杜玉萍；陈清；王雅贤；俞守义
目的采用阳离子脂质体介导的基因转染的方法对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记,建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型.方法以绿色荧光蛋白作为标记基因经阳离子脂质体介导转入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内,活体荧光成像系统直接观察原位肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较.结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达.绿色荧光蛋白转染后的人膀胱移行细胞癌T24细胞的体内外生物学行为无明显改变,裸小鼠膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移.结论绿色荧光蛋白是新一代的生物源性荧光标记物质,它具有分子量小、对细胞无毒、使用方便及容易检测等优点.绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的可视裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法.
作者：谭万龙；吴元东；陈彤；熊林；郑少斌 刊期： 2006年第06期
目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法.方法以金黄色葡萄球菌菌体抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,利用胶体金免疫层析技术,采用二步法检测金黄色葡萄球菌,并对该方法的特异性、敏感性进行评价.结果建立的胶体金免疫层析试纸法能在60 min内完成检测,灵敏度实验结果显示检测灵敏性为1×106cfu/ml;特异性实验检测显示与副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌小川型、O139型及569B型等菌无交叉反应,但与耶尔森氏菌、大肠杆菌标准株(ATCC25922)、铜绿假单胞菌标准株(ATCC27853)有一定交叉.结论建立的检测金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析法,能快速、灵敏地检测金黄色葡萄球菌.
作者：杜玉萍；陈清；王雅贤；俞守义 刊期： 2006年第06期
目的研究各种昆虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果.方法对家蝇(Musca domestica)幼虫、蛹及德国蜚蠊(Blattella germanica)、美洲蜚蠊(POeriplaneta americana)若虫采用针刺感染大肠杆菌诱导产生抗菌肽,经研磨、层析提取其抗菌肽,并通过流式细胞仪测定各种抗菌肽对人髓样白血病细胞(K562)的作用.结果①抑菌圈显示所提取的各种抗菌肽均有一定的抑菌作用.所提抗菌肽浓度:家蝇幼虫6.51 mg/ml,家蝇蛹4.08 mg/ml,美洲大蠊6.93 mg/ml,德国小蠊6.71 mg/ml.②家蝇幼虫和蛹的抗菌肽对K562有一定的杀伤作用,而美洲蜚蠊和德国蜚蠊不仅不能杀伤K562,在某种程度上还有减少其死亡和促进其生长的作用.结论各种昆虫抗菌肽由于结构不同,因而功能也太不同.
作者：杨晓红；张庆华；段希玲；董建臻；侯玉英；赵瑞君 刊期： 2006年第06期
肺炎链球菌感染在不同人群中的分布受各种因素影响,其流行以及菌株血清型的分布也都有明显的差异性.造成肺炎链球菌致病的各种毒力因子在致病过程中尽管作用不同,但都参与了该过程.深入了解近年来肺炎链球菌感染的流行情况及肺炎链球菌相关毒力因子的研究进展,对预防和治疗肺炎链球菌感染,研制新一代疫苗有着实际意义.
作者：鲜墨；吴忠道 刊期： 2006年第06期
目的了解广州市7～18岁中小学生常见病患病情况.方法选择广州市城乡12所中小学作为监测点,抽样调查5760名在校7～18岁学生,进行视力、龋齿、营养状况、乡村部分学生的肠道蛔虫卵检查,并与历年广州市中小学生常见病患病情况调查资料进行对比分析.结果广州市7～18岁中小学学生视力不良总检出率为59.3%,城市学生视力不良检出率(64.5%)高于农村学生(54.1%),女生视力不良和近视均高于同年龄男生,视力不良主要表现为近视(占视力不良的97.2%);近视检出率随年龄增长而增长,由7岁时的28.8%上升至18岁的85.6%.城乡学生总龋检出率为37.3%,总龋均为1.10;城市学生恒龋的检出率(15.3%)和龋均(0.31)与乡村学生比较(分别为13.3%和0.24)差异无统计学意义,但乡村学生乳龋检出率(33.1%)和龋均(1.22)高于城市学生(分别为16.0%和0.43),差异有统计学意义.营养状况方面城、乡学生体重正常者只占受检者33.9%和28.0%,乡村学生营养不良及较低体重比例(64.8%)高于城市学生(50.1%),而城市学生超重及肥胖比例(16.0%)高于乡村(7.3%);肠道蛔虫感染率几近为零.结论近视;乳齿的检出率升高、乳龋的充填率下降;正常体重者比例较低,营养不良或较低体重者比例较大等是当前广州市学生的常见病防治的重点问题.
作者：熊莉华；麦锦城；邓纳莉 刊期： 2006年第06期
目的观察筛选自生生活阿米巴的培养、保存和染色方法,为人体寄生虫学实验教学标本提供代用品.方法用不同的方法和材料培养保存自生生活阿米巴,比较观察其复苏、生长效果;分别用活体染色、碘染色和固定染色(铁苏木素、三色染色法).结果青菜水对自生生活阿米巴培养佳,上述染色剂均能使自生生活阿米巴着色.结论再观察结果证明,自生生活阿米巴可作为人体寄生虫学实验教学标本的代用品,若与其染色标本配合使用,效果更好.
作者：王唯唯；黄文达；戴世忠 刊期： 2006年第06期
目的采用分子生物学方法鉴定一株甲病毒M1.方法 M1病毒在C6/36细胞中增殖,用TRIZOL法提取总RNA.采用RT-PCR方法扩增目的片段,并将其克隆到T载体中,筛选重组子并测定其核苷酸序列.用NCBI/BLAST程序进行同源性收索.结果 M1病毒扩增出469 bp的特异片段,且包含SAG特有的100nt片段.同源性分析表明,该片段与SAG、GET相对应片段同源性为95%,91%.结论 M1病毒属于鹭山病毒.
作者：赵文忠；罗招凡；刘建伟；方美玉 刊期： 2006年第06期
目的建立检测巨噬细胞移动抑制因子含量的ELISA检测法.方法采用方阵滴定法,比较4种封闭液、不同稀释度的捕获抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记链菌素对检测结果的影响,确定ELISA法的佳实验条件.结果包被用捕获抗体的适浓度为4 mg/L,检测抗体的适浓度为200 mg/L,Streptavidin-HRP的适稀释度为1:5000.该方法的检测灵敏度为0.156μg/L,变异系数为7.3%～9.6%,回收率为91.2%～113.6%,与VEGF、TNF-α、IL-6、ICAM-1、胆红素、血红蛋白及甘油三酯均无交叉反应.结论建立的ELISA检测法简便、特异且灵敏,适用于检测血清中的MIF水平.
作者：林秋雄；单志新；黄小穗；余细勇；杨敏；周志凌；刘晓颖；陈红梅；林曙光 刊期： 2006年第06期
目的了解黔南地区农村居民隐孢子虫病的感染情况及其流行特征.方法对黔南少数民族聚居的山区采取整群分层抽样方法,对1739份农村居民人粪和47份动物粪便标本用改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊.结果黔南地区农村居民隐孢子虫病感染率为2.30%(40/1739),5县(市)在1.01%～5.29%之间,男性感染率2.23%,女性2.39%,0～2岁8.76%(12/137),3～6岁3.76%(7/186),7～12岁1.99%(4/201),13～17岁2.77%(8/289),18岁以上0.97%(9/926).临床主要表现为腹泻,以水样便居多.动物粪便污染的土壤CSO阳性率为2.13%(1/47).结论黔南地区农村居民隐孢子虫病的感染以婴幼儿居多,人群感染率及动物感染率均较高,应引起高度重视.
作者：王红艳；戎聚全；吴桂萍 刊期： 2006年第06期
目的研究妊娠梅毒的发病率,分析其发病特点,并探讨其防治方法,以降低先天性梅毒儿的发病率.方法 63例经血清学检查确诊为妊娠梅毒孕妇,根据其确诊孕周数分组,比较各组孕妇妊娠结局、围生儿预后及新生儿梅毒发生情况,分析梅毒的治疗与先天梅毒儿发病率之间的关系.同时将孕妇分为流动人口组与长期居住组,比较其发病率.结果妊娠梅毒的发生率为4.5%o,其中流动人口占61.9%.不同孕周先天梅毒的发病率分别为:13～27周占12.5%,28～36周占27.3%,37周以上占42.9%.结论妊娠梅毒的发病率有逐年上升的趋势.降低妊娠梅毒及先天梅毒儿的发病率,关键在于加强婚前检查及早孕检测.
作者：谭华霖；陈敦金；王国平；朱文彪；柯柬初 刊期： 2006年第06期
目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin.方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coli BL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定.结果 经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45 000,与预期理论值相符.结论 Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础.
作者：吴芬芳；宁云山；吴英松；王穗海；董文其；李明 刊期： 2006年第06期
目的探讨急诊冠状动脉搭桥术的手术指征、并发症及围术期处理方法.方法回顾28例急诊CABG手术患者.入选病例均符合ACC/AHA有关冠心病手术指南中急诊冠状动脉搭桥术适应证.分析入选病例的围术期危险因素及死亡原因.结果本组所有病例有心肌梗死病史,大部分有高脂血症、高血压和糖尿病,以及合并左室肥厚,一半病例有左主干病变.围术期死亡3例,占10.7%;10例出现围术期并发症,占35.7%.围术期并发症包括二次开胸止血、心包填塞、恶性心律失常、急性肾衰竭和MOSF等.合并手术操作(瓣膜置换等),更长的体外循环转机时间和主动脉阻断时间是主要的死亡原因.结论急诊冠状动脉搭桥术是挽救生命、缓解症状和提高生活质量的有效手段.缩短体外循环转机时间和主动脉阻断时间可减少术后死亡和出血并发症.
作者：方丹青；姚尖平；张冬成；张希；王治平；徐颖琦；吴钟凯 刊期： 2006年第06期
目的建立HSP90稳定高表达细胞系,探讨HSP90在应激适应中的作用及其机制.方法含人类HSP90β全长基因的质粒pSmycHSP经酶切鉴定、大肠杆菌转化、质粒提取纯化后,以电穿孔转染,G418筛选建立HSP90稳定高表达的小鼠成纤维细胞系.通过免疫共沉淀方法,观察HSP90表达与底物蛋白HSP70、Raf-1的结合情况.结果经G418筛选的阳性克隆HSP90 clone细胞HSP90胞膜、胞核强染.免疫共沉淀结果表明,细胞内HSP90含量、HSP90结合的Raf-1量、HSP90结合的HSP70量变化趋势为外源性HSP90转染细胞＞对照.结论 HSP90高表达导致HSP90蛋白与部分底物蛋白的结合性改变.提示细胞可通过HSP90分子伴侣功能,抗衡应激反应中蛋白质变性引起的细胞损伤.
作者：陈雪梅；邹飞 刊期： 2006年第06期
目的探讨防治儿童龋齿有效的社区健康教育模式.方法选择辖区内500例儿童及其家长,随机分为龋齿防治的健康教育组(即实验组)300例,对照组200例,然后对实验组进行系统的健康教育之后,对比两组儿童的龋患率、刷牙情况和家长口腔卫生知识掌握情况.结果健康教育组儿童的龋患率显著低于对照组儿童龋患率;健康教育组儿童经常刷牙者所占比例显著高于对照组;健康教育组家长口腔卫生知识测试合格率大大高于对照组.结论社区健康教育对儿童龋齿的防治有积极的意义.
作者：夏莺；黄淑芬；侯东辉 刊期： 2006年第06期
目的通过检测足叶乙甙浓度及其药代动力学参数,对血液透析治疗的患者应用标准剂量的足叶乙甙进行药物安全性研究.方法通过高效液相色谱法,检测血浆中足叶乙甙浓度(总浓度和非蛋白结合浓度),观察患者在透析前后药物的浓度、半衰期、药物分布容积等指标.结果足叶乙甙的透析前后药物半衰期的对比符合一级动力两室模型,15例患者透析前后足叶乙甙的半衰期t1/2分别为:(4.3±0.45)h,(3.5±0.36)h.透析过程中药物分布容积为(8.5±0.4)L/m2,血液中非蛋白结合状态的足叶乙甙占总浓度的9.0%(9.02%±0.7%).结论在有肾功能损害的情况下,足叶乙甙在体内通过排泄途径的改变使药物的清除率无明显下降,血透治疗没有显著增加足叶乙甙的排泄.在药动学和临床治疗反应的动态监测下,标准剂量的足叶乙甙静脉治疗在取得积极疗效的同时,药物不良反应轻微,具有较好的安全性.
作者：张庆光；莫洁庭；钟华 刊期： 2006年第06期
植物源杀虫剂以对环境安全、低毒、高效和无抗药性等优势,愈来愈来引起人们的关注.笔者就其对害虫的作用方式和作用机理进行综述,由于植物源杀虫剂的生物活性成分复杂,试虫种类繁多,其杀虫作用方式和作用机理呈现出多样性.
作者：徐河山；马雅军 刊期： 2006年第06期
目的应用反向点杂交法(RDB)对样本进行β-地中海贫血基因诊断,评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能.方法使用反向点杂交法对1 294例疑似地中海贫血病例(材料包括外周血、羊水和脐带血)进行β-地贫基因诊断,并对其中10例进行测序;对其中890例与血液学试验指标进行比较.结果用RDB方法,1 294例样品中有558例β地中海贫血.在558例基因诊断阳性病例中共发现了21种突变,涉及到14个突变位点.前6位的突变位点从高到低依次排列为CD41-42(41.2%)、IVS-2-654(25.6%)、TATAbox-28(13.8%)、CD17(7.2%)、CD26(2.0%),CD 71-72(1.4%).与RDB比较,将临界值定为MCV≤80fL或MCH≤26Pg,脆性≤60%,HbA2＞3.8%,则敏感度分别为98.49%,89.17%,95.47%;特异性为68.97%,72.82%,77.08%.结论与血液学方法比较,RDB具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断.
作者：黎青；李少英；孔舒；孙筱放；蒋玮莹 刊期： 2006年第06期
目的分析影响云南省旋毛虫病卫生、饮食和行为习惯等危险因素,为旋毛虫病防治提供对策.方法应用现场问卷调查和血清学检查方法,使用单因素非条件Logistic回归结合多因素非条件Logistic回归模型分析.结果有10个因素终选入多因素非条件Logistic回归模型,包括生吃或半生吃猪肉和狗肉,不同的地区分布,是否一直是现居住地及居住年限.结论影响云南省旋毛虫病的危险因素为生吃或半生吃猪肉和狗肉等饮食习惯、不同的地区分布、是否一直是现居住地及居住年限,对旋毛虫病的防治应采取有效地防治措施以降低发病率.
作者：汪丽波；杜尊伟；王学忠；姜进勇 刊期： 2006年第06期
目的克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)沉寂信息调节因子Sir2基因,构建原核表达重组载体,表达重组蛋白,并制备抗体进行相关功能的研究.方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离获得阴道毛滴虫Sir2同源基因的cDNA克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析.将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物并对表达产物进行SDS-PAGE鉴定之后,用纯化重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清,对重组蛋白和滴虫总蛋白进行蛋白质印迹鉴定.结果在阴道毛滴虫cDNA文库中获得一株1 034 bp的cDNA克隆,序列分析表明,该序列开放阅读框有912 bp,推测肽链具有304个氨基酸,等电点(PI)5.5.该肽链与酵母SIR2p蛋白及其同源物一致性高达30%～47%,并具有SIR2p及其同源蛋白的三个高度保守的特征性结构域.进化树结果显示,TvSIR2p接近线虫的SIR2蛋白,与同时克隆到的基因组TvSir2比较序列一致,证明该TvSir2基因组DNA不含内含子.PCR扩增出890bp片段,植入表达载体pET-41a;经酶切鉴定后取阳性克隆用IPTG诱导表达,产生融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量为62 000,与预期分子质量相符.用该融合蛋白免疫豚鼠得到的抗体,经Western blotting检测其与相应融合蛋白发生特异性反应,同时在33 000处也能识别滴虫虫体全蛋白.结论推测该克隆是阴道毛滴虫Sir2的同源基因,该基因没有内含子,它可能参与阴道毛滴虫的组蛋白去乙酰化作用及调节衰老和寿命.阴道毛滴虫Sir2基因可以在大肠杆菌中得到表达,并获得了相应的抗血清,为进一步研究其功能奠定了基础.
作者：史咏梅；傅玉才；徐晓园；许铭炎；刘红 刊期： 2006年第06期
目的了解疫情爆发原因,总结经验教训.方法所有病例都采用统一表格进行个案调查,病例诊断标准参照国标,由临床医生和防疫医生共同诊断.在爆发期间有流行病学史,临床症状明显或症状不典型但白细胞数下降的定为临床病例;血或粪便培养副伤寒杆菌阳性,或血清肥达式反映达辅助诊断意义的定为确诊病例.结果共发病223例,无死亡病例,总罹患率为2.42%(223/9215).其中学生发病211例,罹患率为2.56%(211/8215);教职工发病12例,罹患率为1.20%(12/1000).本次疫情是因沙门氏菌污染食物造成的副伤寒爆发,后期疫情延续是因接触性传染引起的.结论本次疫情延续时间较长,主要是由于发现和报告时间较迟,失去早日控制疫情的时机,造成后期接触性传染.因此必须重视学校传染病疫情监测和报告工作,以防肠道传染病的爆发流行.
作者：邹毅；胡国超 刊期： 2006年第06期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
