学术投稿

CTX-M型阴沟肠杆菌的基因克隆及原核表达产物特性研究

江洁华;徐韫健;廖伟娇;李乃健

关键词:CTX-M型, 克隆, 重组质粒, 酶动力学
摘要:目的 对阴沟肠杆菌所产CTX-M型β-内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特性研究.方法 以产CTX-M型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板,设计两对引物PCR扩增CTX-M,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.再将CTX-M基因克隆到pGEX-6P-3表达质粒并转入感受态BL21,选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测.结果 PCR扩增出大小为876 bp和1 067 bp的基因片段,与GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性为100%.CTX-M-3型重组菌株药敏试验结果 与原菌株相比,对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致.结论 重组质粒pGEX-6P-3/CTX-M构建成功,CTX-M-3型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加,亲和力下降.
热带医学杂志相关文献
  • CRISPR及其在原核生物防御系统中的作用

    近来在众多原核生物的基因组中,人们发现一类成簇的、有规律间隔的短回文重复序列(clusteredregularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)结构家族.CRISPR由一类DNA重复单元构成,在功能上与DNA的重组、修复及原核生物的免疫防御系统关系密切.通过对CRISPR和其相关系统(CASS)基因的比较性分析,CRISPR独特的结构和功能引起人们的广泛关注.实验表明CASS的插入序列来源于细胞内的许多染色体外遗传物质,并且以一种类似于真核生物中:RNA干扰(RNAi)系统的机制,在原核生物抵抗入侵的噬菌体和质粒的防御系统中发挥着重要作用.本文对CRISPR的结构、片段来源和功能进行综述.

    作者:王菲;罗恩杰 刊期: 2008年第10期

  • 重庆市九龙坡区2005-2007年麻疹流行病学分析

    目的 了解九龙坡区麻疹的流行病学特征,为更好地制定有针对性的控制措施提供依据.方法 利用办公软件Excel2003对九龙坡区2005-2007年麻疹疫情资料和监测资料进行分析.结果 2005-2007年九龙坡区麻疹年平均发病率为10.59/10万.发病地区有明显的聚集趋势,发病时间有一定的季节性,男女性别比为1.30;发病以0~6岁儿童为主,占病例总数的76.36%,无免疫史病例占67.83%.结论 无麻疹疫苗免疫史是麻疹发病的主要危险因素.以后应减少<8个月婴儿的暴露机会,加强≥8个月龄婴儿麻疹疫苗的及时和有效接种,加强麻疹疫情监测,完善流动儿童的计划免疫管理,减少免疫空白,保护易感人群.

    作者:李中琴;邱财丽;谭学钧 刊期: 2008年第10期

  • 凝血仪用异常质控血浆的制备和应用

    目的 探讨血凝仪用的异常凝血实验室内质控血浆的制备和应用.方法 连续采集多份健康人血浆,经离心混合和防腐处理后,置于37℃水浴箱中,连续进行APTT、PT检测,当PT、APTT值比正常对照延长2~3倍时,立即将混合血浆分装于适用容器内,置-80℃超低温冰箱速冻备用.在仪器配套质控血浆监控下进行检测,确定混合血浆靶值和标准差,以后每天取一份速冻正常混合血浆作为当天质控物与患者标本同时检测,连续观察6个月.结果 自制异常值混合血浆质控图变化较稳定,各项目每个月均数与靶值以及6个月的总体平均值无显著性差异(P>0.05).结论 自制异常质控血浆在-80℃保存时,可稳定6个月以上,有较好的稳定性和均匀性,适用于日常异常凝血室内质控.

    作者:王希平;凌寿坚;陈日荣 刊期: 2008年第10期

  • 广州市2005-2007年水源水质卫生状况调查

    目的 了解广州市水源水水质卫生状况,为水污染的治理提供科学依据.方法 连续3年每季度对市政水厂的水源水采集一次样本,对水源水进行常规分析.结果 3年共采集样本94宗,对32个常规指标和氨氮进行了检测,超标严重的指标依次是色度、混浊度、铝、铁、锰、耗氧量、氨氮、氟化物、细菌总数和粪大肠菌群,合格率在3.13%~93.95%之间,2007年与2005和2006年相比主要超标指标除了铝有所上升外,其余指标均显著降低(P<0.05).结论 广州市水源水的主要污染来源是工业废水和生活污水,主要污染物为有机物.加大治污力度、选取新的水源水,是提高饮用水源水质量的直接和有效方法 .

    作者:石同幸;孙兰;施洁;傅雪松;黄汝明;刘慧;王德东 刊期: 2008年第10期

  • 改良原代大鼠肝细胞的体外分离培养和功能研究

    目的 建立经济有效且功能良好的原代肝细胞体外分离培养系统.方法 采用0.02%胶原酶和Pereoll分离液分离纯化大鼠肝细胞,光镜和电镜下观察HepatoZYME-SFM培养的肝细胞形态,自动生化仪定期检测培养肝细胞功能,RT-PCR半定量方法检测白蛋白mRNA,高效液相色谱法(high performance liquidchromatography,HPLC)分析安定代谢能力.结果 分离纯化的大鼠肝细胞总数(2-3)×108>cells/整肝,活力和纯度大于95%,生长良好形态正常.培养3 d后ALT、AST显著下降,加入NH4>C1后8 d内BUN保持相对稳定高水平,白蛋白合成在第3~4天达到高峰.培养的2~5 d内肝细胞可有效清除安定.结论 通过使用低浓度胶原酶灌流、Percoll分离液纯化以及HepatoZYME-SFM无血清培养基培养,肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力.

    作者:庄鹏;李志莹;范紫香;江元森;姚集鲁 刊期: 2008年第10期

  • 乙肝病毒C基因亚型与病毒变异的相关研究

    目的 探讨乙肝病毒C基因亚型与病毒变异的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对155例慢性HBV C基因感染者,包括78例肝细胞癌(HCC)、36例肝硬化(LC)和41例慢性肝炎(CH)血清样本进行C基因亚型和病毒基本核心启动子(BCP)以及前C区(Pc)变异检测.结果 在HCC、LC和CH研究组中C2的分布均高于C2,同时C1亚型有较高的BCP变异,C2亚型有较高的PC变异(P<0.030).结论 慢性HBV C基因型患者HCC的高发生率和有较严重的肝脏损害可能与其中C1分布较多有关.因此HBV C基因型患者进行亚型鉴定能更好地评估HBV基因型系列对慢性HBV感染疾病进展和临床结局的影响.

    作者:黄月华;曾文挺;梁建新;周彬;梁敏锋 刊期: 2008年第10期

  • 流行性腮腺炎免疫后病例的流行病学特征

    目的 了解广州市流行性腮腺炎免疫后病例的流行病学特征.为进一步预防控制腮腺炎提供依据.方法 对流行性腮腺炎病例进行流行病学个案调查,病例血清进行腮腺炎病毒的基因序列检测.结果 178例调查对象中,82例有腮腺炎疫苗免疫接种史,其中接种1针次腮腺炎疫苗的80例(97.6%).接种2针次的2例(2.4%);接种腮腺炎疫苗后1年内发病的有4例,接种后2年内发病的有3例;免疫后阳性血清病毒SH基因测序结果与疫苗株(Jeryl-Lynn)100%同源性.免疫后病例与未免疫病例相比:不同年龄问的差异有显著性,出现免疫后病例发病高峰向后推移现象;性别和临床症状均无显著性差异.结论 免疫后再感染的病例多数只接种过1针次腮腺炎疫苗;病毒基因与疫苗株同源,未发现变异;免疫后病例与未免疫相比发病年龄高峰向后推移.

    作者:陈健;吴新伟;许建雄;吴雪红;伍业健;蔡衍珊;李志群;李向忠 刊期: 2008年第10期

  • 肛周脓肿的彩超诊断

    目的 探讨经肛高频彩色超声波检查肛周脓肿的声像学特点及术前定位的应用价值.方法 应用经肛高频彩色超声波检查肛周脓肿30例,并与常规专科检查结果 相比较.作声像图描述及术前定位.结果 经肛高频彩色超声波检查肛周脓肿声像图表现为低回声,无回声或混和回声区,病灶区域未测及明显血流信号.结论 经肛高频彩色超声波用于肛周脓肿的诊断在显示病灶位置、形态、保存图像作对照研究等方面具有明显的优点,可为肛周脓肿的研究提供客观依据.

    作者:盛光;白新华;郑凯 刊期: 2008年第10期

  • 紫外线减毒弓形虫对小鼠旋毛虫感染的影响

    目的 探讨紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染的影响.方法 ICR小鼠分为两组,实验组为紫外线减毒弓形虫免疫3周后再感染旋毛虫,对照组为旋毛虫单独感染.结果 与旋毛虫单感染相比,小鼠预先经紫外线减毒弓形虫免疫再感染旋毛虫,在感染后5~14 d其小肠内的成虫数明显增加(肠道排虫明显延迟),而感染后23~90 d其肌肉中的幼虫数明显下降.结论 紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染具有一定的免疫调节和异源性保护作用.

    作者:朱佩娴;郑焕钦;王树萍;张瑞琳;黄世光;吕芳丽 刊期: 2008年第10期

  • 中山市某医院医院感染的流行病学分析

    目的 监测分析某综合性教学医院医院感染的分布动态和变化发展趋势,为制定防治措施以及评价医院感染管理效果提供依据.方法 采取回顾性调查的方法 对某综合性教学医院2002-2006年具有明确医院感染的6 595例病人的临床资料进行统计学分析.结果 各年度医院感染发病率差异有统计学意义(χ2=177.61,P<0.01),2003年以后呈现逐渐下降的趋势.医院感染主要分布部位为呼吸道,其中又以下呼吸道为主,占38.95%,其次为泌尿道,占10.89%.中医康复科,神经外科,血液内科的医院感染率有逐年上升的趋势.各年度检出菌株数排在前2位的病原菌分别是真菌、铜绿假单胞菌.其中,真菌所占的比率呈逐年上升的趋势.结论 连续动态的医院感染的流行病学调查和监测可以把握医院感染的变化趋势.加强重点科室、重点环节和高危人群的专项监测并制定有针对性的预防策略,能够大程度的降低医院感染的发生.

    作者:曾伟英;聂绍发;萧帼稳;王宏;钟振锋;王莉 刊期: 2008年第10期

  • 冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制

    目的 探讨冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲索作用于体外培养的HL-60细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,瑞氏染色法观察细胞凋亡时的形态学变化.应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化.结果 冬凌草甲素可显著的抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用48~60 h后在瑞氏染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低.结论 冬凌草甲素能抑制HL-60细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.

    作者:刘加军;林东军;陆敏强;张俊峰;陈规划 刊期: 2008年第10期

  • 日本血吸虫TCTP编码基因DNA免疫的效果评价

    目的 评价pEGFP-TCTP真核重组质粒联合免疫佐剂CpG诱导小鼠保护性免疫的效果.方法 构建日本血吸虫TCTP真核重组质粒,将pEGFP-TCTP注射入BABL/c小鼠,采用ELISA法检测免疫小鼠血清中IFN-γ,水平;尾蚴攻击感染后45 d处死小鼠,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;小鼠肝脏送病理切片,计算虫卵肉芽肿的数量.结果 TCTP DNA免疫保护性效果显示:实验组与阴性对照组相比,显示出一定的保护性效果,TCTP组的减虫率和减卵率分别为43.91%和53.48%,与GST组效果相似.DNA免疫后及感染后期,TCTP组与PBS对照组血清IFN-γ水平有显著性差异(P<0.05);攻击感染前后组间比较发现,GST组和GST+CpG组有显著性差异(P<0.05),提示CpG显著提高了DNA免疫的效果.结论 SjTCTP DNA免疫能诱导较明显的保护性Th1免疫应答,CpG基序可以有效的诱导保护性Th1免疫应答,是一种有效的DNA免疫佐剂.

    作者:阮志燕;吴忠道;曹爱莲 刊期: 2008年第10期

  • 重庆市基本消除碘缺乏病评估结果分析

    目的 分析重庆市基本消除碘缺乏病的经验和存在的问题,为进一步巩固成果,实现消除碘缺乏病的目标提供参考资料.方法 查阅历年碘盐监测、儿童甲状腺肿和尿碘资料,现场调查居民食用碘盐、8~10岁儿童甲状腺肿和尿碘,分析病情变化特征.结果 2001-2007年,碘盐生产批质量合格率除2001年为92.86%外,其余各年均为100%;碘盐批发企业批质量合格率2001年为88.68%,其余年在92.57%~99.34%之间;居民碘盐食用率为94.2%~98.4%,合格碘盐食用率自2003年起,稳定在90%以上,2007年95%的区县在90%以上;儿童甲状腺肿大率2005年触诊法和B超法分别降至10.5%和9.9%,无20%以上的区县;尿碘中位数稳定在250μg/L左右,<5μg/L者占5%以下.市级评估38个区县,合格碘盐食用率均为90%以上,儿童甲状腺肿大率在10.0%~17.3%之间,尿碘中位数均>100μg/L.国家评估碘盐食用率为99.07%,儿童甲状腺肿大率触诊法为7.76%,B超法为7.27%,尿碘中位数为289.17μg/L.结论 重庆市达到基本消除碘缺乏病标准,但仍存在非碘盐,儿童甲肿率下降缓慢等问题,与生活水平低和蛋白质营养不足有关.仍需加强碘盐监测,防止非碘盐,同时发展经济,提高居民生活水平,增加蛋白质营养,方能取得更好的效果.

    作者:肖邦忠;廖文芳;陈静;李心术;吴成果;罗兴建 刊期: 2008年第10期

  • CTX-M型阴沟肠杆菌的基因克隆及原核表达产物特性研究

    目的 对阴沟肠杆菌所产CTX-M型β-内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特性研究.方法 以产CTX-M型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板,设计两对引物PCR扩增CTX-M,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.再将CTX-M基因克隆到pGEX-6P-3表达质粒并转入感受态BL21,选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测.结果 PCR扩增出大小为876 bp和1 067 bp的基因片段,与GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性为100%.CTX-M-3型重组菌株药敏试验结果 与原菌株相比,对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致.结论 重组质粒pGEX-6P-3/CTX-M构建成功,CTX-M-3型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加,亲和力下降.

    作者:江洁华;徐韫健;廖伟娇;李乃健 刊期: 2008年第10期

  • 广州地区2004-2007年蠕虫感染状况及流行特点

    目的 了解广州市近年来蠕虫在人群中的感染状况及流行特点,为制订防治策略提供依据.方法 根据本市各区的地理分布,连续4年分期分批选择不同职业的人群作为调查对象,采用改良加藤氏厚涂片粪检蠕虫卵.结果 共粪检4 200人,总肠道寄生虫感染率为8.00%,其中肝吸虫感染率为6.98%,钩虫感染率为0.50%,蛔虫感染率为0.31%,鞭虫感染率为0.26%.近年来市区感染率不断增高.职业中以工商人员的感染率高,其次是农民、医务人员及干部;男性感染率明显高于女性.结论 肝吸虫及农村的土源性线虫仍是今后重点防治的寄生虫.采取有效的综合防治措施,加强宣传教育,改变人们不良的饮食习惯,提高防护意识,可降低人群蠕虫感染率.

    作者:张豪;刘小宁;任文锋;郭荣同;高雨藩;潘志明 刊期: 2008年第10期

  • 医学生人文素质教育的意义及其实施途径的探讨

    医学人文素质教育是现代高等医学教育不可缺少的组成部分,在医学教育中具有重要的基础性地位,它的实现要靠教育者在教育的各个环节中主动施行.积极探讨加强医学生人文素质教育的有效实施途径具有重要的现实意义.

    作者:蒋敏;黄泽智;曾铁功;马新华 刊期: 2008年第10期

  • 血常规参数RDW在肝纤维化诊断中的价值

    目的 初步探讨病毒性肝炎患者的红细胞分布宽度(RDW)、平均红细胞体积(MCV)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)等四项血常规参数在肝纤维化诊断中的意义.方法 303例病毒性肝炎患者分为急性肝炎(AH)组、慢性肝炎(CH)组、肝炎肝硬化(LC)组和重型肝炎(SH)组,对照组由16名健康人组成.采用全自动血细胞计数仪检测所有被测试者的血常规参数,并同期对其中179例患者采用放射免疫法检测其血清透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)水平、采用彩色多普勒超声仪测量其脾脏的长径(SPL)及厚度(SPT),研究上述指标之间的相互关系.结果 CH组、LC组和SH组患者的RDW均显著高于对照组,CH组、LC组的MCV显著高于对照组,MPV和PDW在各病毒性肝炎组与对照组之间无显著性差异;病毒性肝炎患者的RDW与其HA、LN、SPT、SPL成显著直线正相关.结论 RDW对慢性肝炎肝纤维化的诊断有一定的临床价值.

    作者:周跃;沈轶瑶;顾宇峰;汤伟 刊期: 2008年第10期

  • 慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立

    目的 针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统.方法 按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞.24~48 h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产:将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6~12 h后.用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞.结果 按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FT细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞.亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆.结论 熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术.同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础.

    作者:贾俊双;孙妍;肖东;姚开泰 刊期: 2008年第10期

  • 药物对旋毛虫病沙鼠脑及心肌NO合成及组织病理的作用

    目的 探讨IFN-γ、L-Arg及L-NNA对旋毛虫病沙鼠的脑及心肌NO合成和脑组织病理变化的影响.方法 经腹腔给予感染旋毛虫后不同时期的沙鼠不同剂量的IFN-γ、L-Arg及L-NNA,检测沙鼠脑及心肌的NO含量,并观察脑组织的病理变化.结果 IFN-γ和L-Arg组沙鼠脑及心肌NO含量明显升高,且随药物浓度的增加而升高.给予L-NNA后,脑和心肌组织阴性对照组、脑7 d组及心肌7 d组和40 d组的NO含量明显降低,且随药物浓度的增加而降低;脑25 d组、40 d组及心肌25 d组的NO量则明显升高,且随药物浓度的增加而升高.大脑组织未见明显病理改变.结论 IFN-γ和L-Arg能促进旋毛虫病的沙鼠脑及心肌的NO合成,给予L-NNA后对不同时期及不同组织则表现出不同的增强或抑制NO合成的双重作用.

    作者:万启惠;贺利芳;刘兴安;张曦 刊期: 2008年第10期

  • 外阴阴道念珠菌病易感因素的分析

    目的 探讨影响女性外阴阴道念珠菌病发病的易感因素.方法 通过病例对照研究,分析比较社会文化、环境、疾病史及生活习惯等多种因素与外阴阴道念珠菌病发病的关系.结果 工作压力大、自身手足癣、常穿紧身裤、洗衣机洗涤内裤、非经期使用卫生护垫、外阴药液清洗等因素在病例组中的发生率明显高于对照组(P<0.05).清洁外阴毛巾经常晾晒、内裤经常晾晒、内裤全棉质地在病例组中的发生率明显低于对照组(P<0.05).结论 外阴阴道念珠菌病好发于月经前期,其发病与环境因素及多种生活卫生习惯有关.

    作者:胡晨;吴小丽;魏善荣;杨京京;张悦;李芹;蔡云清 刊期: 2008年第10期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会