学术投稿

HPC2真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

谭康联;李志杰;刘靖华;黄浩;唐靖;邓鹏;姜勇

关键词:HPC2, 载体构建, 基因表达, 转染
摘要:目的构建在哺乳动物细胞中表达的HPC2真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达.方法从重组pcDNA3/HPC2载体上将HPC2 cDNA序列亚克隆至带有flag标记的真核表达载体pcDNA3-flag上,经PCR、酶切和测序鉴定,将重组质粒pcDNA3-flag/HPC2用脂质体瞬时转染HEK293细胞,细胞裂解后,用Western blot分析并观察HPC2在HEK293细胞中的表达情况.结果PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-flag/HPC2构建正确,并可在HEK293细胞内高效表达.结论成功构建了pcDNA3-flag/HPC2真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达,为进一步研究HPC2的功能提供了重要的实验材料.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 河豚鱼中毒致呼吸麻痹的临床实质与抢救措施

    目的探讨河豚鱼中毒致呼吸麻痹的临床实质与抢救措施.方法总结分析33例诊断明确的河豚鱼中毒患者采取不同抢救方法与效果.结果使用阿托品解毒及应用呼吸兴奋剂者无明确的药物治疗作用,及时建立人工气道维持有效呼吸与生命支持等综合措施抢救,轻、中症患者在10~14 h左右痊愈,极重症患者也可在19~24 h内恢复自主呼吸.结论河豚毒选择阻断神经与肌肉的电生理活动,呈非去极化型箭毒碱样作用,致呼吸动力障碍,与呼吸中枢无关.M胆碱能受体阻滞剂阿托品及中枢兴奋剂均无明确使用指征,维持有效通气等综合治疗可达到满意疗效.

    作者:刘贵真;车嘉琳;肖明;方座华 刊期: 2005年第12期

  • 以脑功能障碍为主的低血糖症73例临床分析

    目的探讨以脑功能障碍为主要表现的低血糖症的临床特点及发病机制.方法回顾分析73例低血糖反应致脑功能障碍的临床资料.结果糖尿病降糖治疗药物剂量调控不佳是造成该症的主要原因,临床主要表现为昏迷、偏瘫、癫痫、精神异常等,其发病机制复杂,可能和血糖下降速度快、病人年龄大、存在脑动脉硬化以及低血糖引起脑血管痉挛或神经的选择性损伤等因素有关.结论凡遇诊断未明的脑功能障碍者应常规检查血糖,以尽快确诊治疗.此外,糖尿病病人合理使用降糖药物、定期监测血糖是预防低血糖症的关键.

    作者:刘忆星;陆兵勋;刘恋;陈璇;刘忆 刊期: 2005年第12期

  • 1017株临床分离细菌耐药谱和耐药机制的研究

    目的了解本院临床分离细菌的耐药谱和耐药机制,为合理使用抗生素提供依据.方法分离的细菌用BD Phoenix仪鉴定,药敏用K-B法,数据分析用WHONET5软件.结果1017株细菌中前6位为铜绿假单胞菌、凝固酶阴性葡萄球菌(CN5)、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌(SA)、粪肠球菌和肺炎克雷伯菌,分别为19.37%、17.70%、13.27%、12.09%、11.8%和7.57%.G杆菌中,亚胺培南敏感率高(81.5%),头孢他啶敏感率大于70%.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的阳性率分别为34.8%和45.5%.G+球菌中,万古霉素和替考拉宁敏感率分别为99.0%和100.0%,呋喃妥因、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦敏感率大于70%.CNS和SA耐苯唑西林比率分别为78.2%和46.8%.结论本院临床细菌产ESBLs和耐苯唑西林比率高,应加强抗生素的合理使用和采取有效的隔离措施以降低耐药率及多重耐药菌的扩散.

    作者:耿穗娜;芮勇宇;王前;牟成惠;周晓红;张洁 刊期: 2005年第12期

  • 强直性脊柱炎全髋关节置换术股骨假体的选择

    目的分析强直性脊柱炎股骨近段的形态学改变并以之为基础指导强直性脊柱炎的全髋关节置换术的假体选择.方法将24例(36髋)强直性脊柱炎患者设为强直性脊柱炎(AS)组,所纳入患者术前已出现关节强直,并进行非骨水泥人工全髋关节置换术.对照组共30例(45髋),均系非强直性脊柱炎患者并且进行非骨水泥型全髋关节置换术.分析两组患者术前髋关节正侧位片,并且测量Singh指数、髓腔张开指数、皮质形态指数和皮质骨指数,分析两组患者术后x线片,测量股骨假体的髓腔占有率.并且进行组间计量资料t检验,对髓腔占有率和Singh指数进行Spearman等级相关分析.结果两组间在Singh指数、髓腔张开指数、皮质形态指数以及假体髓腔占有率方面存在显著性差异(P<0.05).皮质骨指数两组间无统计学差异(P>0.05).强直性脊柱炎患者的股骨近段出现比较显著的骨质疏松以及形态学改变,髓腔形态更接近于直立,髓腔开口处张口角度更大,骨皮质变薄.结论在没有定制型假体的情况下,对于由于严重骨质疏松所造成的股骨近段髓腔形态呈现烟囱型改变的强直性脊柱炎患者,可以选用传统水泥型假体并且应当按照关节翻修术来处理;对于对髓腔形态没有出现显著改变的强直性脊柱炎患者仍然可以选用传统生物固定型假体;由于其年龄较轻预期生存时间较长,对THA术后髋关节功能期望值较高,根据患者髓腔形态利用计算机辅助设计技术制备特殊设计的个体化水泥型假体应比现有类型假体更加适合强直性脊柱炎患者.

    作者:杨佩;王春生;王坤正;时志斌;宫福良 刊期: 2005年第12期

  • 下肢骨肉瘤的MRI与X线对照研究

    目的对比分析下肢骨肉瘤的X线与MRI表现,探讨MRI对骨肉瘤的诊断价值.方法收集经手术或病理穿刺活检证实的下肢骨肉瘤15例,男11例,女4例,均行MRI平扫及增强扫描(4例行CT扫描),并摄有X线平片,对其MRI征象与X线征象作逐一对比.结果MRI及X线平片对下肢骨肉瘤的诊断准确率均为100%,MRI在显示病变范围、放射状骨针、Codman三角两层结构以及跳跃病灶等方面明显优于X线平片检查.结论X线平片是诊断骨肉瘤简便而实用的方法,但MRI可以更好的显示病变的范围,发现早期病变.

    作者:黄晖;陈燕萍;曹国洪;林志春 刊期: 2005年第12期

  • 人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2.1通道的表达

    目的Kir2.1通道是控制骨髓源性巨噬细胞增殖、活化和凋亡的重要离子通道之一,并且还参与细胞分化.本研究观察Kir2.1通道mRNA及蛋白在人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达.方法采用密度梯度离心加贴壁黏附法,从男性健康志愿者的外周血中分离单核细胞,经5 d培养后分化为巨噬细胞.在建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型的基础上,采用RT-PCR,蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究Kir2.1通道的表达.结果将巨噬细胞同30mg/L氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)于37℃孵育60 h后,细胞体积增大,并有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,细胞内的总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)的含量分别从(54.79±28.304)mg/g、(47.968±26.787)mg/g和(6.822±3.437)mg/g增加至(229.775±57.453)mg/g、(96.241±24.003)mg/g和(133.535±36.292)mg/g,CE/TC从(14.437±6.781)%提高到[(57.946±3.507)%(n=7,P<0.05)].但是,Kir2.1通道mRNA的扩增量在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间无显著差异[(59.074±10.566)%vs(46.98±12.527)%,n=5,P>0.05];同样,Kir2.1通道蛋白在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间亦无显著差异[(60.527±18.621)%vs(50.243±11.583)%,n=6,P>0.05].结论人单核细胞源性巨噬细胞同30mg/LOxLDL孵育60 h后可分化为泡沫细胞,但Kir2.1通道的表达无明显改变.

    作者:雷新军;马爱群;席雨涛;张葳;姚艳;杜媛 刊期: 2005年第12期

  • HPC2真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

    目的构建在哺乳动物细胞中表达的HPC2真核表达载体,并分析其在HEK293细胞中的表达.方法从重组pcDNA3/HPC2载体上将HPC2 cDNA序列亚克隆至带有flag标记的真核表达载体pcDNA3-flag上,经PCR、酶切和测序鉴定,将重组质粒pcDNA3-flag/HPC2用脂质体瞬时转染HEK293细胞,细胞裂解后,用Western blot分析并观察HPC2在HEK293细胞中的表达情况.结果PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组质粒pcDNA3-flag/HPC2构建正确,并可在HEK293细胞内高效表达.结论成功构建了pcDNA3-flag/HPC2真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达,为进一步研究HPC2的功能提供了重要的实验材料.

    作者:谭康联;李志杰;刘靖华;黄浩;唐靖;邓鹏;姜勇 刊期: 2005年第12期

  • 斑蝥素致深度化学烧伤1例

    斑蝥为芫菁科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥全虫,是一种重要的昆虫类药物.现代药学研究表明其主要药用成分是斑蝥素[1].以往的文献报道显示,斑蝥素可使人和动物皮肤发红和起水疱,但不损伤皮肤深层,形成的水疱很快会痊愈[1].我院2004年3月18日收治1例因斑蝥素所致深度化学烧伤患者,创面较深,部分创面为Ⅲ度,经手术植皮等综合治疗治愈出院.

    作者:胡丽;邱学文 刊期: 2005年第12期

  • bcl-2基因表达与小细胞肺癌对抗机体免疫所致细胞凋亡的关系

    目的观察小细胞肺癌细胞株bcl-2基因表达与其耐受肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)免疫攻击的关系,探索应用bcl-2硫代反义寡核苷酸(bcl-2 SON)治疗肺癌的途径.方法bcl-2 SON处理小细胞肺癌细胞株NCI-H69,Western blotting检测其对bcl-2表达作用:分别把bcl-2表达不同的小细胞肺癌细胞株与肺癌标本分离出来的TIL共同培养,并通过JAM试验观察TIL诱导肺癌细胞凋亡的情况.结果经bcl-2 SON处理后NCI-H69细胞的bcl-2表达明显受抑制.JAM试验结果显示,bcl-2 SON处理的H69细胞及无bcl-2表达的NCI-H82细胞在与TIL混合培养中,随着TIL浓度增加,凋亡细胞也增加;对照的NCI-H69可见bcl-2表达,JAM试验中随着TIL浓度增加,凋亡细胞的量无明显变化.结论表达bcl-2的肺癌细胞可对抗肿瘤浸润淋巴细胞的免疫攻击,bcl-2 SON可作为治疗肺癌的新途径.

    作者:郑俊猛;王得坤;姜海明 刊期: 2005年第12期

  • 罕见眼部巨大肿瘤1例

    1临床资料病例,女,16岁,因右眼眶巨大肿物半年,于2004年1月12日入院.病人于2003年7月无明显诱因出现右侧耳下肿物,1月后出现右眼眶肿物,进行性增大,生长速度较快.3个月后肿物表面破渍、渗血,患者一直未进行系统治疗及检查.入院时:神志清晰,精神可,偶有头晕、头痛,无恶心、呕吐,饮食可,睡眠可,二便正常.

    作者:刘求红;詹宇坚;余杨桂;刘聪慧 刊期: 2005年第12期

  • 胸部小切口在肺叶切除手术的临床研究

    目的在保证与传统胸部切口相同手术效果前提下,探索保留胸部肌肉的胸部小切口在肺叶切除手术中的应用价值.方法2000年1月至2005年1月连续336例肺肿瘤随机分为胸部小切口组(184例)和传统切口组(152例),胸部小切口长度平均12.7 cm,比较两组单肺叶切除手术病人的术中术后资料,包括手术切口长度、手术时间、术中出血量、术后引流量、术后输血量、术后止痛药用量、术后离床时间及住院时间、术后主要并发症等.结果胸部小切口组的各项指标明显优于传统切口组(P<0.01),小切口组病人恢复良好,无严重并发症及围术期死亡.结论胸部小切口对胸部损伤小、出血少、并发症少、恢复快、住院时间缩短、切口美观等优点.该切口能满足肺叶切除手术的需要,可作为肺肿瘤手术的常规切口.

    作者:方丹青;彭品贤;廖成全 刊期: 2005年第12期

  • 人CD40分子基因转染人脐静脉内皮细胞ECV-304

    目的构建人CD40的真核表达载体,建立持续、稳定高表达CD40的人脐静脉内皮细胞ECV-304.方法将含有CD40的克隆载体pUCD40酶切后,再克隆到真核表达载体pCDNA3.1中,构建重组质粒pCDNA3.1(+)/CD40,并对重组质粒进行酶切鉴定.然后用脂质体法将重组质粒转染ECV-304,G418筛选转染的细胞.RT-PCR、Western-blotting和流式细胞仪定性定量检测转染后的ECV-304的CD40的表达情况.结果经酶切鉴定,重组体中已插入目的基因片段CD40.RT-PCR和Western-blotting证实,重组质粒转染的ECV-304中有CD40基因的表达,流式细胞仪检测转染后的ECV-304的CD40的表达率为95%.结论成功构建了真核表达载体pCDNA3.1(+)/CD40,并建立了高表达CD40的ECV-304,为筛选抗动脉粥样硬化药物奠定了基础.

    作者:王维蓉;林蓉;杨玉琮;甘伟杰;刘俊田;吕社民 刊期: 2005年第12期

  • 18FDG PET在鼻咽癌放疗后鼻咽部复发或残留再程三维适形放疗中的临床价值

    目的探讨18氟-脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描仪(18FDG PET)在鼻咽癌放射治疗后鼻咽部复发或残留再程三维适形放射治疗(3DCRT)中的临床应用价值.方法对36例首程放射治疗后鼻咽部复发或残留的鼻咽癌患者,采用CT模拟定位,结合18FDG PET确定靶区范围,应用三维适形放射治疗,观察CT与18FDG PET确定靶区大小的差异、疗效和并发症.结果36例患者中,18FDGPET较CT而言,大体肿瘤体积大小无变化的占36.1%(13/36)、增加的占16.7%(6/36)、缩小的占47.2%(17/36).1、2、3年局部控制率分别为97.2%、75.0%、58.3%;1、2、3年生存率分别为94.4%、86.1%、72.0%;1、2、3年无瘤生存率分别为85.7%、76.6%、56.1%.急性放射反应主要是急性放射性口咽、鼻咽粘膜炎和口干,多为Ⅰ~Ⅱ级.晚期放射损伤包括听力丧失5.6%(2/36)、张口困难25.0%(9/36)、吞咽困难8.3%(3/36)、慢性副鼻窦炎33.3%(12/36)、脑神经损伤13.9%(5/36).结论三维适形放射治疗结合18FDG PET确定靶区范围在鼻咽癌放射治疗后鼻咽部局部复发或残留中有较好的疗效,同时由于靶区缩小而使放射损伤发生率降低.

    作者:丁轶;吴德华;陈龙华 刊期: 2005年第12期

  • 经翼点锁孔手术治疗前循环动脉瘤

    目的探讨经翼点锁孔入路治疗前循环动脉瘤的可行性和手术方法.方法对18例前循环动脉瘤采用经翼点锁孔入路进行夹闭术,其中后交通动脉动脉瘤9例、大脑中动脉动脉瘤3例、前交通动脉动脉瘤6例.患者Hunt-Hess临床分级均在Ⅲ级以内.结果均获得成功夹闭,术后无面神经损伤表现,平均手术时间缩短1~2 h.1例左后交通动脉瘤术中破裂,术后出现一过性感觉和运动性失语.结论经过慎重的选择病例以及术前周密的手术设计,经翼点锁孔入路治疗前循环动脉瘤是一种较理想的术式.

    作者:冯文峰;漆松涛;黄胜平;黄理金 刊期: 2005年第12期

  • HPLC-ELSD法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的研究

    目的建立高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的的分析方法.方法采用Hypersil-ODS(4.0 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(30:70),流速0.5 ml/min;柱温25℃;利用ELSD检测器检测:漂移管温度98℃,载气流速3.2 L/min.结果苦杏仁苷进样量在1.0~15.1μg范围内,标准曲线呈良好的线性关系,r=0.9999,苦杏仁苷的平均回收率为99.0%,RSD为2.9%(n=5).结论本方法简便快速,结果准确可靠,为苦杏仁苷的含量测定提供了一个新方法,可用于苦杏仁药材及含苦杏仁复方制剂的质量控制.

    作者:吴昭晖;游文玮;HE Feng 刊期: 2005年第12期

  • 卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达

    目的研究DNA转录与修复相关基因的表达与卵巢癌顺铂耐药性之间的关系.方法以卵巢癌亲本细胞系COCl为对照,应用cDNA微阵列检测其顺铂耐药细胞系COC1/DDP中DNA转录与修复相关基因的表达.结果和结论与COCl细胞相比,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,其中共有20个DNA转录与修复相关基因的表达发生改变,表达上调的有13个基因,表达下调的有7个基因,包括CAD、DDB1、DDIT4等大量DNA修复基因以及一般转录因子RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ基因和DHX9、DDX3X基因的表达上调以及MLH1和BTF3基因的低表达,提示COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与DNA转录和损伤修复能力的异常有关.

    作者:曹漫明;张积仁;汪森明;胡喜钢;胡利娟 刊期: 2005年第12期

  • 紫杉醇联合Herceptin或表阿霉素治疗Her-2/neu阳性乳腺癌患者的临床疗效

    目的比较Herceptin联合紫杉醇(TAX)的生物化疗组和表阿霉素(EPI)联合TAX单纯化疗组治疗Her-2/neu阳性表达的乳腺癌患者的疗效评估以及前者血清肿瘤标志物的变化及意义.方法选择免疫组化法检查Her-2/neu为阳性的乳腺癌患者为入选对象,以32例接受Herceptin联合TAX方案治疗者为研究组,41例接受EPI联合TAX方案治疗者为对照组,分别观察上述两组病人的疗效、研究组病人Her-2/neu表达强度与疗效之间的关系及该组患者血清肿瘤标志物的变化.结果Herceptin联合TAX治疗乳腺癌的客观有效率(RR%)、临床受益率(RR+SD%)均明显高于EPI联合TAX组;生物化疗组中,免疫组化检测结果为Her-2/neu(+)、Her-2/neu(++)、Her-2/neu(+++)的患者的临床有效率分别为0%、44.4%和63.6%;单纯化疗组分别为8.3%、36.4%和38.9%;Herceptin联合TAX方案化疗后,血清肿瘤标志物水平与化疗前比较有不同程度降低,CA153、TPS及CEA与治疗前相比有显著性差异(P<0.05),而CA125则无显著性差异(P>0.05).结论对于Her-2/neu阳性的晚期乳腺癌患者,Herceptin联合TAX方案组的疗效明显优于TAX联合EPI方案组,对Her-2/neu(+++)的乳腺癌患者,Herceptin联合TAX治疗的有效率高于Her-2/neu(++)的患者.肿瘤标志物CEA、TPS、CA153在判定疗效上也有一定的临床价值.

    作者:崔斐;罗荣城;陈锦章;陈斌;黄宇贤 刊期: 2005年第12期

  • 可行走式分娩镇痛对胎儿血氧饱和度的影响

    目的探讨可行走式分娩镇痛对胎儿血氧饱和度的影响.方法选取60例足月待产病例,其中30例行罗哌卡因+舒芬太尼复合的腰硬联合镇痛即可行走式分娩镇痛,30例自然分娩组产程中不使用任何药物镇痛.在活跃期进行胎儿血氧饱和度的监护,记录第一产程活跃期、第二产程胎儿血氧饱和度值及胎儿血氧饱和度低值.胎儿出生后立即抽取脐动脉血进行血脐分析,记录pH值和BE值.结果可行走式分娩镇痛组和自然分娩组比较:第一产程活跃期胎儿血氧饱和度分别为(51.92±5.90)%和(50.77±6.47)%(P=0.48),第二产程胎儿血氧饱和度分别为(44.85±6.27)%和(43.12±7.34)%(P=0.32);胎儿血氧饱和度低值分别为(41.63±7.51)%和(40.96±7.48)%(P=0.73).结论可行走式分娩镇痛对产程中胎儿血氧饱和度无影响.

    作者:高云飞;余艳红;史永胜;黄晓莉;刘高望 刊期: 2005年第12期

  • 荆芥连翘汤对促进皮肤溃疡愈合的影响

    目的观察荆芥连翘汤对小鼠皮肤溃疡的治疗作用.方法建立小鼠皮肤创伤和烫伤两种皮肤溃疡模型,比较荆芥连翘汤以及rhEGF的用药组和自身对照组小鼠皮肤溃疡面积,用显微镜观察溃疡面炎症细胞浸润情况.结果和自身对照组相比,荆芥连翘汤可明显缩小小鼠皮肤溃疡面积(P<0.001),同时炎症细胞浸润显著减少(P<0.001);荆芥连翘汤用药组疗效显著优于rhEGF用药组.结论荆芥连翘汤可明显促进小鼠皮肤溃疡的愈合.

    作者:刘学清;曾抗;兰海梅;陈宝田 刊期: 2005年第12期

  • 姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡以及对c-myc、caspase-3表达的影响

    目的探讨姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其对c-myc、Caspase-3表达的影响.方法姜黄素处理A375细胞,MTT法检测细胞的生长活性,应用倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察,采用Annexin V/PI双染法和DAN片段化分析检测细胞凋亡,SABC免疫组化法和原位杂交检测细胞内c-myc、Caspase-3表达水平.结果姜黄素能抑制A375细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性.经30 μmol/L姜黄素处理A375细胞48 h,细胞呈现凋亡形态学改变;DAN片段化分析可见到明显的DNA梯带形成;流式细胞仪定量检测出20 μmol/L以上浓度姜黄素诱导细胞凋亡的发生率较对照组有显著性差异.c-myc表达水平减少,而Cas ase-3表达增加.结论姜黄素能抑制A375细胞增殖和诱导其凋亡,c-myc和Caspase-3基因可能参与凋亡过程.

    作者:邱实;谭升顺;张江安;刘安;袁景奕;饶国洲;王文勇 刊期: 2005年第12期

南方医科大学学报杂志

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