苏鲁；潘洪珍；翁敬飚；徐艺华；陈芳；洪梅燕
0引言从基因的分子生物学角度,病毒性肝炎也是一种基因病,相对于正常肝细胞来说,从肝炎患者的肝细胞中获得了肝炎病毒的基因,因此,病毒性肝炎的治疗也可以采取象遗传病那样的基因治疗(genetherapy)策略[1-5].
作者：成军；刘妍；王琳；钟彦伟；王刚 刊期： 2003年第08期
目的:探讨凋亡相关蛋白P53、Bcl-2和增生细胞核抗原(PCNA)在胃癌前病变不同转归中的作用以及在胃癌早期诊断中的意义.方法:采用免疫组化(LSAB)法检测52例胃癌患者癌前病变组织标本及56例非胃癌患者组织标本的P53、Bcl-2和PCNA的表达.结果:发生癌变者与P53、Bcl-2和PCNA阳性强度有密切关系;PCNA标记指数(PCNA LI)在癌变组表达明显高于非癌变组,差异有显著性(t=5.261,P＜0.01);在癌变组,88.5%的病例有单一或多种基因表达异常,51.9%为两种或两种以上基因同时表达,与非癌变组相比有显著性差异(χ2=4.393,P＜0.05).结论:在胃癌发生过程中,P53、Bcl-2表达强度明显增加,细胞增生活性升高,且为多基因协同作用,说明在胃癌演变过程中他们起重要作用.
作者：伍银桥；王孟薇；吴本俨；尤纬缔；祝庆孚 刊期： 2003年第08期
目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,TTD)对肝癌细胞的作用及其机制.方法:采用MTT比色法观察了TTD对肝癌细胞增生的影响;采用流式细胞仪法观察了TTD对肝癌细胞内活性氧的影响;采用琼脂凝胶电泳法观察了DNA片断化的梯形条带.结果:10 and 20 μmol/L TTD作用于肝癌细胞系24,48,72 h后其增生率分别为90.1±1.0%and 77.5±2.0%,70.2±2.9%and 56.6±1.6%,61.6±2.0%and 47.2±1.9%(F=40.025,P＜0.001);0、10和20μmol/L TTD作用于肝癌细胞系2 h后O2-为35%、36.6%、63.2%;H2O2.为24.5%、40.5%、84.6%.48 h后20 umol/LTTD组肝癌细胞出现典型的凋亡表现.结论:TTD能够通过诱导肝癌细胞内活性氧的产生,而引起细胞凋亡,呈明显的剂量依赖性.
作者：荆绪斌；李涛；杨绮华；郭光华；胡辉；陈素钻 刊期： 2003年第08期
目的:探讨肥大细胞在胃嗜酸性肉芽肿发病中的作用.方法:应用免疫组化SP染色检测胃嗜酸性肉芽肿中的肥大细胞及微血管密度;HE染色计数嗜酸细胞;电镜观察肥大细胞J脱颗粒情况.结果:肥大细胞数量在胃溃疡和胃嗜酸性肉芽肿中差别无显著性(9.1±3.0 vs 8.9±3.0,P＞0.05);脱颗粒肥大细胞数量及比例在胃嗜酸性肉芽肿组明显高于胃溃疡组(73±2.4vs 4.3±1.4、80.3±15.7%vs 48.4±15.7%,P＜0.01);肥大细胞高计数组微血管密度高于肥大细胞低计数组(57.3±10.7 vs 32.4±7.2,P＜0.01);脱颗粒肥大细胞与嗜酸细胞具有正相关性(r=0.931,P＜0.01).结论:肥大细胞在胃嗜酸性肉芽肿中可促进嗜酸细胞浸润及血管新生,可能在胃嗜酸性肉芽肿发病中起重要的作用.
作者：高振军；罗和生；操寄望；余保平；宋刘来 刊期： 2003年第08期
0引言乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生密切相关.虽然HBV和HCV感染与肝细胞癌之间的关系已经得到确定,但是具体的分子生物学机制还有许多工作要做.
作者：张忠东；成军；钟彦伟；张树林 刊期： 2003年第08期
目的:研究抗栓灵含片治疗伴有血小板活化的难治性溃疡性结肠炎(UC)的疗效和机制.方法:常规应用激素和/或柳氮磺吡啶(SASP)治疗1 mo以上无效或恶化的UC患者18例(男8例,女10例,平均年龄32.4岁),加用抗栓灵含片,2片(相当于2 400 U低分子肝素钠)含化,2次/d,观察大便次数、便血情况、自觉症状、肠黏膜肠镜下和组织病理学改变,并在治疗前和治疗后4 wk用流式细胞仪测定血液中黏附分子P选择素(CD62p),溶酶体膜糖蛋白(CD63),血液和组织中细胞间黏附分子(CD54),多药耐药基因(MDR)产物P-糖蛋白170(Pgp-170),用放射免疫法测定血栓素A2代谢产物TXB2含量,用血小板黏附仪测定血小板黏附率.结果:应用抗栓灵含片治疗后,与治疗前相比,大便次数(1.6 vs 8.2次/d)、便血情况(范围0-3,0.3 vs 2.7分)、肠镜下情况(范围0-3,1.1 vs 2.6分)、病理组织学观察(范围0-15,5.0 vs 12.0分)、自觉症状(范围0-5,0.7 vs3.9分)均明显改善或缓解(P＜0.05).CD62p(4.1±1.8% vs8.0±3.1%,),CD63(3.2±1.6% vs 6.3±2.1%),TXA2(390±67ng/L vs548±85ng/L),血小板黏附率(34.8±8.1%vs 43.2±10.7%),体外血栓形成长度(1.8±0.3 cm vs2.3±0.6cm),血液中CD54(14.4±5.1% vs 26.9±6.9%),组织中CD54(23.1±4.1% vs 51.1±6.2%),血液中多药抗性基因(MDR)产物P-糖蛋白170(Pgp-170)(10.4±2.7%vs 18.9±3.9%),组织中Pgp-170(10.2±2.3%vs 16.5±3.2%)明显下降(P＜0.01或0.05).结论:抗栓灵含片治疗伴有血小板活化的难治性溃疡性结肠炎有效,可抑制血小板活化和高凝状态,减轻炎症,抑制多药耐药基因表达.
作者：江学良；权启镇；孙自勤；王要军；尚瑞莲；齐风 刊期： 2003年第08期
作者： 刊期： 2003年第08期
目的:采用阿霉素肝动脉输注与血液灌流二者联合应用,以NK107树脂,日本活性炭作为黏附剂,观察杂种犬外周循环血液中阿霉素浓度及其副作用.方法:采用杂种犬肝动脉输注阿霉素,同时杂种犬股动、静脉插管以NK107树脂(灌流组Ⅰ),日本活性炭(灌流组Ⅱ)作为黏附剂进行血液灌流,测定血中阿霉素浓度,观察外周血象、心肌酶、肝、肾功能.结果:灌流组Ⅰ,Ⅱ在灌流1 h,2 h;3 d,14 d血浆阿霉素浓度(89±9,60±15,21±5,10±2;99±14,61±13,26±5,12±2mg@L-1)明显低于对照组(312±23,237±12,116±15,58±8 mg@L-1)(P＜0.01)时;心肌酶(LDH,CPK-MB,α-HBDH)在灌流24 h(0.9±0.4,11.9±6.4,1.0±0.3;1.1±0.3,4.3±3.7,1.9±0.6 μkat@L-1),72 h(0.9±0.4,8.2±4.5,0.8±0.3;1.1±0.1,2.6±2.3,2.7±2.3 μkat@L-1)无显著性变化(P＞.05),而对照组24 h(1.6±0.2,23.9±12.9,2.7±0.3 μkat@L-1)后高于灌流前(P＜0.05),72h (3.1±0.1,33.7±10.4,8.5±0.3 μkat@L-1)后明显高于灌流前0.8±0.1,11.1±10.7,1.4±0.1 μkat@L-1)(P＜0.01).外周血白细胞(WBC),血小板(Pt),红细胞(RBC),血红蛋白(Hb)灌流后3,7,14 d灌流组无明显变化(P＞0.05),而对照组在第7天(8.5±5.4×109/L,77±35×109/L,4.8±1.2×1012/L,94±27 g/L)低于灌流前(16.3±4.2×109/L,131±38×109/L,5.9±1.6×1012/L,131±28 g/L)(P＜0.05),14 d(6.2±4.4×109/L,69±39×109/L,5.2±1.6×1012L,109±28g/L)明显低于灌流前P＜0.01).肝,肾功能在灌流前,灌流后无显著变化(P＞0.05).结论:以NK107树脂,日本活性炭作为黏附剂,肝动脉输注阿霉素与血液灌流二者联合应用能够减低外周血阿霉素浓度,降低其副作用.
作者：张志友；张文怡；钱绍诚 刊期： 2003年第08期
目的:探讨垂体后叶素和特利加压素降低肝硬化门脉高压时对肝组织氧分压的不同影响.方法:采用胆总管结扎法制作胆汁性肝硬化模型,40只大鼠随机分成2组:垂体后叶素组(n1=20),特利加压素组(n2=20),两组分别从门静脉缓慢注入垂体后叶素和特利加压素,连续观察用药前及用药后5,10,15,20,25,30 min的门静脉压及肝组织氧分压.结果:两组用药后门静脉压均明显降低,两组间无显著差异(t=0.39 P＞.05);垂体后叶素组用药后肝组织氧分压明显下降,特利加压素组无明显下降,两组间有显著差异(t=9.19P＜0.01).结论:垂体后叶素降低门静脉压时肝组织氧分压明显下降,而特利加压素在降低门静脉压时肝组织氧分压无明显降低,是治疗急性食管、胃静脉曲张破裂出血较理想的药物.
作者：祝建波；邓利群；王思元 刊期： 2003年第08期
作者： 刊期： 2003年第08期
目的:乙型肝炎病毒(HBV)基因组内部结构基因与编码基因之间相互重叠,是基因组序列高度集中利用的-个典型.早期研究中确定了编码病毒蛋白的4个开放读码框架(ORF),本研究通过对于中国HBV感染者的流行病毒株的基因序列进行分析比较,阐明基因组结构的特点,并探索是否存在新型ORF的可能性.方法:考虑到HBV基因组序列的准种特点以及多聚酶链反应(PCR)技术的精确度,我们采用的技术是长距离且精确PCR(LA-PCR)技术,根据中国HBV患者的病毒基因序列设计PCR扩增用引物,自慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列,克隆入pGEM Teasy质粒,挑选克隆进行全基因组DNA测序,与其他HBV基因组序列进行比较.结果:测序结果5株HBV全基因组核苷酸序列存在一新的ORF,定义为前-前-S区,并发现该区之前存在一TA富集区,提示存在新型启动子的可能性.新界定的前-前-S区ORF编码氨基酸序列为MQLIITSKLGⅡYILCGRLVFYIREKLHAVPHFVGHHILGNKSYS,与前-S1、前-S2和表面抗原主蛋白编码基因框架一致表达.结论:在HBV基因组中存在有一新的ORF,命名为前-前-S区.
作者：董菁；成军 刊期： 2003年第08期
目的:乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)对HBV的感染和复制都不是必须的,普遍认为其与HBV引起免疫耐受、免疫系统功能障碍有关.筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与HBeAg相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制.方法:应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HBeAg基因连接人酵母表达载体p GBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌氨苄青霉素-LB平板上选择并测序,结果在GenBank中进行生物信息学分析.并根据GenBank中的序列信息设计引物从并克隆到另一酵母表达载体pGADT7中,体外免疫共沉淀方法再次验证二者之间的结合作用.结果:成功克隆出HBeAg基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能使X-α-gal变成蓝色的真阳性菌落39个,其中有5个未知基因,在genbank中未找到同源序列,在HepG2细胞的mRNA中成功扩增出该基因的全序,体外免疫共沉淀方法证明HBeAg与新基因E-19表达的蛋白质在体外也有结合作用.结论:成功克隆出HBeAg的肝细胞结合蛋白,发现与HBeAg有相互作用的未知蛋白新基因,为HBeAg的功能研究提出新线索.
作者：陆荫英；邵清；成军；陈天艳；王琳；梁耀东；刘妍；张健；李克；张玲霞 刊期： 2003年第08期
0引言细胞周期(cell cycle)是细胞分裂增生的经典概念,过去的研究主要集中在细胞周期的形态学描述上.随着细胞周期素(cyclin)和细胞周期素依赖性激酶(cyclin dependentkinase,CDK)的发现及其作用机制的研究进展,使得我们对于细胞周期调节有了分子生物学水平上的深入认识.细胞周期的分子生物学调节机制的研究,也促进了肿瘤形成的分子生物学机制的研究,同时对于肿瘤病毒(oncogenic virus)引起正常细胞的恶性转化机制的研究具有十分重要的促进作用.
作者：成军；刘妍；王琳；钟彦伟；王刚 刊期： 2003年第08期
0引言乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝细胞癌(HCC)发生发展之间的密切关系,早已被大量的临床医学和临床流行病学资料所证实[1].随着细胞周期(cell cycle)调节的分子生物学机制研究不断深入,特别是关于细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)的发现,使得细胞周期这一经典的概念又有了新的内容,大大促进了肿瘤形成的分子生物学研究的进展[2].
作者：成军；刘妍；洪源；王建军；杨倩 刊期： 2003年第08期
目的:建立琼脂糖凝胶电泳法检测人血清醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase isoenzymes ADH EC 1.1.1.1)同工酶.方法:采用自制琼脂糖凝胶板,摸索实验条件,在pH 8.6,74 mmol/L巴比妥电泳缓冲系统中进行20 mA、20 min电泳,可清晰地分离出ADH同工酶三条区带.结果:检测了67例患者血清ADH总活性0.013-0.021 Kat/L,同工酶ADH Ⅰ占ADH总活性0.01-0.30,ADHⅡ占ADH总活性0.12-0.31,ADHⅢ占ADH总活性0.39-0.80.检测了10例人健康肝组织匀浆的ADH总活性为0.136-0.196Kat/L,同工酶ADH Ⅰ占总活性的0.07-0.25,同工酶ADHⅡ占总活性的0.19-0.27和同工酶ADHⅢ占总活性的0.56-0.73.结论:正常人血清中ADH酶活性很低,为0-1.8×10-3 Kat/L,其同工酶不易被检测出.而肝脏组织中含有大量ADH酶活性,当肝脏受到严重损伤时,ADH即从肝细胞内逸出,进入血液,使血清中ADH酶活性明显升高,同时通过琼脂糖电泳对其同工酶的检测可测出三条区带,帮助临床进一步了解肝细胞损伤程度,对患者预后和病程的监测具有一定的临床意义.
作者：宓庆梅；曹鲁宁；高春芳 刊期： 2003年第08期
目的:了解肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)患者首次发病时间分布规律,为IBS进一步的病因研究提供线索.方法:对消化专科门诊就诊的符合罗马Ⅱ诊断标准的IBS患者402例进行问卷调查.对首次发病月份采用圆分布资料分析.结果:IBS患者的长病程达54 a,平均病程7.62 a,男、女患者病程分布差别无显著性(χ2=2.35,P＞0.05).IBS患者发病有季节性,春季高发(Z=31.78,P＜0.01),男性高发月份为3月份(Z=18.37,P＜0.01),女性高发月份为4月份(Z=16.55,P＜0.01),男、女性高发月份差别有显著性(t=3.32,P＜0.01).患者中腹泻型占36.6%,便秘型占18.4%,其他占45.0%,男、女亚型差别有显著性(χ2=7.77,P＜0.05);腹痛是IBS常见特征,腹痛部位以左下腹多,其次为全腹痛,再次为右下腹痛,无单独的左上腹痛.结论:门诊IBS患者发病有季节高峰,季节可能是IBS发病的影响因素之一.
作者：许小幸；李定国；宋光辉；周惠清；刘清华 刊期： 2003年第08期
目的:从中国慢性乙型肝炎患者的血清中,应用长距离多聚酶链反应技术(L-PCR)技术扩增、克隆乙型肝炎病毒(HBV)的全基因组序列,建立中国HBV流行株的参考标准序列.方法:从2例慢性乙型病毒性肝炎患者血清提取DNA,以L-PCR技术对于3 200 bp的HBV DNA进行扩增,纯化后克隆到TA载体中进行序列分析.对于HBV DNA的各个编码基因区进行分析.结果:克隆获得的5个HBV DNA全基因序列分别为G376-A6、G376-A7、G683-A1、G683-A2和G683-A3,全基因序列长度分别为3 125、3 215、3 213、3 182和3 215碱基对(bp),在GenBank中的注册号分别为AF384372、AF384371、AF363963、AF363962和AF363961.其中G376-A6、G376-A7来源于同一个患者,G683-A1、G683-A2、G683-A3来源于另一个患者.G376-A6、G683-A2两株病毒在前-S1区存在缺失突变区.其中G683-A2的羧基末端区存在缺失突变.来源于不同患者的e/核心抗原蛋白质一级结构序列没有显著的差别,但来源于同一个患者的HBV基因序列有着明显的同源性.G376-A6、G683-A2两株病毒存在多聚酶蛋白区的缺失突变,但不在多聚酶蛋白的活性结构区,因此考虑这种形式的突变尚不会影响到多聚酶的活性.G683-A3株病毒的多聚酶在其羧基末端存在较长的缺失突变区,使其多聚酶区结构被破坏.5株病毒的X蛋白的一级结构序列比较的结果说明其高度保守.但是相对来讲,X蛋白的氨基末端更为保守,羧基末端序列有一定程度的变异.结论:克隆了HBV DNA中国株的全基因序列,可以作为研究中HBV流行株的参考序列.
作者：成军；董菁；洪源；钟彦伟；刘妍；王刚；王琳 刊期： 2003年第08期
目的:乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBcAg)在HBV感染的肝细胞中可同时存在于细胞核和胞质中,对于病毒前基因组RNA装配入核壳体是必须的,HBcAg还是HBV介导体液免疫反应和CD4+T细胞免疫反应的重要抗原,寻找人肝细胞cDNA文库中与HBcAg相互作用蛋白的基因,是研究HBcAg生物学功能的重要途径.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBcAg基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AHl09并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-d-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析.根据Genbank的信息设计新基因的引物,从HepG2细胞的mRNA中逆转录PCR扩增出C-12#新基因的完整序列,连入另一酵母表达载体pGADT7,并转化进酵母细胞Y187,再次与转化了诱饵质粒的酵母细胞AH109配合(回交),以进一步证实HBcAg与C-12#新基因编码蛋白的结合作用.结果:成功克隆出HBcAg基因并在酵母细胞中的表达,配合后选出既能在四缺(SD/Trp-Leu-His-Ade)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上均能生长,并变成蓝色的真阳性菌落16个,其中未知基因4个.用自行设计的引物成功地从HepG2细胞的mRNA中扩增出C-12#新基因的完整序列,回交实验证实二者之间的结合作用.结论:成功克隆出HBcAg的肝细胞结合蛋白,发现未知功能基因,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.
作者：陆荫英；陈天艳；成军；邵清；梁耀东；王琳；刘妍；张健；李克；张玲霞 刊期： 2003年第08期
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组存在前-X基因.乙型肝炎病毒(HBV)基因组内部结构基因与编码基因之间相互重叠,是基因组序列高度集中利用的一个典型.早期研究中确定了编码病毒蛋白的4个开放读码框架(ORF),本研究通过对于中国HBV感染者的流行病毒株的基因序列进行分析比较,阐明基因组结构的特点,并探索是否存在新型ORF的可能性.方法:考虑到HBV基因组序列的准种特点以及多聚酶链反应(PCR)技术的精确度,我们采用的技术是长距离且精确PCR(LA-PCR)技术,根据中国HBV患者的病毒基因序列设计PCR扩增用引物,自慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列,克隆入pGEM Teasy质粒,挑选克隆进行全基因组DNA测序,与其他HBV基因组序列进行比较.结果:测序结果提示来源于2个患者的5株HBV全基因组核苷酸序列在X基因之前存在一ORF,我们命名其为前-X(pre-X)区.前-X区编码氨基酸与X蛋白融合表达,序列为MGLGYWPSPPAWNLCGSSADPYCGTPSSLFCSQPVWSETYRNRQLCCPLSQIHLLS.该编码序列仅在adr血清型中有编码表现.结论:在HBV基因组中存在有一新的ORF,命名为前-X区,该区可能是一种HBV血清型特异性编码区.
作者：董菁；成军 刊期： 2003年第08期
目的:利用分子生物学技术,研究乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)的反式激活作用,克隆HBxAg反式激活作用的靶基因,为进一步探索HBxAg的反式激活作用,以及反式激活作用的靶基因,阐明HBV感染引起慢性肝炎、肝细胞癌(HCC)发生发展的分子生物学机制,为探索新型预防和治疗技术、寻求新型途径奠定理论基础.方法:利用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBxAg的编码基因,构建表达载体pcDNA3.1(-)-X,转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,与转染空白载体的HepG2细胞对照组分别提取总mRNA,并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于获得的差异表达基因片段序列的同源性基因进行搜索,确认为与已知的功能基因无同源性之后,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,完成新基因序列的确定.然后自HepG2细胞提取总mRNA,应用生物信息学技术确定的新基因的序列设计特异性引物,进行逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术的扩增,获得阳性克隆之后,进行鉴定并对克隆的基因及其编码产物的序列进行分析.结果:PCR技术扩增获得的HBxAg基因序列,经过限制性酶切鉴定和序列测定证实无误.转染HepG2细胞并提取足量的mRNA,利用SSH技术进行分析,获得的基因片段序列分析结果表明,其中之一为新型基因片段序列,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过对EST数据库中注册的基因片段序列同源性的搜索和比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从HepG2细胞提取总mRNA,以RT-PCR技术,扩增获得该新基因的全基因序列,并测序证实,命名为XTP1,在GenBank中注册,注册号为AF488828.结论:利用分子生物学技术与生物信息学技术相结合,发现并鉴定、克隆了HBxAg的反式激活作用的新基因XTP1,并为进一步研究HBxAg的反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定了基础.
作者：刘妍；成军；王琳；王建军；陆荫英；李克 刊期： 2003年第08期
世界华人消化杂志
主管:华人消化杂志；新消化病学杂志
主办：山西省科学技术厅
