抗人VEGF单链抗体基因的克隆及突变校正

廖楚航；王大章；杨西川；李扬；房思炼

关键词：血管内皮生长因子, 单链抗体, 点突变

摘要：目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力.方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF单克隆抗体(E11)的可变区基因片段,构建表达载体pET-15b(含E-tag).将V11轻、重链可变区基因序列(V11L、V11H)与其所属亚组共同序列和一致序列进行联配比较,发现异常氨基酸并分析其性质,确定异常突变点.PCR定点回复突变,重新表达单链抗体基因(V11m), ELISA检测表达产物与VEGF165的结合.结果:V11存在四个异常突变点:V11L第7、23、36位,V11H第113位.回复突变后的表达产物与VEGF165的结合能力显著提高.结论:利用抗体残基位置序列保守性及氨基酸侧链性质分析,可以推定并有助于回复异常点突变,该方法简便易行.获得的抗人VEGF单链抗体对恶性肿瘤的诊治具有潜在的应用价值.

实用医院临床杂志相关文献

鼻息肉组织中E-选择素和GM-CSF水平测定及其意义

目的:探讨鼻息肉组织中粘附分子E-选择素(E-Selectin)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平及其在鼻息肉病理机理中的相关性.方法:采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunsorbent assay, EL1SA)检测60例鼻息肉组织匀浆中E-Selectin和GM-CSF水平,以12例鼻中隔手术患者之代偿肥大的下鼻甲后端黏膜作为对照组.结果:鼻息肉组织匀浆中E-Selectin和GM-CSF水平均明显高于对照组,差异有显著性意义.结论:E-Selectin和GM-CSF相互协同作用,通过参与嗜酸性粒细胞的浸润,活化,增殖,从而在鼻息肉的形成过程中起重要作用.

作者：洪苏玲；黄江菊；杨玉成；康厚墉；王祎琴刊期： 2004年第01期
以脐周疼痛为主要症状的输尿管结石1例报告

患者,男,46岁,干部.因脐周疼痛2天,加重2小时于2003年8月10日就诊.患者于就诊前2天,无明显诱因出现脐周隐痛,间断发作;并腹泻2次,呈稀便,无畏寒发热,无恶心呕吐,无尿频尿痛腰痛,未治疗.

作者：邓嘉梅刊期： 2004年第01期
血压处理与脑卒中的防治

在脑卒中预防和治疗中,血压是非常重要的问题.目前在脑卒中的一级预防和二级预防中已有充分的随机对照试验证据支持进行血压调控.降低升高的血压已成为一致公认预防脑卒中的重要措施.然而,急性脑卒中的早期血压管理由于缺乏随机对照试验证据,多年来一直存在不同观点和争论.

作者：刘鸣刊期： 2004年第01期
小儿高原心脏病

据WHO统计,全世界有1.4亿人生活在海拔2500米以上的高山地带,由于高原低压性缺氧环境的影响,全世界有560万人罹患高原病或称高山适应不全.其中,高原心脏病(HAHD)是高山适应不全的一种主要形式.我国3000米以上土地约占国土面积1/6,生活在青藏高原4000米以上的极高海拔地就有60万人,而且有大量人群从低海拔地区移居或旅居高原,应该说拥有大规模的易感人群和患病人群.

作者：周同甫刊期： 2004年第01期
脑膜瘤端粒酶活性与细胞增殖的关系及临床意义研究

目的:观察脑膜瘤端粒酶活性表达与细胞增殖的关系,探讨它们不同的预后诊断价值.方法:脑膜瘤病例41例,分为良性、非典型性、恶性 (WHOⅠ、Ⅱ、Ⅲ级)三组.用TRAP法检测端粒酶活性表达.免疫组化LDP法标记PCNA,并计数PCNA标记指数(PCNA LI).结果:41例脑膜瘤中13例(31.7%)表达端粒酶活性, WHOⅡ级组与WHOⅢ级组高于WHOⅠ级组(P＜0.05,P＜0.05).41例脑膜瘤平均PCNA LI为(19.32±15.87)%,WHOⅡ级组和WHOⅢ级组较WHOⅠ级组高(P＜0.05,P＜0.05).WHOⅡ级组中端粒酶活性组的PCNA LI高于无端粒酶活性组(P＜0.05).端粒酶活性阳性表达与组织学分级和PCNA LI呈正相关(r=8.24,r=7.05).结论:非典型及恶性脑膜瘤肿瘤细胞端粒酶的活性伴随着细胞增殖活性的增加而升高,两指标的联合应用对预后判断有重要意义.对于良性脑膜瘤端粒酶活性不表达更有实际意义.

作者：宋林红；杨红；董丹丹；李科；徐玉川；杜琼刊期： 2004年第01期
心力衰竭患者血浆心钠素水平与左心功能关系的临床研究

目的:探讨血浆心钠素(ANP)水平与心力衰竭患者临床心功能变化之间的关系.方法:采用特异性放免法测定心衰患者血浆ANP水平,同时采用NYHA心功能分级和超声心动图检查评定患者左心功能.结果:随心功能恶化,血浆ANP水平呈上升趋势.各级心功间差异均有显著性意义(P＜0.05).经抗心衰药物综合治疗后,ANP水平降低(P＜0.01).ANP水平与左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(ΔD%)呈负相关;与左室收缩末内径(LVSd)、左室舒张末内径(LVDd)呈正相关.结论:心钠素在心力衰竭的进展中,其血中浓度与心衰程度密切相关,可用于监测心衰程度.

作者：肖骅；覃数刊期： 2004年第01期
烧伤早期肝组织JNK1及其磷酸化的变化

目的:观察烧伤小鼠早期肝组织JNK1及其磷酸化的时相变化特点,初步探讨烧伤后应激的分子机制.方法:将36只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组给予背部Ⅲ° 15%-20%烧伤.分别于伤后2h、4h、6h、12h、24h用western blot测定肝组织JNK1的蛋白表达及其磷酸化水平.结果:烧伤后各时相点肝组织JNK1在蛋白水平与正常对照相比没有统计学意义的变化;而烧伤后早期(2h)JNK1磷酸化程度显著增加,4h达到高峰,6h时仍显著高于正常对照组水平(P＜0.01),以后逐渐恢复至正常.结论:烧伤早期引起小鼠肝组织JNK1的磷酸化程度显著增强,而蛋白表达无明显变化.

作者：孙充洲；岑瑛；李军刊期： 2004年第01期
血透患者动脉硬化及其危险因素的研究

目的:通过对血透患者颈动脉内膜及其动脉硬化的观察,了解血透患者动脉硬化与尿毒症诸多危险因素的相关性.方法:采用横断面调查的方法,选择22例尿毒症维持性血液透析病人.采用Seqia-256彩超仪,mhz探头,应用颈部检查软件,检测颈动脉内膜中层厚度(IMT)、颈动脉起始部到分叉处动脉硬化斑块面积和数、计算中层内膜横切面积(cIM)[1],同时测定该组病人的IL-6、Lp(a)、iPTH、钙磷乘积,以主观全面评价(SGA)、营养不良炎症积分(Mis)评估病人营养不良和炎症状态.用多因素相关分析方法分析以上诸因素和动脉硬化的相关性.结果:该组病人IL-6较正常组明显增高(54.2±25vs29.5±20.30pg/ml,P＜0.05)、Lp(a)水平增高(0.31±0.28vs0.13±0.11g/L,P＜0.05).颈动脉内膜中层厚度为(8.2±0.25)mm,计算cIM为(0.58±8.1)mm2.将超声发现的颈动脉斑块面积相加,得到斑块总面积(tPA)为(52.26±76.36)mm2.相关分析发现年龄与IMT、cIM、tPA明显相关;IL-6与SGA、Mis、IMT、cIM、tPA明显相关;SGA与IMT、cIM、tPA明显相关;Mis与IMT、cIM、tPA明显相关.而透析时间、Lp(a)、iPTH、钙磷乘枳与IMT、cIM、tPA无明显相关性.结论:SGA和Mis是良好的评价尿毒症患者炎症及营养不良的指标;尿毒症病人存在微炎症;炎症状态在动脉硬化的发生发展中起重要作用.

作者：王莉；李春梅；李贵森；康志敏；王芳；何强；杨秀川刊期： 2004年第01期
高血压脑出血外科治疗

脑出血是高血压常见、危险的并发症之一,具有较高的死亡率及致残率.据美国一组病人的调查,发病一周内死亡率达59%,一月内可达82%[1].出血发生后血肿对脑组织产生急性压迫和推移,引起血肿周围脑组织微循环障碍,血块溶解后还会产生有毒物质,进一步加剧脑的代谢障碍.

作者：黄光富；蒋万书刊期： 2004年第01期
解读美国国家联合委员会关于高血压预防、检测、评估与治疗第七次报告(JNC-7)

今年5月21日在美国医学会杂志(JAMA)公布的JNC-7与1997年发表的JNC-6相比,从风格到内容都有重大变化.变化的依据是近6年中大量关于高血压防治的前瞻性随机临床试验,包括近发表的ALLHAT、LIFE等所获取的新证据.JNC-7遵循循证医学的原则,对高血压防治提出了新思路,制定了新策略,对我国高血压防治指南有重要参考价值.

作者：胡大一刊期： 2004年第01期
髌骨软骨软化症病因的生物力学分析

髌骨软骨软化症(Chondromalacia of the Patella ,以下简称CP)是膝前部疼痛中常见的疾病之一,是运动创伤中的多发病和常见病,在正常人群中也有较高发病率.周元铭认为CP好发于女性,多见于极不活动的近10岁女孩和极好动的近20岁男孩[32].

作者：张允；涂豫建；张林辉刊期： 2004年第01期
心脏保护研究与临床实践

近期发表的心脏保护研究(Heart Protection Study,简称HPS)是由英国牛津大学临床试验中心组织牵头,69个英国医疗中心参加,共入选2万余名冠心病或其他阻塞性动脉疾病或糖尿病等高危患者,接受每天40mg辛伐他汀或抗氧化维生素治疗5年,了解对病人总死亡率等的影响[1～3].

作者：蒋立新刊期： 2004年第01期
无痛胃肠镜检查和治疗术的临床应用研究

目的:研究小剂量咪唑安定和异丙酚联合应用在胃肠镜检查和治疗中的可行性和安全性.方法:①2140例胃镜检查患者给予咪唑安定和异丙酚静脉复合麻醉为实验组,1000例常规操作为对照组,②将600例结肠镜检查患者随机分为两组:静脉复合麻醉组(350例)静脉注射咪唑安定、芬太尼及异丙酚至患者进入4级镇静状态后进行结肠镜检查.对照组(250例)按常规进行结肠镜检查,比较两组患者的反应、操作时间及检查前中后血压、心率及氧饱和度的变化.③治疗组:在无痛胃肠镜状态下开展息肉摘除、贲门失弛缓症内镜下扩张治疗、食管静脉曲张套扎治疗及EST共51例.结果:①胃镜静脉复合麻醉组咳嗽、恶心呕吐的发生率分别为1.7%、0.53%,而对照组为46.6%、11.6%(P＜0.001),静脉复合麻醉组清醒时间为8.95±2.95min,检查中血压、心率及氧饱和度平稳.②肠镜检查中复合麻醉组与对照组相比血压无明显变化(P＜0.05);入镜时间明显优于对照组(P＜0.01).③全部治疗组无并发症发生,患者依从性好,治疗时间明显缩短.结论:小剂量咪唑安定和异丙酚及芬太尼联合应用于胃肠镜检查安全、有效.尤其有利于开展胃肠镜下治疗,此项技术深受患者欢迎,推广和应用此项技术必将产生巨大的社会和经济效益.

作者：郭强；李德亮；陈艳敏；唐天云；范红；罗静；王骊刊期： 2004年第01期
CTn-Ⅰ测试板对急性心肌梗塞诊断价值的评价

肌钙蛋白是心肌的结构蛋白,是心肌细胞特有的成分,利用高特异性的抗心肌肌钙蛋白(Cardiac Troponin.CTn-Ⅰ)单克隆抗体测试板测定血清CTn-Ⅰ含量,与传统的心电图结合磷酸肌酸激酶(CK)及其同功酶(CK-MB)诊断急性心肌梗塞(AMI)进行比较,以评价快速CTn-Ⅰ测试板法对急性心肌梗塞(AMI)的诊断价值,现报告如下.

作者：代琼；李光富；曾凯宏；刘玉兰；张黎刊期： 2004年第01期
膜诱导组织再生技术治疗牙种植体周围炎

目的:在动物实验的基础上,研究临床应用膜诱导组织再生技术治疗牙种植体周围炎,以观察治疗的临床效果.方法:选择符合牙种植体周围炎诊断标准的患者作为研究对象,在牙种植体周翻瓣刮治的同时运用胶原膜覆盖种植暴露面和骨面,观察种植体周骨组织再生情况和种植体的稳固性.结果:经过一年的放射学和临床观察,发现炎症未复发,种植体稳固性提高,种植体周骨组织有不同程度的再生.结论:膜诱导组织再生技术可用于牙种植体周围炎的治疗.

作者：詹斌；叶扬；余聃；张梅；常雪梅刊期： 2004年第01期
高血压病视网膜病变

原发性高血压的病因至今不清楚,可能由于视丘下部管制和维持正常血压中枢调节机理不稳定,或者调节机理减弱,来自脊髓和延髓节段中枢的神经兴奋性改变,而使内脏循环血管收缩,这些改变多与遗传相关[1].

作者：闵鹄秋刊期： 2004年第01期
须癣1例

患者,男,49岁,因唇周反复起脓肿2+月,起结节、鳞屑性红斑1月,于2003年3月3日来我院就诊.

作者：何迅；王尚兰；薛竞；刘伟；杨雁刊期： 2004年第01期
丙泊酚靶控输注麻醉在瓣膜置换术中的应用

目的:比较丙泊酚靶控输注(TCI)静脉麻醉和异氟醚静吸复合全麻在瓣膜置换术中的临床效果.方法:24名患者随机分成两组.丙泊酚组(n=12)气管插管后经右颈内静脉泵入丙泊酚,靶浓度2μg/ml,体外循环(CPB)期间0.8μg/ml,CPB后1μg/ml;异氟醚组(n=12)采用大剂量芬太尼复合吸入异氟醚全麻.以收缩压(SBP)≤80%基础值为反馈指标.监测SBP、心率(HR)、中心静脉压(CVP)等指标,比较术后恢复情况.结果:两组围术期血流动力学稳定,丙泊酚组清醒快,气管导管拔除早,在抑制心肌应激方面优于异氟醚组.结论:在瓣膜置换术中应用靶控输注丙泊酚辅以喉麻和硫酸镁,可大幅减少芬太尼用量,术后恢复快,该方法值得临床推广应用.

作者：李祥奎；兰志勋；万永灵；黄建新刊期： 2004年第01期
院前急性心脑血管事件的救治原则

1 院前急救可提高心血管急症的生存率许多社区医疗实践证实,不断加强和改善社区急救医疗服务(EMS)体系是提高心脑血管急症生存率的关键.基本生命支持的救治方法在基层和社区医疗中的普及,使许多现场急救取得了极大的成功,也是急救医疗服务体系(EMSS)在院外的心脑血管急症病人获得生存佳的目标.

作者：沈洪刊期： 2004年第01期
妊娠期高血压疾病的流行病学研究现状

妊娠期高血压疾病是妊娠期常见的并发症,对妊娠期高血压疾病我国与国际定义及分类法有所不同,为与国际接轨,目前我国有很多学者建议用国际的分类方法以取代我国的分类方法.

作者：戴钟英刊期： 2004年第01期