学术投稿

新生大鼠少突胶质前体细胞的培养与鉴定

王丽雁;蔡文琴;陈鹏慧

关键词:少突胶质前体细胞, 细胞培养, 大鼠
摘要:目的 在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs).方法 原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养.免疫荧光法及膜片钳记录细胞电生理特性进行鉴定.结果 振荡分离后超过90%细胞为NG2阳性OPCs:OPCs电生理特性:输入阻抗Ra相对较高;电压依赖的K+电流具有外向整流特性;对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)敏感的小的内向Na+流,不能产生动作电位.结论 振荡法结合差速贴壁可以获得纯度较高的OPCs;OPCs具有区别于神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞的独有电生理特性.
第三军医大学学报杂志相关文献
  • 护理干预对改善慢性阻塞性肺疾病患者生命质量的影响

    慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是严重危害公众健康的多发病、慢性病.2005年我国COPD流行病学调查显示:全国每年因COPD死亡100万人,COPD致残500万~1000万人,我科对住院治疗的COPD患者52例采取护理干预措施,取得满意效果,现介绍如下.

    作者:吴海燕;张钦芳;张安琴 刊期: 2008年第06期

  • 低频复合生理频率慢性电刺激对肺气肿兔膈肌力学特性的影响

    目的 研究低频复合生理频率慢性电刺激后肺气肿兔膈肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型及其力学模式的适应性变化.方法 采用木瓜蛋白酶雾化吸入法建立肺气肿模型:测定正常对照组、肺气肿组和肺气肿各慢性电刺激(chronic electfical stimulation,CES)组膈肌MHC亚型及膈肌颤搐收缩张力(Pt)、峰值张力时间(TPT)、1/2松弛时间(1/2Rt)、强直颤搐收缩张力(Po)、疲劳指数(FI)和疲劳恢复指数(FRI)的适应性变化.结果 ①340 Hz、10 Hz、(10+40)Hz慢性电刺激后肺气肿兔膈肌MHC的相对含量较刺激前都明显增加(P<0.05).10 Hz组MHC-I型比例明显增加(P<0.01).(10+40)Hz组MHC-I、MHC-Ⅱa型比例增加(P<0.05).②肺气肿组Pt、Po均较正常对照组明显减低(P<0.01).TPT、1/2Rt延长(P<0.01),FI、FRI增加(P<0.01);(10+40)Hz组和40 Hz组与肺气肿组比较Pt、Po均明显增加(P<0.01),TPT、1/2Rt均明显缩短(P<0.01),FI和FRI下降(P<0.01);(10+40)Hz组与40 Hz组比较,Pt、Po、TPT、1/2Rt无显著性差异(P>0.05),FI和FRI降低(P<0.01).结论 不同频率的CES可导致膈肌MHC亚型及肌条力学产生不同的适应性变化,低频复合生理频率电刺激可显著提高肺气肿兔膈肌收缩力,增强膈肌抗疲劳能力,可能是体外膈肌起搏对COPD患者膈肌康复治疗更佳的频率模式之一.

    作者:邓永红;李军梅;刘刚 刊期: 2008年第06期

  • 我国西部部分地区变应性鼻炎流行病学抽样调查

    目的 抽样调查我国西部部分地区(重庆、成都、乌鲁木齐、南宁)变应性鼻炎流行病学特征.方法 2005年9-12个月,采用多阶段抽样和整群抽样相结合的方法,以家庭为调查单位,采用问卷调查形式对小学生及其父母、中学生及其父母、大学生及其父母进行流行病学调查.变应性鼻炎诊断依据ARIA标准,采用SAS 9.13完成统计分析.结果 有效调查问卷为26 197份,总患病率为34.31%,重庆、成都、乌鲁木齐、南宁患病率分别为32.30%、34.33%、37.90%、30.32%,其中男性患病率为36.35%,女性为35.68%,经统计学处理,两者之间无显著性差异.根据ARIA分类标准,间歇性变应性鼻炎占30.47%,持续性的占69.53%;轻度的占8.77%,中.重度的占91.23%.根据1997年海口会议诊断标准,季节性变应性鼻炎占14.43%.西部地区变应性鼻炎发病月份在9、3、8月较高,诱发因素以感冒、天气变化、灰尘和刺激性气体为主.结论 调查结果表明我国西部部分地区变应性鼻炎患病率较高,其中以中一重度持续性和常年性为主.

    作者:钱迪;洪苏玲;杨玉成;黄江菊;邹伟;曾庆 刊期: 2008年第06期

  • 大鼠Otos基因重组腺病毒载体的构建和鉴定

    目的 构建表达Otos基因的复制缺陷型重组腺病毒.方法 应用RT-PCR技术从大鼠耳蜗螺旋韧带成纤维细胞总RNA中克隆出Otos基因,将Otos基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293细胞进行包装,反复感染293细胞,并进行扩增,对其进行安全性、病毒滴度以及活性等指标的检测.结果 克隆出大鼠Otos基因,经测序证实结果正确,得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA证实含目的 基因.结论 成功构建了表达Otos的复制缺陷型重组腺病毒.

    作者:卓贤露;姜振东;魏运军;鲁立;张学渊;袁伟 刊期: 2008年第06期

  • 新生大鼠少突胶质前体细胞的培养与鉴定

    目的 在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs).方法 原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养.免疫荧光法及膜片钳记录细胞电生理特性进行鉴定.结果 振荡分离后超过90%细胞为NG2阳性OPCs:OPCs电生理特性:输入阻抗Ra相对较高;电压依赖的K+电流具有外向整流特性;对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)敏感的小的内向Na+流,不能产生动作电位.结论 振荡法结合差速贴壁可以获得纯度较高的OPCs;OPCs具有区别于神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞的独有电生理特性.

    作者:王丽雁;蔡文琴;陈鹏慧 刊期: 2008年第06期

  • 巴马香猪腹腔皮下种植子宫内膜建立子宫内膜异位症模型的研究

    目的 为研究子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)的治疗提供理想的动物模型.方法 选取雌性巴马香猪6头,从子宫后壁选取内膜组织,种植于腹腔和皮下,观察异位组织变化情况.结果 皮下和腹腔种植的部分内膜组织形成异位病灶,呈包块或小囊泡状.病理证实为子宫内膜,表明动物建模成功.结论 成功建立子宫内膜异位症的动物模型.

    作者:马玉霞;王琳;孔燕;梁志清 刊期: 2008年第06期

  • 颅内原发性黑色素瘤诊治体会

    颅内黑色素瘤是一种罕见的恶性肿瘤,其临床表现不具特征性,诊断和治疗困难,预后不佳,现将2005-2007年收治的4例颅内原发性恶性黑色素瘤报告如下.

    作者:李毅;肖顺武;张学军;谢明祥;任光阳;王培 刊期: 2008年第06期

  • 对急性贫铀中毒的促排措施研究

    目的 比较常见的几种贫铀促排剂,寻找高效低毒的药物或组合方案.方法 分别在给予贫铀溶液前1h、立即、延迟4 h给予碳酸氢钠、Tiron、dimethyhhiourea(DMTU)和diethylenetriaminepenta-methylene phosphonic acid(DTPMP)及相应的组合方案,并在3 d后进行肾功能检测及病理学观察.结果 提前给药,血清尿素氮和肌酐浓度下降程度显著(P<0.05),下降明显的是NaHCO3+DMTU组和单用DTPMP组;立即给药,尿素氮和肌酐显著降低的是NaHCO3+DM-TU组、单用NaHCO3组和单用Tiron组(P<0.05);延后给药,肾功能均未见明显改善(P>0.05).提前给药和立即给药,NaHCO3+DMTU组肾脏病变轻;延后给药,病变比提前给药和立即给药的严重,其中以单用Tiron组肾脏病变轻.结论 急性贫铀中毒时,提前1 h和立即给药时,NaHCO3+DMTU合用效果较好;延后4 h给药,单用Tiran的效果相对较好.

    作者:李蓉;任泂;冷言冰;杨峥嵘;艾国平;徐辉;粟永萍;程天民 刊期: 2008年第06期

  • 小鼠破骨细胞骨髓诱导模型的建立及功能观察

    目的 获得大量高质量小鼠破骨细胞,为体外研究破骨细胞骨吸收功能提供丰富的细胞来源.方法 采用巨噬细胞集落刺激因子(maerophage colony stimulating factor,M-CSF)和破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)诱导小鼠骨髓单核细胞分化为破骨细胞,并通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phos-phatase,TRAP)染色和骨吸收实验来鉴定破骨细胞及其噬骨能力.结果 诱导3 d后可见TRAP(+)多核细胞出现,诱导5 d后骨片上可见蓝紫色的吸收陷窝.随着培养时间的延长,TRAP(+)多核细胞数目和吸收陷窝呈现时间依赖性增长趋势(P<0.05).结论 M-CSF和RANKL诱导小鼠骨髓单核细胞可产生大量的具有活跃噬骨能力的破骨细胞.

    作者:鲁秀敏;苏楠;李福兵;赵玲;陈林 刊期: 2008年第06期

  • 视神经乳头静脉炎眼底荧光素血管造影的临床研究

    目的 探讨视神经乳头静脉炎的临床表现及眼底荧光素血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)的特征.方法 回顾性分析33例经荧光素眼底血管造影确诊为视神经乳头静脉炎患者临床资料.结果 33例患者均为单眼发病,视力在0.5以上者23例,占69.70%;眼底视盘边界不清、充血水肿,视网膜静脉怒张迂曲而动脉无明显改变.FFA检查显示视网膜中央静脉迂曲扩张,充盈迟缓,视盘毛细血管扩张,微动脉瘤,视盘毛细血管及视网膜静脉管壁渗漏荧光素,后期视盘及视网膜呈强荧光.结论 视神经乳头静脉炎发病率较低,不易与其他类似疾病相鉴别,FFA对于本病的诊断和治疗有重要指导意义.

    作者:黄熙;张美霞;严密;张军军;孟丹 刊期: 2008年第06期

  • 数字人体肠道的三维可视化研究

    目的 建立中国数字人肠道的三维可视化数字模型.方法 利用中国首例女性数字化可视人数据集(CVH-2),分割出肠道的轮廓数据,并进行表面三维重建.结果 分割并三维重建出了十二指肠、空肠、回肠、盲肠、阑尾、结肠、直肠等肠道结构.模型能够实现缩放、旋转、任意角度切割,以及十二指肠、空肠和回肠、大肠等不同段单独或者整体显示,能够方便地观察人体肠道的走向和形态.结论 数字人肠道消化道的可视化模型为教学和临床研究提供了数字化的工具,为虚拟内镜以及CT/MRI影像的消化道研究提供了形态学依据.

    作者:刘利;郑小林;张绍祥;胡南;谭立文;吴毅 刊期: 2008年第06期

  • 股骨头骨折应用可吸收材料15例临床分析

    自2000年7月至2006年7月应用可吸收材料治疗股骨头骨折15例,效果满意.

    作者:王盛伟;范远俊;向阳 刊期: 2008年第06期

  • 蝇蕈醇小脑齿状-中位核微注射对豚鼠经典眨眼条件反射建立的影响

    目的 观察小脑齿状-中位核在豚鼠经典眨眼条件反射建立过程中的作用.方法 采用500 ms正弦波纯音和100 ms束状氧气流的配对刺激,训练豚鼠建立经典眨眼条件反射.在条件反射训练的第4~6天,向豚鼠双侧小脑齿状-中位核微注射蝇蕈醇.整个实验过程中,使用高分辨率的张力换能器检测豚鼠的眨眼反应.结果 ①蝇蕈醇注射组豚鼠训练第4~6天的条件反应率均显著低于第3训练日水平(P1=0.005,P2=0.004,P3=0.010);②蝇蕈醇注射组豚鼠训练第7、8天条件反应率仅分别相当于对照组豚鼠第4、5训练日水平(P1=O.061,P2=0.669);③在此过程中,蝇蕈醇注射组豚鼠非条件眨眼反应的幅度和峰潜伏期均无显著变化(P1=0.926,P2=0.939).结论 小脑齿状一中位核是运动性学习神经回路的重要组成部分,控制着眨眼条件反应的获得和表达.

    作者:林曦;胡波;杨丽;隋建峰 刊期: 2008年第06期

  • 多发性硬化患者血清尿酸及一氧化氮水平变化

    多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统各部位白质反复髓鞘脱失,临床表现为复发与缓解交替的以慢性病程为特征的自身免疫性疾病.此病好发于青壮年人群,且缺乏有效的治疗方法,预后不佳.为探讨尿酸(UA)及一氧化碳(NO)在MS发病机制中的作用及其临床意义,本研究对于2002年5月2005年5月间在我院神经内科住院的40例MS患者的血清UA及NO水平进行了检测,并与正常组作对照.现报告如下.

    作者:孙萍;李德炯;龚玲;付蓉 刊期: 2008年第06期

  • Cyr61与β-catenin在肝癌组织和细胞株中表达的相关性研究

    目的 研究Cyr61与β-catenin在肝细胞肝癌和肝癌细胞株中的表达及其相关性,探讨二者在肝癌发生中的作用.方法 采用免疫组化法检测32例肝细胞肝癌患者肝癌组织中Cyr61与β-catenin蛋白的表达水平;免疫组化法和RT-PCR检测正常肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2、QGY-7701、H22中Cyr61与β-catenin蛋白与mRNA的表达水平;并比较二者的相关性.结果 65.63%(21/32)肝癌标本Cyr61蛋白阳性表达,71.88%(23/32)肝癌标本β-catenin蛋白阳性表达,二者合并阳性表达有56.25%(18/32),合并阴性表达有18.75%(6/32),Cyt61表达与β-catenin表达呈正相关(r=0.425,P<0.05);正常肝细胞株L02及肝癌细胞株HepG2、QGY-7701、H22中Cyr61与β-catenin mRNA与蛋白均有表达,二者表达一致性达100%.结论 Cyr61与β-catenin在肝癌和肝癌细胞株中高度一致阳性表达,提示Cyr61的表达可能与Bβ-eatenin的表达有关,二者可能在肝癌的发生中起到重要作用.

    作者:孙世俊;司维柯;丁伟;潘静;李招权;赵宸 刊期: 2008年第06期

  • 人NT-proBNP的高效原核表达及免疫学检测标准品的研究

    目的 构建人NT-proBNP(氨基末端脑钠肽,amino.terminal pro-brain natriuretic peptide)的高效原核表达载体,建立重组NT-proBNP纯化工艺,制备NT-proBNP免疫学检测工作标准品.方法 采用人工合成和套叠(GeneSOEing)PCR技术相结合的方式对NT-proBNP基因序列进行密码子进行偏嗜性改造后克隆入原核表达质粒pET32a和pET42a构建不同形式的NT-proBNP原核表达重组质粒;采用离子交换、HIS和GST亲和层析柱以及肠激酶(EK酶)酶切等方法建立NT-proBNP重组蛋白的纯化工艺;用Roche公司NT-proBNP检测试剂盒测定所制备的标准品的免疫活性和稳定性.结果 pET32a和pET42a构建的不同形式NT-proBNP原核表达质粒在BL21(DE3)均实现了高效可溶性表达,通过多种纯化方案制备了纯度达98.3%的NT-proBNP-83重组蛋白,经测定具有良好免疫活性和稳定性,适合用于免疫学检测工作标准品.结论 成功构建了人NT-proBN的高效原核表达载体,筛选出较适合用于免疫学检测工作标准品的NT-proBNP重组蛋白.

    作者:易维京;李鹏;李淑慧;智强;胡川闽 刊期: 2008年第06期

  • 急性肺损伤大鼠肺组织PPAR-γ表达的研究

    目的 在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复制的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠模型中,观察PPARγ表达的改变,探讨PPAR-γ在ALI发病中的作用.方法 在LPS复制的大鼠Au模型中,观察动脉血气、肺湿/干(W/D)比值、肺组织病理,用RT-PCR法检测肺组织PPAR-γ、TNF-α mRNA表达,用ELISA法检测TNF-α蛋白变化,并用免疫组化观察肺组织PPAR-γ的改变.结果 ALI大鼠,PaO2显著降低(P<0.05),肺W/D比值显著高于对照组(P<0.05),病理显示肺组织受损;肺组织TNF-αmRNA显著升高(P<0.05),与此同时血浆TNF-α亦显著升高(P<0.05).正常大鼠肺组织可表达PPAR-γ,LPS致伤后肺组织PPAR-γ mRNA在1 h即开始下降,2 h降至谷底,并持续至实验结束.免疫组化显示致伤后1、2 h与对照组无显著差异,从4 h显著降低并持续至8 h(P<0.05).结论 正常大鼠肺组织可表达PPAR-γ,LPS可引起ALI大鼠肺组织PPA-γ的基因和蛋白水平表达下降,这可能与ALI炎症持续和损伤有关.

    作者:王建春;姜鹏;黄建;钱桂生 刊期: 2008年第06期

  • 冠状动脉粥样硬化性心脏病患者单核细胞CX3CRl表达的研究

    目的 观察CX3CR1在不同类型冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者外周血单核细胞中的表达.方法 选择经冠状动脉造影后确诊为冠心病的患者,其中54例稳定型心绞痛病例及61例急性冠脉综合征的病例作为研究对象;以冠状动脉造影正常的20例患者作为正常对照组,24例冠状动脉造影正常但有胸前区疼痛的病例作为阳性对照.利用流式细胞仪直接免疫荧光法检测不同类型患者外周血单核细胞上CX3CR1的表达;同时采用Gensini评分系统对冠心病患者冠状动脉病变程度进行定量评分,并分析CX3CR1与Gensini积分间的关系.结果 冠心病患者CX3CR1表达水平高于正常对照组[正常对照组为(0.46±0.27)%、稳定性心绞痛组为(12.59±6.05)、急性冠脉综合征组为(38.77±13.22),P<0.01],急性冠脉综合征患者CX3CR1表达明显高于稳定型心绞痛患者,差异有统计学意义(P<0.01);且冠心病患者CX3CR1表达水平与Gemini积分呈显著正相关(r=0.913,P<0.01).结论 冠心病患者CX3CR1表达水平明显升高,并且其增加程度与冠脉的狭窄程度有相关性.

    作者:彭丹丹;李志梁 刊期: 2008年第06期

  • 雌激素受体β蛋白及其同分异构体mRNA在女性慢传输性便秘患者乙状结肠壁内的表达

    目的 研究雌激素受体β(estrogen receptor β,ERB)蛋白及其同分异构体mRNA在女性慢传输性便秘(slowtransit constipation,STC)患者乙状结肠的表达.方法 采用RT-PCR及Western blot技术检测20例女性STC患者以及20对照组乙状结肠ERβ蛋白及其同分异构mRNA的表达.结果 ERβ1、ERβ2及ERβ5mRNA在女性STC患者及对照组乙状结肠均有表达,ERβ3及ERβ4 mRNA在两组中均无表达,STC组ERβ1、ERβ2及ERβ5mRNA表达量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).Western blot结果显示STC组乙状结肠ERβ蛋白表达较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 ERβ与STC的发病有关.

    作者:张广军;刘宝华;童卫东 刊期: 2008年第06期

  • 用生物反应器制备乙脑灭活疫苗的研究

    目的 用生物反应器制备乙脑纯化灭活疫苗.方法 用搅拌式生物反应器培养Vero细胞,接种并培养乙型脑炎病毒,将收获的病毒液进行灭活和纯化.结果 细胞密度都增至2.4×106ml-1以上,病毒滴度都>7.25 lgLD50/ml.结论 用生物反应器制备乙脑灭活纯化疫苗的工艺合理,可以生产出高滴度的乙型脑炎病毒液.

    作者:衡燮;温嘉纳;李佳;李桂兰;奚光跃;周健;姬光;任邦彦;谭振国;孙明波 刊期: 2008年第06期

第三军医大学学报杂志

第三军医大学学报杂志

主管:第三军医大学

主办:第三军医大学