检出2例有5q-,5例有7q-,1例有-7.从而使-5/5q-和-7/7q-的检出率分别增至14.5%和22.9%.平均随访12个月,38例存活,10例死亡,5例转变为急性白血病.结论 CCA结合FISH能提高MDS染色体异常的检出率,与CCA相比,采用组合探针的FISH更为敏感和特异.

    作者:贺蓉;肖晓素;刘晓翌;卢丽华;王勇强;彭黎明 刊期: 2008年第02期

  • 上海市人群附红细胞体感染状况的调查

    目的 了解上海市人群附红细胞体的感染状况.方法 按照分层抽样调查的方法在地处中心城区、城郊结合区、郊区的3个区各抽取4个村或居委会作为调查点,血涂片镜检附红细胞体.结果 共调查1603户的3003人.人群附红体的标化感染率为17.81%,3个区的标化感染率分别为29.50%、11.89%、7.73%,其差异具有统计学意义(χ2=196.34,P<0.05),且有从中心城区向郊区降低的趋势(χ2=173.88,P<0.05);男女感染率(经年龄标化)分别为16.50%和19.82%,差异具有统计学意义(χ2=5.18,P<0.05);年龄组感染率中以10~19岁组高,与其余年龄组的感染率差异具有统计学意义(χ2=213.59,P<0.05).感染人群总的平均感染度为1.66%,3个区的平均感染度分别为2.06%、1.20%、1.04%(F=8.19,P<0.05);年龄、性别感染度差异无统计学意义(F=1.27,P>O.05;t=1.76,P>0.05);感染者具有家庭聚集性分布(χ2=96.95,P<0.05).结论 上海市人群中存在附红细胞体感染,主要表现为轻度感染,且具有地区、年龄分布差异和家庭聚集性等特点.

    作者:朱民;蔡黎;王龙英;王真瑜;马杏宝 刊期: 2008年第02期

  • 治愈晚期丝虫病2例

    目的 为提高丝虫病的诊断和治疗水平.方法 根据病例资料进行分析.结果 病例确诊为丝虫病,经长期驱虫治疗治愈.结论 不明原因的下肢水肿有可能为象皮肿,早中期象皮肿经长期驱虫治疗可治愈.

    作者:刘淑卿 刊期: 2008年第02期

  • 慢性乙肝患者外周血HBcAg18-27V/I变异体特异性淋巴细胞分析

    目的 分析不同HBcAg18-27V/I变异体特异性淋巴细胞的频数在慢性乙肝患者外周血中的差异.方法 收集44例ALTo≥2×ULN的慢性乙肝患者外周血淋巴细胞,通过PCR方法分析感染者病毒学背景(HBV基因型、HBcAg18-27V/I、HLA-A2基因型),应用流式细胞仪分别检测HBcAg18-27V-Tetramer(+)CD8(+)和HBcAg18-271-Tetramer(+)CD8(+)的淋巴细胞频数.结果 华南地区慢性乙肝患者主要为HLA-A2基因型(22/44);感染的HBV主要为B基因型(35/44).其中HBcAg18-27为I变异体的占优势(43/44),在A2阳性组中,HBcAg18-27I-Tetramer(+)CD8(+)的淋巴细胞频数与HBcAg18-27V.Tetramer(+)CD8(+)的淋巴细胞频数(0.41±0.52 vs 0.28±0.43)比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 在HBV基因型B/C为主的地区,应用HBcAg18-27V表位进行细胞免疫学研究而不考虑HBV病毒学背景的结果可能导致一定的偏差.

    作者:马世武;梁敏锋;于乐成;王战会;周彬;侯金林 刊期: 2008年第02期

  • 2006年南阳市法定传染病疫情分析

    目的 分析南阳市2006年法定传染病疫情,了解应用网络直报后传染病监测工作的质量.方法 采用描述流行病学方法对南阳市2006年传染病疫情资料进行统计分析.结果 2006年全市共报告乙类传染病18种共29247例,死亡165例,报告发病率为295.88/10万;报告丙类传染病6种共1863例,无死亡病例.发病数居前二位的分别为肺结核和乙型病毒性肝炎,分别占乙类传染病报告总数的38.96%和38.03%.结论 应用网络直报后南阳市加大对传染病的监测防控力度,防治措施得到落实,疫苗预防相应传染病得到有效控制,但病毒性肝炎、疟疾、血源及性传播传染病呈上升趋势,尤其是血源与性传播传染病发生的重点人群为青壮年,应引起关注.必须加大血源及性传播疾病的防治力度,遏制疫情的快速上升.

    作者:卢千超;彭阳;张小敏;柳曙光;王卫民 刊期: 2008年第02期

  • 免疫组织化学ABC法观察扁桃酸对小鼠急性弓形虫病肝脏病变的作用

    目的 用免疫组织化学ABC法观察扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病肝脏的病变,探讨扁桃酸对病变肝脏的保护作用.方法 扁桃酸200 mg/kg,2次/d,口服和静脉注射治疗弓形虫感染小鼠,同时设立乙胺嘧啶及扁桃酸药物对照组,治疗不同时间后取肝脏组织,常规制作病理切片,免疫组织化学ABC法常规染色.结果 阳性对照组可见大量肝细胞坏死区,其内可见形态典型的弓形虫速殖子,扁桃酸治疗组仅见少量散在的黄染肝细胞,乙胺嘧啶对照组小鼠肝组织内也仅见少量散在的黄染肝细胞,但肝细胞受到明显的毒性损害.因而扁桃酸能有效地抑制弓形虫速殖子入侵肝细胞.减轻弓形虫速殖子对肝细胞的破坏程度,且扁桃酸对肝细胞的毒副作用极少.结论 扁桃酸对弓形虫感染小鼠的肝脏有明显的保护作用.

    作者:司开卫;程彦斌;李哲;李小其;杨君华;李琛 刊期: 2008年第02期

  • 茂名市公共场所中央空调冷却水中军团菌污染状况调查

    目的 调查茂名市公共场所大型中央空调冷却水中军团菌的污染状况及主要血清型.方法 于2006年8月至2007年7月,共采集茂名市区部分商场、酒店等中央空调冷却水24份,应用GVPC、BCYE、BCY培养基进行军团分离培养、生化鉴定及血清分型.结果 冷却塔冷却水中军团菌的污染率达37.5%(9/24),血清型有121、LJ两种,以LI(6/9)为主.结论 茂名市公共场所大型中央空调冷却水中军团菌检出率较高,对市民健康构成了威胁.

    作者:龙彩云;廖国东;许铭清 刊期: 2008年第02期

  • EXCEL中SUMIF和DSUM函数在血吸虫病资料汇总中的应用

    目的 对比分析各类流行村的各项疫情指标的变化,以考核和评价荆州市重点血防项目实施2年后的效果.方法 应用EXCEL建立453个抽样村的数据库,采用EXCEL中SUMIF或DSUM函数,对各类流行村的病情、螺情等疫情指标分类求和.结果 用SUMIF或DSUM函数分别统计出了基础年与考核年的一、二、三、四、五类村中各项疫情指标的和.结论 应用EXCEL中的SUMIF或DSUM函数,能高效、便捷的对血吸虫病疫情资料进行分类统计分析.

    作者:袁梅枝;王加松;何亮才;彭孝武;董娟 刊期: 2008年第02期

  • HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者应用阿德福韦治疗过程中HBV P区变异情况分析

    目的 研究HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者应用阿德福韦治疗过程中P区变异情况.方法 选取4例服用阿德福韦患者的系列血清,包括用药前的基线血清(Baseline,简称BL)、用药后半年(28周)、一年(52周)、二年(92周)的血清,将4份系列血清用一片段PCR法进行HBV全基因组克隆、测序,并将测序结果进行基因型及血清型分型、P区变异分析.结果 4例系列血清的基因型及血清型分型:1号为C基因型/adrq+血清型;2号为B、C混合基因型/adw2、adrq+混合血清型;3号、4号为B基因型/adw2血清型.在P基因的反转录酶区,有几处非常有意义的有义突变,其中有2例病人在P-ORF与S-ORF重叠区,即反转录酶区存在1处完全相同的热点变异,很可能会影响反转录酶的活性,而使HBV对ADV产生耐药逃逸.结论 HBeAg阳性的CHB患者应用阿德福韦治疗过程中,P区有几处非常有意义的氨基酸变异,很可能与HBV对阿德福韦的耐药逃逸有关.

    作者:卢建溪;项凤梅;谢东英;徐启桓;朱明芬;李莉;李刚 刊期: 2008年第02期

  • 利血平对耐药结核分枝杆菌临床株的作用

    目的 观察泵抑制剂(利血平)对耐药结核分枝杆菌临床分离株的作用.方法 应用3组BacT.ALERT3D培养仪系统的培养基,分别命名为A、B、C组培养基.3组培养基均接种42株耐药结核分枝杆菌临床分离株,其中A、B组同时加入利福平1 μg/mL;环丙沙星2 μg/mL.;利福平1 μg/mL和环丙沙星2 μg/mL;A、C组同时加入利血平20 mg/L;C组未加入任何抗结核药物.结果 在A组培养基中,耐利福平1μg/mL的14株菌株中有2株恢复对利福平的敏感性,12株仍然耐药;耐环丙沙星2μg/mL的6株菌株和耐利福平1μg/mL及环丙沙星2μg/mL的22株菌株全部恢复药物敏感性.在B组培养基中,42株耐药结核分枝杆菌临床分离株,药物耐药性无变化.在C组培养基中,42株耐药结核分枝杆菌临床分离株明显生长,说明利血平对所研究菌株无抑制作用.A组与B组培养基细菌的药物敏感性差异有统计学意义(P<0.01).结论 结核分枝杆菌存在耐药机制之一的外排系统;泵抑制剂之一利血平对耐药的结核分枝杆菌临床分离株有抑制其外排作用,使结核分枝杆菌恢复敏感性.

    作者:邝小佳;蔡杏珊;张宇青;邝浩斌;陈华;谭耀驹 刊期: 2008年第02期

  • 十二指肠引流对慢性重型肝炎胆道感染治疗的影响

    目的 了解十二指肠引流对慢性重型肝炎胆道感染治疗的影响及慢性重型肝炎胆道感染的细菌分布.方法 在胃镜引导下行十二指肠引流.并对胆汁进行细菌培养及药敏试验,根据药敏试验选择敏感抗生素进行治疗.结果 慢性重型肝炎的胆汁细菌培养的阳性率高达93.30%;细菌以G-杆菌为主,占,55.93%,其次G+球菌,占27.97%,真菌占16.10%;行十二指肠引流后有针对性地使用敏感抗生素进行治疗的慢性重型肝炎组治愈率74.30%,而未进行十二指肠引流组的慢性重型肝炎治愈率仅51.48%.结论 慢性重型肝炎合并胆道感染时使用十二指肠引流找出病原菌,有针对性地使用抗生素能明显提高慢性重型肝炎的治愈率.

    作者:范慧敏;张春兰;杨湛 刊期: 2008年第02期

  • 赶黄草水提取物利胆退黄作用的研究

    目的 探讨赶黄草水提取物的利胆退黄作用.方法 采用胆管引流法,观察赶黄草水提取物对正常大鼠胆汁分泌量的影响;采用胆管结扎致大鼠梗阻性黄疸模型和α-萘异硫氰酸酯(ANIT)致胆汁淤积模型,观察赶黄草水提取物对模型大鼠血清总胆红素(TBIL)含量、碱性磷酸酶(ALP)活性、γ-谷氨酰转移酶(GGT)活性、门冬氨酸转氨酶(AST)活性、丙氨酸转氨酶(ALT)活性的影响.结果 赶黄草水提取物能增加正常大鼠胆汁的分泌量,但对血清TBIL含量无影响;对于胆管结扎所致梗阻性黄疸模型大鼠和ANIT所致的胆汁淤积模型大鼠,赶黄草水提取物能显著降低血清TBIL含量,抑制血清ALP、GGT、AST和ALT活性.结论 赶黄草水提取物具有明显的利胆退黄作用.

    作者:张中贤;黄剑臻 刊期: 2008年第02期

  • 2005年湛江市、韶关市、汕头市人兽弓形虫感染状况调查

    目的 了解广东省湛江市、韶关市、汕头市的人兽弓形虫感染情况.方法 收集3个地区人、猪、鼠血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测弓形虫IgG抗体.结果 湛江市检测猪血清279份,阳性13份,阳性率为4.66%,检测鼠血清93份,阳性7份,阳性率7.53%;韶关市检测人血清42份,阳性0份,检测鼠血清95份,阳性3份,阳性率3.16%;汕头市检测人血清50份,阳性6份,阳性率为12.00%,检测鼠血清100份,阳性3份,阳性率为4.00%.结论 汕头市人群存在弓形虫感染,湛江市、韶关市、汕头市兽类存在弓形虫感染,3个地区的鼠类弓形虫感染率无统计学意义,家鼠、野鼠的弓形虫感染率也无统计学意义.

    作者:梁秋光;曾敏;潘珠;杨柳;冯志勇;杨华源 刊期: 2008年第02期

  • 广东省阳春市褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染的调查

    目的 了解广东省阳春市褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫的感染情况.方法 在阳春当地采集野生的褐云玛瑙螺和福寿螺,在实验室用人工胃液消化法检查其中的广州管圆线虫幼虫并记数.用检获的幼虫感染实验小鼠.结果 共检查褐云玛瑙螺350只,福寿螺465只,广州管圆线虫第3期幼虫的阳性率分别为7.71%和0.86%;感染度分别为1~312和1~4.从上述感染的实验小鼠中检获到广州管圆线虫第4期幼虫,且其血清特异性IgM均为阳性.结论 阳春是广州管圆线虫的自然疫源地,该虫中间宿主以褐云玛瑙螺感染较严重.

    作者:李征途;黄迪;莫如聪;梁敏仪;刘彩虹;邱瑞华;林远远;许丹龙;黄志荣;钟晓旋;韩敦正;陈代雄;张赟;詹希美 刊期: 2008年第02期

  • 肠出血性大肠杆菌O157:H7的紧密黏附素基因eae的测序及生物信息学分析

    目的 克隆编码肠出血型大肠杆菌O157:H7的紧密黏附素eae基因,并对其进行测序及生物信息学分析,为研究EHEC与宿主细胞相互作用奠定基础.方法 利用PCR技术扩增eae基因,经过纯化,将其定向插入克隆载体PMD19-T simple vector并进行测序,应用生物信息学软件分析其生物学特性.结果 用PCR方法扩增eae基因,大小为2802 bp,编码934个氨基酸,用DNAstar5.0软件分析紧密黏附素(Intimin)蛋白的生物活性,在202~210、510~520、716~735个氨基酸残基的肽链上,显示该蛋白具有良好的亲水性,在175~220、300~315、550~610、710~780、825~880个氨基酸残基的肽链上具有良好的柔韧性,在220~300、615~710个氨基酸残基的肽链上,显示该蛋白具有良好的抗原性.结论 本研究用PCR法扩增出了O157:H7的eae基因,成功构建了肠出血性大肠杆菌O157:H7紧密黏附素eae基因的重组质粒,并分析了黏附素蛋白的亲水性、柔韧性、抗原性,为进一步研究大肠杆菌O157:H7黏附素的致病机制奠定了基础,为下一步表达出Intimin蛋白,进一步研究该蛋白与宿主细胞的粘附、免疫原性、抗原抗体反应提供了理论依据.

    作者:吴仲鑫;周勇;贡树基;彭丽娟;仲华;万成松 刊期: 2008年第02期

  • MBP、IL-16在Guillain-Barré综合征发病中的机制

    目的 探讨髓鞘碱性蛋白(MBP)和白细胞介素16(IL-16)在Guillain-Barré综合征(GBS)发病过程中的变化.方法 用ELISA法检测GBS组(36例)中MBP和IL-16的水平,并与多发性硬化(MS)组(45例)及对照组(33例)相比较.结果 GBS、Ms和对照组3组中CSF MBP的水平均明显高于Serum MBP的水平(P<0.01),而CSF IL-16的水平均明显低于Serum IL-16的水平(P<0.01).GBS组CSF中MBP的水平明显高于对照组(P<0.01)但低于MS组(P<0.01),Serum中MBP水平和对照组相比无明显差异但低于MS组(P<0.01).CSF中的IL-16水平明显高于对照组(P<0.05),但与MS组相比无明显差异,Serum中IL-16的水平低于对照组(P<0.01)但与MS组相比无明显差异.结论 GBS发病早期神经根髓鞘的脱失可能更严重,中枢神经系统局部产生的IL-16参与了GBS神经根脱髓鞘的炎症过程.

    作者:田作军;赵薛旭;李作汉;张帆;曹福田;董亚贤 刊期: 2008年第02期

  • 广东两个不同地区电信员工幽门螺杆菌感染的血清流行病学调查

    目的 通过分析广州市与汕尾市两个地区电信员工幽门螺杆菌(Hp)感染的血清学调查资料,以了解广东中心城市与沿海城市的幽门螺杆菌感染的流行差异.方法 使用免疫胶体金法对2006年9月至2007年1月来我院进行健康体检的广州市和汕尾市电信员工(共2379人)进行幽门螺杆菌感染的血清学调查.结果 广州市与汕尾市两个地区电信员工幽门螺杆菌总感染率分别为23.73%和34.35%,汕尾市幽门螺杆菌总感染率显著高于广州市(χ2=29.964,P<0.01);两个地区电信员工幽门螺杆菌感染率随年龄的增加而增加,51岁以上年龄组为感染率高峰组;广州市男女的阳性率分别为24.82%和20.97%,两者差异无统计学意义(xz=2.260,P=0.103);汕尾市男女的阳性率分别为35.14%和33.65%,两者差异也无统计学意义(χ2=0.191,P=0.662).结论 广东中心城市电信员工Hp感染率明显低于沿海城市,各地区有必要针对本地区人群开展相应的流行病学调查,制定正确、有效的预防措施.

    作者:劳小斌;陈佑明;邱春嫦 刊期: 2008年第02期

  • 鲍曼不动杆菌多态性DNA指纹图与药敏谱对医院感染管理的指导作用

    目的 建立鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)药敏谱及基因分型指纹图谱,探讨其对医院感染管理的指导作用.方法 收集2006年9月至2007年9月神经外科病房住院患者标本中分离的29株AB以及同年从该病房环境中分离的21株AB,以3个月为一期,采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对医院环境中AB和临床标本中分离的AB进行基因分型并建立DNA指纹图谱,同时结合WHO推荐的K-B法进行药敏试验,建立药敏谱,比较临床标本中AB与环境中分离的AB药敏谱与RAPD型间差异,判断相关性,并从中分析对医院感染管理的作用.结果 临床标本中AB的药敏谱及分型指纹图谱与环境中AB的药敏谱及分型指纹图谱呈现相关关系.29株临床分离的AB共分12种基因型,15种抗菌药物药敏谱分18个型;呈单一对应关系有10种,一对二的对应关系有2种;二对一的对应关系有一种.21株环境中分离的AB共分10种基因型,15种抗菌药物药敏谱分14个型;呈单一对应关系的有8种,一对二的对应关系的有3种,多株临床标本中AB与环境中AB具有同源性.结论 依据AB药敏谱及DNA分型指纹图谱对感染源的确定、防止耐药菌传播和制定一系列防治措施具有极为重要的指导意义.

    作者:高霞;谢妮;张洪;肖增簧;秦超 刊期: 2008年第02期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会