学术投稿

巨噬细胞移动抑制因子ELISA方法的建立和应用研究

林秋雄;单志新;黄小穗;余细勇;杨敏;周志凌;刘晓颖;陈红梅;林曙光

关键词:酶联免疫吸附测定, 巨噬细胞移动抑制因子, 动脉粥样硬化
摘要:目的建立检测巨噬细胞移动抑制因子含量的ELISA检测法.方法采用方阵滴定法,比较4种封闭液、不同稀释度的捕获抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记链菌素对检测结果的影响,确定ELISA法的佳实验条件.结果包被用捕获抗体的适浓度为4 mg/L,检测抗体的适浓度为200 mg/L,Streptavidin-HRP的适稀释度为1:5000.该方法的检测灵敏度为0.156μg/L,变异系数为7.3%~9.6%,回收率为91.2%~113.6%,与VEGF、TNF-α、IL-6、ICAM-1、胆红素、血红蛋白及甘油三酯均无交叉反应.结论建立的ELISA检测法简便、特异且灵敏,适用于检测血清中的MIF水平.
热带医学杂志相关文献
  • 旋毛虫病危险因素的Logistic回归分析

    目的分析影响云南省旋毛虫病卫生、饮食和行为习惯等危险因素,为旋毛虫病防治提供对策.方法应用现场问卷调查和血清学检查方法,使用单因素非条件Logistic回归结合多因素非条件Logistic回归模型分析.结果有10个因素终选入多因素非条件Logistic回归模型,包括生吃或半生吃猪肉和狗肉,不同的地区分布,是否一直是现居住地及居住年限.结论影响云南省旋毛虫病的危险因素为生吃或半生吃猪肉和狗肉等饮食习惯、不同的地区分布、是否一直是现居住地及居住年限,对旋毛虫病的防治应采取有效地防治措施以降低发病率.

    作者:汪丽波;杜尊伟;王学忠;姜进勇 刊期: 2006年第06期

  • 黔南地区农村居民人体隐孢子虫病调查

    目的了解黔南地区农村居民隐孢子虫病的感染情况及其流行特征.方法对黔南少数民族聚居的山区采取整群分层抽样方法,对1739份农村居民人粪和47份动物粪便标本用改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊.结果黔南地区农村居民隐孢子虫病感染率为2.30%(40/1739),5县(市)在1.01%~5.29%之间,男性感染率2.23%,女性2.39%,0~2岁8.76%(12/137),3~6岁3.76%(7/186),7~12岁1.99%(4/201),13~17岁2.77%(8/289),18岁以上0.97%(9/926).临床主要表现为腹泻,以水样便居多.动物粪便污染的土壤CSO阳性率为2.13%(1/47).结论黔南地区农村居民隐孢子虫病的感染以婴幼儿居多,人群感染率及动物感染率均较高,应引起高度重视.

    作者:王红艳;戎聚全;吴桂萍 刊期: 2006年第06期

  • 胶体金免疫层析法检测金黄色葡萄球菌的初步研究

    目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法.方法以金黄色葡萄球菌菌体抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,利用胶体金免疫层析技术,采用二步法检测金黄色葡萄球菌,并对该方法的特异性、敏感性进行评价.结果建立的胶体金免疫层析试纸法能在60 min内完成检测,灵敏度实验结果显示检测灵敏性为1×106cfu/ml;特异性实验检测显示与副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌小川型、O139型及569B型等菌无交叉反应,但与耶尔森氏菌、大肠杆菌标准株(ATCC25922)、铜绿假单胞菌标准株(ATCC27853)有一定交叉.结论建立的检测金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析法,能快速、灵敏地检测金黄色葡萄球菌.

    作者:杜玉萍;陈清;王雅贤;俞守义 刊期: 2006年第06期

  • 一起甲型副伤寒爆发调查分析

    目的了解疫情爆发原因,总结经验教训.方法所有病例都采用统一表格进行个案调查,病例诊断标准参照国标,由临床医生和防疫医生共同诊断.在爆发期间有流行病学史,临床症状明显或症状不典型但白细胞数下降的定为临床病例;血或粪便培养副伤寒杆菌阳性,或血清肥达式反映达辅助诊断意义的定为确诊病例.结果共发病223例,无死亡病例,总罹患率为2.42%(223/9215).其中学生发病211例,罹患率为2.56%(211/8215);教职工发病12例,罹患率为1.20%(12/1000).本次疫情是因沙门氏菌污染食物造成的副伤寒爆发,后期疫情延续是因接触性传染引起的.结论本次疫情延续时间较长,主要是由于发现和报告时间较迟,失去早日控制疫情的时机,造成后期接触性传染.因此必须重视学校传染病疫情监测和报告工作,以防肠道传染病的爆发流行.

    作者:邹毅;胡国超 刊期: 2006年第06期

  • 植物源杀虫剂作用方式和机理的研究进展

    植物源杀虫剂以对环境安全、低毒、高效和无抗药性等优势,愈来愈来引起人们的关注.笔者就其对害虫的作用方式和作用机理进行综述,由于植物源杀虫剂的生物活性成分复杂,试虫种类繁多,其杀虫作用方式和作用机理呈现出多样性.

    作者:徐河山;马雅军 刊期: 2006年第06期

  • 屋尘螨变应原Der p 1基因原核表达产物的纯化及特性鉴定

    目的建立屋尘螨主要变应原Der p 1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性.方法大量诱导表达含pET24a-Der p 1质粒的BL 21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Der p 1纯化蛋白的抗原活性.结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Der p 1蛋白.Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Der p 1蛋白呈强阳性反应,佳血清稀释度为1:64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应.结论纯化后的融合蛋白Der p 1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子.

    作者:刘志刚;杨慧;付颖媛;高波;朱健琦;吉坤美 刊期: 2006年第06期

  • 抗PSMD10单克隆抗体的制备和鉴定

    目的制备抗PSMD10的单克隆抗体(McAb),并对其特异性进行鉴定.方法用柱层析纯化的重组PSMD10蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,用Protein-G亲和层析纯化接种杂交瘤细胞的小鼠腹水,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,Western-blot分析其特异性.通过免疫组织化学染色法检测PSMD10在肝细胞肝癌组织中的表达部位.结果筛选出2株能稳定分泌抗PSMD10单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗均为IgG2,Western-blot分析显示,2株单抗都与重组的PSMD10发生特异性结合.免疫组织化学染色分析显示,PSMD10表达在肝细胞肝癌的细胞浆内.结论制备的抗PSMD10杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单克隆抗体,可望用于进一步研究肝细胞肝癌的发生发展、诊断和治疗.

    作者:陶涛;李明;宁云山;吴英松;季超能;洪艳华;邓东声 刊期: 2006年第06期

  • 妊娠梅毒63例临床分析

    目的研究妊娠梅毒的发病率,分析其发病特点,并探讨其防治方法,以降低先天性梅毒儿的发病率.方法 63例经血清学检查确诊为妊娠梅毒孕妇,根据其确诊孕周数分组,比较各组孕妇妊娠结局、围生儿预后及新生儿梅毒发生情况,分析梅毒的治疗与先天梅毒儿发病率之间的关系.同时将孕妇分为流动人口组与长期居住组,比较其发病率.结果妊娠梅毒的发生率为4.5%o,其中流动人口占61.9%.不同孕周先天梅毒的发病率分别为:13~27周占12.5%,28~36周占27.3%,37周以上占42.9%.结论妊娠梅毒的发病率有逐年上升的趋势.降低妊娠梅毒及先天梅毒儿的发病率,关键在于加强婚前检查及早孕检测.

    作者:谭华霖;陈敦金;王国平;朱文彪;柯柬初 刊期: 2006年第06期

  • HSP90高表达细胞系的建立及其对底物蛋白结合能力的影响

    目的建立HSP90稳定高表达细胞系,探讨HSP90在应激适应中的作用及其机制.方法含人类HSP90β全长基因的质粒pSmycHSP经酶切鉴定、大肠杆菌转化、质粒提取纯化后,以电穿孔转染,G418筛选建立HSP90稳定高表达的小鼠成纤维细胞系.通过免疫共沉淀方法,观察HSP90表达与底物蛋白HSP70、Raf-1的结合情况.结果经G418筛选的阳性克隆HSP90 clone细胞HSP90胞膜、胞核强染.免疫共沉淀结果表明,细胞内HSP90含量、HSP90结合的Raf-1量、HSP90结合的HSP70量变化趋势为外源性HSP90转染细胞>对照.结论 HSP90高表达导致HSP90蛋白与部分底物蛋白的结合性改变.提示细胞可通过HSP90分子伴侣功能,抗衡应激反应中蛋白质变性引起的细胞损伤.

    作者:陈雪梅;邹飞 刊期: 2006年第06期

  • 湖北省世界银行贷款项目环境改造灭螺工程经济效益分析

    目的分析湖北省世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益,为今后科学规划环境改造灭螺工程提供依据.方法参照卫生经济评价原理和方法,对湖北省160项世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益进行分析.结果 160项环境改造灭螺工程的单位灭螺面积费用为0.81元/m2,有螺面积下降1%的费用为116.62元,总费用效益比为1.10,总净费用效益比为0.10.结论虽然不同疫区市、不同方法的环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益差异较大,但是总体上还是可产生较好的直接效益.

    作者:刘建兵;黄水生;范宏萍;戴裕海 刊期: 2006年第06期

  • 几种昆虫抗菌肽对肿瘤细胞(K562)的作用研究

    目的研究各种昆虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果.方法对家蝇(Musca domestica)幼虫、蛹及德国蜚蠊(Blattella germanica)、美洲蜚蠊(POeriplaneta americana)若虫采用针刺感染大肠杆菌诱导产生抗菌肽,经研磨、层析提取其抗菌肽,并通过流式细胞仪测定各种抗菌肽对人髓样白血病细胞(K562)的作用.结果①抑菌圈显示所提取的各种抗菌肽均有一定的抑菌作用.所提抗菌肽浓度:家蝇幼虫6.51 mg/ml,家蝇蛹4.08 mg/ml,美洲大蠊6.93 mg/ml,德国小蠊6.71 mg/ml.②家蝇幼虫和蛹的抗菌肽对K562有一定的杀伤作用,而美洲蜚蠊和德国蜚蠊不仅不能杀伤K562,在某种程度上还有减少其死亡和促进其生长的作用.结论各种昆虫抗菌肽由于结构不同,因而功能也太不同.

    作者:杨晓红;张庆华;段希玲;董建臻;侯玉英;赵瑞君 刊期: 2006年第06期

  • 急诊冠状动脉搭桥术围术期手术效果分析

    目的探讨急诊冠状动脉搭桥术的手术指征、并发症及围术期处理方法.方法回顾28例急诊CABG手术患者.入选病例均符合ACC/AHA有关冠心病手术指南中急诊冠状动脉搭桥术适应证.分析入选病例的围术期危险因素及死亡原因.结果本组所有病例有心肌梗死病史,大部分有高脂血症、高血压和糖尿病,以及合并左室肥厚,一半病例有左主干病变.围术期死亡3例,占10.7%;10例出现围术期并发症,占35.7%.围术期并发症包括二次开胸止血、心包填塞、恶性心律失常、急性肾衰竭和MOSF等.合并手术操作(瓣膜置换等),更长的体外循环转机时间和主动脉阻断时间是主要的死亡原因.结论急诊冠状动脉搭桥术是挽救生命、缓解症状和提高生活质量的有效手段.缩短体外循环转机时间和主动脉阻断时间可减少术后死亡和出血并发症.

    作者:方丹青;姚尖平;张冬成;张希;王治平;徐颖琦;吴钟凯 刊期: 2006年第06期

  • 围生期新生儿急诊开胸手术的麻醉处理

    目的探讨新生儿急诊开胸手术的麻醉与危症处理.方法对29例出生1周以内的新生儿急诊开胸手术的麻醉资料作回顾性分析.结果所有病例术前均有合并症,术中出现需要及时处理的并发症12例(41%),其中术中出现呼吸和心血管系统较大波动的有6例(20%),出现水电解质和酸硷失衡的有8例(27%),经对症处理术中得以纠正.术后有6例(20%)出现较严重肺部感染和不同程度心力衰竭,经抗感染、强心利尿和呼吸支持等治疗,得到控制.全部病例基本痊愈出院.结论并发症的严重程度对预后有直接影响.术中维持有效的呼吸道通气和较稳定的血流动力学,及时纠正水、电解质和酸碱失衡等并发症是麻醉成功的关键.

    作者:黄漫 刊期: 2006年第06期

  • 食品中产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

    目的调查广州地区食品中产气荚膜梭菌的污染水平及菌型分布.方法参照国家标准方法进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用针对产气荚梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2六种毒素的基因cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2序列的6对特异性引物,用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型鉴定.同时用产气荚膜梭菌A型参照株NCTC64609作为阳性对照.结果从142份食品中分离到21株产气荚膜梭菌,以冷冻肉的带菌率高,为19.6%;鲜肉和速冻肉饺分别为12.2%和11.9%.经多重PCR方法鉴定,均扩增出预期大小为324 bp的cpa基因片段的特异性条带,未扩增出针对cpb、etx和iA基因的特异性条带,证实均为A型产气荚膜梭菌.携带β2毒素基因的产气荚膜梭菌共19株(占总分离株的90.4%),其中1株为肠毒素基因阳性的A型菌株.结论初步调查表明广州地区食品中存在可致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌污染,为进一步建立广州地区食品中及与食物中毒有关的厌氧菌分子分型数据库奠定了基础.

    作者:邓志爱;李孝权;李钏华;张健;张欣强;庞杏林;张颖;莫自耀 刊期: 2006年第06期

  • 多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子的检测

    目的研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用.方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性,再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应(PCR),分别扩增革兰阴性菌整合子.结果用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子,有21.2%的菌株同时对10种抗生素都耐药,依次为氨苄西林(72.5%)、头孢曲松(62.5%)、头孢唑啉(61.2%)、头孢他啶(56.2%)、哌拉西林(55.0%)、复方磺胺嘧啶(51.2%)、环丙沙星(50%)、庆大霉素(48.8%)、头孢吡肟(48.8%)、头孢西丁(33.8%),显著高于整合子阴性的菌株.用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子,可扩增出1000 bp,1450 bp,1600 bp,1700 bp,1850 bp,1900 bp,大于2000 bp等6种不同长度的脱氧核苷酸(DNA)片段,相同菌属可携带有不同长い度的耐药基因片段,不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段.结论Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中,在多重耐药机制中起着重要的作用.

    作者:廖伟娇;江洁华;易建云;徐韫健;潘思争 刊期: 2006年第06期

  • 韶关市区德国小蠊侵害及密度的调查

    目的摸清德国小蠊的侵害及密度,为制定防制对策提供科学依据.方法采用目测法、药激法分别对特殊行业单位60个,一般单位40个,居民住户100户调查侵害情况;用粘蟑盒对受侵害的特殊行业单位6个、一般单位4个,居民住户10户测定密度.结果特殊行业、一般单位、居民住户的侵害率分别为100%、37.50%、17.00%,经统计学分析差异有高度显著性(x2=35,P<0.005).密度(只/盒·夜)分别为15.09、1.79、1.41.侵害情况及密度以特殊行业为严重,其次为一般单位和居民住户.侵害率和密度较高的场所为厨房、点心间、食品仓库、熟食间、员工更衣室及首层餐厅等.结论德国小蠊侵害情况和密度不断上升,危害日趋严重.侵害场所由原来的宾馆、酒家、娱乐等特殊行业蔓延至一般单位和居民住户,成为严重的公共卫生问题,是今后蟑螂防制工作策略的新挑战.

    作者:梁河章;胡应辉;蓝荣彪 刊期: 2006年第06期

  • 肺炎链球菌感染的流行病学及毒力因子研究进展

    肺炎链球菌感染在不同人群中的分布受各种因素影响,其流行以及菌株血清型的分布也都有明显的差异性.造成肺炎链球菌致病的各种毒力因子在致病过程中尽管作用不同,但都参与了该过程.深入了解近年来肺炎链球菌感染的流行情况及肺炎链球菌相关毒力因子的研究进展,对预防和治疗肺炎链球菌感染,研制新一代疫苗有着实际意义.

    作者:鲜墨;吴忠道 刊期: 2006年第06期

  • 单相动作电位在右心室流出道室性心律失常发病机制中的研究

    目的采用单相动作电位(monophasic action potential,MAP)研究右心室流出道室性心律失常的发病机制.方法 52例右心室流出道室性心律失常的病人,在记录室性早搏或室性心动过速时同步记录MAP.结果 15例室性早搏病人均未记录到早期后除极(early after depolarization,EAD),12例室性心动过速病人在诱发室性心动过速的第1个早搏的同时可同步记录到EAD,所有病人均未记录到晚期后除极(dilate after depolarization,DAD).结论触发活动可能不是右心室流出道室性早搏的发病机制,而部分右心室流出道室性心动过速的发病机制可能是触发活动.

    作者:李宜富;谭倩;张杏;高飞;董少红;朱莲玉;王靖怡 刊期: 2006年第06期

  • 丹皮酚抑制GLC-82细胞增殖的体外实验研究

    目的探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对人肺癌细胞株GLC-82增殖和凋亡的影响.方法采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人肺癌细胞株GLC-82的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对GLC-82细胞的诱导凋亡作用.结果 Pae在31.25~250 mg/L浓度范围内对GLC-82细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系.透射电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变.Pae在31.25~250 mg/L浓度下均可诱导GLC-82细胞发生凋亡,有明显的时效和量效关系.丹皮酚作用后细胞周期发生明显变化,主要表现为S期细胞增加,G0/G1期和G2/M期细胞减少,细胞周期几乎停滞于S期.结论 Pae有抑制人肺癌细胞株GLC-82的增殖和诱导其发生凋亡的作用.

    作者:张旃;李明昌;谭炳炎;欧阳丽萍;陆家海;罗斌 刊期: 2006年第06期

  • 巨噬细胞移动抑制因子ELISA方法的建立和应用研究

    目的建立检测巨噬细胞移动抑制因子含量的ELISA检测法.方法采用方阵滴定法,比较4种封闭液、不同稀释度的捕获抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记链菌素对检测结果的影响,确定ELISA法的佳实验条件.结果包被用捕获抗体的适浓度为4 mg/L,检测抗体的适浓度为200 mg/L,Streptavidin-HRP的适稀释度为1:5000.该方法的检测灵敏度为0.156μg/L,变异系数为7.3%~9.6%,回收率为91.2%~113.6%,与VEGF、TNF-α、IL-6、ICAM-1、胆红素、血红蛋白及甘油三酯均无交叉反应.结论建立的ELISA检测法简便、特异且灵敏,适用于检测血清中的MIF水平.

    作者:林秋雄;单志新;黄小穗;余细勇;杨敏;周志凌;刘晓颖;陈红梅;林曙光 刊期: 2006年第06期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会