侯舒心；郭宪国；门兴元；钱体军；吴滇；石武祥
目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin.方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coli BL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定.结果 经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45 000,与预期理论值相符.结论 Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础.
作者：吴芬芳；宁云山；吴英松；王穗海；董文其；李明 刊期： 2006年第06期
目的了解黔南地区农村居民隐孢子虫病的感染情况及其流行特征.方法对黔南少数民族聚居的山区采取整群分层抽样方法,对1739份农村居民人粪和47份动物粪便标本用改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊.结果黔南地区农村居民隐孢子虫病感染率为2.30%(40/1739),5县(市)在1.01%～5.29%之间,男性感染率2.23%,女性2.39%,0～2岁8.76%(12/137),3～6岁3.76%(7/186),7～12岁1.99%(4/201),13～17岁2.77%(8/289),18岁以上0.97%(9/926).临床主要表现为腹泻,以水样便居多.动物粪便污染的土壤CSO阳性率为2.13%(1/47).结论黔南地区农村居民隐孢子虫病的感染以婴幼儿居多,人群感染率及动物感染率均较高,应引起高度重视.
作者：王红艳；戎聚全；吴桂萍 刊期： 2006年第06期
目的调查广州地区食品中产气荚膜梭菌的污染水平及菌型分布.方法参照国家标准方法进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用针对产气荚梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2六种毒素的基因cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2序列的6对特异性引物,用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型鉴定.同时用产气荚膜梭菌A型参照株NCTC64609作为阳性对照.结果从142份食品中分离到21株产气荚膜梭菌,以冷冻肉的带菌率高,为19.6%;鲜肉和速冻肉饺分别为12.2%和11.9%.经多重PCR方法鉴定,均扩增出预期大小为324 bp的cpa基因片段的特异性条带,未扩增出针对cpb、etx和iA基因的特异性条带,证实均为A型产气荚膜梭菌.携带β2毒素基因的产气荚膜梭菌共19株(占总分离株的90.4%),其中1株为肠毒素基因阳性的A型菌株.结论初步调查表明广州地区食品中存在可致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌污染,为进一步建立广州地区食品中及与食物中毒有关的厌氧菌分子分型数据库奠定了基础.
作者：邓志爱；李孝权；李钏华；张健；张欣强；庞杏林；张颖；莫自耀 刊期： 2006年第06期
目的克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)沉寂信息调节因子Sir2基因,构建原核表达重组载体,表达重组蛋白,并制备抗体进行相关功能的研究.方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离获得阴道毛滴虫Sir2同源基因的cDNA克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析.将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物并对表达产物进行SDS-PAGE鉴定之后,用纯化重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清,对重组蛋白和滴虫总蛋白进行蛋白质印迹鉴定.结果在阴道毛滴虫cDNA文库中获得一株1 034 bp的cDNA克隆,序列分析表明,该序列开放阅读框有912 bp,推测肽链具有304个氨基酸,等电点(PI)5.5.该肽链与酵母SIR2p蛋白及其同源物一致性高达30%～47%,并具有SIR2p及其同源蛋白的三个高度保守的特征性结构域.进化树结果显示,TvSIR2p接近线虫的SIR2蛋白,与同时克隆到的基因组TvSir2比较序列一致,证明该TvSir2基因组DNA不含内含子.PCR扩增出890bp片段,植入表达载体pET-41a;经酶切鉴定后取阳性克隆用IPTG诱导表达,产生融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量为62 000,与预期分子质量相符.用该融合蛋白免疫豚鼠得到的抗体,经Western blotting检测其与相应融合蛋白发生特异性反应,同时在33 000处也能识别滴虫虫体全蛋白.结论推测该克隆是阴道毛滴虫Sir2的同源基因,该基因没有内含子,它可能参与阴道毛滴虫的组蛋白去乙酰化作用及调节衰老和寿命.阴道毛滴虫Sir2基因可以在大肠杆菌中得到表达,并获得了相应的抗血清,为进一步研究其功能奠定了基础.
作者：史咏梅；傅玉才；徐晓园；许铭炎；刘红 刊期： 2006年第06期
目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值.方法用10W、1.5～2 min(85～95℃)和5 W、1.5～2 min(55～65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况.结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变.酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(P＜0.01).结论 HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果.
作者：冯炼强；刘大全；朱兆玲；吕明德；谭进富；王竹；周忠信 刊期： 2006年第06期
目的制备抗PSMD10的单克隆抗体(McAb),并对其特异性进行鉴定.方法用柱层析纯化的重组PSMD10蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,用Protein-G亲和层析纯化接种杂交瘤细胞的小鼠腹水,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,Western-blot分析其特异性.通过免疫组织化学染色法检测PSMD10在肝细胞肝癌组织中的表达部位.结果筛选出2株能稳定分泌抗PSMD10单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗均为IgG2,Western-blot分析显示,2株单抗都与重组的PSMD10发生特异性结合.免疫组织化学染色分析显示,PSMD10表达在肝细胞肝癌的细胞浆内.结论制备的抗PSMD10杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单克隆抗体,可望用于进一步研究肝细胞肝癌的发生发展、诊断和治疗.
作者：陶涛；李明；宁云山；吴英松；季超能；洪艳华；邓东声 刊期： 2006年第06期
目的建立屋尘螨主要变应原Der p 1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性.方法大量诱导表达含pET24a-Der p 1质粒的BL 21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Der p 1纯化蛋白的抗原活性.结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Der p 1蛋白.Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Der p 1蛋白呈强阳性反应,佳血清稀释度为1:64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应.结论纯化后的融合蛋白Der p 1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子.
作者：刘志刚；杨慧；付颖媛；高波；朱健琦；吉坤美 刊期： 2006年第06期
目的探讨广州市荔湾区站前街社区育龄妇女对艾滋病的认知水平,以期为这一人群中开展艾滋病健康教育提供依据.方法以该社区中18～35岁的育龄妇女为研究对象,在艾滋病宣传月进行为期1个月的相关艾滋病健康教育宣传.采用定量(问卷调查)与定性研究(小组访谈)相结合的方法对社区育龄妇女进行调查.自行设计调查问卷,分别于健康教育前后收集调查问卷,分析健康教育对育龄妇女艾滋病防治知识、态度及行为的影响.结果 84.1%的人认为艾滋病病毒感染者值得同情和关心.大多数社区育龄妇女愿意参加到防治艾滋病的活动中.经过健康教育后,调查对象对艾滋病基础知识、传播途径知识知晓率显著提高(P＜0.01).结论该社区育龄妇女艾滋病知识缺乏,应加强对这一人群的艾滋病健康教育,并不断地改进方法,消除育龄妇女对艾滋病的恐惧心理和对当前流行形势的麻痹认识.
作者：曾静；彭淑梅；王晓东 刊期： 2006年第06期
目的采用阳离子脂质体介导的基因转染的方法对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记,建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型.方法以绿色荧光蛋白作为标记基因经阳离子脂质体介导转入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内,活体荧光成像系统直接观察原位肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较.结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达.绿色荧光蛋白转染后的人膀胱移行细胞癌T24细胞的体内外生物学行为无明显改变,裸小鼠膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移.结论绿色荧光蛋白是新一代的生物源性荧光标记物质,它具有分子量小、对细胞无毒、使用方便及容易检测等优点.绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的可视裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法.
作者：谭万龙；吴元东；陈彤；熊林；郑少斌 刊期： 2006年第06期
目的探讨初发2型糖尿病患者外周血中白三烯B4(LTB4)与血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性变化的临床意义.方法用ELISA法检测55例初发的2型糖尿病患者血清中LTB4含量与PAF-AH活性,与25例健康体检者对照,并比较它们与患者空腹血糖、HbAlc和空腹胰岛素之间的关系.结果 2型糖尿病患者血清中LTB4含量(864.69±202.67)ng/L与健康对照组(353.31±120.93)ng/L比较,差异有显著性(P＜0.01);而2型糖尿病患者血清PAF-AH活性(9.36±3.14)μmol/min·L与健康对照组(6.11±1.23)μmol/min·L比较有显著性差异(P＜0.01).2型糖尿病空腹血糖FBG(12.54±4.94)mmol/L、HbAlc(10.23±3.13)%和空腹胰岛素FINS(10.9±11.1)mU/L与外周血LTB4含量和PAF-AH活性之间均呈明显的正相关性(P均＜0.01),患者外周血LTB4含量与PAF-AH活性之间也呈明显的正相关性(P＜0.01).结论 2型糖尿病患者存在炎症反应,血清LTB4与PAF-AH活性明显升高,提示它们可能共同参与了初发2型糖尿病的病理生理过程,可作为初发2型糖尿病患者病情变化的监测指标之一.
作者：夏碧文；唐皓；梁艳冰；叶海宁；马中富；熊仕秋 刊期： 2006年第06期
目的克隆和分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,Tv)Rab1a基因,构建Rab1a基因表达重组载体并表达其融合蛋白,以进一步探讨其功能.方法提取阴道毛滴虫基因组DNA为模板,扩增TvRab1a基因,用pQE80L载体与TvRab1a cDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物并由SDS-PAGE鉴定.结果在阴道毛滴虫cDNA文库克隆中发现了Rab1a基因,序列分析显示Rab1a基因的基因组DNA序列含有一个25 bp大小的内含子.成功构建了pQE/Rab1a原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白质.结论分析表明TvRab1a基因是阴道毛滴虫Rab1鸟苷三磷酸酶同源基因,它含有一个25 bp的内含子.获得了该基因的重组蛋白,将对TvRab1a基因的功能进行进一步研究.
作者：徐晓园；傅玉才；许铭炎；史咏梅；刘红 刊期： 2006年第06期
目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因,并进行序列分析.方法根据GenBank中公布的SARS冠状病毒Tor2株M基因序列,设计一对引物,用RT-PCR法从SARS-CoV GD322株基因组中扩增M基因片段.克隆至pET-32(a)载体,转化大肠杆菌BL-21后测序,利用DNAstar和Clustal X分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoV M基因翻译的氨基酸序列的差异.结果该M基因与Tor2株M基因核苷酸同源性为99.86%;与已收集的81株SARS-CoV M基因所译氨基酸相比,和41株(占50.62%)M蛋白完全同源,37株(占45.68%)仅有一个氨基酸改变,同源性为99.55%,仅与3株(占3.70%)有2个氨基酸差异,同源性为99.10%.结论已获得具有代表性的SARS-CoV M基因重组质粒.
作者：胡族琼；龙北国；晏辉钧；张文炳；方丹云；刘志伟；周经姣；江丽芳；赵卫 刊期： 2006年第06期
植物源杀虫剂以对环境安全、低毒、高效和无抗药性等优势,愈来愈来引起人们的关注.笔者就其对害虫的作用方式和作用机理进行综述,由于植物源杀虫剂的生物活性成分复杂,试虫种类繁多,其杀虫作用方式和作用机理呈现出多样性.
作者：徐河山；马雅军 刊期： 2006年第06期
目的研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用.方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性,再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应(PCR),分别扩增革兰阴性菌整合子.结果用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子,有21.2%的菌株同时对10种抗生素都耐药,依次为氨苄西林(72.5%)、头孢曲松(62.5%)、头孢唑啉(61.2%)、头孢他啶(56.2%)、哌拉西林(55.0%)、复方磺胺嘧啶(51.2%)、环丙沙星(50%)、庆大霉素(48.8%)、头孢吡肟(48.8%)、头孢西丁(33.8%),显著高于整合子阴性的菌株.用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子,可扩增出1000 bp,1450 bp,1600 bp,1700 bp,1850 bp,1900 bp,大于2000 bp等6种不同长度的脱氧核苷酸(DNA)片段,相同菌属可携带有不同长い度的耐药基因片段,不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段.结论Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中,在多重耐药机制中起着重要的作用.
作者：廖伟娇；江洁华；易建云；徐韫健；潘思争 刊期： 2006年第06期
目的观察筛选自生生活阿米巴的培养、保存和染色方法,为人体寄生虫学实验教学标本提供代用品.方法用不同的方法和材料培养保存自生生活阿米巴,比较观察其复苏、生长效果;分别用活体染色、碘染色和固定染色(铁苏木素、三色染色法).结果青菜水对自生生活阿米巴培养佳,上述染色剂均能使自生生活阿米巴着色.结论再观察结果证明,自生生活阿米巴可作为人体寄生虫学实验教学标本的代用品,若与其染色标本配合使用,效果更好.
作者：王唯唯；黄文达；戴世忠 刊期： 2006年第06期
目的探讨丹皮酚(paeonol,Pae)对人肺癌细胞株GLC-82增殖和凋亡的影响.方法采用MTT法检测丹皮酚对体外培养的人肺癌细胞株GLC-82的增殖抑制作用,用透射电镜和流式细胞仪观察Pae对GLC-82细胞的诱导凋亡作用.结果 Pae在31.25～250 mg/L浓度范围内对GLC-82细胞的增殖均有抑制作用,呈现明显的量效和时效依赖关系.透射电镜下可见肿瘤细胞发生凋亡改变.Pae在31.25～250 mg/L浓度下均可诱导GLC-82细胞发生凋亡,有明显的时效和量效关系.丹皮酚作用后细胞周期发生明显变化,主要表现为S期细胞增加,G0/G1期和G2/M期细胞减少,细胞周期几乎停滞于S期.结论 Pae有抑制人肺癌细胞株GLC-82的增殖和诱导其发生凋亡的作用.
作者：张旃；李明昌；谭炳炎；欧阳丽萍；陆家海；罗斌 刊期： 2006年第06期
肺炎链球菌感染在不同人群中的分布受各种因素影响,其流行以及菌株血清型的分布也都有明显的差异性.造成肺炎链球菌致病的各种毒力因子在致病过程中尽管作用不同,但都参与了该过程.深入了解近年来肺炎链球菌感染的流行情况及肺炎链球菌相关毒力因子的研究进展,对预防和治疗肺炎链球菌感染,研制新一代疫苗有着实际意义.
作者：鲜墨；吴忠道 刊期： 2006年第06期
目的观察临床常用的三种抗菌药物对小鼠肠道菌群的影响.方法采用3×2析因设计,将48只昆明小鼠随机分为8组,处理因素和水平分别为头孢氨苄(0,500 mg/kg)、丁胺卡那霉素注射液(0,200 mg/kg)、环丙沙星(0,150 mg/kg),每组按析因设计方案给予处理,给药14 d,动态观察动物粪便大肠杆菌和肠球菌变化的情况.结果①药物作用6 d,三种药物均导致小鼠肠道大肠杆菌数量显著减少,而肠球菌数量增加,作用前后以及与对照组比较差别有统计学意义;②作用14 d,大肠杆菌数回升,有些组甚至高于实验前,而肠球菌数减少显著;③三种药物的交互效应:药物作用6 d,对大肠杆菌的影响方面,头孢氨苄和环丙沙星联合作用有拮抗作用;头孢氨苄和丁胺卡那霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素则有协同作用;头孢氨苄、丁胺卡那霉素和环丙沙星三者联合使用有协同作用.对肠球菌的影响三者抗菌药物之间交互效应有协同作用.药物作用14 d,仅丁胺卡那霉素与环丙沙星之间对肠球菌作用的交互效应有统计学意义,两者有协同作用.结论 头孢氨苄、丁胺卡那霉素和环丙沙星三种抗菌药物均可对小鼠造成肠道菌群失调,特别是环丙沙星导致的菌群失调持续时间较长;抗菌药物对大肠杆菌和肠球菌数量影响的规律不同;三种抗菌药物联合使用有交互作用.
作者：柯雪梅；陈清；杜玉萍 刊期： 2006年第06期
目的建立HSP90稳定高表达细胞系,探讨HSP90在应激适应中的作用及其机制.方法含人类HSP90β全长基因的质粒pSmycHSP经酶切鉴定、大肠杆菌转化、质粒提取纯化后,以电穿孔转染,G418筛选建立HSP90稳定高表达的小鼠成纤维细胞系.通过免疫共沉淀方法,观察HSP90表达与底物蛋白HSP70、Raf-1的结合情况.结果经G418筛选的阳性克隆HSP90 clone细胞HSP90胞膜、胞核强染.免疫共沉淀结果表明,细胞内HSP90含量、HSP90结合的Raf-1量、HSP90结合的HSP70量变化趋势为外源性HSP90转染细胞＞对照.结论 HSP90高表达导致HSP90蛋白与部分底物蛋白的结合性改变.提示细胞可通过HSP90分子伴侣功能,抗衡应激反应中蛋白质变性引起的细胞损伤.
作者：陈雪梅；邹飞 刊期： 2006年第06期
目的分析湖北省世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益,为今后科学规划环境改造灭螺工程提供依据.方法参照卫生经济评价原理和方法,对湖北省160项世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益进行分析.结果 160项环境改造灭螺工程的单位灭螺面积费用为0.81元/m2,有螺面积下降1%的费用为116.62元,总费用效益比为1.10,总净费用效益比为0.10.结论虽然不同疫区市、不同方法的环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益差异较大,但是总体上还是可产生较好的直接效益.
作者：刘建兵；黄水生；范宏萍；戴裕海 刊期： 2006年第06期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
