牟霞；陈瑶；王穗海；黄湘；李明
目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RA FLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径.方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平;用反转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测FLS中MMP-3 mRNA的表达水平.结果:TWEAK终浓度为50、100μg/L组诱导RA FLS合成MMP-3的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(P＜0.05);TWEAK终浓度为100μg/L诱导RA FLS的MMP-3 mRNA表达水平为对照组的1.26倍,具有显著的统计学意义(P＜0.05);TNF-α和IL-1β对TWEAK诱导RA FLS合成MMP-3及MMP-3 mRNA表达具有协同作用,协同作用组MMP-3的水平及MMP-3mRNA表达水平明显高于单纯TWEAK组,具有显著的统计学意义(P＜0.05).结论:TWEAK通过诱导RA FLS合成MMP-3,直接参与RA的关节损伤,TNF-α和IL-1β在此过程中发挥协同作用.
作者：夏丽萍；肖卫国；李俊松；丁爽；鲁静 刊期： 2009年第01期
目的:为获得大肠癌的特异性抗原基因,构建人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.方法:从2株人大肠癌细胞CCL-187和CX-1中提取总RNA,分离纯化mRNA,并以此为模板合成第1链cDNA,用置换法合成第2链cDNA.双链cDNA经末端削平、EcoR Ⅰ接头连接、Xho Ⅰ酶切、过柱分级分离,除去＜400 bp片段.收集符合需要的cDNA片段与噬菌体ZAP Express载体连接,体外包装后获得人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库.结果:构建的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体文库,原始库容量为2.3×109 pfμ/L,重组率97%.重组子插入cDNA片段平均大小1 kb以上.结论:成功地构建高质量的人大肠癌抗原基因的cDNA噬菌体表达文库,为大肠癌的特异性抗原筛选奠定了基础.
作者：陈航；方瑾 刊期： 2009年第01期
目的:探讨IL-11对中子照射后肠上皮内Jak/STAT通路的影响,并观察其对Bax和Bcl-2表达的影响.方法:BALB/c小鼠和IEC-6细胞经4 Gy中子照射和IL-11处理分别作为肠上皮损伤的体内外模型,采用HE染色、Western blot、EMSA、免疫组化和图像分析技术分别检测肠道病理变化、Jakl和STAT3活性及Bax和Bcl-2的表达.结果:(1)中子照射后,小鼠肠道损伤极为严重,且未见明显再生;IL-11治疗组隐窝上皮细胞及存活隐窝数量较多.(2)中子照射后,IEC6细胞Jakl和STAT3活性均减弱,IL-11处理可增加二者活性.(3)中子照射后,小鼠肠道Bax表达增加,Bcl-2表达无明显改变;应用IL-11可降低Bax表达,增加Bcl-2表达.结论:在中子辐射时,IL-11可通过激活Jak/STAT通路,并下调Bax表达,上调Bcl-2表达,对肠上皮起到一定的保护作用.
作者：王瑞娟；彭瑞云；高亚兵；常公民；徐新萍；付凯飞；罗庆良 刊期： 2009年第01期
目的:研究雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和环孢素A(cyclosperin A,CsA)体内处理对同种移植小鼠急性排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响.方法:建立同种皮肤移植模型,术后给予RAPA或CsA,1次/d,连续14 d,同时设生理盐水对照组.每日观察移植物存活状况.术后选取1、7、10、14、21 d共5个时间点,提取受体小鼠脾细胞,RT-PCR检测TLR5及Foxp3 mRNA表达,探讨不同处理组基因表达与移植物生存的相关性.体外实验利用鞭毛蛋白(flagellin)联合RAPA和CsA处理正常小鼠T细胞6 h,RT-PCR检测TLR5表达.结果:RAPA和CsA可明显延长小鼠同种移植皮片存活期.RAPA可促进脾细胞TLR5 mRNA表达升高,停药后的第21天仍明显高于CsA组和对照组(P＜0.05);CsA组在第7、10天有显著升高,第21天降低(P＜0.05);3组中高表达的时间点为移植后第10天,此时正值排斥高峰期.RAPA可引起Foxp3 mRNA的表达升高(P＜0.05),停药后仍维持较高水平;CsA组仅在移植后第7、10天短暂升高,第14天低于对照组(P＜0.05).移植后1、7、10、21 d 3组的TLR5与Foxp3 mRNA变化趋势正相关.体外实验中,RAPA或CsA与flagellin联合使用,可促进TLR5的表达,以前者的作用更为明显.结论:RAPA和CsA在同种移植急性排斥高峰期可引起TLR5和Foxp3表达的协同升高,且RAPA的作用更加明显和持久,鞭毛蛋白体外可以增强这种作用效果.
作者：陈富强；曲莉莉；张超；梁婷；宋静；徐佳；侯桂华 刊期： 2009年第01期
目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制.方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4 h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯类多克隆刺激剂PDB和离子霉素Ion进行刺激,以流式细胞术(FCM)结合荧光抗体染色技术检测黄芩苷对CD3+ T细胞增殖率的影响;以碘化丙锭(PI)染色结合FCM分析其细胞周期分布.结果:BA(10、15、20、25 ms/L)对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖均有明显的抑制作用(P＜0.05),且呈浓度依赖性.对细胞周期分析表明,BA能使ConA或PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞停滞于G0/G1 期、S期,阻止其进入G2/M期,阻止作用随浓度的增加而增强.结论:BA对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+ T细胞增殖有明显抑制作用,能够将淋巴细胞阻滞在G1/G1 期和S期,表现出明显的周期特异性.本研究提示黄芩苷有发展成免疫抑制剂的潜力.
作者：李林；曾耀英；黄秀艳；宋兵；杨志；滕菲；姚满林 刊期： 2009年第01期
白细胞黏附于血管内皮细胞并渗出内皮细胞层是免疫反应的关键和重要步骤.此过程不仅需要激活白细胞及其膜表面黏附分子,而且需要内皮细胞上相关的黏附分子的调控.目前研究已由研究黏附生理过程转向研究此过程的分子机制.本文主要介绍与此过程相关的内皮细胞黏附分子的基因表达、信号转导通路调控以及对细胞功能的影响等的新研究进展.
作者：张宇；桑晨；庄逢源 刊期： 2009年第01期
目的:建立EB病毒转化B淋巴母细胞系(B-LCL),作为抗原提呈细胞(APC)提呈抗原肽,刺激短期培养的特异性T细胞活化并分泌IFN-γ,从而应用于T细胞表位鉴定中.方法:用B95-8细胞培养上清中的EB病毒转化肾综合征出血热(HFRS)患者PBMC,建立HFRS患者的B-LCL,以自身BLCL为APC,加载抗原肽后,刺激短期培养的G9L特异的HFRS患者CD8+ T细胞系,应用ELISPOT测定CD8+ T细胞受到抗原肽刺激后产生IFN-γ的能力.结果:加载过抗原肽G9L或V15R的B-LCL可刺激G9L特异的CD8+ T细胞活化并产生IFN-γ,而与G9L无同源序列的115P则不能刺激G9L特异的CD8+ T细胞活化.结论:B-LCL可作为非专职APC有效地将抗原肽提呈给特异性T细胞.
作者：王美亮；张全华；王九平；李永明；马樱；金伯泉 刊期： 2009年第01期
目的:构建人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPIⅡb/Ⅲa)Fab噬菌体抗体库,筛选抗GPⅡb/Ⅲa特异性的噬菌体抗体,并对其功能进行研究.方法:取血小板膜糖蛋白抗体(抗GPⅡIb/Ⅲa)阳性的特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾细胞,采用噬菌体抗体库技术构建人源性抗GPⅡb/Ⅲa Fab噬菌体抗体库,以表达GPⅡb/Ⅲa的CHO123细胞筛选抗体库,并以ELISA法检测噬菌体抗体;用Western blot对抗体进行鉴定,并测定其与血小板抗原的结合;观察筛选到Fab抗体对血小板聚集的影响.结果:筛选出2株能够与血小板膜GPⅡb/Ⅲa特异性结合的Fab抗体,其序列与人免疫球蛋白轻、重链可变区序列具有高度同源性,表达纯化的Fab抗体能抑制血小板聚集.结论:成功地从人源性抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体库筛选出特异性识别GPⅡb/Ⅲa,具有抑制血小板聚集作用的人源性抗体.
作者：董宁征；崔宇杰；阮长耿 刊期： 2009年第01期
目的:通过实验探索锁阳多糖、水提取物咀嚼片延缓衰老的效应及其作用机制.方法:提取锁阳多糖、水提取物并制备其咀嚼片;制备衰老动物模型,观察该制剂对衰老模型动物免疫吞噬功能、脾淋巴细胞对刀豆蛋白A(ConA)刺激的增殖活性等的影响;对衰老模型动物脑超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量的影响.结果:锁阳咀嚼片治疗组吞噬指数、吞噬百分率、脾脏淋巴细胞转化能力较衰老模型动物升高;锁阳咀嚼片能提高衰老模型动物脑组织SOD活性,降低MDA、NO的含量,且锁阳多糖组在改善自由基水平方面优于锁阳水提物组.结论:锁阳多糖、水提取物咀嚼片可通过改善衰老模型动物免疫功能以及影响脂质过氧化物作用发挥抗衰老作用.
作者：刘永琦；苏韫；吴建军；张毅；魏舒畅；聂蕾；颜春鲁 刊期： 2009年第01期
目的:建立一种检测小鼠NKT细胞的方法.方法:首先将α-GalCer负载于空的CD1d四聚体上.将α-GalCer溶于1000 mL/L的DMSO中,配成浓度为0.1 g/L,之后震荡α-GalCer液,37℃,12 h,用之前超声水浴37℃,10 min,取12 mol/L的上述α-GalCer液加入到1 mol/L的四聚体溶液中,将上述二者的混合液37℃,避光,孵育24-48 h.然后应用流式细胞术(FCM)检测正常的和腹腔注射α-Galcer 5μg 3d后的小鼠的脾脏及骨髓中共表达α-GalCer/CD1d四聚体及CD3的NKT细胞.结果:在正常小鼠脾脏及骨髓的淋巴细胞中NKT细胞的比例分别为1.2%和1.6%;腹腔注射α-GalCer5μg 3d后小鼠脾脏的淋巴细胞中NKT细胞有轻度的增加,比例为2%和2.7%.结论:CD1d四聚体是检测小鼠NKT细胞的有效工具.
作者：刘景华；窦立萍；王莉莉；于力 刊期： 2009年第01期
目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系.方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体peDNA3-GFP-HEK2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性细胞群,对该群细胞进行无G418条件下的单克隆筛选并进行体内稳定性检测.结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,peDNA3-GFP-HER2构建正确;终建立的表达HER2基因B16细胞系体内传代后GFPHER2阳性率高于90%.结论:成功建立了体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤细胞系,为其他体内稳定表达外源基因的转染细胞的建立提供了借鉴.
作者：李贺；向泽敏；吴秀丽；王莉；卫红飞；万敏；王丽颖；于永利 刊期： 2009年第01期
目的:探讨树突状细胞(DC)的模式识别受体(PPBs)活化与细胞因子表达的关系.方法:采用基因芯片及RT-PCR检测经E.coli LLO/OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞(bone marrw-derived dendritic cell,BMDC)的PPRs及其下游NF-KB信号通路相关分子mRNA的表达水平,并观察BMDC的活化状况及培养上清液内细胞因子含量.结果:经E.coliLLO/OVA刺激后2 h,BMDC出现短暂的TLR4 mRNA表达上调,其下游信号途径相关的Myd88、Rip2、Irak1、Imk2、Ikkα、NF-KB1和NF-KB2 mRNA均出现表达上调,黏附分子Icam1、细胞因子IL-1α、IL-1b、IL-6和TNF-α的mRNA也表达上调;经E.coli LLO/OVA刺激后4 h,BMDC出现Card4(NOD1)mRNA表达上调,其下游信号途径相关的Rip2、Ikkβ、NFkB1和NF-KB2 mRNA均出现表达上调,IFN-γ、TNF-β和CD40 mRNA也上调表达.经E.coli LLO/OVA刺激后24 h,BMDC表达共刺激分子及MHC-Ⅱ类分子上调;且培养上清液内IL-12和IFN-γ含量增高.结论:重组疫苗E.coli LLO/OVA经TLR4和NOD1受体激活NF-KB信号通路,诱导了小鼠BMDC成熟并表达一系列细胞因子尤其是IL-12和IFN-γ.
作者：徐曼；戴明燊；米粲 刊期： 2009年第01期
目的:观察酪氨酸激酶抑制剂A77 1726对白细胞介素13(IL-13)促成纤维细胞胶原合成作用的影响.方法:MTF法观察不同浓度的A77 1726对成纤维细胞的增殖作用的影响.成纤维细胞分为实验组和实验对照组,实验对照组加入IL-13(100 μg/L),实验组加入A77 1726(50 μmol/L)和IL-13(100μg/L),作用24、48、72 h后,羟脯氨酸(Hyp)检测A77 1726对IL-13促进成纤维细胞分泌胶原蛋白的影响,RTPCR观察A77 1726对IL-13促进成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因mRNA水平表达的影响,Western blot观察A77 1726对IL-13促进成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白的影响.结果:A77 1726可抑制成纤维细胞的增殖.羟脯氨酸检测实验组48 h组和72 h组成纤维细胞分泌胶原蛋白的含量显著低于实验对照组(P＜0.05),RT-PCR观察到实验组48 h组和72 h组成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因(COLIA1)mRNA表达水平显著低于实验对照组(P＜0.05),Western blot观察到实验组48 h组和72 h组成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白的水平显著低于空白对照组(P＜0.05).结论:酪氨酸酶抑制剂A77 1726阻断IL-13对成纤维细胞的促胶原蛋白合成作用,阻断IL-13促成纤维细胞Ⅰ型胶原α1基因mRNA水平和蛋白水平的表达.
作者：熊丽霞；李文林；石小玉；刘卓琦；唐洪林 刊期： 2009年第01期
目的:纯化并鉴定阿尔茨海默病(AD)患者血清中抗Aβ2自身抗体.方法:选择AD患者做为研究对象,采集血清标本,测定抗体含量,用饱和硫酸铵沉淀血清得到IgG粗品,Aβ42免疫亲和柱层析对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western blot方法鉴定IgG纯度和免疫活性.结果:用CNBr活化Sephrose 4B柱层析纯化出较高纯度的抗Aβ42自身抗体,纯度可达到90%.结论:CNBr活化Sephrose4B层析柱可有效地从人血清中纯化出较高纯度的抗Aβ42自身抗体,便于对自身抗体进一步研究,为AD的免疫治疗提供更多的信息.
作者：段金海；徐书雯；莫建伟；向绍通；方运勇；汪华侨；莫思杰；胡涛；姚志彬 刊期： 2009年第01期
目的:观察哮喘豚鼠外周血、肺和骨髓组织嗜酸性粒细胞(EOS)百分比和肺组织Eotaxin和CCR3的表达及激素对其影响.方法:健康雄性豚鼠40只,以卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,随机分为正常组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松干预组(C组)、布地奈德干预组(D组),每组10只,在末次激发6 h后处死豚鼠;取豚鼠颈动脉血、骨髓和肺组织,分别制备血涂片、骨髓涂片和肺组织切片;外周血和骨髓涂片用Wright染色,光学显微镜下计数细胞总数和EOS百分比;肺组织切片HE染色,光学显微镜下计数细胞总数和EOS百分比;肺组织切片用Eotaxin和CCR3多克隆抗体免疫组化染色,光学显微镜下分别计数阳性细胞百分比;用Western blot法测定肺组织中Eotaxin蛋白表达变化.结果:豚鼠外周血、骨髓和肺组织中EOS百分比,A组为(1.33±0.52)%、(1.17±0.41)%、(1.67±0.52)%;B组为(4.83±0.98)%、(3.17±0.75)%、(4.00±0.89)%;C组为(2.68±1.03)%、(1.67±0.82)%、(2.83±0.75)%;D组为(2.67±0.52)%、(1.83±0.75)%、(2.67±0.52)%;B组与A、C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),A组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C组与D组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但C组较D组降低骨髓EOS百分比似乎更明显;豚鼠肺组织Eotaxin和CCR3多克隆抗体免疫组化染色阳性细胞百分比,A组为(2.29±0.35)%、(2.07±0.15)%;B组为(3.27±0.42)%、(3.66±0.47)%;C组为(2.80±0.22)%、(2.98±0.45)%;D组为(2.75±0.31)%、(2.65±0.25)%;B组与A、C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),A组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C组与D组比较差异无统计学意义;免疫印迹法检测发现豚鼠肺组织Eotaxin在A、B、C、D组表达量分别为0.447 ±0.026、0.836±0.012、0.639±0.034、0.668±0.023,B组表达较A、C和D组明显升高(P＜0.01),C组与D组比较差异无统计学意义,但仍高于A组(P＜0.05);相关性分析结果提示哮喘豚鼠肺组织中EOS百分比和Eotaxin和CCR3在肺组织的表达皆呈正相关(r=0.852,P＜0.001)、(r=0.671,P＜0.001).结论:哮喘豚鼠外周血、骨髓和肺组织EOS均明显增加,并与肺内Eotaxin和CCR3的表达相一致,激素可通过抑制Eotaxin和CCR3的表达和活性,有效发挥抗EOS炎症作用,是激素控制哮喘发病的重要机制.
作者：吕丽丽；朱述阳；刘平莉 刊期： 2009年第01期
目的:构建pSG5/NS5A5B△C质炷,并检验其在Huh7细胞中的瞬时表达.方法:使用已经构建的pTM1-△C质粒,并检验其在NS2NS5A5B△C质粒为模板,根据pTM1、HCV NS5A5B△C、pSG5序列和酶切位点特点设计引物,PCR扩增得到HCVNS5ASB△C基因片段,将目的片段插入psG5载体中,经筛选阳性克隆、Sac Ⅰ和Bg/Ⅱ分别酶切鉴定后,用FuGene 6转染试剂转染入Huh7细胞.用免疫荧光染色、Western blot检测HCV NS5A5B△C在Huh-7细胞中的表达.结果:限制性内切酶Sac Ⅰ和BglⅡ分别酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳结果显示酶切片段大小和插入方向均与预计一致.荧光显微镜下可见转染的Huh7细胞表达带有绿色荧光的HCV NS5A5B△C蛋白,该蛋白主要表达于细胞质,表达率达40%以上.Western blot结果也证实在转染pSG5/NS5A5B△C的Huh7细胞中出现了大小与HCV NS5A5B△C(82 ku)一致的条带.结论:成功构建了pSGS/NS5A5B△C质粒,并在Huh7细胞中成功瞬时表达,为进一步研究HCV蛋白的功能奠定了基础.
作者：王雪萍；李富军；邓琳；长野(藤井)基子；北山喜久美；堀田博 刊期： 2009年第01期
目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制.方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H21源exosomes瘤苗免疫小鼠,3 H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响.以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响.结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5 mg/L顺铂预处理24 h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P＜0.05).顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加.顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P＜0.05).结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关.
作者：汪少华；沈宜；李静；向自武；范维珂；陈黎 刊期： 2009年第01期
二十世纪60年代,Claman和Miller等[1,2]分别采用照射或胸腺切除的小鼠模型,同时过继转移正常小鼠骨髓细胞和胸腺细胞,或过继转移胸腺细胞或胸导管淋巴细胞,才能产生针对羊红细胞抗体,发现了B细胞对某些抗原(后称为T细胞依赖抗原)刺激产生抗体必须要有T细胞的辅助.
作者：金伯泉 刊期： 2009年第01期
目的:构建大鼠CD36真核表达载体,并在293T细胞中表达.方法:应用RT-PCR技术,从大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞提取的总RNA中,获得CD36基因编码序列片段,克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,通过荧光显微镜和Western blot检测其在293T细胞中的表达.结果:酶切和测序证明重组真核表达载体pEGFP-N1-CD36构建成功,荧光显微镜及Western blot确认目的基因序列在293T细胞中过表达.结论:成功构建大鼠CD36基因的重组真核表达载体pEGFP-N1-CD36,并在293T细胞中过表达.
作者：王欣；陈莹；陈杰 刊期： 2009年第01期
自然杀伤(natural killer,NK)细胞是淋巴细胞的一种亚型,能够参与机体的固有免疫和适应免疫.人类NK细胞是淋巴细胞循环中的一个重要部分,约占淋巴细胞的20%,在脾脏和骨髓占5%-10%,在其他未发生感染的淋巴器官只有很小的比例(小于1%).
作者：于建渤；刘卫平 刊期： 2009年第01期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
