学术投稿

改良原代大鼠肝细胞的体外分离培养和功能研究

庄鹏;李志莹;范紫香;江元森;姚集鲁

关键词:肝细胞, 细胞培养, 分离, 细胞功能
摘要:目的 建立经济有效且功能良好的原代肝细胞体外分离培养系统.方法 采用0.02%胶原酶和Pereoll分离液分离纯化大鼠肝细胞,光镜和电镜下观察HepatoZYME-SFM培养的肝细胞形态,自动生化仪定期检测培养肝细胞功能,RT-PCR半定量方法检测白蛋白mRNA,高效液相色谱法(high performance liquidchromatography,HPLC)分析安定代谢能力.结果 分离纯化的大鼠肝细胞总数(2-3)×108>cells/整肝,活力和纯度大于95%,生长良好形态正常.培养3 d后ALT、AST显著下降,加入NH4>C1后8 d内BUN保持相对稳定高水平,白蛋白合成在第3~4天达到高峰.培养的2~5 d内肝细胞可有效清除安定.结论 通过使用低浓度胶原酶灌流、Percoll分离液纯化以及HepatoZYME-SFM无血清培养基培养,肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力.
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  • 地震灾区消毒与病媒生物控制工作的准备策略

    目的 探讨地震灾区消毒与病媒生物控制工作的准备策略.方法 分析地震灾区四川平武县南坝镇的地震现场情况和消毒与病媒生物控制工作的开展情况.结果 受对地震灾区各种情况的掌握程度、环境条件的影响,及器械等条件不适应,消毒与病媒生物控制工作效率受到一定程度的限制,耗费较多的人力、物力才能达到效果.结论 对地震灾区相关信息的掌握和充分估计,及消毒与病媒生物控制工作的物质的充分准备,可更为有效地开展灾区消毒与病媒生物的控制工作.

    作者:严子锵;肖新才;刘于飞;伍浩颖 刊期: 2008年第10期

  • 医学生人文素质教育的意义及其实施途径的探讨

    医学人文素质教育是现代高等医学教育不可缺少的组成部分,在医学教育中具有重要的基础性地位,它的实现要靠教育者在教育的各个环节中主动施行.积极探讨加强医学生人文素质教育的有效实施途径具有重要的现实意义.

    作者:蒋敏;黄泽智;曾铁功;马新华 刊期: 2008年第10期

  • 血常规参数RDW在肝纤维化诊断中的价值

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    作者:周跃;沈轶瑶;顾宇峰;汤伟 刊期: 2008年第10期

  • 肛周脓肿的彩超诊断

    目的 探讨经肛高频彩色超声波检查肛周脓肿的声像学特点及术前定位的应用价值.方法 应用经肛高频彩色超声波检查肛周脓肿30例,并与常规专科检查结果 相比较.作声像图描述及术前定位.结果 经肛高频彩色超声波检查肛周脓肿声像图表现为低回声,无回声或混和回声区,病灶区域未测及明显血流信号.结论 经肛高频彩色超声波用于肛周脓肿的诊断在显示病灶位置、形态、保存图像作对照研究等方面具有明显的优点,可为肛周脓肿的研究提供客观依据.

    作者:盛光;白新华;郑凯 刊期: 2008年第10期

  • 诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR的研究

    目的 建立诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏的检测方法,为疾病预防控制提供可靠的依据.方法 根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅰ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立一步法实时荧光RT-PCR快速检测反应体系,优化反应条件,评价反应体系的灵敏度、特异性、重复性.并与常规RT-PCR比较.结果 诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR检测时限短.仅1 h就出结果 ,与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒、诺如病毒遗传组Ⅱ型无交叉反应,低检出下限为100拷贝/反应.比常规RT-PCR灵敏100倍,5份浓度不同的诺如病毒遗传组Ⅰ型标本重复检测5次,平均Ct值变异系数范围为0.39%~1.02%.结论 诺如病毒遗传组Ⅰ型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏、重复性好,可应用于突发公共卫生应急检测和诺如病毒遗传组Ⅰ型监测,提高快速检测能力.

    作者:谭翰清;郭赐贶;谭海芳;陈华;程洁萍;林凤;孔秀珍;丁丽娜 刊期: 2008年第10期

  • 广州市2005-2007年水源水质卫生状况调查

    目的 了解广州市水源水水质卫生状况,为水污染的治理提供科学依据.方法 连续3年每季度对市政水厂的水源水采集一次样本,对水源水进行常规分析.结果 3年共采集样本94宗,对32个常规指标和氨氮进行了检测,超标严重的指标依次是色度、混浊度、铝、铁、锰、耗氧量、氨氮、氟化物、细菌总数和粪大肠菌群,合格率在3.13%~93.95%之间,2007年与2005和2006年相比主要超标指标除了铝有所上升外,其余指标均显著降低(P<0.05).结论 广州市水源水的主要污染来源是工业废水和生活污水,主要污染物为有机物.加大治污力度、选取新的水源水,是提高饮用水源水质量的直接和有效方法 .

    作者:石同幸;孙兰;施洁;傅雪松;黄汝明;刘慧;王德东 刊期: 2008年第10期

  • 流行性腮腺炎免疫后病例的流行病学特征

    目的 了解广州市流行性腮腺炎免疫后病例的流行病学特征.为进一步预防控制腮腺炎提供依据.方法 对流行性腮腺炎病例进行流行病学个案调查,病例血清进行腮腺炎病毒的基因序列检测.结果 178例调查对象中,82例有腮腺炎疫苗免疫接种史,其中接种1针次腮腺炎疫苗的80例(97.6%).接种2针次的2例(2.4%);接种腮腺炎疫苗后1年内发病的有4例,接种后2年内发病的有3例;免疫后阳性血清病毒SH基因测序结果与疫苗株(Jeryl-Lynn)100%同源性.免疫后病例与未免疫病例相比:不同年龄问的差异有显著性,出现免疫后病例发病高峰向后推移现象;性别和临床症状均无显著性差异.结论 免疫后再感染的病例多数只接种过1针次腮腺炎疫苗;病毒基因与疫苗株同源,未发现变异;免疫后病例与未免疫相比发病年龄高峰向后推移.

    作者:陈健;吴新伟;许建雄;吴雪红;伍业健;蔡衍珊;李志群;李向忠 刊期: 2008年第10期

  • 广州地区老年人肺炎链球菌临床分离株的青霉素耐药研究与分子分型

    目的 调查广州地区老年患者肺炎链球菌分离株对青霉素的敏感性,并分析其亲缘关系.方法 K-B纸片法对33株分离自老年住院病人的肺炎链球菌进行青霉素药敏试验;应用PCR技术检测青霉素结合蛋白基因pbpla,pbp2x,pbp2b;用盒式PCR(BOX-PCR)分析菌株间亲缘关系.用多位点测序分型技术(multilocussequence typing,MIST)检测青霉素耐药菌株的分子分型.结果 青霉素的耐药率为3.03%(1/33);用PCR方法鉴定PSSP的准确率为68.75%:BOX-PCR可将这33株肺炎链球菌分为21型.MLST分型显示,青霉素耐药菌株属ST271型.结论 广州地区老年患者肺炎链球菌对青霉素耐药率较低,用PCR方法检测PSSP有一定的可行性.BOX-PCR显示了较高的分辨率,能快速可靠地检测菌株间的亲缘关系.广州地区流行的耐药克隆与Taiwanl9F-14株同源.

    作者:周婧杰;叶惠芬;徐邦牢;方燮帆;张革;潘武宾 刊期: 2008年第10期

  • 流动人口艾滋病干预模式的实践与思考

    目的 探索流动人口艾滋病防治模式,预防艾滋病在流动人口中的传播和蔓延.方法 建立以社区为基础的流动人口干预模式,政府组织领导,明确各部门职责,建立考核激励机制,充分动员基层工作人员和社会工作者的力量,全社会共同参与,针对不同类型的流动人口开展艾滋病防治工作.结果 经过一年多的探索与实践,基层工作人员的能力明显提高,流动人口艾滋病防治知识知晓率提高,自我保护意识增强,多部门分工负责的机制已经形成,目标人群主动咨询检测的意识增强,防治工作取得了一定成效.结论 以社区为基础的流动人口干预模式是可行和可推广的.但同时,也面临人力资源缺乏、经费不足、部门配合的积极性有待提高等挑战.

    作者:丁贤彬;王豫林;周超;欧阳琳;潘传波;易辉容;郑建琼;卢戎戎 刊期: 2008年第10期

  • 重庆市基本消除碘缺乏病评估结果分析

    目的 分析重庆市基本消除碘缺乏病的经验和存在的问题,为进一步巩固成果,实现消除碘缺乏病的目标提供参考资料.方法 查阅历年碘盐监测、儿童甲状腺肿和尿碘资料,现场调查居民食用碘盐、8~10岁儿童甲状腺肿和尿碘,分析病情变化特征.结果 2001-2007年,碘盐生产批质量合格率除2001年为92.86%外,其余各年均为100%;碘盐批发企业批质量合格率2001年为88.68%,其余年在92.57%~99.34%之间;居民碘盐食用率为94.2%~98.4%,合格碘盐食用率自2003年起,稳定在90%以上,2007年95%的区县在90%以上;儿童甲状腺肿大率2005年触诊法和B超法分别降至10.5%和9.9%,无20%以上的区县;尿碘中位数稳定在250μg/L左右,<5μg/L者占5%以下.市级评估38个区县,合格碘盐食用率均为90%以上,儿童甲状腺肿大率在10.0%~17.3%之间,尿碘中位数均>100μg/L.国家评估碘盐食用率为99.07%,儿童甲状腺肿大率触诊法为7.76%,B超法为7.27%,尿碘中位数为289.17μg/L.结论 重庆市达到基本消除碘缺乏病标准,但仍存在非碘盐,儿童甲肿率下降缓慢等问题,与生活水平低和蛋白质营养不足有关.仍需加强碘盐监测,防止非碘盐,同时发展经济,提高居民生活水平,增加蛋白质营养,方能取得更好的效果.

    作者:肖邦忠;廖文芳;陈静;李心术;吴成果;罗兴建 刊期: 2008年第10期

  • 凝血仪用异常质控血浆的制备和应用

    目的 探讨血凝仪用的异常凝血实验室内质控血浆的制备和应用.方法 连续采集多份健康人血浆,经离心混合和防腐处理后,置于37℃水浴箱中,连续进行APTT、PT检测,当PT、APTT值比正常对照延长2~3倍时,立即将混合血浆分装于适用容器内,置-80℃超低温冰箱速冻备用.在仪器配套质控血浆监控下进行检测,确定混合血浆靶值和标准差,以后每天取一份速冻正常混合血浆作为当天质控物与患者标本同时检测,连续观察6个月.结果 自制异常值混合血浆质控图变化较稳定,各项目每个月均数与靶值以及6个月的总体平均值无显著性差异(P>0.05).结论 自制异常质控血浆在-80℃保存时,可稳定6个月以上,有较好的稳定性和均匀性,适用于日常异常凝血室内质控.

    作者:王希平;凌寿坚;陈日荣 刊期: 2008年第10期

  • 冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制

    目的 探讨冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲索作用于体外培养的HL-60细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,瑞氏染色法观察细胞凋亡时的形态学变化.应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化.结果 冬凌草甲素可显著的抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用48~60 h后在瑞氏染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低.结论 冬凌草甲素能抑制HL-60细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.

    作者:刘加军;林东军;陆敏强;张俊峰;陈规划 刊期: 2008年第10期

  • 宝安区一起学校水痘爆发的流行病学调查

    目的 调查分析一起水痘爆发疫情的原因和特点,总结经验教训.方法 病例定义为2007年2月28日以来,学校内教师和学生中出现典型的水痘样皮疹(疱疹≥3 d),伴或无发热症状体征.通过现场调查、问表等方法 ,描述本次爆发的流行病学特征,通过病例对照研究危险因素.结果 123例患者中罹患率为6.8%,其中男6.7%,女7.0%.流行病曲线上发病高点在4月30日到5月3日.三年级的罹患率为20.1%,一年级的罹患率为16.2%.患病的主要危险因素为:中午两小时午休时间(RR=4.9,95%CI=3.4-7.1)和乘坐校巴时(RR=3.2,95%CI=2.3-4.5)的密切接触.对27个班级的940名学生进行进一步分析发现,只在学校午休而不乘校巴的(RR=5.4,95%CI=3.5-8.3);在校午休同时也乘校巴(RR=2.8,95%CI=1.9-4.2).对午休的57个宿舍进行人群聚集性分析有显著性意义.结论 此次水痘爆发的主要危险因素与学生中午两小时午休期间在宿舍聚集和乘坐校巴时的密切接触有关.有效的控制措施是对病例的隔离及学校和校巴的消毒.

    作者:马智超;周小涛;李基;严新风;邓立权;张廷禄 刊期: 2008年第10期

  • 紫外线减毒弓形虫对小鼠旋毛虫感染的影响

    目的 探讨紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染的影响.方法 ICR小鼠分为两组,实验组为紫外线减毒弓形虫免疫3周后再感染旋毛虫,对照组为旋毛虫单独感染.结果 与旋毛虫单感染相比,小鼠预先经紫外线减毒弓形虫免疫再感染旋毛虫,在感染后5~14 d其小肠内的成虫数明显增加(肠道排虫明显延迟),而感染后23~90 d其肌肉中的幼虫数明显下降.结论 紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染具有一定的免疫调节和异源性保护作用.

    作者:朱佩娴;郑焕钦;王树萍;张瑞琳;黄世光;吕芳丽 刊期: 2008年第10期

  • 大鼠胚胎干细胞的研究进展

    胚胎干细胞是来源于早期胚胎内细胞团或着床后胚原始生殖细胞的一类未分化的全能性(多能性)干细胞,具有无限增殖和全向分化的能力.Es细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性具有重要的医学价值,在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用前景.至今为止人类已建立了数百个小鼠的ES细胞系.但相对大鼠而言,由于其ES细胞在体外培养时较易发生分化,故建系较难.Iannaceone等从大鼠PVG近交系大鼠的囊胚分离克隆了大鼠ES细胞系-BESC-01.本文主要综述了目前分离、培养大鼠胚胎干细胞的技术进展,我实验小组在预实验中得到的结果 及面临的问题,讨论其在临床工作中的应用前景.

    作者:刘蓉;张薇;张玉芳;郭中敏 刊期: 2008年第10期

  • 重庆市人群蛔虫和钩虫感染趋势与感染因素分析

    目的 了解重庆市人群土源性寄生虫的感染状况,为防治决策提供科学依据.方法 将1982-2007年间按不同年代,且资料完善、有代表性年份的蛔虫、钩虫人群感染率调查资料进行统计,比较发展趋势.并对蛔虫、钩虫感染者与未感染者进行对照调查,用回归分析方法分析感染与生吃蔬菜、赤脚下地劳动、年人均收入的关系.结果 建国初期蛔虫、钩虫感染率高分别达到92.9%和74.7%,2007年已分别降至23.42%和7.89%,呈稳定下降态势.病例-对照研究共调查了1 180人,其中病例(感染者)425人,对照755人.蛔虫、钩虫病例对照研究结果 表明,感染与生吃蔬菜、赤脚下地劳动、年人均收入密切相关.结论 人群钩虫、蛔虫感染率呈下降趋势,社会经济发展、环境因素和社会因素发生改变,对促进土源性寄生虫的防治工作发挥了重要作用.

    作者:蒋诗国;肖邦忠;罗兴建;罗飞;吴成果;李继艮;肖鹏;黄文利 刊期: 2008年第10期

  • 中山市某医院医院感染的流行病学分析

    目的 监测分析某综合性教学医院医院感染的分布动态和变化发展趋势,为制定防治措施以及评价医院感染管理效果提供依据.方法 采取回顾性调查的方法 对某综合性教学医院2002-2006年具有明确医院感染的6 595例病人的临床资料进行统计学分析.结果 各年度医院感染发病率差异有统计学意义(χ2=177.61,P<0.01),2003年以后呈现逐渐下降的趋势.医院感染主要分布部位为呼吸道,其中又以下呼吸道为主,占38.95%,其次为泌尿道,占10.89%.中医康复科,神经外科,血液内科的医院感染率有逐年上升的趋势.各年度检出菌株数排在前2位的病原菌分别是真菌、铜绿假单胞菌.其中,真菌所占的比率呈逐年上升的趋势.结论 连续动态的医院感染的流行病学调查和监测可以把握医院感染的变化趋势.加强重点科室、重点环节和高危人群的专项监测并制定有针对性的预防策略,能够大程度的降低医院感染的发生.

    作者:曾伟英;聂绍发;萧帼稳;王宏;钟振锋;王莉 刊期: 2008年第10期

  • 广州地区2004-2007年蠕虫感染状况及流行特点

    目的 了解广州市近年来蠕虫在人群中的感染状况及流行特点,为制订防治策略提供依据.方法 根据本市各区的地理分布,连续4年分期分批选择不同职业的人群作为调查对象,采用改良加藤氏厚涂片粪检蠕虫卵.结果 共粪检4 200人,总肠道寄生虫感染率为8.00%,其中肝吸虫感染率为6.98%,钩虫感染率为0.50%,蛔虫感染率为0.31%,鞭虫感染率为0.26%.近年来市区感染率不断增高.职业中以工商人员的感染率高,其次是农民、医务人员及干部;男性感染率明显高于女性.结论 肝吸虫及农村的土源性线虫仍是今后重点防治的寄生虫.采取有效的综合防治措施,加强宣传教育,改变人们不良的饮食习惯,提高防护意识,可降低人群蠕虫感染率.

    作者:张豪;刘小宁;任文锋;郭荣同;高雨藩;潘志明 刊期: 2008年第10期

  • 改良原代大鼠肝细胞的体外分离培养和功能研究

    目的 建立经济有效且功能良好的原代肝细胞体外分离培养系统.方法 采用0.02%胶原酶和Pereoll分离液分离纯化大鼠肝细胞,光镜和电镜下观察HepatoZYME-SFM培养的肝细胞形态,自动生化仪定期检测培养肝细胞功能,RT-PCR半定量方法检测白蛋白mRNA,高效液相色谱法(high performance liquidchromatography,HPLC)分析安定代谢能力.结果 分离纯化的大鼠肝细胞总数(2-3)×108>cells/整肝,活力和纯度大于95%,生长良好形态正常.培养3 d后ALT、AST显著下降,加入NH4>C1后8 d内BUN保持相对稳定高水平,白蛋白合成在第3~4天达到高峰.培养的2~5 d内肝细胞可有效清除安定.结论 通过使用低浓度胶原酶灌流、Percoll分离液纯化以及HepatoZYME-SFM无血清培养基培养,肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力.

    作者:庄鹏;李志莹;范紫香;江元森;姚集鲁 刊期: 2008年第10期

  • 乙肝病毒C基因亚型与病毒变异的相关研究

    目的 探讨乙肝病毒C基因亚型与病毒变异的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法,对155例慢性HBV C基因感染者,包括78例肝细胞癌(HCC)、36例肝硬化(LC)和41例慢性肝炎(CH)血清样本进行C基因亚型和病毒基本核心启动子(BCP)以及前C区(Pc)变异检测.结果 在HCC、LC和CH研究组中C2的分布均高于C2,同时C1亚型有较高的BCP变异,C2亚型有较高的PC变异(P<0.030).结论 慢性HBV C基因型患者HCC的高发生率和有较严重的肝脏损害可能与其中C1分布较多有关.因此HBV C基因型患者进行亚型鉴定能更好地评估HBV基因型系列对慢性HBV感染疾病进展和临床结局的影响.

    作者:黄月华;曾文挺;梁建新;周彬;梁敏锋 刊期: 2008年第10期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会