学术投稿

小鼠Nestin启动子的克隆及其表达载体的构建

张丽;袁红花;袁凤刚;朱孝荣

关键词:遗传载体, 启动子, Nestin, 调控, 转染
摘要:目的:克隆Nestin基因启动子序列,并研究其调控能力.方法:用高保真酶PCR扩增出小鼠Nestin启动子全序列、核心序列,pcDNA3.1质粒双酶切切掉CMV启动子序列,将Nestin基因启动子序列插入到原CMV启动子位置,pEGFP-N1质粒双酶切下EGFP序列,克隆入pcDNA3.1多克隆位点中,重组构建质粒,分别用Nestin启动子全序列和核心序列调控EGFP基因的表达.重组质粒分别转染Nestin+细胞和Nestin-细胞,观察EGFP基因在细胞内的表达情况.结果:成功克隆出Nestin基因启动子全序列和核心序列.经酶切鉴定及测序证实正确.二序列皆能调控EGFP在各种细胞内的表达.结论:Nestin基因启动子全序列和核心序列具有非特异性调控能力.
实用医学杂志相关文献
  • 重组人p53腺病毒注射液逆转鼻咽癌化疗耐药的研究

    目的:探讨重组人p53腺病毒(rAd-p53)瘤内注射前后的鼻咽癌原发灶中P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance-associated protien,MRP)和肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)的表达情况及其意义.方法:71例确诊中晚期鼻咽癌的患者随机分为3组:基因治疗组(27例,行-rAd-p53瘤内注射+同步放化疗)、常规放化疗组(24例)和单纯放疗组(20例).12例同期门诊活检病理为鼻咽黏膜慢性炎患者作为对照.分别收集治疗前、治疗中鼻咽部瘤体组织标本.采用免疫组化法检测鼻咽癌组织中P-gp、MRP和LRP的表达情况.结果:鼻咽癌组中P-gp、MRP及LRP阳性表达率分别为57.7%(41/71)、57.7%(41/71)、53.5%(38/71),黏膜慢性炎组未见P-gp、MRP及LRP表达.基因治疗组治疗前、后原发灶P-gp、MRP和LRP蛋白阳性表达率分别为55.6%和25.9%、63.0%和33.3%、59.3%和25.9%,差异有统计学意义.常规放化疗组治疗前、后鼻咽癌原发灶P-gp、MRP和LRP蛋白阳性表达率分别为62.5%和79.2%、58.3%和70.8%、50%和58.3%,差异无统计学意义.单纯放疗组治疗前、后鼻咽癌原发灶P-gp、MRP和LRP蛋白阳性表达率分别为55.0%和55.O%、50%和40%、50%和55%,差异无统计学意叉.结论:P-gp、MRP和LRP与鼻咽癌的内源性耐药相关;p53基因治疗可一定程度逆转鼻咽癌耐药,可能是其治疗鼻咽癌的作用机制之一.

    作者:张政;翁敬锦;兰桂萍;韦海明;覃扬达;覃颖;孙金杰;司勇锋 刊期: 2012年第03期

  • CA19-9对胆管细胞癌的诊断价值评价

    目的:用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清CA19-9对胆管细胞癌的诊断、鉴别诊断价值,并对诊断界点(cut-off value)进行确定,以期对CA19-9应用于胆管细胞癌的诊断价值进行客观评价.方法:采用化学微粒子免疫发光法检测胆管细胞癌患者、肝细胞癌患者、肝血管瘤患者及健康对照血清CA19-9,绘制ROC曲线.结果:胆管细胞癌患者血清CA19-9较肝细胞癌患者、肝血管瘤患者及健康对照均高,有统计学意义(P<0.01).胆管细胞癌与肝血管瘤比较的ROC曲线显示AUC为0.882,诊断界点值为55.09 μ/mL时,敏感度达81.8%,特异度速99.0%;与肝细胞癌比较的AUC为0.830,诊断界点值为63.58 μ/mL时,敏感度达81.8%,特异度达87.5%.结论:血清CA19-9检测对于胆管细胞癌的诊断及与肝细胞癌的鉴别诊断具有较高的价值.

    作者:习浩;刘荣静 刊期: 2012年第03期

  • 间歇充气压力泵辅助预防妇科盆腔术后下肢深静脉血栓的疗效观察

    目的:观察使用间歇充气压力泵对预防和减少妇科盆腔术后下肢深静脉血栓形成的疗效.方法:将术后80名患者分为试验组(40例)和对照组(40例),两组基础护理和药物治疗相同,试验组在基础护理和药物治疗的基础上加用间歇充气压力泵驱动下肢循环.结果:试验组出现2例下肢深静脉血栓,发生率为5%,对照组出现8例下肢深静脉血栓.发生率为20%.经x2检验,试验组和对照组在妇科盆腔术后深静脉血栓的预防上有明显的差异性.结论:对妇科盆腔手术后患者的下肢用充气压力泵作间歇循环驱动,可有效预防和减少下肢深静脉血栓形成的发生.

    作者:易芬兰;黄慧英;王丹;钟清玲 刊期: 2012年第03期

  • Cdx2-siRNA对胃癌细胞Survivin和Caspase-9表达的影响

    目的:观察Cdx2小分子干扰RNA(Cdx2-siRNA)对人胃癌MGC-803细胞凋亡及Survivin、Caspase-9表达的影响.方法:设计合成针对Cdx2基因的siRNA寡核苷酸以及阴性对照siRNA.将人胃癌MGC-803细胞接种于培养板中,分为3组,正常对照组不作处理,阴性对照组和Cdx2-siRNA组分别用LipofectamineTM 2000将阴性对照siRNA或Cdx2-siRNA成功转染进细胞内.应用流式细胞仪检测转染24 h时MGC-803细胞凋亡的变化,并应用RT-PCR和Western blot技术检测胃癌MGC-803细胞中Survivin和Caspase-9基因mRNA和蛋白的表达.结果:Cdx2-siRNA组MGC-803细胞的凋亡率为(12.5± 0.6)%,明显高于阴性对照组和正常对照组(P<0.05);Cdx2-siRNA组Survivin mRNA和蛋白的表达量分别为(0.14±0.04)和(0.51 ±0.12),明显低于阴性对照组和正常对照组(P<0.05);Cdx2-siRNA组Caspase-9 mRNA和蛋白的表达量分别为(0.98 ±0.24)和(1.78 ±0.41),明显高于阴性对照组和正常对照组(P<0.05);而阴性对照组和正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:Cdx2-siRNA促进人胃癌细胞的凋亡,其机制可能与其抑制Survivin的表达、增强Caspase-9的活性有关.

    作者:杨杰;王晓通;谢玉波;肖强 刊期: 2012年第03期

  • 真性桡动脉瘤1例

    患者男,44岁,会计.主因发现左腕部搏动性包块3年就诊.无外伤史及介入治疗史,查体:左桡动脉处可见-2.0 cm×3.0 cm的椭圆形包块,可触及搏动,尺动脉搏动良好,Allen试验阳性.

    作者:齐一侠;张建;俞恒锡 刊期: 2012年第03期

  • PNF技术联合拮抗肌针刺对上肢痉挛性偏瘫的疗效

    目的:观察PNF技术联合拮抗肌针刺对脑卒中后上肢痉挛性偏瘫的疗效.方法:将70例脑卒中恢复期患者随机分为治疗组(37例)和对照组(33例).对照组给予常规康复训练及针刺拮抗肌治疗,治疗组在此基础上加用上肢PNF技术,均治疗4周.治疗前后采用改良Ashworth分级法、Fugl-Meyer(fugl-Meyer assessment,FMA)上肢运动功能评定量表、改良Barthel指数评定量表分别评定上肢的痉挛程度、运动功能及日常生活活动能力(activities of daily living,ADL).结果:治疗4周后,两组患者偏瘫上肢的痉挛程度均较前降低(P<0.05),运动功能及日常生活活动能力较前明显改善(P<0.01),并且治疗组优于对照组(P<0.05).结论:PNF技术联合拮抗肌针刺可有效减轻患者偏瘫上肢的痉挛程度,提高其运动功能,改善其日常生活活动能力.

    作者:王润妹;宋成宪;李舜;刘小蓝;习丽明 刊期: 2012年第03期

  • 急性心肌梗死患者视黄醇结合蛋白4和脂联素的水平变化及性别差异

    目的:检测急性心肌梗死(AMI)患者与正常对照者血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)和脂联素(APN)水平,探讨二者是否存在性别差异.方法:采用酶联免疫吸附试剂盒检测空腹状态下AMI患者(AMI组)和正常对照者(对照组)血清RBP4和APN水平,并常规化验FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C等生化指标.结果:与对照组比较,AMI组患者RBP4水平显著升高,APN水平显著降低,HDL-C显著降低,FPG显著升高.AMI组与对照组血清RBP4和APN水平均有性别差异,男性RBP4水平显著高于女性,但APN水平显著低于女性.结论:AMI患者存在RBP4和APN水平变化和性别差异.

    作者:丁玉静;邱丽君;苏卫东;崔亚斌 刊期: 2012年第03期

  • 改良NOTES及TUES在腹腔镜结直肠手术中的应用

    目的:探讨经自然腔道内镜手术(natural orifice tragslaminal endoscopic surgery,NOTES)及经脐入路内镜手术(TUES)技术在腹腔镜腹部外科手术中的临床应用价值.方法:采用NOTES及,TUES技术,自行设计了肛门转换器,标本切除后经此肛门转换器拖出,完成了5例免辅助切口腹腔镜乙状结肠癌根治术.采用,TUES完成右半结肠及直肠癌各1例.结果:手术过程用时平均260min,术中平均失血量约为110mL,全组无手术死亡病例,无术后出血、吻合口漏等并发症,随访0.5-1年无腹壁穿刺孔或切口肿瘤复发,术后患者腹部切口未见明显瘢痕,美容效果良好.结论:经过我们加以改良,NOTES及TUES技术在腹腔镜腹部外科临床实际运用中操作更为简单、实用,改进后的技术对器械要求不高,既克服了单孔技术的操作难度大的问题,也改良了NOTES技术因入路带来的伦理、感染、内瘘等问题,同时仍然具备NOTES及TUES技术入路隐蔽、体表无创口或微小瘢痕、创伤小等特点,有临床实用价值及广泛的应用前景.

    作者:杜吉义;陈江;李家辉;刘叔仁 刊期: 2012年第03期

  • 手术去势间断联合抗雄激素药物治疗晚期前列腺癌临床疗效分析

    目的:探讨手术去势联合间断抗雄激素药物治疗晚期前列腺癌的临床疗效.方法:选取晚期失去根治手术机会前列腺癌患者124例,其中98例为手术组,予以行双侧睾丸切除术,术后1周内口服抗雄激素药物,26例作为时照组,予以黄体生成素释放激素类似物(LHRH-a)及抗雄激素药物.两组患者在年龄、临床分期、前列腺特异性抗原(PSA)水平、Gleason评分等方面无统计学差异(P>0.05).以手术日或第1次注射LHRH-a为起点,定期复查PSA,当PSA≤0.2 ng/mL后持续3~6个月停用抗雄激素药物或LHRH-a,以后根据复查PSA结果,决定是否新一轮治疗.治疗期及间歇期检测血清PSA、睾酮、肝肾功能、血常规、骨扫描、盆腔MRI等,并在治疗前、治疗后6个月及12个月行生活质量评分.结果:124例患者均对内分泌治疗敏感,手术组98例患者内分泌治疗(1.5 ±0.4)个月后血清PSA均降至低值,对照组23例患者在内分泌治疗(3.5±0.8)个月后血清PSA均降至低值,两组前列腺体积均明显缩小,随访时间2.1~7年.生存质量评分显示.患者性欲减退、阵发性潮热、体力及精神状态在间歇期得到明显改善(P<0.01),组间比较对照组较手术组缓解更明显(P<0.05).结论:手术去势联合间断雄激素药物是治疗晚期前列腺癌的有效手段,尤其适合已行去势手术、年纪较大或贫困地区经济承受能力较差的患者.

    作者:万克松;胡卫列;夏照明;朱陈辉;汪帮琦;聂海波;吕军 刊期: 2012年第03期

  • 间歇性高容量血液滤过对严重脓毒症炎症介质的影响

    目的:探讨间歇性高容量血液滤过(PHVHF)对严重脓毒症血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素10(IL-10)等炎症介质的影响,评价其治疗严重脓毒症的临床疗效.方法:2009年3月至2011年3月收住到温州医学附属第六医院的40例严重脓毒症患者纳入本研究,并随机分成对照组(常规治疗)和PHVHF组,PHVHF组患者入选后除接受常规治疗外,还接受72 h的PHVHF治疗.在治疗前和治疗72 h后收集血标本.检测血清中TNF-α、IL-6和IL-10炎症介质水平变化.同时进行急性生理和慢性健康状况评分(APACHE Ⅱ)、简化的急性生理评分(SAPS Ⅱ)和序贯器官功能衰竭评分(SOFA).结果:经PHVHF治疗后,患者的病情和血流动力学指标明显改善.TNF-α、IL-6、IL-10浓度较治疗前明显下降(P<0.05).相反,对照组上述指标却无明显变化(P>0.05).结论:PHVHF治疗可以改善脓毒症患者的临床病情和血流动力学,有效地清除血浆炎症介质.因此,PHVHF是一种治疗严重脓毒症患者可行的辅助治疗模式.

    作者:邱泽亮;张宁;宁易平;徐俊龙;楼天正 刊期: 2012年第03期

  • 泛福舒联合流感疫苗佐治老年支气管扩张患者的临床疗效观察

    目的:探讨泛福舒联合流感疫苗对老年支气管扩张患者的临床意义.方法:将54例老年支气管扩张患者于缓解期随机分成疫苗组和对照组.疫苗组病例于观察开始前口服泛福舒以及每年我国流感高发季节前接种灭活流感疫苗.两组患者均观察2年,每4周随访1次.对咳嗽、咳痰、咯血等症状以及胸部影像学资料进行临床评价;登记疫苗组1、2年内肺炎复发次数及再发肺部感染的相距时间,与对照组进行回顾性对比分析.结果:疫苗组1年再发肺部感染病例明显低于对照组,而再发肺部感染的相距时间延长,但两年内再发肺部感染病例与对照组差异无差显性.结论:泛福舒联合流感疫苗接种是临床佐治老年支气管扩张的一个有效方法,值得临床推广.

    作者:卢树标;吕文慧 刊期: 2012年第03期

  • 老年患者吞咽困难评估的研究进展

    国内60~79岁老年患者的误吸率为14.2%[1],国外的10%-30%的65岁以上老年人存在吞咽困难情况[2].现在大约600-100万美国人有不同程度的吞咽困难[3].

    作者:邹小芳;于书慧;刘青 刊期: 2012年第03期

  • 氧化应激与重症哮喘研究进展

    支气管哮喘是一种嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性非特异性疾病.流行病学研究表明.哮喘的发病率和病死率具有全球性上升的趋势.

    作者:蓝楠 刊期: 2012年第03期

  • 脑缺血大鼠海马CA1、CA3区及齿状回钙神经素的表达与学习记忆损伤的关系

    目的:建立脑缺血致大鼠学习记忆障碍模型,通过免疫组化检测海马CA1、CA3区和齿状回钙神经素(CaN)的分布与表达,探讨海马内CaN的表达与脑缺血后学习记忆损伤的关系.方法:SD雄性大鼠54只,随机分为对照组、假手术组、缺血组、缺血再灌注组,对后3组大鼠建立模型.大鼠造模后1周进行Morris水迷宫学习获得实验,3周后进行记忆保持实验.实验结束后取海马组织,HE染色观察海马CA1、CA3区及齿状回组织细胞形态,免疫组化法检测CaN的表达.结果:(1)与对照组及假手术组相比,缺血再灌注组海马痛理学变化、学习记忆损伤程度明显.(2)与对照组及假手术组相比,缺血组与缺血再灌注组CA1、CA3区及齿状回的CaN阳性细胞数明显增多(P<0.05);假手术组与对照组CA1、CA3区及齿状回的CaN阳性细胞数相比较差异无统计学意义:缺血组与缺血再灌注组CA1区和齿状回的CaN阳性细胞数相比较差异无统计学意义;缺血组CA3区CaN阳性细胞数与缺血再灌注组阳性细胞数差异有统计学意义(P<0.05).结论:缺血组、缺血再灌注组大鼠学习记忆功能明显损伤,其海马CA1、CA3区及齿状回CaN表达明显增多,提示海马内CaN可能与大鼠脑缺血致学习记忆障碍有关.

    作者:朱献;张琳;吴小侨 刊期: 2012年第03期

  • 检测胃癌血清和腹水中CA72-4抗原水平的临床意义

    目的:对胃癌患者进行CA72-4含量的检测,分析血清和腹水中的CA72-4水平与胃癌的相关性,预期判定腹膜复发的可能性.方法:研究了48例胃癌患者血清和腹水中的CA72-4水平、损伤部位及根除和淋巴结转移的数量.结果:淋巴结转移的胃癌患者与血清和腹水中的高水平CA72-4含量显著相关.浆膜浸润胃癌与血清中的CA72-4水平含量无显著统计学相关性,然而,与腹水中的CA72-4水平含量显著相关.尽管血清中的CA72-4水平含量与晚期胃癌无显著相关性,但腹水中的CA72-4水平含量与晚期胃癌呈显著相关.结论:腹水中的CA72-4高水平含量与淋巴结转移和浆膜浸润胃癌显著相关.血清中的CA72-4水平含量仅与淋巴结转移相关,与浆膜浸润胃癌无显著相关.

    作者:孙萍;盛家和;王征帆 刊期: 2012年第03期

  • 快速康复外科面临的问题及思考

    快速康复外科(fast track surgery,FTS)是指采用有循证医学证据的围术期处理的一系列优化措施,以减少或降低患者的心理及生理创伤应激.促进患者术后快速康复.FTS安全有效,明显改善术后脏器功能恢复、缩短术后住院时间,而并不增加甚至降低术后并发症率及病死率[1-4].

    作者:谢正勇;程黎阳 刊期: 2012年第03期

  • 脂联素、同型半胱氨酸在退行性心瓣膜病患者中的水平变化及其临床意义

    目的:探讨老年退行性心瓣膜病患者脂联素及同型半胱氨酸的水平变化及其意义.方法:选择老年退行性心瓣膜病患者80例作为观察组.健康者60例作为对照组.比较组间脂联素、同型半胱氨酸水平差异,分析其与瓣膜病变程度、瓣膜病变数量之间的关系.结果:观察组血清脂联素水平明显低于对照组(P<0.01)、同型半胱氨酸水平明显高于对照组(P<0.01);随着瓣膜病变数量增多及返流程度加重,脂联素水平进行性下降(P<0.05),同型半胱氨酸水平进行性升高(P<0.05).结论:低脂联素血症及高同型半胱氨酸血症可能是老年退行性心瓣膜病的危险因素.

    作者:周华兰;徐培敬;胡得飞;张枫林;陈颖 刊期: 2012年第03期

  • 右美托咪定复合芬太尼用于患者自控镇痛的临床观察

    目的:观察右美托咪定复合芬太尼用于患者静脉自控镇痛是否改善镇痛效果和减轻与芬太尼有关的副作用.方法:全组60例女性患者,年龄25~60岁,ASA I或Ⅱ级,全麻下行妇科手术.随机双盲分为两组n=30):F组-镇痛泵100 mL生理盐水中+芬太尼0.8 mg(8 μg/mL);FD组-镇痛泵100 mL生理盐水中+芬太尼0.8 mg+右美托咪定400 μg(4 μg/mL).观察记录:首次PCA时间;PCA按压总次数和无效次数:24 h芬太尼总用量;不同时段疼痛强度;血流动力学和呼吸的变化.结果:FD组患者术后24 h内芬太尼用量明显少于F组[(440±19.6)μg vs(576±25.5)μg,P<0.01].术后2、4和8 h,FD组及MAP及HR明显较术前减少或降低(均P<0.01).FD组在术后0-24 h内恶心和瘙痒发生率显著低于F组(13%vs 40%和17%vs 40%,P<0.05);未发现心动过缓、血压过低、过度镇静和呼吸抑制现象.结论:右美托咪定复合芬太尼用于患者静脉自控镇痛可改善芬太尼镇痛效果,节俭芬太尼用量、减少有关副作用;提高静脉芬太尼患者自控镇痛的满意度.

    作者:姚敏;张兆平;顾美蓉;高宏;孙国华 刊期: 2012年第03期

  • 心脏房室结旁间皮瘤1例

    患者男,31岁,已婚,工人,平素健康,发病当晚8:50左右夫妻俩在房内商议家事,患者突然感到呼吸困难,胸闷不适,随即倒地.脸色苍白,口唇青紫,两眼垂闭,双手冰冷,121角留有白沫,呼之无应答.

    作者:魏秀珍 刊期: 2012年第03期

  • 神经型钙黏附蛋白与肿瘤关系的研究进展

    钙黏附分子超家族包括经典型钙黏附分子和非经典型钙黏附分子,经典型钙黏附分子主要包括上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏附蛋白(N-cadherin).E-cadherin主要表达在人类各种上皮组织中,在细胞的形态发生和维持上皮完整性及肿瘤细胞间紧密接触等方面起着重要作用.

    作者:曹莉 刊期: 2012年第03期

实用医学杂志

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主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所