学术投稿

阴道毛滴虫Rab1a基因的cDNA克隆及重组表达

徐晓园;傅玉才;许铭炎;史咏梅;刘红

关键词:阴道毛滴虫, Rab1A, 重组蛋白表达
摘要:目的克隆和分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,Tv)Rab1a基因,构建Rab1a基因表达重组载体并表达其融合蛋白,以进一步探讨其功能.方法提取阴道毛滴虫基因组DNA为模板,扩增TvRab1a基因,用pQE80L载体与TvRab1a cDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物并由SDS-PAGE鉴定.结果在阴道毛滴虫cDNA文库克隆中发现了Rab1a基因,序列分析显示Rab1a基因的基因组DNA序列含有一个25 bp大小的内含子.成功构建了pQE/Rab1a原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白质.结论分析表明TvRab1a基因是阴道毛滴虫Rab1鸟苷三磷酸酶同源基因,它含有一个25 bp的内含子.获得了该基因的重组蛋白,将对TvRab1a基因的功能进行进一步研究.
热带医学杂志相关文献
  • 一起甲型副伤寒爆发调查分析

    目的了解疫情爆发原因,总结经验教训.方法所有病例都采用统一表格进行个案调查,病例诊断标准参照国标,由临床医生和防疫医生共同诊断.在爆发期间有流行病学史,临床症状明显或症状不典型但白细胞数下降的定为临床病例;血或粪便培养副伤寒杆菌阳性,或血清肥达式反映达辅助诊断意义的定为确诊病例.结果共发病223例,无死亡病例,总罹患率为2.42%(223/9215).其中学生发病211例,罹患率为2.56%(211/8215);教职工发病12例,罹患率为1.20%(12/1000).本次疫情是因沙门氏菌污染食物造成的副伤寒爆发,后期疫情延续是因接触性传染引起的.结论本次疫情延续时间较长,主要是由于发现和报告时间较迟,失去早日控制疫情的时机,造成后期接触性传染.因此必须重视学校传染病疫情监测和报告工作,以防肠道传染病的爆发流行.

    作者:邹毅;胡国超 刊期: 2006年第06期

  • 围生期新生儿急诊开胸手术的麻醉处理

    目的探讨新生儿急诊开胸手术的麻醉与危症处理.方法对29例出生1周以内的新生儿急诊开胸手术的麻醉资料作回顾性分析.结果所有病例术前均有合并症,术中出现需要及时处理的并发症12例(41%),其中术中出现呼吸和心血管系统较大波动的有6例(20%),出现水电解质和酸硷失衡的有8例(27%),经对症处理术中得以纠正.术后有6例(20%)出现较严重肺部感染和不同程度心力衰竭,经抗感染、强心利尿和呼吸支持等治疗,得到控制.全部病例基本痊愈出院.结论并发症的严重程度对预后有直接影响.术中维持有效的呼吸道通气和较稳定的血流动力学,及时纠正水、电解质和酸碱失衡等并发症是麻醉成功的关键.

    作者:黄漫 刊期: 2006年第06期

  • 饮食(服务)行业从业人员肠道沙门氏菌检测结果分析

    目的了解花都区饮食、服务行业从业人员人群肠道沙门氏菌带菌状况.方法对花都区疾病预防控制中心2004年12月至2005年11月的饮食、服务行业从业人员健康体检时肛拭样品中检出的肠道沙门氏菌进行分析.结果检测样品21 787份,检出沙门氏菌108份,检出率为0.496%.全年各月份的检出率为0.104%~1.153%,8月份高,3月份低(x2=48.4528,P<0.005).女性(0.524%)高于男性(0.427%,x2=0.8435,0.25<P<0.50).108株沙门氏菌分布于21个血清型,菌型以德尔俾沙门氏、斯坦利沙门氏、纽兰沙门氏、阿贡纳沙门氏、鸭沙门氏、纽波特沙门氏为主,6个血清型共检出79份,占总检出率的73.13%.结论沙门氏菌是重要的肠道病原菌,人群带菌率与气候、季节关系密切.并且周围的卫生环境条件及人群的生活方式也是影响带菌率的重要因素.我区人群沙门氏菌带菌率较高,菌型分散,给卫生检测工作带来了一定困难.各地区菌型的差异因人口流动为沙门氏菌在人群中的分布带来了很大的不确定因素.因此,沙门氏菌是花都区卫生部门要重点检测的肠道致病菌之一.

    作者:徐胜玲;蔡师志;汤国球 刊期: 2006年第06期

  • 广西SARS来源的流行病学研究

    目的研究SARS来源,掌握其发生原因、发展和分布规律,为制定预防控制对策和措施提供科学依据.方法建立主动和被动监测系统监测SARS疫情,对SARS病例进行现场流行病学问卷调查,分析其分布规律和特征.采集病例、密切接触者、野生动物和人工饲养果子狸的血清、咽漱液、咽拭子等标本分别采用ELISA方法和荧光定量PCR检测IgG、IgM抗体和RNA,进行血清学和病原学研究,并结合流行病学、病原学和血清学结果探讨SARS的来源.结果于2002年12月17日到2003年5月上旬,出现两个流行高峰,共报告病人22例,发病率0.046/10万,病死率为13.64%.呈局部爆发和高度点状散发,具有高度家庭聚集性,大多分布在农村,以外出广东务工青壮年民工为主,男女性别比为1.75:1.主要症状为发热、咳嗽,伴有畏寒、咽痛、胸闷、气促、胸痛、全身乏力、恶心、呕吐和腹泻等其它的症状.91%的病人胸片检查呈现单侧或双侧肺部片状阴影.病例血白细胞正常或减少,病人血清IgG和IgM阳性率分别为100%和81.8%,1例病人血浆中检出SARS病毒核酸.密切接触者IgG抗体阳性率为1.11%.野生动物山瑞鳖、眼镜蛇、蛤蚧和鹰血清SARS病毒抗体阳性.结论从流行病学、临床表现、血清学和病原学均证实SARS在广西流行,具有输入性、续发性和自然疫源性三个来源.病人为重要的传染源,野生动物可能是SARS的源头.

    作者:梁绍伶;黎学铭;董柏青;谭毅;梁富雄 刊期: 2006年第06期

  • SARS冠状病毒M基因的克隆及序列分析

    目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因,并进行序列分析.方法根据GenBank中公布的SARS冠状病毒Tor2株M基因序列,设计一对引物,用RT-PCR法从SARS-CoV GD322株基因组中扩增M基因片段.克隆至pET-32(a)载体,转化大肠杆菌BL-21后测序,利用DNAstar和Clustal X分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoV M基因翻译的氨基酸序列的差异.结果该M基因与Tor2株M基因核苷酸同源性为99.86%;与已收集的81株SARS-CoV M基因所译氨基酸相比,和41株(占50.62%)M蛋白完全同源,37株(占45.68%)仅有一个氨基酸改变,同源性为99.55%,仅与3株(占3.70%)有2个氨基酸差异,同源性为99.10%.结论已获得具有代表性的SARS-CoV M基因重组质粒.

    作者:胡族琼;龙北国;晏辉钧;张文炳;方丹云;刘志伟;周经姣;江丽芳;赵卫 刊期: 2006年第06期

  • 异种胰岛细胞移植治疗1型糖尿病临床观察

    目的猪作为人异种胰岛细胞移植的供体被认为可能是解决人类供体短缺的办法.本研究目的是观察异种胰岛细胞移植对1型糖尿病的治疗效果.方法本研究共3名1型糖尿病自愿受试者,随访6个月.3名患者均在内分泌专科医生的指导下坚持胰岛素治疗,但是长期血糖控制欠佳,血糖波动大,多次出现严重低血糖.供体是新生猪,采用胶原酶消化法分离胰岛细胞,经过体外培养后注入受试者肝内.移植细胞数分别为80万、100万、60万.免疫抑制剂:2例选用环孢霉素(cyclosporine,CSA)+骁悉(mycophenolate mofetil,MMF),1例选用他克莫司(tacrolimus,FK506)+MMF.结果所有病人在移植后1周内均有低热和轻度的肝区疼痛,没有严重的并发症.移植术后仍需胰岛素治疗.术后20 d左右,胰岛素用量较术前逐渐减少.6个月后观察,3名受试者血糖均能较好控制,血糖大幅度波动的情况得到改善,HbA1c明显下降,C肽水平显著升高,每天胰岛素用量分别减少了46.7%、25%、20%.结论异种(猪)胰岛细胞移植治疗1型糖尿病,可以使血糖得到理想控制,改善血糖的大幅度波动,低血糖发生率降低,胰岛素用量减少,短期内无明显副反应.

    作者:梁干雄;李晓群;季明芳;余元龙;王得坤;陈少颖;王维 刊期: 2006年第06期

  • 荔枝果实中泛变应原profilin基因的克隆及序列分析

    目的克隆荔枝果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)同源基因.方法采用生物信息学方法对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过RT-PCR和3′-RACE技术克隆荔枝果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.结果获得了一个全长的新基因(689bp).该基因开放阅读框为396个碱基,编码131个氨基酸残基,经分析该蛋白等电点为4.98,分子量约为14 060.此序列已被GenBank收录,登陆号为DQ309464.序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(与桦树和橡胶花粉泛变应原profilin的同源性分别为80%和84%,与桃子profilin的同源性为85%),因此认定其为泛变应原基因.结论从荔枝果实中成功地克隆出了一个泛变应原基因,为进一步的蛋白表达奠定了基础.

    作者:张红云;宋娟娟;刘志刚;康敏雄 刊期: 2006年第06期

  • 广州市荔湾区育龄妇女艾滋病认知调查及健康干预

    目的探讨广州市荔湾区站前街社区育龄妇女对艾滋病的认知水平,以期为这一人群中开展艾滋病健康教育提供依据.方法以该社区中18~35岁的育龄妇女为研究对象,在艾滋病宣传月进行为期1个月的相关艾滋病健康教育宣传.采用定量(问卷调查)与定性研究(小组访谈)相结合的方法对社区育龄妇女进行调查.自行设计调查问卷,分别于健康教育前后收集调查问卷,分析健康教育对育龄妇女艾滋病防治知识、态度及行为的影响.结果 84.1%的人认为艾滋病病毒感染者值得同情和关心.大多数社区育龄妇女愿意参加到防治艾滋病的活动中.经过健康教育后,调查对象对艾滋病基础知识、传播途径知识知晓率显著提高(P<0.01).结论该社区育龄妇女艾滋病知识缺乏,应加强对这一人群的艾滋病健康教育,并不断地改进方法,消除育龄妇女对艾滋病的恐惧心理和对当前流行形势的麻痹认识.

    作者:曾静;彭淑梅;王晓东 刊期: 2006年第06期

  • 植物源杀虫剂作用方式和机理的研究进展

    植物源杀虫剂以对环境安全、低毒、高效和无抗药性等优势,愈来愈来引起人们的关注.笔者就其对害虫的作用方式和作用机理进行综述,由于植物源杀虫剂的生物活性成分复杂,试虫种类繁多,其杀虫作用方式和作用机理呈现出多样性.

    作者:徐河山;马雅军 刊期: 2006年第06期

  • 云南省齐氏姬鼠体表寄生恙螨种类调查与分析

    目的了解云南省齐氏姬鼠体表寄生恙螨种类、空间分布情况及优势种.方法选取云南省16个县(市)作为调查点,现场用鼠笼加食饵诱捕齐氏姬鼠,收集其体表寄生恙螨,用Hoyer's液封片后在显微镜下分类、鉴定.恙螨种群的空间分布格局用分布型指数中的聚块指数(m*/m)判定.结果在所调查的16个县(市)中,从所捕获到的1 177只齐氏姬鼠体表共采集到恙螨7 634只,经分类鉴定隶属3亚科10属79种.齐氏姬鼠总染螨率和总螨指数较高,分别达35.85%及6.49螨/鼠;小板纤恙螨和乡野纤恙螨为齐氏姬鼠体表恙螨优势种,王氏纤恙螨次之.恙螨及优势恙螨种类在齐氏姬鼠不同个体之间的分布均呈聚集型分布格局.结论齐氏姬鼠体表恙螨种类复杂,数量丰富,物种多样性高,主要恙螨在所对应小兽宿主的寄生有明显的聚集性.

    作者:侯舒心;郭宪国;门兴元;钱体军;吴滇;石武祥 刊期: 2006年第06期

  • HSP90高表达细胞系的建立及其对底物蛋白结合能力的影响

    目的建立HSP90稳定高表达细胞系,探讨HSP90在应激适应中的作用及其机制.方法含人类HSP90β全长基因的质粒pSmycHSP经酶切鉴定、大肠杆菌转化、质粒提取纯化后,以电穿孔转染,G418筛选建立HSP90稳定高表达的小鼠成纤维细胞系.通过免疫共沉淀方法,观察HSP90表达与底物蛋白HSP70、Raf-1的结合情况.结果经G418筛选的阳性克隆HSP90 clone细胞HSP90胞膜、胞核强染.免疫共沉淀结果表明,细胞内HSP90含量、HSP90结合的Raf-1量、HSP90结合的HSP70量变化趋势为外源性HSP90转染细胞>对照.结论 HSP90高表达导致HSP90蛋白与部分底物蛋白的结合性改变.提示细胞可通过HSP90分子伴侣功能,抗衡应激反应中蛋白质变性引起的细胞损伤.

    作者:陈雪梅;邹飞 刊期: 2006年第06期

  • 抗凋亡蛋白Fortilin基因的克隆、表达与鉴定

    目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin.方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coli BL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定.结果 经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45 000,与预期理论值相符.结论 Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础.

    作者:吴芬芳;宁云山;吴英松;王穗海;董文其;李明 刊期: 2006年第06期

  • 微波凝固肝癌细胞活性的酶组织化学检测

    目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值.方法用10W、1.5~2 min(85~95℃)和5 W、1.5~2 min(55~65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况.结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变.酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(P<0.01).结论 HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果.

    作者:冯炼强;刘大全;朱兆玲;吕明德;谭进富;王竹;周忠信 刊期: 2006年第06期

  • 广东和广西部分地区蝙蝠携带登革病毒及流行性乙型脑炎病毒的调查研究

    目的了解广东及广西蝙蝠携带登革病毒和流行性乙型脑炎(乙脑)病毒的情况.方法 2004年9月至2005年11月期间11次收集广东及广西部分地区的蝙蝠.收集的蝙蝠取脑组织标本和血清标本,采用两对登革病毒和乙脑病毒通用引物,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞培养分离方法检测所采集蝙蝠标本中的登革病毒(dengue virus,DV)和乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV).结果收集了4个科9个种共905只蝙蝠,其中棕果蝠154只、犬蝠395只、普通长翼蝠5只、小黄蝠52只、中菊头蝠228只、中华菊头蝠15只、小菊头蝠41只、双色蹄蝠8只、普氏蹄蝠7只.蝙蝠来源于粤中、粤西和桂东的7个县市.905只蝙蝠标本中未检测、分离到登革病毒和乙型脑炎病毒.结论未发现所调查的蝙蝠携带登革病毒和乙型脑炎病毒.

    作者:胡勇;陈清;李志峰;吴毅;胡贵方;李建栋;俞守义 刊期: 2006年第06期

  • 足叶乙甙在血液透析患者中的应用研究

    目的通过检测足叶乙甙浓度及其药代动力学参数,对血液透析治疗的患者应用标准剂量的足叶乙甙进行药物安全性研究.方法通过高效液相色谱法,检测血浆中足叶乙甙浓度(总浓度和非蛋白结合浓度),观察患者在透析前后药物的浓度、半衰期、药物分布容积等指标.结果足叶乙甙的透析前后药物半衰期的对比符合一级动力两室模型,15例患者透析前后足叶乙甙的半衰期t1/2分别为:(4.3±0.45)h,(3.5±0.36)h.透析过程中药物分布容积为(8.5±0.4)L/m2,血液中非蛋白结合状态的足叶乙甙占总浓度的9.0%(9.02%±0.7%).结论在有肾功能损害的情况下,足叶乙甙在体内通过排泄途径的改变使药物的清除率无明显下降,血透治疗没有显著增加足叶乙甙的排泄.在药动学和临床治疗反应的动态监测下,标准剂量的足叶乙甙静脉治疗在取得积极疗效的同时,药物不良反应轻微,具有较好的安全性.

    作者:张庆光;莫洁庭;钟华 刊期: 2006年第06期

  • 大鼠GAD65基因的克隆与原核表达

    目的构建pGEX-6P-3/GAD65原核表达载体,获得大量纯化的大鼠GAD65蛋白.方法通过RT-PCR技术从大鼠脑组织中扩增GAD65 cDNA,克隆至PGEM-Teasy载体上并测序,利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将GAD65基因插入PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,限制性内切酶消化鉴定.IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定,并用Sepharose4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行酶切.结果扩增的GAD65长度为1758bp,测序结果与已知序列吻合.重组子经酶切鉴定,获得PGEX-6P-3 GAD65原核表达菌株,获得分子量约91 000的PGEX-6P-3/GAD65融合蛋白,分离纯化出约65 000的GAD65蛋白,Western-blot表明重组蛋白能被GAD65单克隆抗体特异结合.结论成功获得GAD65蛋白,为研究GAD65生物学作用奠定了基础.

    作者:郑小玲;刘启才;林勇平;孙卫文;陈盛强;吴晓蔓 刊期: 2006年第06期

  • 湖北省世界银行贷款项目环境改造灭螺工程经济效益分析

    目的分析湖北省世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益,为今后科学规划环境改造灭螺工程提供依据.方法参照卫生经济评价原理和方法,对湖北省160项世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益进行分析.结果 160项环境改造灭螺工程的单位灭螺面积费用为0.81元/m2,有螺面积下降1%的费用为116.62元,总费用效益比为1.10,总净费用效益比为0.10.结论虽然不同疫区市、不同方法的环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益差异较大,但是总体上还是可产生较好的直接效益.

    作者:刘建兵;黄水生;范宏萍;戴裕海 刊期: 2006年第06期

  • 初发2型糖尿病患者血清LTB4与PAF-AH改变的意义研究

    目的探讨初发2型糖尿病患者外周血中白三烯B4(LTB4)与血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性变化的临床意义.方法用ELISA法检测55例初发的2型糖尿病患者血清中LTB4含量与PAF-AH活性,与25例健康体检者对照,并比较它们与患者空腹血糖、HbAlc和空腹胰岛素之间的关系.结果 2型糖尿病患者血清中LTB4含量(864.69±202.67)ng/L与健康对照组(353.31±120.93)ng/L比较,差异有显著性(P<0.01);而2型糖尿病患者血清PAF-AH活性(9.36±3.14)μmol/min·L与健康对照组(6.11±1.23)μmol/min·L比较有显著性差异(P<0.01).2型糖尿病空腹血糖FBG(12.54±4.94)mmol/L、HbAlc(10.23±3.13)%和空腹胰岛素FINS(10.9±11.1)mU/L与外周血LTB4含量和PAF-AH活性之间均呈明显的正相关性(P均<0.01),患者外周血LTB4含量与PAF-AH活性之间也呈明显的正相关性(P<0.01).结论 2型糖尿病患者存在炎症反应,血清LTB4与PAF-AH活性明显升高,提示它们可能共同参与了初发2型糖尿病的病理生理过程,可作为初发2型糖尿病患者病情变化的监测指标之一.

    作者:夏碧文;唐皓;梁艳冰;叶海宁;马中富;熊仕秋 刊期: 2006年第06期

  • 多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子的检测

    目的研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用.方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性,再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应(PCR),分别扩增革兰阴性菌整合子.结果用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子,有21.2%的菌株同时对10种抗生素都耐药,依次为氨苄西林(72.5%)、头孢曲松(62.5%)、头孢唑啉(61.2%)、头孢他啶(56.2%)、哌拉西林(55.0%)、复方磺胺嘧啶(51.2%)、环丙沙星(50%)、庆大霉素(48.8%)、头孢吡肟(48.8%)、头孢西丁(33.8%),显著高于整合子阴性的菌株.用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子,可扩增出1000 bp,1450 bp,1600 bp,1700 bp,1850 bp,1900 bp,大于2000 bp等6种不同长度的脱氧核苷酸(DNA)片段,相同菌属可携带有不同长い度的耐药基因片段,不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段.结论Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中,在多重耐药机制中起着重要的作用.

    作者:廖伟娇;江洁华;易建云;徐韫健;潘思争 刊期: 2006年第06期

  • 自生生活阿米巴的培养、保种和染色的再观察

    目的观察筛选自生生活阿米巴的培养、保存和染色方法,为人体寄生虫学实验教学标本提供代用品.方法用不同的方法和材料培养保存自生生活阿米巴,比较观察其复苏、生长效果;分别用活体染色、碘染色和固定染色(铁苏木素、三色染色法).结果青菜水对自生生活阿米巴培养佳,上述染色剂均能使自生生活阿米巴着色.结论再观察结果证明,自生生活阿米巴可作为人体寄生虫学实验教学标本的代用品,若与其染色标本配合使用,效果更好.

    作者:王唯唯;黄文达;戴世忠 刊期: 2006年第06期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会