何清义；李起鸿；许建中；杨柳
目的建立生长期大鼠长骨成骨细胞体外培养实验模型并观察其生长及骨化过程.方法以10周龄Wistar大鼠股骨、胫骨为材料,采用酶分次消化法分离成骨细胞,经DME:F-12加10%胎牛血清的培养基原代和传代培养或含50 μg/ml L-抗坏血酸和10 mmol/L β-甘油磷酸钠的培养基连续培养,追踪观察成骨细胞在体外培养中的增殖及形态变化,并通过Giemsa、ALP及von Kossa染色技术,观察细胞体外基质分泌和骨化过程.结果①大鼠长骨成骨细胞具有体内成骨细胞的形态特征,增殖代谢旺盛,其群体倍增时间为78 h.②成骨细胞分泌形成球形和无定形基质.③当给予钙化条件培养时,细胞形成钙化骨基质.④大多数细胞ALP染色呈阳性并与基质的钙化密切相关.结论培养的生长期大鼠长骨成骨细胞具有成骨细胞的某些生物学行为,为儿童骨生长及调控的研究提供了一种实验模型.
作者：王华；黎海芪；杨锡强；瞿平；刘瑜 刊期： 2002年第05期
全子宫切除术是妇产科常见手术之一,针对该手术难点集中在对盆腔深部的子宫血管及宫颈的处理这一问题,我们设计了分段式筋膜内全子宫切除术,共施行216例,与同期传统术式相对照[1],效果满意,现报道如下.
作者：杨鹰；李幼飞 刊期： 2002年第05期
目的观察离心管构建的组织工程软骨细胞凋亡及细胞增殖情况.方法对离心管构建3周的组织工程软骨进行透射电镜、流式细胞仪检测和3H-TdR掺入测定,与3周龄兔关节软骨对照.结果透射电镜检查组织工程软骨有5%左右的细胞凋亡,正常关节软骨未见明显的细胞凋亡;流式细胞仪显示软骨细胞有8.5%左右的亚二倍体细胞,正常关节软骨有2.4%左右的亚二倍体细胞.3H-TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强.结论培养3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强.
作者：谢肇；许建中；周强；解世杰 刊期： 2002年第05期
目的了解肝脏局部浸润淋巴细胞是否存在AICD现象及其意义.方法采用S-P法检测10例慢性重型乙型肝炎肝组织Fas和FasL表达.结果 10例慢性重型乙型肝炎肝内浸润淋巴细胞和肝细胞皆有不同程度的Fas和FasL的表达,Fas和FasL在淋巴细胞和肝细胞皆以膜浆型表达为主.结论慢性重型乙型肝炎肝组织内细胞损伤的效靶关系十分复杂,肝组织浸润淋巴细胞存在激活诱导细胞死亡现象,浸润的淋巴细胞可能通过Fas/FasL介导的凋亡途径而下调免疫反应.
作者：李玲；顾长海；王雅凡 刊期： 2002年第05期
目的研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)作用的机制. 方法将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES-1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES-1细胞进行mRNA差异显示,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因.结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN1,仅在Hp(CagA+)培养滤液处理的GES-1细胞中表达, 斑点杂交结果与之一致.与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN1与泛素活化酶E1同源性99%,即为人类泛素活化酶E1基因的一部分. 结论泛素-蛋白水解酶复合体通路中的泛素活化酶E1基因可能参与了Hp 的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程.
作者：陈洁平；沈鼎明；杨致邦 刊期： 2002年第05期
目的了解TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞中癌基因c-myc和c-fos的表达及胶原分泌的影响,探讨瘢痕增生机制. 方法烧伤患者增生性瘢痕6例标本,通过细胞培养研究了TGF-β1对增生性瘢痕成纤维细胞癌基因c-myc和c-fos的表达(免疫组织化学和图像分析方法)及胶原分泌(3H-脯氨酸法)的影响. 结果 TGF-β1可显著提高增生性瘢痕成纤维细胞癌基因c-myc和c-fos的表达, 图像分析结果面密度(c-myc: 0.0687±0.0072 vs 0.0141±0.0016,P<0.01;c-fos: 0.0529±0.0048 vs 0.0223±0.0021,P<0.01);平均灰度(c-myc: 3340±462 vs 1120±232 ,P<0.01; c-fos: 1402±286 vs 605±79,P<0.01);积分吸光度[c-myc: 2.0±0.3 vs -(1.5±0.2), P<0.01; c-fos: 3.3±0.4 vs -(1.3±0.1), P<0.01]等指标经统计学处理与对照组有显著性差异;TGF-β1可促使增生性瘢痕成纤维细胞合成分泌胶原率提高2.0倍(P<0.01). 结论 TGF-β1可能是通过癌基因c-myc和c-fos的表达而促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成分泌增加.
作者：毋巨龙；李荟元；李世荣 刊期： 2002年第05期
目的观察骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)在软骨细胞培养条件下传代培养的主要生物学特性.方法梯度离心分离幼兔骨髓有核细胞,培养分离MSCs并进行传代培养,观测在体外软骨细胞培养条件下MSCs形态、生长特点及Ⅰ型和Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚集体合成分泌以及碱性磷酸酶活性等方面的变化.结果①MSCs原代细胞呈可见的均匀分布的簇状生长,呈长梭形,在传代培养中形态特性无明显变化、均质性明显提高;②各代Ⅰ型胶原免疫组化均为阳性,Ⅱ型胶原免疫组化均为阴性.③在各代培养中碱性磷酸酶染色均为阴性,对甲苯胺蓝存在极弱的异染性反应;④细胞外基质中硫酸糖胺多糖含量亦很低.结论传代培养中骨髓MSCs保持了常规低糖培养条件下的基本生物学特点,说明常用的软骨细胞基础培养条件同样适合骨髓MSCs的培养.
作者：周强；李起鸿；杨柳；段小军 刊期： 2002年第05期
目的研究体外培养成骨细胞合成分泌TGF-β1的功能.方法利用胎兔颅骨成骨样细胞体外培养模型,应用免疫组化和酶联免疫吸附试验检测成骨细胞分泌TGF-β1的情况.结果体外培养的成骨细胞能够分泌TGF-β1,随传代培养次数增加和培养时间延长,TGF-β1浓度增加,在第3代和第7天时增加明显,以后逐渐下降.结论体外培养的成骨细胞具有分泌TGF-β1的功能,呈一定的时效关系,并和传代次数有关.
作者：卢卫忠；杨柳；吴梅英；唐康来；贺小兵；许建中；李起鸿 刊期： 2002年第05期
目的探讨生长抑素类似物SMS201-995(SMS)是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长,以及与细胞内游离钙的关系.方法采用人胆管癌细胞系SK-ChA-1,应用MMT比色法, Annexin V-FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等方法进行检测和观察.结果在SMS作用下SK-ChA-1细胞生长受抑制.SMS处理SK-ChA-1细胞后, Annexin V标记的凋亡细胞增多.细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高.结论 SMS可能通过诱导SK-ChA-1细胞[Ca2+]i依赖性细胞凋亡,抑制胆管癌生长.
作者：陈华；何振平；马宽生；王曙光 刊期： 2002年第05期
目的提供一种用于动物实验研究的游离皮瓣切取方法.方法于犬大腿内侧隐动、静脉走行区域设计,在内侧肌群肌膜表面切取带血管蒂皮瓣,保留隐神经.结果皮瓣平均面积为3.2 cm×3.0 cm.隐动脉直径为1.1 cm,股静脉直径为3.0 cm,血管蒂长度3.5～4.0 cm.结论带血管蒂的犬大腿内侧皮瓣为游离皮瓣修复组织缺损的研究提供了良好方法.
作者：孙远；李慧增；史文进；容国俊 刊期： 2002年第05期
目的通过基因转染方法,用骨形态发生蛋白3(BMP3)基因转染成纤维细胞(NIH-3T3细胞),观察转染不同时期被转染细胞的形态学改变及细胞内碱性磷酸酶含量的变化,初步探讨骨组织工程种子细胞来源的另一途径.方法定向克隆法将BMP3基因构建于PcDNA3表达载体,脂质体介导法转染NIH-3T3细胞,G418筛选获得稳定转化体,观察不同时期被转染细胞的形态学变化,钙钴法染色转染细胞不同时相的碱性磷酸酶并作图像分析.结果转染细胞培养筛选6周提取的总RNA用Dot blot可以检出有明显的BMP3 mRNA表达.转染细胞第1周细胞形态由长梭形变为杆状,转染后2周细胞由长梭形变为多角形,转染后4周细胞变为多边形,类似成骨细胞,钙钴法碱性磷酸酶染色示转染组细胞胞浆内有大量染成黑色的碱性磷酸酶颗粒,及图像分析示转染细胞内碱性磷酸酶明显高于同期对照组,两组间有显著性差异(P<0.01).结论通过向NIH-3T3细胞内转染BMP3基因,可以使NIH-3T3细胞形态向成骨细胞形态发生转化,被转染细胞内碱性磷酸酶水平明显增高,已具有成骨细胞的某些特性.
作者：谭祖键；胡蕴玉 刊期： 2002年第05期
目的研制符合骨与软骨组织工程制备技术要求的新型支架复合材料;并确定其性能与结构优化设计的主要参数指标.方法按不同CPPf(聚磷酸钙纤维)/PLLA(L-聚乳酸)重量比及相同CPPf+PLLA/NaCl 颗粒重量比,采用溶铸颗粒沥取(Solvent-casting particulte-leaching)法制备系列CPPf/PLLA支架复合材料;液体置换法、压缩性能测试及扫描电子显微镜观测其密度、孔隙度、压缩模量及微结构特征;材料样品体外人工降解液直接浸渍法判定其生物降解性能,并观测其生物降解率、压缩模量及微结构改变.结果系列支架材料密度为0.108～0.165 g/cm3,孔隙度87.17%～93.24%,压缩模量为5.19～7.89 MP,横截面微结构由微孔海绵状过渡为纤维网状.随着支架材料在人工降解液中降解时间的延长,其降解率以0%～13.2%线性递增;压缩模量呈线性降低至1.10～2.78 MP;材料横截面微结构则发生相应改变. 结论 CPPf/PLLA支架复合材料具有高孔隙度的三维立体结构,良好的抗压缩性能和生物降解性能,经进一步优化设计后,可成为结构和性能符合各项要求的新型骨与软骨组织工程支架材料.
作者：戴刚；石宗利；李起鸿；李重庵 刊期： 2002年第05期
组织工程学近年来有很大的进展.目前,应用组织工程技术已成功地培育出人耳廓、人工肌腱及具有人指(趾)骨及指(趾)间关节结构与外形的复合组织等,为组织工程化产品的临床应用展示了良好的前景[1,2].组织工程学的研究主要包括种子细胞、支架材料、细胞-支架复合体体外构建与培育三个方面.种子细胞研究涉及来源的选择、体外大量扩增、表型诱导与维持及移植免疫等.支架材料研究则是根据不同组织和器官组织工程制备技术的需要,进行其三维支架的制备工艺设计及结构与性能优化.细胞-支架复合体体外构建与培育是组织工程研究的核心内容,包括接种细胞浓度与工程化组织产量的关系,种植细胞在支架材料中粘附、增殖、代谢的定性与定量研究,以及模拟体内细胞生长所处的微环境及动力学特征的生物反应器等研究[3,4].
作者：李起鸿 刊期： 2002年第05期
目的应用组织工程学技术,体外初步构建有活性的人工骨.方法培养、诱导人间充质干细胞向成骨细胞表型转化,制备性能优越的支架材料,将细胞与材料复合构建人工骨,在体外培养一定时间后,扫描电镜观察组织工程化骨的微观结构和消化细胞行碱性磷酸酶染色.结果 L-聚乳酸、聚磷酸钙纤维、Ⅰ型胶原按一定的方法可构建出新型的骨组织工程复合支架材料,诱导后的间充质干细胞可在材料内良好贴附生长,维持成骨细胞表型.结论本实验为骨组织工程学的进一步研究与应用提供了新的材料和方法.
作者：段小军；杨柳；石宗利；周强 刊期： 2002年第05期
目的构建人乳头瘤病毒16型E7基因片段(HPV16E7)的逆 转录病毒载体.方法 PCR扩增HPV16cDNA全长的E7片段,并用酶切、连接 等方法将HPV16E7亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN上,然后再用酶切、测序进行鉴定.通过Ge nbank 的数据库分析软件对HPV16E7进行同源性分析.结果经酶切分析、测序证明,从HPV16 cDNA克隆的300 bp的HPV16E7与逆转录病毒载体发生了基因重组,HPV 16E7基因片段与数据库中的原HPV16 cDNA的E7有高度的同源性.结论构建了含HPV16E7的逆转录病毒载体,为人关节软骨细胞的基因转染打下了基础.
作者：何清义；李起鸿 刊期： 2002年第05期
目的研究TNF-α和IL-1对大鼠肝细胞糖皮质激素受体(GR)的表达和转录激活能力的影响,探讨炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制.方法免疫细胞化学染色分析经TNF-α和IL-1刺激培养后BRL-3A大鼠肝细胞株GR的表达和核转位变化,应用糖皮质激素反应元件报告质粒pMAMneo-CAT分析系统观察GR的转录激活能力改变.结果 BRL-3A细胞经TNF-α和IL-1刺激培养12 h后,其胞浆和胞核GR蛋白水平的表达明显降低,尤以核内GR降低更加显著;转染pMAMneo-CAT质粒的肝细胞在地塞米松存在情况下,经TNF-α和IL-1刺激后CAT含量显著下降,两者协同效果更加明显.结论 TNF-α和IL-1可以通过降低BRL-3细胞GR的表达和核转位而抑制GR的转录激活能力,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的主要机制.
作者：王军平；粟永萍；赵景宏；周艳红；秦荣；刘贤华 刊期： 2002年第05期
目的探讨骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein, BMP)诱导成骨过程中骨胶原氨基酸的变化规律及转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1 , TGF-β1)对骨胶原生成的影响,进一步阐明BMP的诱导成骨机制和TGF-β1对骨损伤修复的调节机制.方法实验采用日本大耳白兔左尺骨中上段12mm骨缺损实验模型,随机分为实验组、对照组及空白组,缺损内分别植入BMP/TGF-β1/载体、BMP/载体及单纯载体.分别于术后第1、2、3、4、5周检测各组缺损区胶原羟脯氨酸(Hydroxyproline, HP)及羟赖氨酸(Hydroxylysine, HL)量的变化,并作胶原VG染色图像分析、组织学及电镜观察.结果实验组较同期对照组及空白组胶原HP生成量增加,成骨细胞数量增多,Ⅰ型胶原生成时间提前、生成量增加,胶原总量也明显增加,骨损伤修复时间缩短.结论 TGF-β1可使骨胶原在BMP诱导成骨过程中生成增加.TGF-β1通过促进成骨细胞生成使Ⅰ型胶原分泌能力增强,并抑制Ⅱ型胶原产生使软骨期缩短,骨损伤修复提前.BMP、TGF-β1两者在骨损伤修复中相互加强,具有协同作用.
作者：谭祖键；李起鸿；许建中；杨柳；曹佳；潘峰；孙玮 刊期： 2002年第05期
目的观察将骺板软骨细胞接种于自制的生物凝胶经体外培养生成软骨组织的生物学特点,初步评价这一凝胶基质作为软骨组织构建材料的生物学性能.方法将第一代骺板软骨细胞接种于生物凝胶进行体外培养,行大体、倒置显微镜以及组织学、Ⅰ型和Ⅱ型胶原免疫组化光镜观察.结果骺板软骨细胞-生物凝胶复合物,在体外培养过程中不能维持其初始外形,培养1周直径可收缩为初始的45%,但能保持种子细胞的稳定均相分布.经体外培养2周后由外周向中心逐渐形成软骨组织,表面为由1～3层梭形细胞组成的膜样结构,内部细胞主要为圆形细胞,有细胞外基质相隔,形成软骨细胞陷窝.基质中富含软骨特异性基质成分Ⅱ型胶原和蛋白聚糖,而Ⅰ型胶原免疫组化逐渐转为弱阳性,位于表面膜结构.结论这一生物凝胶具有良好的细胞相容性,适合软骨细胞在其中生成成熟的工程化软骨,但难以维持其初始外形.
作者：周强；李起鸿；杨柳；戴刚 刊期： 2002年第05期
目的获取具有生物学活性的CTLA4胞外区蛋白. 方法构建CTLA4胞外区(CTLA4125)蛋白的酵母表达载体,在GS115酵母细胞中表达.通过硫酸铵粗分离和离子交换层析等 ,获取纯化的目的蛋白,并在CTLL2细胞中鉴定活性.结果质粒在GS115酵母中可较高水平地表达CTLA4胞外区蛋白.经纯化后的蛋白可抑制IL-2刺激的CTLL2细胞的增殖.结论 GS115酵母可高效表达具有生物学活性的CTLA4胞外区蛋白.
作者：朱瑾；吴军；易绍萱；陈希炜；郑峻松；罗高兴；张宁 刊期： 2002年第05期
目的探讨大鼠坐骨神经损伤后再生过程结构形态三维重建的方法, 三维重现再生神经通过损伤界面和吻合口的过程及规律.方法用硅胶管桥接60只大鼠左侧坐骨神经长6 mm缺损,术后3、7、15、30、60、90 d取坐骨神经远近端各1 cm,石蜡包埋,连续切片,HE、硝酸银-luxol快蓝染色,显微摄像输入微机后进行图像配准、二维综合处理,终在SGI 三维图形工作站上完成三维重建和显示.结果三维图像显示新生神经纤维与正常神经纤维相比有郎飞氏结尚未形成、排列紊乱、髓鞘较薄、轴索较细、神经膜管形成等差异,胶原纤维大量增生阻碍了新生神经纤维的生长.结论利用计算机图像重建技术,采用三维图像的形式对外周神经再生过程和再生规律进行可视化研究,是一种有效的方法.
作者：陈菁；楚燕飞；朱刚；李兵仓；吴国萍；黄宏；陈志强 刊期： 2002年第05期
第三军医大学学报杂志
主管:第三军医大学
主办：第三军医大学
