学术投稿

核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

彭佳;王国华;陈坤;宋晓国;张贺秋;周见远;何竞

关键词:核心链霉亲和素, 克隆, 表达
摘要:目的 克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因.方法 人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的 蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性.结果 人工合成的354bp DNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因.将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物.SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符.在非变性条件下纯化目的 蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果 表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当.结论 成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因.
现代检验医学杂志相关文献
  • 不稳定型心绞痛患者冠状动脉支架置入术后血清sCD40L及hs-CRP水平的动态观察

    目的 动态观察52例不稳定型心绞痛患者冠状动脉支架置入术后血清可溶性CD40配体(sCD40L)及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)的水平变化.方法 用ELISA法检测血清sCD40L水平;在Olympus AU2700全自动生化分析仪上采用免疫透射比浊法检测血清hs-CRP水平.结果 与冠状动脉支架置入前相比,sCD40L及hs-CRP水平在支架置入后7,14,21,30,90和180 d均明显降低(P<0.0001);支架置入后7,14,21,30,90和180 d五个组之阀相互比较,sCD40L及hs-CRP水平差异无显著性(P>0.05).结论 在支架置入前,不稳定型心绞痛患者血清sCD40 L及hs-CRP的水平均明显偏高,在支架置入后随之降低.sCD40L及hs-CRP水平变化对评价临床药物干预效果具有一定作用.

    作者:徐邦牢;马为;贝春花;王蓉;雷秀霞 刊期: 2008年第04期

  • 血清NT-pro BNP水平与NYHA心功能分级的相关性研究

    目的 研究N端B型脑钠肽(NT-pro BNP)与美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级的相关性.方法 入选心脏病患者864例,男503例,女36I例;年龄28~89岁(52±22岁),按NYHA分级将病人进行分组.另选择同期健康献血者100名作为对照组.各组病人分别于入院时、出院前各采血一次,对照组则仅采血1次,每次均抽取静脉血3 ml.以免疫电化学发光法检测其血清NT-pro BNP浓度.结果 各组病人NT-pro BNP水平均显著高于对照组NT-pro BNP水平(2.59±0.12 ng/ml),心功能分级升高,NT-pro BNP亦呈升高趋势(P<0.05),出院前NT-pro BNP水平与入院时相比明显下降(P<0.05).结论 心血管疾病患者血清NT-pro BNP水平随心衰严重程度增加而升高,随治疗改善而下降.

    作者:于农;金欣;孙君;陈建魁;宋世平;尹秀云 刊期: 2008年第04期

  • 配合性血小板输注的临床应用

    目的 研究配合性血小板输注的临床效果.方法 选择36例反复输注血小板的患者,随即分为2组,包括交叉配合组及对照组,其中交叉配合组18例.应用单克隆抗体固相血小板抗体实验(MASPAT)进行血小板交又配合实验,对照组18例采用血小板随即输注.并于输注前及输注后1 h和24 h检测血小板计数,并以血小板校正计数增值(CCI)判断输注效果 结果 交叉配合组与对照组输注有效率分别为83.3%和36.6% 两组间差异有统计学意义(p<0.01) 结论 经MASPT进行血小板配合输注能显著提高血小板临床输注效果.

    作者:荣保平;张献清;霍保平 刊期: 2008年第04期

  • 染色体核型分析在骨髓增生异常综合征中的应用

    目的 探讨染色体核型分析在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断、预后评估中的价值.方法 对112例MDS患者的染色体核型情况进行回顾性分析.结果 112例MDS中,染色体核型异常者57例,占50.9%,主要累及+8,-7/7q-,-5/5q-,-y,20q-及其它涉及数量或结构异常的各种核型改变,其中-7/7q-和复杂核型异常的MDS易发生克隆转化,易进展为急性白血病;5例初诊为良性血细胞减少的患者经染色体核型分析,发现有克隆性细胞遗传学异常,终确诊为MDS.结论 染色体核型分析在MDS诊断、预后评估方面具有重要价值,特别在原始细胞比例不高、病态造血不明显的MDS-RA或MDS-RCMD时,核型分析对疾病的诊断及预后估计起决定作用.

    作者:唐玉凤;庞国香;卢冬梅;郝少丽 刊期: 2008年第04期

  • 抑郁症患者血清甲状腺激素水平研究

    目的 探讨血清甲状腺激素水平与抑郁症的关系.方法 采用ELISA方法 对40例抑郁症患者治疗前后及对照者血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)和促甲状腺素(TSH)进行检测.结果 抑郁症患者治疗前血清FT3,FT4较对照组低(P<0.05),而TSH与对照组差异无显著性(P>0.05).治疗4 W后两组间差异无显著性(P>0.05).结论 抑郁症患者存在甲状腺功能低下.

    作者:张文亮 刊期: 2008年第04期

  • 氧化苦参碱干预急性出血坏死性胰腺炎大鼠TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表达

    目的 探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OM)干预实验性急性出血坏死性胰腺炎(acute hemorrhagic necrotizing pan-creatitis,AHNP)大鼠TNF-α mRNA和IL-1βmRNA的表达.方法 以5 g/dl牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立Sprague-Dewley(SD)大鼠AHNP,将SD大鼠随机分为SO组、AHNP-NS组及AHNP-OM组.检洲血清TNF-α和IL-1β含量及胰腺组织中TNF-α tuRNA和IL-1β mRNA的表达.结果 AHNP-NS组和AHNP-OM组血清TNF-α水平3 h与6 h分别为286.5±50.3pg/ml和150.3±40.7 pg/ml及500.5±45.3 pg/ml和240.5±60.3 pg/ml(P<0.05);AHNP-NS组和AHNP-OM组3 h与6 h血浆IL-1β分别为:293.8±46/3 pg/ml,388.0±44.5 pg/ml和150.2±47.5 pg/ml,182.7±30.6pg/ml(P<0.05);AHNP-OM组造模3 h与6h胰腺组织TNF-α mRNA和IL-1β mRNA的表达较AHNP-NS组显著减弱(P<0.05).结论 OM预处理能够显著减少牛磺胆酸钠SD大鼠AHNP模型炎症细胞因子IL-1β和TNF-α,从而改善胰腺炎痛变的严重程度.

    作者:庄建伟;房栋;张红光 刊期: 2008年第04期

  • 女性生殖道链球菌分型与意义研究

    目的 研究无乳链球菌在女性生殖道中的定植和感染机制,提高临床实验室对其检测的认识水平.方法 先将白带涂片检查,再对链球菌为优势菌的患者样本进行细菌培养和鉴定,结合阴道菌群分布、白细胞数量等检测数据进行分析.结果 涂片检查链球菌阳性率5.35%(58/1 085),白细胞阳性率0.28%(3/1 085);细菌培养无乳链球菌阳性率1.75%(19/1 085);链球菌血清分型D型占51.72%,B型(无乳链球菌)占32.76%.结论 无乳链球菌在女性生殖道中的定植与疾病呈密切相关.

    作者:陈华英;何艳;林伟华;聂晓辉;黄云平 刊期: 2008年第04期

  • 肺炎支原体肺炎患儿血清锌、铁、铜含量的分析

    目的 探讨血清锌、铁、铜水平与小儿肺炎支原体肺炎的关系.方法 取肺炎支原体肺炎患儿急性期用药前血清标本,使用罗氏PS00全自动生化分析仪,检测其锌、铁、铜离子含量,与正常儿童对照组比较.其中锌离子测定采用比色法,铁、铜离子测定采用终点法.结果 肺炎支原体肺炎患儿血清锌(6.85±1.36 μmol/L)、铁(3.90±0.41μmol/L)离子水平明显低于对照组(锌13.30±1.75μmol/L,铁5.61±0.52μmol/L),P<0.01;血清铜(14.40±2.91μmol/L)离子水平与对照组(铜14.80±2.96μmol/L)相比无明显差异,P>0.05.结论 血清锌、铁、铜离子含量与小儿肺炎支原体关系密切,可通过调节三者在血清中的含量来预防和辅助治疗小儿肺炎支原体肺炎.

    作者:朱飞;周育栀;邱群芳 刊期: 2008年第04期

  • 四种TRAIL受体在隐球菌性脑膜炎中的表达及临床意义

    目的 研究建立实时荧光定量(RFQ)-PCR法测定四种TRAIL受体DcR1,DcR2,DR4,DR5 mRNA含量的方法 ,探讨其在隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中表达的检测价值,并分析隐球菌性脑膜炎患者免疫指标与四种TRAIL受体的相关性.方法 设计特异性的引物和探针,以人基因GAPDH为内参照,用实时定量PCR的方法 检测35例健康人和35例隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL受体mRNA的表达水平,采用全自动特定蛋白分析仪检测IgG,IgA,IgM,C3,C4.结果 与健康人比较,隐球菌性脑膜炎患者外周血单个核细胞中TRAIL受体DcR1 mRNA的表达显著升高(P<0.01),受体DcR2,DR4,DR5 mRNA的变化无统计学意义.隐球菌性脑膜炎患者血清中的C3和IgG显著下降(P<0.01),且与DcR1的变化成负相关,结论 隐球菌性脑膜炎患者TRAIL受体DcR1 mRNA的表达明显升高,提示TRAIL受体DcR1可能参与隐球菌性脑膜炎的疾病进程,这为有效治疗隐球菌性脑膜炎提供了新的线索.

    作者:周晔;邓安梅;陈燕;谷明莉;吴传勇;陈波;陈孙孝;仲人前 刊期: 2008年第04期

  • 急性心肌梗死患者纤溶活性变化及药物干预效果评价

    目的 讨论急性心肌梗死(AMI)患者凝血与纤溶指标变化及其药物的干预作用.方法 用酶联免疫法(ELISA)及免疫法等定量分析47例AMI患者入院即刻及治疗14 d后血浆vWF,FIB,DD,t-PA,PAI等相关指标变化,并观察治疗14d后AMI患者中氯吡格雷组与常规治疗组血浆vWF,FIB,DD,t-PA,PAI水平变化.结果 AMI患者急性发作期血液处于高凝状态,血浆vWF,FIB水平明显高于健康对照组(P<0.01),纤溶活性指标t-PA较健康组明显降低(P<0.01),PAI,DD水平升高(P<0.01).治疗14 d后血浆vWF,FIB,t-PA水平接近健康对照组(P>0.05);治疗14 d后氯吡格雷组与常规治疗组血浆t-PA,FIB,PAI有显著性差异(P<0.05).结论 AMI患者有明显凝血、纤溶功能异常,氯吡格雷与阿司匹林联用能明显改善凝血、纤溶功能异常.

    作者:吕晓莉;党小军;刘丹萍;王华;苍金荣 刊期: 2008年第04期

  • 全自动免疫透射比浊法测定血清免疫球蛋白应考虑的问题及解决方法

    血清免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)水平测定以对很多血液和免疫方面的疾病诊断和疗效观察具有重要的临床参考价值而愈来愈被重视,逐渐成为临床实验室的常规项目.免疫比浊测定法(im-munoturbidimetry)因同时具备生化检测的快速性和免疫反应的特异性,可进行血清Ig的快速、准确定量,临床实验中应用较广泛.

    作者:罗浔阳;孙兵;胡金曹;张葵;顾光煜 刊期: 2008年第04期

  • 西安幼儿园827名儿童血中微量元素含量分析

    目的 通过对幼儿园儿童全血中微量元素的含量检测,了解各元素的缺乏情况以及和年龄、性别、身高、体重的关系.为儿童进一步平衡膳食,合理补充提供依据.方法 对在园827名儿童晨起空腹采静脉血,测定全血中锌、钙、铁、镁、铜的含量,同时测量身高、体重,用WHO 0~6岁儿童年龄、性别、身高、体重9分法评价,分为均值上、均值下两组,将数据进行统计分析.结果 各元素的缺乏率由高至低依次为锌(51.5%)、钙(26.1%)、铁(19.6%),而镁、铜的缺乏率为0%;分析了锌、钙、铁的结果 发现男孩、女孩,日托、全托均没有显著性差异,但年龄组有显著性差异,4岁组的锌(71.5%)、钙(33.2%)、铁(23.4%)缺乏率均高,其次是3岁组,5岁组缺乏率低.身高均值上、均值下各微量元素无显著性差异,体重均值上、均值下的儿童血中钙含量有显著性差异,均值下幼儿钙的缺乏率为30.4%,均值上的为24.0%.结论 全因幼儿血中锌、钙、铁均有不同程度的缺乏,尤其是4岁组幼儿,需要针对锌、钙、铁的缺乏制定食谱,更加合理安排膳食,进一步加强对儿童家长、教师的膳食营养知识、儿童保健知识的宣传教育.

    作者:范昕 刊期: 2008年第04期

  • 改良石墨炉原子吸收法直接测定血液中的铅

    目的 建立一种改良石墨炉原子吸收法直接测定血液中铅的方法 .方法 以氯化钯、硝酸铵和Trionx-100作为基体改进剂,血液样品经稀释后直接用石墨炉原子吸收法测定.结果 氯化钯、硝酸铵和Trionx-100基体改进剂的使用,可将灰化温度提高到1 000℃,降低血液成分对测定结果 的影响.线性范围为0~80μg/L,相关系数在0.9980以上,相对偏差为55%~12.2%,回收率为90.1%~106.2%,方法 的检出限为1.1 μg/L.结论 此方法 具有准确可靠、简便快速、样品不需要消化、污染小等优点,可适用于血铅的测定.

    作者:上官淑芳;黄峰 刊期: 2008年第04期

  • 中国北方汉族人乙二醛酶I基因Ala111Glu多态性与糖尿病并发冠心病的关系研究

    目的 探讨中国北方地区汉族人乙二醛酶I(GLO-I)基因Ala111Glu多态性与糖尿病并发冠心病的关系.方法 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测了161名对照组、99例糖尿病组和71例糖尿病并发冠心病组GLO-I基因Ala111Glu多态性的基因型和等住基因频率分布.分析基因多态性对糖化血红蛋白(HbA1c)、血糖、血脂水平的影响.结果 3组研究对象的GLO-I基因Ala111Glu多态性基因型和等位基因频率分布差异无显著意义,不同基因型亚组间HbAlc、血糖、血脂水平无明显差别.Logistic回归分析显示,年龄、HbA1c是糖尿病并发冠心痛的危险因素,HDL-C则是糖尿病并发冠心病的保护因素(β=-2.708,Exp(β)=0.067,95%CI=0.009~0.488,P=0.008).结论 GLO-I基因Ala111Glu多态性与糖尿病并发冠心病无明显关联性,不是中国北方汉族人糖尿病并发冠心病发病的独立危险因素.

    作者:金勋;夏良裕;宋耀虹;张麟;尹志农;鄢盛恺 刊期: 2008年第04期

  • 单纯疱疹病毒Ⅰ,Ⅱ型抗原gG1,gG2表达产物复性与纯化

    目的 探讨原核表达系统表达单纯疱疹(HSV)Ⅰ,Ⅱ型分型抗原gG1,gG2包涵体的复性与纯化方法 .方法 采用含氧化/还原谷胱甘肽(1:6)透析液透析法复性,并配合Ni2+固相化的HiTrap Chelating HP亲和层析法纯化表达抗原.应用免疫印迹法、动物免疫实验、SDS-PAGE凝胶电泳对复性纯化后的抗原免疫活性、纯度给以鉴定.结果 复性后的表达抗原具有相当于细胞培养法获得的天然抗原的免疫活性和抗原活性,且纯度迭90%以上.结论 建立的gG1,gG2包涵体的复性与纯化方法 可以用于该类原核表达抗原的大量制备工作,获得的高纯度,高活性抗原可以应用于相关病原体感染临床诊断试剂盒的开发.

    作者:ZHANG Xiao-yan;张小艳;杨来智;吴润香;安社刚 刊期: 2008年第04期

  • 细胞因子对小鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护作用

    目的 研究细胞因子IFN-γ和TNF对小鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护作用.方法 小鼠结核分枝杆菌感染后第5 d给予IFN-γ和/或TNF治疗,观察治疗后半数死亡时间、一定时间内的死亡率、脾内活菌数,检测脾细胞分泌IFN-γ和IL-4水平(ELLSA法)及MΦ产生NO水平(用Griess试剂).结果 IFN-γ和TNF联用组与单纯攻毒组比较明显延长感染小鼠丰数死亡时间、降低感染小鼠35 d内的死亡率、显著减少感染小鼠脾内活菌数,脾细胞IFN-γ分泌水平明显升高,IL-4分泌水平显著降低,MO产生NO水平明显增加.结论 IFN-γ和TNF联合诱导MΦ产生NO,促进Th1细胞反应,抑制Th2细胞反应,改变了Th1/Th2平衡,对小鼠结核分枝杆菌感染产生保护效应.

    作者:汤红明;刘君炎 刊期: 2008年第04期

  • 深圳迈瑞BS-300全自动生化分析仪单向阀故障的判断和处理

    深圳迈瑞BS-300全自动生化分析仪是深圳迈瑞公司的产品,为任选式、多通道、多项目全自动生化分析仪[1].此仪器的清洗系统主要由清洗液桶、单向阀、马达、搅拌棒、样本针、试剂针、清洗池等构成.生化分析仪清洗部分对检验结果影响非常大,单向阀是BS-300全自动生化分析仪清洗部件之一,包括负责内壁清洗的内冲阀,负责外壁清洗的外冲阀,它们的作用主要是对泵的保护,降低泵的压力.

    作者:何文军;陈丽娥;黄永攀 刊期: 2008年第04期

  • 不同类型胸腔积液表达癌胚抗原mRNA的差别

    目的 分析癌胚抗原mRNA(CEA mRNA)在不同类型胸腔积液(包括良性漏出液、良性渗出液和恶性胸腔积液)中表达的差别,探讨CEA mRNA指标鉴别诊断良、恶性胸腔积液的应用价值.方法 对良性漏出液、良性渗出液和恶性胸腔积液应用反转录-套式-聚合酶链反应技术检测CEA mRNA,比较各类胸腔积液检测结果 的差别.结果 漏出液、渗出液和恶性胸腔积液表达CEA mRNA的阳性率分别为1.0%(1/103),3.7%(4/107)和81.2%(134/165),恶性胸腔积液表达CEA mRNA的阳性率远远高于良性胸腔积液(P<0.01).结论 良、恶性胸腔积液CEA mRNA的表达具有极显著性差别,CEA mRNA具有高度的鉴别诊断良、恶性胸腔积液的价值.

    作者:薛承岩;卢云涛;杜新生;杨林瀛;宋立刚 刊期: 2008年第04期

  • ADVIA Centaur全自动免疫分析仪电磁阀故障及排除一例

    ADVIA Centaur全自动免疫分析仪是德国拜尔公司新推出的一种化学发光免疫分析仪器.它采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术,广泛用于内分泌激素、过敏源、心肌标志物、肿瘤标志物等重要指标的测定.

    作者:国秀芝;韩建华;赵颖 刊期: 2008年第04期

  • 因检验结果互认而进行的补体检测结果校正研究

    目的 探讨利用混合血清制备质控参考品对不同实验室间补体C3,C4检测结果 进行校准的可能性.方法 分别检测单份血清和由这些单份血清制备的混合血清的C3,C4,比较单份血清检测值的均数与混合血清检测值的接近程度;将100份正常人血清(40岁以下成人,男女各半)等量混合为参比血清与1名患者血清同时送6家临床实验室检测,依照同一实验室检测的参比血清检测值和<全国临床检验操作规程(第3版)>给定的各项目的 参考值对患者血清检测值进行校准,观察校准效果.结果 混合血清检测值与单份血清测定值的均数十分接近;患者血清迟6家临床实验室C3,C4检测结果 的CV值分别为10.32%和16.14%,校准后为4.99%和6.53%.结论 依照参比血清检测值和约定真值对待栓血清C3,C4检测值进行校准效果明显.

    作者:刘辉;马悦;张静;袁宏;宫晓红;宗建国;徐维家 刊期: 2008年第04期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院