学术投稿

PCR-HRM技术在华法林佳用药剂量关联基因单核苷酸多态性检测中的应用

王芳芳;尤崇革;李光迪;潘云燕;郜莉娜;李菲菲

关键词:华法林, EvaGreen, 高分辨熔解技术, 单核苷酸多态性
摘要:目的 新研究显示华法林佳用药剂量关联基因CYP2C9,CYP4F2和VKORC1可指导临床个体化用药,该成果的临床应用有赖于临床快速分子诊断方法的建立,为此该论文建立PCR-HRM(High-resolution melting)技术检测华法林佳用药剂量关联基因单核苷酸多态性(SNP)并进行应用评价.方法 采用国际前沿的基因突变筛查技术-HRM和新型荧光染料Eva Green对华法林佳用药剂量关联基因CYP2C9*2,CYP2C9*3,CYP4F2 V433M和VKORC1 1173C/T四个SNP位点先进行染料法荧光PCR,接着进行PCR产物的高分辨熔解,依据熔解峰的特点进行SNP分型即PCR-HRM技术建立,后通过检测临床181例标本进行临床应用评价.结果 在181例服用华法林的患者中检测到CYP2C9*2杂合子2例,CYP2C9*3杂合子15例,CYP4F2 V433M杂合子74例,纯合子14例,VKORC1 1173C/T杂合子33例.随机选择各类基因型PCR产物共24例进行测序,验证结果与检测结果一致.结论 PCR-HRM技术检测华法林佳用药剂量关联基因SNP是一种灵敏、简便、快捷的低成本检测方法,可用于临床常规化分子诊断.
现代检验医学杂志相关文献
  • 胰腺癌肿瘤标志物单项和联合检测的评价

    目的 应用受试者工作特征(ROC)曲线,对肿瘤标志物CA199,CEA在胰腺肿瘤诊断中的应用价值进行评价.方法 采用电化学发光免疫分析法检测胰腺癌患者、胰腺良性疾病患者及健康对照者血清中的CA199,CEA含量,分析并比较单项检测和联合检测的意义,通过ROC曲线评价CA199,CEA在胰腺肿瘤诊断中的应用价值.结果 与良性胰腺疾病组及健康对照组相比,胰腺癌组血清CA199,CEA含量差异均有统计学显著性意义(P<0.01);CA199+CEA,CA199,CEA的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.89,0.80,0.68.结论 通过ROC曲线评价CA199,CEA联合检测对胰腺肿瘤诊断有显著意义.

    作者:陈红梅;居会祥;孙明忠;肖丽华 刊期: 2011年第02期

  • 荧光原位杂交法(FISH)快速检测尿液中金黄色葡萄球菌

    目的 利用荧光原位杂交法快速检测尿液中的金黄色葡萄球菌,筛查金黄色葡萄球菌所致的尿路感染.方法 针对金黄色葡萄球菌16sRNA设计荧光标记的核苷酸探针,利用荧光原位杂交技术(FISH)对132例疑似尿路感染患者中段尿标本进行检测;同时进行中段尿培养.结果 荧光原位杂交法检测阳性的有9例,与中段尿培养比较,其敏感度为100.0%,特异度为99.2%,阳性预期值为90.0%,阴性预期值为100.0%.结论 荧光原位杂交能快速检测尿液中的金黄色葡萄球菌,对金黄色葡萄球菌所致的尿路感染进行快速诊断.

    作者:吴青;李艳;汪明;顾剑;胡慧霞;徐万洲;韦传东;吴泽刚 刊期: 2011年第02期

  • 凝血检测标本的采集、运送、处理和保存

    目的 探讨对血凝标本的采集、运送、处理和保存方法.方法 通过仔细研究凝血标本的采集、运送、处理和保存过程中可能存在的影响因素,探索保证检测结果的准确性的具体措施,并参照美国临床和实验室标准化研究院(CLSI) H21-A5及相关文件对常规方法进行优化.结果 优化后的方法在标本采集时强调了患者的隐私和抗凝剂与标本的比例;标本的运送、处理和保存方面根据标本的类型(基于血浆和基于分子两种标本类型)和检测项目提出了具体的优化措施.结论 实验室应该注意血凝检测标本采集、运送、处理和保存的规范化.

    作者:胡丽涛;王治国 刊期: 2011年第02期

  • 过敏性紫癜患儿Th17细胞表达及意义

    目的 探讨Th17细胞在儿童过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿55例,采用流式细胞分析法检测外周血Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆相关细胞因子IL-17和IL-6的水平,并进行相关性分析.同期选取20例同龄健康儿童作为对照.结果 HSP患儿外周血Th17/CD4+T细胞比例显著高于对照组[(1.91±0.78)% vs(0.52±0.24)%,(P<0.01)];HSP患儿血浆IL-17和IL-6的水平亦明显高于对照组[IL-17:(47.4±17.6)pg/ml vs (15.6±11.2) pg/ml;IL-6:(273.8±42.4)pg/ml vs(228.7±37.4)pg/ml,(P<0.01)].患儿血浆IL-17和IL-6的水平呈正相关(r=0.762,P<0.01).结论 过敏性紫癜急性期患儿Th17细胞比例增加,IL-17和IL-6水平升高,提示Th17细胞可能参与了HSP的发病及其炎性反应过程.

    作者:孟凡茹;李玮;杨静慈;王秀丽;庞晓璐 刊期: 2011年第02期

  • 西安地区儿童肺炎支原体感染的流行病学分析

    目的 探讨西安地区儿童呼吸道肺炎支原体(MP)感染的流行病学特征.方法 应用MP快速培养检测法对西安地区2007年5 598例急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本进行MP培养检测.结果 1047例MP检出阳性,阳性检出率为18.70%.各年龄组患儿MP阳性检出率基本相同,不同季节MP阳性检出率不同.结论 MP为西安地区儿童呼吸道感染的主要病原体之一,各年龄组儿童普遍易感,第四季度MP感染率较高.

    作者:焦西英;钱新宏;宋琳;成胜权;罗建峰 刊期: 2011年第02期

  • 髓源性抑制细胞-免疫系统的调节成分

    近来研究发现,一类被称为髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的细胞群,参与了肿瘤的免疫逃逸、免疫耐受、免疫抑制等病理过程,促进肿瘤的生长.这群细胞主要分布在血液、脾、淋巴结、骨髓及肿瘤微环境等部位,通过复杂的分子途径,对机体的抗肿瘤免疫起抑制作用.该文就MDSCs的来源、基本特性及其在生理和病理条件下的生物学作用做简要综述.

    作者:李媛;胡正军 刊期: 2011年第02期

  • 西藏三个不同海拔地区男性体检者血尿酸的观察

    目的 探讨西藏三个不同海拔高度地区驻军男性体检者血尿酸的变化.方法 选择来自海拔4 500 m(A组)、3 700 m(B组)、2 800 m(C组)三个不同海拔高度的驻军男性健康体检人员71人、63人、66人,采用尿酸酶法在日立7180全自动生化分析仪上测定血尿酸水平.结果 A组、B组、C组三个不同海拔高度的驻军男性血尿酸分别为401.38±68.85 μmol/L,377.19±57.48 μmol/L,367.05±57.12 μmol/L,经方差齐性检验,方差齐,(F=2.632,P=0.074).A组血尿酸水平明显升高,经t检验,与B组、C组之间有显著性差异(tAB=2.192,P<0.05;tAC=3.164,P<0.05).但是B组、C组之间无显著性差异(tBC=1.005,P>0.05).A组、B组、C组血尿酸升高率分别为46.5%,27.0%,16.7%,A组和B组、C组之间血尿酸升高率有显著性差异(χ2AB=5.62,P<0.05;χ2AC=12.81,P<0.05).但是B组、C组之间血尿酸升高率无显著性差异(χ2BC=1.48,P>0.05).结论 研究结果表明,在海拔4 000 m以上的高原地区,海拔因素所导致的血尿酸升高率及血尿酸水平均显著升高.这点在高原疾病的预防及治疗中应当引起重视.

    作者:姜南艳;侯毅;江承建;杨光;黄淮霖;陈薇薇;央娜;张惠中 刊期: 2011年第02期

  • DKK1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞侵袭能力的影响

    目的 检测Dikkopf 1(DKK1)在肺癌组织及肺癌细胞系中的表达,并探讨其对肺癌细胞侵袭能力的影响.方法 采用免疫组化的方法检测DKK1在肺癌组织中的表达,应用Western blot检测了肺癌组织及其配对的正常肺组织和10个非小细胞肺癌细胞系中DKK1蛋白表达水平.通过已构建好的DKK1过表达的真核表达载体,将其转染到非小细胞肺癌细胞95C中,观察细胞侵袭能力的改变.结果 免疫组化检测肺癌组织中DKK1阳性表达率为76.2%.Western blot检测表明DKK1在肺癌组织中的表达明显高于配对的正常肺组织,在10个非小细胞肺癌细胞系中均有不同程度的表达.在非小细胞肺癌细胞系95C中过表达DKK1,95C细胞穿过Boyden小室的细胞数目明显增加.结论 DKK1在肺癌组织中呈高表达,并且在多个肺癌细胞系中表达,DKK1的过表达能够增加95C细胞的侵袭能力.

    作者:李书军;刘雪峰;闫洪江;牛秀兰;田刚;崔爱荣;吴文新 刊期: 2011年第02期

  • 血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测对老年人深部真菌感染的诊断价值

    目的 探讨血浆(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)检测(G试验)对老年人深部真菌感染的诊断价值.方法 采用动态比浊法检测67例老年高危患者的血浆BG浓度,并与真菌培养结果进行比较.结果 67例高危患者,G试验31(46.27%)例阳性,真菌培养法21(31.34%)例阳性.深部真菌感染组血浆BG中位数浓度为45.97 pg/ml;非真菌感染组浓度为5.00 pg/ml,两组差异有统计学意义(Z=-6.138,P<0.01).若以真菌培养为标准,G试验的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为90.48%,73.91%,61.29%和94.44%.结论 G试验对于老年人深部真菌感染具有早期、快速的诊断价值.

    作者:杨艳兵;李从荣;郝世勇;李娟;余华 刊期: 2011年第02期

  • 菌血症患者血浆(1,3)-β-D-葡聚糖结果分析

    目的 了解菌血症对GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒的影响.方法 回顾性分析27例非侵袭性真菌感染(IFI)菌血症患者血培养当日(1,3)-β-D-葡聚糖结果.结果 27例非IFI的菌血症患者中8例(29.63%)为G试验阳性,其中革兰氏阳性菌感染的菌血症患者中4例G试验阳性(33.33%,4/12),均为葡萄球菌属感染.革兰氏阴性菌感染的菌血症患者中4例(26.67%,4/15)G试验阳性,其中2例为铜绿假单胞菌感染病人,1例为鲍曼不动杆菌复合群感染病人.金黄色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、鲍曼不动杆菌复合群、铜绿假单胞菌、霍氏肠杆菌感染可引起(1,3)-β-D-葡聚糖检测阳性.结论 葡萄球菌属、铜绿假单胞菌等与GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒有交叉反应,可能会引起G试验假阳性.

    作者:胡毓安;黄梅;王卫萍;范明;王颖;尤金炜;何伟;邵海枫 刊期: 2011年第02期

  • 北京地区健康儿童PT和APTT正常参考范围的探讨

    目的 建立北京地区儿童血浆凝血酶原时间(plasma prothrombin time,PT)和活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)的正常参考值范围,为临床诊治提供依据.方法 采用法国STAGO全自动血凝分析仪检测北京地区1 111例正常儿童的PT和APTT.将所有儿童根据性别不同分成男(582例)、女(529例)两组;根据发育情况分为婴儿组(257例)、幼儿组(265例)、学龄前组(271例)、学龄组(192例)、青春发育期组(126例).采用美国临床实验室标准化协会推荐的C28-A2文件中提供的关于临床实验室如何确定和建立生物参考区间的方法对所有数据进行分析.结果 经过正态性检验,儿童PT和APTT检测值均呈正态分布.经Z检验后发现不同性别儿童的APTT分布差异无统计学意义(t=1.98,P>0.05),但PT分布差异有统计学意义(t=0.837,P<0.05).不同年龄段儿童的PT和APTT差异存在统计学意义 (FAPTT=5.665,P<0.01;FPT=5.755,P<0.01).根据年龄和性别不同,计算APTT和PT的参考范围为:青春发育前组:PT(男)11.9~14.6 s,PT(女)12.0~14.7s;APTT 29.6~50.7 s.青春发育组:PT(男)11.3~14.6 s,PT(女)11.6~14.6 s;APTT 26.5~46.6 s.结论 初步建立北京地区儿童PT和APTT的正常参考范围,对于临床诊治和筛查凝血障碍性疾病、血栓性疾病以及临床使用抗凝剂监测等方面具有十分重要的意义.

    作者:李启亮;李玉清;靳剑云 刊期: 2011年第02期

  • 241938份标本的不合格情况分析与分析前质量控制

    目的 通过总结新疆医科大学第一附属医院检验科急诊室部分标本的分析前质量控制,提高检验科接收标本检验结果的准确性与可靠性.方法 统计2009年1月~10月241 938份标本,对分析前标本采集的准确率,标本运输的时间以及不合格样本的科室分布情况进行统计.以发放问卷形式分析标本分析前人员相关知识掌握程度.结果 各科室送检标本241 938人次,不合格率0.56%,问题多集中在条码错误、血凝、溶血等方面,不合格样本分布在临床各科室.部分送检标本转运时间较长.部分人员对标本分析前状况不够重视.结论 应采取措施加强各个科室送检标本的分析前质量控制,加强检验科与临床沟通,进一步提高检验质量.

    作者:朱有森;阿曼古丽;桑国耀 刊期: 2011年第02期

  • AU2700生化分析仪内、外圈检测单元结果差异性的识别及比对试验

    目的 观察AU2700内、外圈两个独立检测单元测定结果差异的可接受性,并制定有效的差异检出措施.方法 对同一测定项目分圈测定,采用R4s规则作为判定差异不可接受的检出手段,并进行内、外圈测定结果的比对试验.结果 内、外圈检测结果差值大于室内4倍常规SD时,其检测结果经比对试验证实差异不可接受.结论 AU2700内、外圈测定结果的差异呈渐进增大趋势,如不及时发现并处理纠正则结果差异不可接受,采用R4s规则可作为有效检出差异不可接受的报警信号.

    作者:尹中;朱海波 刊期: 2011年第02期

  • 急性髓系白血病M3与M5免疫表型分析

    目的 探讨急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞性白血病患者的细胞抗原表达特点.方法 采用四色流式细胞术(FCM)分析了40例急性早幼粒细胞白血病与30例急性单核细胞性白血病患者的免疫表型.结果 急性早幼粒细胞白血病患者CD45/SSC双参数散点图中细胞群较均一和明显且其SSC值较高,主要表达CD13(100%),CD33(100%),CD117(90%),CD15(75%),CD9(60%);急性单核细胞性白血病患者的CD45/SSC图中幼稚细胞区几乎无细胞,而在单核细胞区出现大量细胞,主要表达CD13(100%),CD33(100%),HLA-DR(80%),CCD64(80%),CD14(53.3%).结论 急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞性白血病患者CD45/SSC双参数散点图显示出其各自独特性,免疫分型可提高诊断M3与M5的准确性.

    作者:莫扬;许小东 刊期: 2011年第02期

  • 变异念珠菌常见菌落和菌体形态

    目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.

    作者:苍金荣;王华;任健康;苏宝凤;张利侠;归巧娣 刊期: 2011年第02期

  • 自主研发血清葡萄糖生化诊断试剂的临床研究

    目的 进行自主研发的血清葡萄糖(Glu)生化诊断试剂自身的性能评价及研发试剂与进口优质Glu生化诊断试剂对血清Glu试验检测的可比性及偏倚评估,确认研发试剂是否符合临床要求,能否应用于临床.方法 自主研发血清Glu己糖激酶法生化诊断试剂自身的性能评价:做空白吸光度、重复性和线性检测.两种试剂的比对和偏倚评估,依据美国(CLSI)EP9-A文件标准[1],科学设计试验方案,以进口德国OLYMPUS(OLYMPUS)诊断试剂为对照组(X),国内中生北控生物科技公司(中生)诊断试剂为试验组(Y),在日本奥林巴斯(OLYMPUS) AU5421自动生化分析仪上测定血清Glu含量.标本选择高、中、低值Glu含量的临床患者血清共计100份,每天10份,每份标本正序、倒序各测定1次,记录测定结果,做统计学分析.结果 自主研发血清Glu生化诊断试剂空白吸光度、重复性和线性检测符合要求,X组试剂和Y组试剂对临床标本Glu的检测结果经统计学处理显示:方法内重复性检查,DX′i≤4DX′,DY′i≤4DY′、离群点检查Eij≤4E,Eij′≤4E′、线性回归r=0.999 8,系统误差的估计值及其置信区间 |(B)clow,(B)chigh|<允许误差,系统误差符合国际标准要求.结论 自主研发的Glu生化诊断试剂与公认的优质进口OLYMPUS生化诊断试剂两者间具有良好的相关性;自主研发Glu生化诊断试剂自身性能良好,安全性和有效性符合临床应用要求.

    作者:李雪梅;王惠萱;王蕴峰;刘玲;王珂;贾雄飞;滕毅 刊期: 2011年第02期

  • 在AU2700生化分析仪上测定IgG限额参数MaxOD的设置

    对基于抗原抗体反应的免疫透射比浊反应当抗原过量(出现等价带及后带反应)时,其浊度大小与抗原含量的正比关系即不存在,可能导致错误结果.现以科华公司IgG测定为例,在AU2700生化分析仪上通过设定限额参数MaxOD,来自动识别抗原过量.

    作者:史连义;刘继勇;谢卫;张继领;王鑫 刊期: 2011年第02期

  • 检验科临检专业组管理模式的建立与实践

    目的 按照<医疗机构临床实验室管理办法>,建立临检专业组管理的工作模式.方法 首先建立临检专业组程序文件作为质量保证标准和科学管理工作的依据.组长在管理和技术上,日常执行的事项包括履行组内质量和安全管理、明确制定临检组各室岗位职责、建立与落实血细胞分析/尿液分析复检规则、临检组技能培训与能力评估、锻炼提升专业组长素质及培养专业组学风等.结果 实施管理后,临检专业组各岗位工作有序进行、质量平稳提高、自主学习习惯养成,组长管理工作比较有条理.结论 临检专业组的管理模式能较好适应玉林市红十字会医院检验科实际,对其他专业组有一定借鉴价值,值得在区市级医院检验科推广.

    作者:陈国添 刊期: 2011年第02期

  • 实验性2型糖尿病兔模型的建立及其血清物质变化研究

    目的 构建完整的、实用的、有效的2型糖尿病动物模型,动态监测2型糖尿病病理改变过程中血清指标的变化情况.方法 20只家兔随机分成2组:对照组5只,常规饲养,实验组15只,采用高脂高糖饲料喂养加5次耳缘静脉注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ)联合诱导的方法建立2型糖尿病兔动物模型,以空腹血糖≥11.0 mmol/ L作为造模成功的标准.观察糖尿病兔血清中血糖(FBG)、血脂(TG、TC)、C-反应蛋白(CRP)、胰岛素(INS)水平的变化.结果 实验组在饲养过程中,TG,INS,CRP水平升高,显著高于对照组(t为2.61,3.11,3.46,均P<0.05).首次注射STZ后2~7 d FBG,INS,CRP升高达到高峰,与对照组比较差异有统计学显著性意义(t=3.14,P<0.01;t=3.21,P<0.05;t=3.63,P<0.01),平均FBG≥16.0 mmol/L,无动物死亡,成模率80%.结论 高脂高糖饲料喂养加小剂量多次注射STZ可建立稳定的兔2型糖尿病模型,方法简便易行,死亡率低、成模率较高,可作为研究2型糖尿病的理想动物模型.

    作者:万莉;王旻晋;杨秋 刊期: 2011年第02期

  • 胃液及血清CA724,CA199和CEA联合检测对胃癌诊断的意义

    目的 探讨胃癌患者胃液及血清CA724,CA199和CEA联合检测在胃癌诊断及其与良性胃疾病鉴别诊断中的临床价值.方法 用电化学发光法分别检测胃癌、良性胃疾病患者胃液、血清中CA724,CA199和CEA浓度.结果 胃癌患者胃液及血清中CEA,CA199和CA724阳性率与胃良性疾病患者的阳性率比较差异有统计学显著性意义(P<0.05);两种标本、三个项目联合检测敏感度为78.6%,显著高于单项、血清标本联合、胃液标本联合检测(P<0.05);两种标本、三个项目联合检测时,2项(69.0%)、3项(95.2%)、5项(100.0%)同时阳性,特异度高于1项阳性(44.2%).结论 胃液及血清CA724,CA199和CEA的联合检测可以提高胃癌的早期诊断,利用多项目同时阳性可增加特异度.

    作者:何思春;庞红全;焦鑫;王利君;刘兴琼 刊期: 2011年第02期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院