胡明均
组织胚胎学属于医学形态学范畴, 是一门极其重要的医学基础课程,实验课在其教学中占有很重要的地位.为了搞好实习课教学,保证和提高教学质量,加强理论与实践相结合,增强学生动手操作能力,近年来,我们在加强实习教学的同时,对组织胚胎学实验考试方法进行了改革.
作者：杨逢春 刊期： 2001年第02期
NOR是核仁组成区相关嗜银蛋白的简称(Nuclear Organizer Region,NOR).细胞学证明,银不与rRNA结合,而与rRNA相关的酸性非组蛋白结合.已有不少学者把它应用于肿瘤研究.本方法将脱氧核糖核酸(DNA)Feulgen反应法与AgNO3-NOR法联合染色,同时显示DNA与NOR,并在原法上做了改进.效果良好,结构清晰,定性准确.具体方法如下:1.组织固定于10%甲醛12～24hr;2.常规石蜡包埋,切片4-6μm;3.切片脱蜡至水,蒸馏水洗10min;4.3.3mol/L HCl浸洗切片1min;5.3.3mol/L HCl水解25min,37℃;6.蒸馏水洗2次,4℃ 2min,室温5min;7.入新配的Schiff试剂,避光,室温下反应1hr;8.连续用亚硝酸水溶液洗3次,每次2min;9.水洗;10.加硝酸银-甲酸明胶液,避光,37℃,按不同组织,时间调控在10-60min之内;硝酸银-甲酸明胶液配法:将1g明胶溶于50ml 1%甲酸中,取出10ml与40m l 50%AgNO3混合.11.蒸馏水充分洗3次;12.脱水、透明、封片、油镜观察.结果:背景淡黄色,DNA染紫红色,AgNO3-NOR染棕黑色.AgNO3-N OR以两种形式存在①团块状,其中含有数个小的银染颗粒,相当于核仁本身;②散在于细胞核内较小的银染颗粒.
作者：葛玲；陈革；王丽蓉 刊期： 2001年第02期
传统上我们都采用10%福尔马林固定组织.福尔马林系甲醛液的俗称,是由甲醛(Formaldeny de HCHO )气体饱和于水而成.一般市售的福尔马林含甲醛37%～40%.配法:取40%甲醛液10ml与蒸馏水90ml混合,即得4%甲醛,亦即10%福尔马林.由于福尔马林久存则氧化产生甲酸,呈酸性,固定标本不适宜,特别是需长期固定的组织更不适合,故我们主张采用中性福尔马林固定组织标本.其配法如下:40%甲醛100ml酸性磷酸钠(或无水磷酸二氢钾)4.0g磷酸氢二钠6.5g蒸馏水900ml因中性福尔马林中加入了磷酸缓冲液,不易被氧化,能长期保持pH7.0,故对组织标本的固定(特别是长期固定)、染色效果非常有利.为了证实两种固定液对组织标本的固定效果,我们将皮肤组织分成两组,每组五块皮肤组织标本.其固定方法如下:第一组由10%福尔马林固定组织3m.第二组由中性福尔马林固定组织3m结果显示:(1)从肉眼观察:第一组固定后组织标本的收缩程度及变硬度明显大于第二组.(2)镜下观察:第二组的正常组织细胞形态、层次分明、色彩鲜艳,正常组织细胞基本上无萎缩、变形.而第一组的正常组织形态有明显萎缩,较第二组层次模糊、色彩暗淡.综上所述,我们建议日常活体组织检查应采用中性的福尔马林固定.
作者：张宝元 刊期： 2001年第02期
Timm染色方法是一种能够显示组织细胞内重金属分布的常用方法 .苔藓纤维末端是脑内含锌量高的区域,因此可以用此方法显示苔藓纤维末梢分布的情况 .1、材料与方法1.1 样品制备在恒温冷箱切片机中制备大鼠脑海马部位的连续冰冻切片,片厚30μm,吹干备用.1.2 染色步骤采用改良的Timm染色法配制Timm′s混合液.用30g阿拉伯胶粉剂溶于60ml 蒸馏水,搅拌均匀,放置24hr,双层纱布过滤,配成50%的阿拉伯胶60ml.放入 1 0ml枸橼酸缓冲液(25.5%枸橼酸+23.5%枸橼酸钠)和30ml 5.67%对苯二酚溶液,充分混合.切片依次浸入0.1%Na2S溶液(用0.1M磷酸缓冲液配制,pH7.4)和3%戊二醛溶液(用0.15M磷酸缓冲液配制,pH7.4)各1hr,然后再回到0.1%N a2S溶液中浸泡1hr固定.染色前,在暗室内将0.5ml的17%硝酸银溶液加入上述Timm′s混合液中,充分混匀.倒入已经放好脑切片的染缸中,染色40～60min,自来水冲洗10min以上 ,吹干、脱水、透明、封固.2、结果与讨论用此方法在显微镜下可以清楚地划分出大鼠海马苔藓纤维出芽等级.在操作步骤上原方法要求先动脉插管,依次注入0.1%Na2S溶液、3%戊二醛溶液、0.1%Na2S 溶液以固定脑组织,然后再制备冰冻切片.本实验为了利用新鲜脑组织观察别的指标,因而将新鲜脑组织先速冻、切片,再将切片依次置入上述溶液中固定.从本实验结果看,这种改进是成功的,为今后将Timm染色和其他也要求新鲜脑组织的研究项目同时进行研究提供了经验.
作者：宋青；孟书聪；董晓敏；肖军军 刊期： 2001年第02期
冷冻小动脉整体切片(不脱钙)是组织切片技术中的一种特殊技术方法.它可将如小鼠、大鼠的整体或大动物的局部组织器官制成切片,以便用于动物组织器官的研究及药物在动物体内分布的实验.切片过程中需用透明粘合胶带贴在包埋块上,使切下的组织片与胶带紧密粘合,而后可进行染色观察.目前国内在整体切片中所用的透明粘合胶带主要为进口产品,如scotch800,8 10,688,850,325等型号的胶带.它们的共同优点是粘度强,透明度较好,但其缺点也十分突出,即不易干燥,且在进行基本的H.E染色时,遇二甲苯后,胶带便严重卷曲,无法封片.这样就使得需要染色观察的实验无法进行.为了克服进口胶带无法染色的问题,我们采用了国产材料,自制了用于冷冻小动物整体切片的胶带,所用材料为聚酯薄膜与火棉胶和乙酸正戊酯.聚酯薄膜的大小根据包埋块的大小而裁定,切片时把火棉胶与乙酸正戊酯制成的胶水涂在裁好的聚酯薄膜上,用此自制胶带贴于包埋块上进行切片.这种自制胶带具有相当粘度,透明性好,可用于进行染色观察的实验.综上所述,如果只切片而不需要染色时可用进口胶带.如果切片需要染色或进行宏观接触法自显影时,采用自制胶带为佳.主要是可以避免染色过程中胶带的卷曲并且防止由于进口胶带不易干燥而造成自显影感光材料被粘坏.
作者：孟书聪；宋青；刘鼎新 刊期： 2001年第02期
传统方法显示心肌间质中胶原纤维的形态,多依赖于组织学的切片和光学显微镜的观察,很难展示其立体的构筑形式和细微的结构特征.如何制作用于扫描电镜观察的胶原样品,在国内尚未见有报道.我们经过反复的实验,摸索出AODO细胞浸渍(四氧化锇细胞浸渍)-扫描电镜样品的制备方法,使此问题得以解决.材料和方法:①升主动脉插管,生理盐水冲洗;②0 .5%戊二醛+0.5%多聚甲醛灌注固定;③取左心室壁,修块至3×3×5mm;④入 1%锇酸后固定;⑤于0.1%锇酸20℃中浸渍3～5天;⑥经50%二甲基亚砜包埋; ⑦液氮中冷冻断裂;⑧1%锇酸和单宁酸导电染色;⑨真空干燥、喷镀,电镜观察.结果: 扫描电镜下,可观察到位于心肌细胞和毛细血管之间的各种粗细不等的胶原纤维,可观察到胶原纤维编织成的各种网状和框架式的结构,以及它们的立体构筑形式.意义:利用此方法制备的样品,不仅可在扫描电镜下甚为清晰地、立体地显示胶原纤维的形态和结构,亦可同时显示心肌细胞、毛细血管和胶原纤维间的形态和位置关系.我们认为它是使用电镜技术研究细胞间质各结构的理想方法.心得和体会:①为保证样品制作的质量,固定样品时,样品体积不可过大,固定时间不可过长,否则细胞表面和胶原的结构不易显露;②0.1%锇酸的浸渍是样品制备是否成功的关键一步,其温度须控制在20℃左右,温度过低,细微结构显示不清;温度过高,样品极易破碎.
作者：田珑；陈小迅；张书永 刊期： 2001年第02期
探索内皮细胞对小鼠骨髓造血细胞的刺激和诱导分化作用. 人脐静脉内皮细胞取自剖腹产后12hr以内的脐带.按Jaffe法进行培养,建立内皮细胞体外培养模型,收集原代培养的内皮细胞上清液(HECS).按本室常规方法制备骨髓有核细胞.在造血细胞半固体和液体培养体系中加入不同组合的重组造血因子,分为三组 :①粒系培养组加GM-CSF(德国BM公司),终浓度为20ng/ml.②红系培养组加入IL-3(美国SIGMA公司)与EPO(德国BM公司),终浓度分别为20ng/m l和2u/ml.③实验组加入内皮细胞培养上清液,以RPMI-1640为对照组.将上述体系接种于24孔板中,每孔1ml,培养7d,收集细胞,作细胞计数,台盼蓝拒染活力检测.细胞表面标记分析:选用抗红系或粒系的单克隆抗体CD71和CD13(美国 Coulter公司)作细胞表面标记检测.培养后细胞经PBS洗涤,取细胞悬液2～5 ×105细胞),加抗体1μl,4℃孵育30min,用PBS洗去没有标记上的抗体和FITC,重新悬浮细胞,用流式细胞仪(Coulter Elite Esp,美国Coulter公司)进行分析.用T检验分析实验数据以x±SD表示.结果:HECS对小鼠骨髓细胞形成各类造血祖细胞集落具有明显的刺激作用,能够提高BF U-E,CFU-E,CFU-GM集落产率,分别为43.04±5.80,148.7 5±32.20,104.67±9.92(P＜0.05);HECS诱导细胞7d后, 细胞表面表达CD13为93.75±5.38,CD71为59.95±7.10(P＜ 0.05).实验组与阳性对照组基本一致,阴性对照组无集落形成和抗体表达.内皮细胞不但能够促进造血干祖细胞的增殖并且能够诱导其定向分析.以往对骨髓细胞的体外培养均采用琼脂或甲基纤维素半固体培养的方法,在用流式细胞仪进行分析时,由于难以去除琼脂或甲基纤维素对实验的干扰,造成对细胞表面抗原标记的困难,影响了实验的准确性.本实验将小鼠骨髓细胞进行体外液体培养,同时加入不同组合的重组造血生长因子,诱导造血干祖细胞向红系和粒系分析,为流式细胞仪分析细胞特异性抗原的表达提供了新的途径.
作者：吴岩；祝彼得 刊期： 2001年第02期
尼氏体也常被称为嗜染质,主要成分是核糖核酸(RNA)和蛋白质,易被碱性苯胺染料所染,硫堇就是常用的一种,但缺点是易褪色,给大量回顾性研究及教学都带来许多不便.为了解决这一问题,本实验用硫堇块染色法,经多次实验可免去脱水过程,使标本不易脱色,而且结果也很理想,适合制作大量的教学切片,制作简便,方法简单,而且可长期保存不易脱色.具体步骤介绍如下:选用猫脊髓、鼠大脑组织厚2mm,入4%多聚甲醛(0.1molPB 配制 pH7.4)固定液内固定一周.0.01molPBS(pH7.4)洗三次,各取3块脊髓、大脑组织块分别放入0.2%、0.5%、1%、2%、4%的硫堇水溶液内 ,50℃温箱内染色,分别于3d、5d、10d取出,入95%酒精脱色30min,入 100%酒精2次各1hr,二甲苯透明15min,入软蜡2hr,入硬蜡2hr,硬蜡包埋.切片5μm,展片后,二甲苯脱腊,中性树胶封片.结果:猫脊髓前角神经元胞质内的尼氏体及核仁清晰可见,呈紫蓝色.大脑皮质锥体细胞,海马齿状回锥体细胞及颗粒细胞胞质均呈紫蓝色.体会:1.几组实验结果对比发现用2%的硫堇水溶液浸泡5d,效果好.2.脱水时间必须短,可直接入95%酒精脱水,分色.3.脊髓切片5μm,大脑切片 6μm实验结果理想.4.此方法的优点是制作简便,石蜡切片后不需再染色,直接二甲苯脱蜡封片,所以同时也解决了脱水不干净,产生褪色的问题.
作者：孙万彬；赵春芳；谷双魁；赵京山 刊期： 2001年第02期
过去常用经典的Nad i反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位,现在广泛使用DAB法.我们对这两种方法进行了比较.方法如下:取Wistar大鼠的心、肝、肾组织,用液氮骤冷,恒冷箱切片(厚7μm),进行以下实验:Nadi反应:切片入孵育液(N-苯基-对-苯二胺3mg、1-羟基-2-萘酸3mg 溶于二甲基亚砜0.1ml,0.05M的磷酸缓冲液pH7.2 10ml,混匀后过滤 )室温30min.入Lugol碘液2min,入5%硫代硫酸钠4min,入1%醋酸钴60min,蒸馏水洗,甘油明胶封固.DAB法:切片入孵育液(0.05M磷酸缓冲液pH7.2 10ml,3,3′-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)9mg,细胞色素C 15mg,混匀后过滤)室温5min .切片用缓冲液清洗,入蒸馏水,甘油明胶封固.HE染色:切片先用10%Formalin固定10min,再做常规HE染色.对照:Nadi反应和DAB法都用迭氮钠预孵育5min(10ml缓冲液中含6mM迭氮钠),再入含6mM迭氮钠的孵育液中孵育,以下的步骤与上述步骤相同.DAB法还用不含细胞色素C的孵育液做对照.实验结果:HE染色的切片显示组织结构正常.Nadi反应的阳性产物为黑绿色的颗粒, 可见弥散的现象.DAB染色的阳性产物为棕色颗粒,很少见有弥散现象.对照切片的结果:用迭氮钠制酶活性的Nadi反应有弱阳性产物,而用迭氮钠的DAB法细胞色素C的切片均呈阴性反应.我们认为显示细胞色素氧化酶的经典方法Nadi反应存在反应产物弥散的现象,用迭氮钠抑制酶的活性后仍有阳性产物出现,因而该法只能表明线粒体的存在,而其定位不够准确.DAB法的方法简便,反应产物不易扩散,可较准确地定位线粒体的存在部位.另外,DA B的沉淀物能与四氧化锇反应形成锇黑,可用于电镜观察.经以上的实验观察和比较,我们认为无论从反应的特异性、定位的准确性,还是电镜应用性等方面看,显示细胞色素氧化酶的DAB法都优于Nadi反应.
作者：曾晓蓓；孙海梅；李宝红 刊期： 2001年第02期
形象投射法源于医学形象思维方式在组织胚胎学教学中的具体应用.它是对于具体某一层次的结构特点和功能,以其高一层次的基本结构框架进行对应形象投射来完成教学活动的.它适用于基本组织学、器官组织学和胚胎学的具体教学,对丰富教学主体的思维结构,解决教学中面临的新问题具有积极的促进作用.另外作为教学方法的一种补充,在其它形态学科甚至个别机能学科也能得到应用,对于将来的远程网上教学,也能发挥积极的作用.
作者：陈国华 刊期： 2001年第02期
肾活检标本中,多数是免 疫复合物介导的肾小球肾炎,通过免疫病理学方法检测肾小球内的免疫沉积物的性质和分布 ,对于终的病理诊断至关重要.免疫电镜检查对肾小球炎的病理诊断虽然不是常规方法, 但为了精确分析沉积于肾小球的抗原抗体复合物,免疫电镜仍为行之有效的手段.本文探讨 了肾活检标本的低温包埋及常规树脂包埋的胶体金标记的透射电镜方法.
作者：王盛兰；王素霞；王薇；邹万忠 刊期： 2001年第02期
对于溃变神经纤维的镀染,Nute法是较可靠的形态学方法之一,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题.为此我神经切片研究室在实际应用中,对于一些实验步骤,大胆地进行了改良和简化,结果与改良前相比没有显著差异,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定 ,使实验者的工作量明显下降.现将改良的关键处介绍如下:一、固定:原方法:灌注固定先灌0.9%生理盐水冲出血液,再以5%重铬酸钾和2.5%铬酸钾的水溶液500ml灌注固定.取出组织固定于10%中性福尔马林1w或更长至3m.改良后,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中2～4hr这一步骤,它可防止灌流时灌流液不能完全达到周缘神经组织部位,同时缩短了组织后固定的时间,只将组织再浸入4% 多聚甲醛固定1～7d即可.二、包埋和切片:原方法:取5～10mm厚的组织流水冲洗24hr,放入装有25%明胶水溶液的培养皿中(加盖),于37℃温箱浸泡12～18hr进行明胶包埋,置于10%福尔马林中6 hr或更长.改良后我们在切片前增加了将组织浸入10%或20%的蔗糖液中过夜这一步骤,次日再将组织骤冷,在恒冷箱中切片,并且将切片置于0.05M磷酸缓冲液,贴至挂过明胶的载玻片上行染色操作.这样我们省略了明胶包埋这一复杂程序,使实验单位易行.三、封固:原法是将切片浸入10%明胶水溶液与等量95%酒精中5min,切片摊于载玻片上,使载片倾倾斜倒出多余水,勿使切片完全干燥,再用95%酒精,浸泡吸水纸压平浸入95% 酒精使明胶凝固、脱水、透明封片.改良后我们在染色后将片直接用梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,树胶封固,可省去明胶贴片、压片、凝固等步骤.
作者：买鸿宴；杨立元；杨磊；雷季良 刊期： 2001年第02期
体外组织块培养成年、老年哺乳动物室管膜下区(SVZ)神经干细胞的研究甚少.本研究的目的是探索体外培养神经干细胞的实用方法及扩充神经干细胞作为移植或基因转移的供体细胞来源.取8、14及 24月龄SD大鼠(雌雄不拘)SVZ组织块作体外培养,在DMEM/F12+B27培养液中加入bFGF(20ng/ml),促进其组织块形成神经小球,刺激神经干细胞增殖 ,并用Nestin免疫组化鉴定.结果显示,培养7～10d产生的神经小球数量多,细胞生长状态佳,绝大多数细胞为Nestin阳性的神经干细胞,此期的神经干细胞较适宜于作细胞移植或基因转移.此法尚有取材方便、组织细胞损伤小、细胞易存活及经济等优点 ,不失为一种具有实用价值的通过体外培养扩增神经干细胞的方法.
作者：谢瑶；何宏文 刊期： 2001年第02期
目的研究大鼠心脏移植中fractalkine的表达以及环孢嘌呤A抗免疫排斥的作用,并探讨该作用的可能机制.材料和方法 1.动物:成年雄性SD大鼠和Wistar大鼠, 体重约200克/只.2.大鼠同种异体心脏移植模型:取供者SD大鼠心脏,结扎上腔静脉和肺静脉.打开受者Wistar大鼠腹腔,结扎腰动脉以及下腔静脉的分支.分别将供者主动脉与受者腹主动脉、供者肺动脉与受者下腔静脉做端侧吻合,并于术后分为三组:Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(CsA7.5mg/KgB.W.)和Ⅲ组(CsA 15mg/Kg B.W.).每组样本7例(n＝7),分别于1d、3d、7d和11d取移植心脏以及供者主动脉,脱水包埋或液氮冻存.3.H.E染色及排异分析:石蜡切片,常规H.E染色,依据国际心肺移植组织(ISHLT)1990年心脏急性排异反应分级标准进行排异反应分析.4.免疫组织化学染色:石蜡或冰冻切片,常规免疫组化方法检测ICAM-1 的表达:fractalkine一抗(羊抗鼠),二抗(驴抗羊),ABC试剂盒(均为Sa ntaCrus公司产品).先以3%H2O2、柠檬酸钠微波抗原修复后,PBS洗三次,加1.5%驴血清封闭,分别加一抗、生物素化二抗、亲合素-生物素化酶试剂DA B显色.以PBS及fractalkine的同型抗体作阴性对照.结果心脏移植后1和 3天,供者心脏和主动脉出现轻度炎性浸润,排异反应为1A或1B级;11天和12天时出现弥漫性炎性浸润和心肌坏死,并伴明显水肿、出血以及血管炎,排斥级别达3B或4 级.CsA治疗可使移植排异降低1～2.5级.移植后,血管内皮细胞和外膜浸润淋巴细胞的fractalkine表达显著升高,并有血管平滑肌细胞和间质成纤维细胞出现较强阳性反应.CsA治疗可明显抑制移植的心脏及主动脉的fractalkine表达. 该抑制作用在1至3天内,呈CsA剂量依赖性,而在7至11天与剂量无关.结论 Cs A治疗是下调淋巴细胞迁移和浸润、减弱移植排斥反应的有效手段,其机理可能与降低趋化蛋白表达有关.
作者：童蓓燕；张新华；顾晓；钟翠平 刊期： 2001年第02期
IgA肾病(IgA N ephropathy,IgAN),为世界各地区常见的肾小球疾病之一,其中1/3 的病人于10～20年内逐渐进展为慢性肾功能衰竭.目前对IgAN的研究热点是多肽类细胞因子在肾脏疾病中的作用.作者等通过用转化生长因子(TGF β)、血小板源生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)对20例IgAN的免疫组化检测发现 ,TGFβ和bFGF在IgAN的活动期大量表达于肾皮质区的近曲小管和部分远曲小管的上皮细胞内,肾小球的系膜区亦见散在的表达.在完全或不完全硬化的肾小球周围的萎缩肾小管并伴有淋巴细胞浸润区域可见大量的TGFβ、bFGF的表达.为进一步了解上述细胞因子存在的位点,我们选用了金标法进行了免疫电镜观察.1、材料和方法1.1材料肾活检组织主要来源于哈尔滨医科大学附属第二院肾内科.选用通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgAN的20例环氧树脂包埋的组织块.1.2方法①免疫组化:TGFβ和bFGF抗体均由北京生物制品有限公司提供.采用s ABC法,具体步骤略.②免疫胶体金:羊抗兔IgG-胶体金3nm和5nm,由武汉博士德生物工程有限公司提供.采用间接法,具体步骤见[免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会]宋雁南等一文.2、结果2.1免疫组化检测 TGFβ、bGFG在IgAN中弥漫的分布于肾皮质区的近曲小管和部分远曲小管的上皮细胞内(70%和90%),在肾小球内可见散在的细颗粒分布于系膜区(45%和35%).2.2免疫胶体金检测金颗粒(标记TGFβ、bFGF细胞因子)主要集中于小管上皮细胞的胞质,有的沉积于线粒体内,或刷状缘其间,或内质网表面等,在肾小球的系膜区、基底膜、内皮细胞及足细胞,亦可见散在的或集中的金颗粒.bFGF在肾间质内也表现为散在的金颗粒.3、讨论金标法是Faulk和Taylor(1971年)提出的,并首先用于免疫电镜.金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质,使其与抗体相吸引,从而将抗体标记.金颗粒集中的部位,既是抗原、抗体反应的部位.通过金标法,可以在细胞器的水平上观察到TGF β、bFGF细胞因子主要存在于小管上皮细胞的胞质内、线粒体内及线粒体周围,脱落于管腔的上皮细胞周围亦存在.实际检测的TGFβ、bFGF细胞因子是促进系膜增生的细胞因子,如果同时检测抑制系膜增生的细胞因子,可以将镍网翻过来,加上抑制系膜增生的细胞因子的抗体做双重染色(选用直径不同金颗粒),可在超微结构水平上,对促进/抑制系膜增生的细胞因子在IgAN肾组织中相互作用的研究提供理论依据.
作者：金晓明；钟志玖；赵瑞波；黄淇；宋雁南；张莉；迟月明 刊期： 2001年第02期
课堂教学是教学程序中主要的教学形式 ,对完成教学任务,提高教学质量起很重要的作用.为了使学生掌握组胚课的基本理论、基本知识和基本技能,除了要求教师必须具备较好的知识结构、渊博的本学科专业知识及扎实的理论基础之外,还应注意以下几点:1.认真备课:教材是教师备课的重要依据,教师应以教学大纲为依据对教材进行深入细致的研究,力求对教材弄懂吃透,据实际情况,确定教学的重点和难点,然后写好教案.为了使自己在课堂上得心应手,必须反复记忆,把绝大部分讲授内容记在脑中,使整个教学内容和教学步骤横流倒背,这样才有信心讲好每一节课.2.授课过程中注意重点突出:在讲课过程中,对于基本理论、基本概念等核心内容及教材的重点和难点,力求精讲、细讲,使学生学懂学通,而一般了解内容可简要叙述.例如:讲肌组织,先给学生介绍骨骼肌是有横纹的,因为每一条骨骼肌肌浆内含有许多与其平行排列的肌原纤维;肌原纤维上具有周期性横纹,并且各条肌原纤维的明暗横纹都相应地排列在同一水平上,因此,肌纤维也呈现出具有明暗相同的周期性横纹.这时学生要问,为什么肌原纤维有横纹呢?这样引出骨骼肌纤维的超微结构,重点讲授肌节、肌原纤维的结构及骨骼肌的收缩原理,在此基础上心肌超微结构还可以用对比法讲解二者的不同点.3.课堂语言要讲究语言艺术:课堂讲授以口头语言为主要工具,辅以投影、幻灯等工具. 正确应用语言是传授知识技能、强化教学效果的有利保证.在课堂用语中注意准确、精练、规范、生动、授课语言既要言之有理,又持之以据,让学生一听就能正确理解教师所讲的意思.讲课速度快慢适当,对生疏重点内容要慢一点,必要时加以重复,以引起学生的注意, 使学生听课能抓住要领,跟着教师的思路,达到好的教学效果.4.充分发挥教师的主导作用:教师在教学中起主导作用,是教学活动的领导者和组织者, 学生是教学的主体,必须调动学生的学习积极性、主动性.在授课过程中注意学生的听课动态,从学生的表情和神态上洞察他们的心理状态,及时灵活地调整讲授的速度、音调高低及讲授知识的深度广度,选择适宜的教学方法,因势利导,提高教学效果.
作者：胡明均 刊期： 2001年第02期
为了观察小鼠妊娠早期子宫中肥大细胞的变化,我们采用改良的甲苯胺蓝染色法对肥大细胞进行特殊染色:1.昆明小鼠,体重25～30g,雌雄1:1合笼,次日晨检见阴栓者定位妊娠第1d(D1),分别取未妊娠、D3、D4、D7、D8小鼠子宫,10%甲醛PBS(pH7.3)固定24hs,石蜡切片.2.甲苯胺蓝染30sec,双蒸水洗去浮色,30%酒精PBS分色1min,蒸馏水终止反应.3.光镜下对妊娠不同天数的小鼠子宫中的肥大细胞进行计数,同时比较肥大细胞脱颗粒的百分率.结果显示:肥大细胞多散布于小鼠子宫的浆膜、浆膜下层以及系膜内,肌层中很少见,不存在于内膜.细胞较大 ,呈圆形或椭圆形;核小,圆形,浅绿色;异染性颗粒紫红色,紧密围绕在细胞核周围.脱颗粒的肥大细胞形态不规则,颗粒排列松散.比较每张未妊娠、D3、D4、D7、D8的小鼠子宫切片,把大细胞平均数目分别为:19个、16个、12个、41个、32个;肥大细胞脱颗粒率分别为:42.71%、45.07%、52.63%、61.93%、6 6.74%.以上数字表明把大细胞数目以及脱颗粒率在胚胎植入后明显增多.应用显微镜测微尺测量妊娠前后肥大细胞的细胞直径,发现妊娠小鼠子宫内的肥大细胞体积略有增加.我们的体会是:1.改变固定液的种类显著影响肥大细胞的染色反应:比较10%甲醛PB S(pH7.3)、4%多聚甲醛、Carnoy以及Bouin等几种常用固定液,以1 0%甲醛PBS的固定效果为佳;2.不同染液的染色效果有差异:甲苯胺蓝法与阿尔辛蓝-藏花红(AB-S)法比较,甲苯胺蓝能清晰地显示肥大细胞的紫红色颗粒,使在浅绿色的组织背景下的肥大细胞容易辨认.AB-S虽然能区分成熟(红色)、未成熟(蓝色)和混合型(红蓝两色)的肥大细胞,但着色的肥大细胞数目明显减少;3.分色剂的选择:30% 酒精PBS分色,肥大细胞颗粒呈紫红色,颜色鲜艳明亮,不易褪色;而90%酒精分色, 颗粒多呈蓝紫色,易褪色.4.植入期间肥大细胞数量变化尤其是脱颗粒率升高,引起局部毛细血管扩张、通透性增加,这可能有利于胚胎植入.
作者：吕丹瑜；杨京京；刘斌 刊期： 2001年第02期
颈上神经节接受来自脊髓侧角的节前纤维,它的头端发出颈内动脉神经,伴随颈内动脉,通过颈动脉管进入颅腔,支配颅内各脑区.颈上神经节的位置及功能十分重要,可通过它来探讨头颈部及颅内各器官的交感神经情况.以往我们采用将颈动脉鞘打开,分离出颈总动脉、迷走神经,再分离出其背侧的交感干,沿交感干头侧、颈内动脉的起始部,暴露出颈上神经节.这种方法在分离迷走神经和颈动脉的过程中很容易刺激迷走神经,发生膈肌痉挛或损伤颈动脉造成大出血而导致动物死亡,死亡率高达50～60%.经过长期的探索和实践,我们采取了暴露双侧颈动脉鞘 ,直接在颈内动脉起始部内侧暴露出颈上神经节的方法,避免了对迷走神经的牵拉和颈动脉的损伤,动物存活率高达95%.操作步骤:1.将大鼠固定在手术台上,沿颈正中纵行切开皮肤;2.钝性分离胸锁乳突肌,暴露颈动脉鞘;3.将颈动脉鞘轻轻拉向外侧,在第2颈椎和第三颈椎腹侧颈内动脉起始部内侧暴露出颈上节;4.作颈上神经节摘聊术,用小镊子夹住颈上神经节头端,向下轻拉,再用小镊子夹住颈上神经节尾端,轻拉,即将完整的颈上神经节取出;5.作颈上神经节内注射药物,向颈上神经节内注射药物时,微量注射器应与交感干相平行的方向进入颈上神经节,缓慢推入荧光金示踪剂2～3μl,留针5分钟,避免示踪剂从针孔内倒溢;6.缝合皮肤;7.动物存活时间根据实验需要,术后动物存活时间可为 72小时、两周或一个月.技术应用结果:摘除双侧颈上交感神经节的大鼠一天后见眼缩回, 眼睑下垂,表明手术是成功的.用颈上神经节摘除术研究松果体的神经支配,结果在摘除颈上神经节1月后,松果体内观察到大量溃变的神经纤维,免疫组化证实5-羟色胺(5-HT )阳性神经纤维数量大量减少,说明颈上神经节发出的5-HT纤维是松果体的主要神经供给.从颈上神经节注射荧光金神经示踪剂,示踪剂沿轴突逆行到达松果体、颌下淋巴结等器官,表明这些器官接受颈上神经节发出的神经纤维支配.
作者：马玉琼；王蕾；陈文玉；欧可群 刊期： 2001年第02期
用于透射电镜样品的包埋液,数年来一直延用几种固定的配方,即常用的812、国产树脂618、Spurr等等,各种包埋剂各有其优缺点.Spurr包埋剂:粘度低,浸透容易,包埋聚合时间短,硬度及韧性均很好,经免疫标记的样品,常用此液进行包埋.另外还可用于难以浸透、硬度高、致密性较高组织.但此包埋液价格昂贵,不宜作为常规的包埋液来使用.812包埋液:粘度低,韧性好,易切出较大的超薄切片,但组织包埋块易吸潮,不易保存 ,包埋液的价格也较高.国产树脂618:价格便宜,购买方便,组织块不易吸潮,保存方便,切割性能较好.但此包埋液粘度高,浸透速度缓慢,配制时不易搅拌均匀.根据以上常用的几种包埋液的优缺点,我室经数年的摸索,按自己的条件,重组了国产61 8树脂包埋液配方:618环氧树脂 5mlDDSA(十二碳烯基丁二酸酐) 2mlMNA(甲基内次甲基四氢邻苯二甲酸酐) 2.5mlDBP(苯二甲酸二丁酯) 1mlDMP-30(2-4-6-三(二甲氨基甲基)苯酚) 0.11ml该包埋液中的增塑剂DBP可根据季节的变化或组织的硬度进行适当的调整(冬季包埋时, DBP可增加至1.5ml,使包埋块的韧性增加).此配方的优点是:粘度降低,浸透力增强,聚合后的组织块颜色淡黄,硬度均等,韧性良好 ,切割性能较佳.经我室数年使用,对不易制片的眼球、耳蜗、皮肤、血管等组织,均取得了较好的超薄切片效果,现已成为我室的常规配方.
作者：齐玲；沈强；法京 刊期： 2001年第02期
传统观点认为,成人眼角、巩膜比例为1∶6.周国民等于1986年报道正常成人的角、巩膜面积比应为1∶12. 我们采用角、巩膜铺片结合计算机图像分析,对胚胎发育过程中眼球的角、巩膜面积进行测量,并计算二者的比例,以期进一步探讨眼球发育的一些基本规律.材料与方法:人工流产及引产的人胚胎眼球标本36例,胎龄6周至36周,4%多聚甲醛固定4 小时.体视显微镜下沿示道将眼球切开,分别以眼球前后极为中心将前、后两半球作放射状切片,并平铺在载玻片上.体视数码摄影系统将前后两半球图像输入计算机,在NIH I mage 1.62中存为TIF格式,分别选取眼球前、后半图像作面积测量.结果:第8周以前,角膜面积和巩膜面积分别在4mm2与36mm2以下.第12周, 二者面积分别增至6mm2和60mm2.至第14周,分别猛增至16mm2和135mm 2.以后增长迅速,第16周时,角、巩膜面积分别为22mm2和185mm2,第21周则为30mm2和300mm2左右.至出生前,角、巩膜面积分别达70mm2和700mm 2.角膜占眼球表面积的比例,在18周以前,接近1/10;18周以后至出生前,一直较恒定地维持在1/11.讨论:利用计算机图像处理系统,研究人胚胎发育中眼球各部分面积的变化,在国内外尚未见报道.研究发现,在人胚胎第14周以前,角膜和巩膜的发育缓慢,14周以后增长非常迅速.提示在该阶段可能有相关基因的激活与表达.这些基因的表达还可能进一步影响到眼球的大小与形状.同时,在此阶段,视网膜的各层逐渐形成,节细胞层出现并与脑发生联系, 对眼球角、巩膜的发育可能会有某种调控作用.此外,自第8周始,上下眼睑关闭,给眼球的发育提供了一个相对独立的环境,也可能对这种迅速增长起一定作用.我们还用相同的方法测得正常成人、牛、狗和小鼠的角、巩膜面积比分别为1/17、1/6、1/9.5和 1/3.有意思的是,在胚胎发育过程中角、巩膜的比例变化较小,而出生以后变化则较快 .因此在出生以后眼球的发育仍有相当大的可塑性.不同种属间角、巩膜比例的差异,也值得我们进一步研究.
作者：胡宝洋；周国民 刊期： 2001年第02期
四川解剖学杂志
主管:四川省科学技术协会
主办：四川省解剖学会
