江涛；王环宇；高秀芬；王玉平；宫慧之；田静；李凤琴；计融
目的:探讨电磁脉冲(EMP)辐射对离体培养兔角膜上皮细胞的损伤作用.方法:6×104 V/m场强的EMP重复照射离体培养的角膜上皮细胞5次,应用原子力显微镜和生化检测仪,对辐射前后的细胞膜状态及上清液多种离子浓度进行检测.结果:EMP照射后角膜上皮细胞膜表面出现多处大小不等的凹陷和穿孔.培养细胞上清多种离子浓度在照射后不同时间均有明显变化,其中K+,Ca2+,Fe2+浓度在照射后24 h明显升高.结论:细胞膜是EMP作用于细胞的敏感靶部位,细胞膜穿孔是EMP非热效应的损伤作用机制之一.
作者：姜涛；王德文；高亚兵；胡文华；陈建魁；刘杰；王水明；彭瑞云；谷庆阳 刊期： 2004年第04期
1 材料和方法1.1 可拆卸的96孔培养板使用丹麦Nunc公司的96孔可拆卸酶联板(拆卸为8条,每条12孔),订购货号437915.因为该酶联板不是无菌级的,不能直接应用于细胞培养,又不能耐受高压灭菌,故采用高剂量放射线(如放射性钴源)照射灭菌,随后按照无菌级别处理,接种细胞.
作者：赵永岐；杨怡；吴燕；刘淑红；葛学铭；范明 刊期： 2004年第04期
医院感染(nosocomial infection)是在医院或其他医疗保健机构内发生的各种感染,包括细菌性和真菌性医院感染.近年来,随着科学技术的飞快发展,各种先进诊疗技术层出不穷,新型抗生素亦应运而生.但是,随之出现的负面效应也呈现出越来越多的趋势,尤其是介入性诊断和治疗手段逐年增多,临床上广谱抗生素和免疫抑制剂的滥用,导致耐药菌株逐年增多,体内正常菌群发生了很大变化[1,2].很多体内的条件致病菌转变成致病菌,这在血液病和恶性肿瘤等免疫力低下的患者中表现尤为突出.因此,临床微生物工作者应积极做好医院感染病原学诊断和医院感染监测工作,定期将医院感染的优势菌群和耐药性监测情况反馈到临床一线,指导临床医师合理使用抗生素,减少耐药菌株的产生和传播,控制医院感染的发生.我们对我院恶性肿瘤和血液病患者发生医院感染的优势菌群和耐药性情况进行了监测,现报告如下.
作者：尹秀云；陈建魁；白云；姚平；金欣；佟雅丽；杜宇；郑纳新；张鹏 刊期： 2004年第04期
O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是细胞中一种重要的DNA损伤修复酶,它在抵御烷化剂所致的细胞突变和死亡中起重要作用.本文综述了近年来关于MGMT的新研究,内容包括MGMT的基因结构与功能,MGMT的分布及其影响因素,MGMT与肿瘤发生、发展及治疗的关系.
作者：崔灵芝；章扬培；宋三泰 刊期： 2004年第04期
目的:建立敏感、特异和快速的针对T-2毒素的ELISA检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法:利用B细胞杂交瘤技术,建立抗T-2毒素的单克隆杂交瘤细胞株.结果:用T-2-羊免疫球蛋白(T-2-GIgG)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了2个稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A7和6E4.将上述2株杂交瘤细胞分别注入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗T-2毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到2A7和6E4单克隆抗体.两株单克隆抗体的Ig亚类为IgG1, 腹水中抗体的滴度分别为6.4×106和1.1×107,参考工作浓度分别为1.0×106和3.2×106.纯化后2A7抗体的IgG含量为16.4 g/L,亲和常数为8×10-8mol/L.2A7抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗T-2毒素单克隆抗体,初步建立了针对T-2毒素的ELISA检测方法.
作者：江涛；王环宇；高秀芬；王玉平；宫慧之；田静；李凤琴；计融 刊期： 2004年第04期
目的:鉴定端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域.方法:通过hPOT1的不同长度缺失突变体与EGFP绿色荧光蛋白融合,转染细胞后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位.结果:确定了hPOT1进核序列是定位于第355～375位氨基酸之间的富含碱性氨基酸序列,其中R372,R373影响hPOT1的细胞核内定位.结论:鉴定出hPOT1的核定位结构域,该结构域影响了hPOT1不同形式剪接体蛋白的细胞内分布.为进一步研究hPOT1在端粒末端调控中的作用提供了线索.
作者：林坚；陈皓；白云秀；金蕊；张彬；黄翠芬；黄君健 刊期： 2004年第04期
目的:构建人β-防御素3(hBD3)的真核表达载体,建立稳定表达hBD3的细胞株.方法:用EcoRⅠ酶切含有hBD3全长基因的pGEM-hBD3重组质粒,获得其编码区全长序列,将其连接入EcoRⅠ预处理过的pcDNA3中,转化大肠杆菌,酶切鉴定筛选出插入方向正确的转化子.采用脂质体转染法将重组pcDNA3-hBD3真核表达载体导入COS-7细胞, 用G418进行抗性筛选,用RT-PCR和Western印迹检测目的基因hBD3的mRNA和蛋白表达水平.结果与结论:构建的pcDNA3-hBD3真核表达载体转染COS-7细胞后可稳定表达hBD3的mRNA和蛋白,且蛋白主要以分泌形式存在于培养上清中.
作者：庹晓晔；柴家科；徐明达；陈璧；盛志勇 刊期： 2004年第04期
泡囊短波单胞菌(Brevundimonas vesicularis)是一种较罕见的非发酵性病原性假单胞菌,其致病力较强,可以引起中枢神经系统感染或菌血症[1,2].近期我们发现了一例泡囊短波单胞菌所致M2型急性髓性白血病患者肺部感染的病例,经检索中国生物医学期刊数据库,尚无泡囊短波单胞菌导致肺部感染的报道.现报告如下.
作者：陈建魁；尹秀云；杜燕；张鹏；姚平；金欣；高亚兵 刊期： 2004年第04期
目的:构建我国SARS病毒BJ01株基因组全序列的亚cDNA克隆,为进一步构建该毒株的全长感染性cDNA克隆奠定基础.方法:根据BJ01株病毒基因组序列中含有的特异酶切位点,利用DNAstar软件设计7对引物,然后通过RT-PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的7个cDNA片段,并分别将其克隆至pGEM-T Easy或Topo载体.结果与结论:已构建出SARS-CoV BJ01株基因组的7个亚cDNA克隆,经酶切鉴定和序列测定表明,所获得的cDNA克隆为BJ01株病毒的特异序列.
作者：赵卓；韩剑峰；范宝昌；陈水平；姜涛；于曼；何维明；祝庆余；秦鄂德 刊期： 2004年第04期
本文综述了近年来电喷雾等软电离质谱技术用于手性识别的研究进展.其研究方法主要分为对映体标记法、离子-分子反应法以及动力学方法等3类.通过综述对质谱技术用于手性识别的不足之处以及未来主要发展趋势进行了讨论.
作者：吴弼东；谢剑炜 刊期： 2004年第04期
随着工农业的不断发展,重金属污染日益严重,尤其是土壤和水源中重金属可在农作物和水生动植物中产生累积效应,对人类健康构成潜在威胁.与其他污染物有所不同的是重金属不能被化学或生物降解,因此对它的治理更加困难和复杂.传统上对重金属污染的治理主要采用物理、化学或机械的方法,这些方法不仅造成人力、物力和财力上的极大消耗,而且效果也不明显.随着生物工程技术的发展,生物治理重金属污染具有极大的潜力和广阔的应用前景,越来越引起人们的广泛关注.
作者：周绪斌；刘琼明；邢瑞云；吕星 刊期： 2004年第04期
目的:克隆人CD20胞外区基因(cdw)和丝状噬菌体(M13K07 )G3蛋白N端结构域(pⅢN1)基因,并在大肠杆菌中进行高效融合表达.方法:利用逆转录PCR和PCR方法分别克隆CD20胞外区基因和pⅢN1基因,然后将二者融合克隆入pTIG-Trx表达载体,在大肠杆菌中进行可溶性表达.结果:可溶性表达产物占细菌可溶性蛋白的约25%,表达产物可被抗CD20分子的单克隆抗体识别.结论:成功地表达并鉴定了人CD20胞外区蛋白,为利用噬菌体抗体库进行抗CD20抗体的筛选奠定了基础.
作者：张效云；孙志伟；王双；俞炜源 刊期： 2004年第04期
目的:建立表达大鼠NMDA(N-methyl-D-aspartate)受体NR1a与NR2A亚单位重组体的细胞模型,研究其生物学及药理学特性.方法:利用脂质体转染方法将大鼠NR1a与NR2A亚单位重组体共转染到HEK-293细胞中,在细胞培养48～72 h后,利用膜片钳全细胞记录技术,观察和分析L-谷氨酸诱发的NMDA受体电流.结果:向转染后的HEK-293细胞表面喷射NMDA受体激动剂L-谷氨酸可在38%细胞上诱发出瞬时内向电流,该电流可被NMDA受体选择性拮抗剂D-AP5(50 μmol/L)完全阻断.L-谷氨酸诱发的电流具有快速失敏的动力学特征和内向整流特性,衰减时间常数(τ值)为(53±9)ms(n=20).L-谷氨酸诱发电流的EC50值为(8.5±0.5)μmol/L.结论:成功地将NR1a与NR2A亚单位转染入HEK-293细胞并形成NMDA受体的功能性表达,为进一步深入研究NMDA受体不同亚单位组成与其功能的关系及其药理学特性奠定了基础.
作者：张树卓；武文；何滢；翁谢川；郑建全 刊期： 2004年第04期
目的: 克隆表达大肠杆菌脱氢奎尼酸合成酶基因aroB,并测定其生物学活性.方法: 根据大肠杆菌中aroB基因的序列设计了一对引物,利用PCR技术扩增得到aroB基因,将其克隆入pGEM-Teasy载体中,以双脱氧法进行测序,然后再克隆入高效原核表达载体pBV220,对该重组子的SD序列进行调节后利用温度诱导表达,并测酶的生物活性.结果: 构建了aroB基因的克隆和表达重组子,经SD序列调节后,aroB基因获得高效表达,SDS-PAGE图谱显示新增38.8×103蛋白带,酶活性测定结果表明脱氢奎尼酸合成酶的相对酶活性为5.4.结论: 实现了脱氢奎尼酸合成酶基因在大肠杆菌中的高效表达,为构建产脱氢奎尼酸工程菌种奠定了基础.
作者：常会波；刘云；吴建新；徐琪寿 刊期： 2004年第04期
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我国是发病率居第3位的恶性肿瘤,每年确诊患者达 11万之多 ,预后甚差[1].HCC的血供特性对影像诊断和手术方案的选择具有十分重要的意义.
作者：李功杰；杨立；史晓林；王殿军；王悦华；李晓兵 刊期： 2004年第04期
目的:建立共同稳定表达大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体的哺乳动物细胞表达系统.方法:采用脂质体介导的方法,将编码大鼠μ阿片受体和人咪唑啉-1受体的基因导入CHO细胞中,以放射配体-受体结合试验分析受体的表达水平,用cAMP积累试验分析表达受体的功能.结果:在共同稳定表达大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体的CHO细胞中,表达的μ阿片受体对3H-二丙诺啡(diprenorphine)的Kd和Bmax值分别为(0.24 ± 0.02)nmol/L和(1.83±0.13)pmol/mg蛋白;表达的咪唑啉-1受体对3H-可乐定的Kd和Bmax值分别为(3.72±0.25)nmol/L和(43.59±6.83)fmol/106细胞.表达的μ阿片受体抑制福司科林(forskolin)刺激下cAMP的积累,表达的咪唑啉-1受体抑制吗啡慢性处理、纳洛酮催促引起的cAMP超射.结论:首次建立了共同稳定表达μ阿片受体和咪唑啉-1受体的细胞模型.
作者：吴宁；苏瑞斌；徐波；李锦；秦伯益 刊期： 2004年第04期
组装抗病毒疗法(PATs)是近年来新兴的基于细胞内免疫的抗病毒感染策略.目前PATs已在抗病毒(如小鼠白血病病毒、人乙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒)感染等领域进行了深入研究.本文综述了PATs的发展历程和研究现状,并对现存的问题和应用前景进行了分析和展望.
作者：秦成峰；秦鄂德 刊期： 2004年第04期
目的:原核细胞表达贝氏柯克斯体34×103外膜蛋白基因,评价34×103重组外膜蛋白的免疫保护性.方法:用PCR从我国贝氏柯克斯体分离株的基因组中扩增34×103外膜蛋白基因,用该基因与原核表达质粒重组,构建重组表达质粒;用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌细胞内表达重组蛋白.用重组蛋白皮下接种免疫BALB/c小鼠2次,在加强免疫后的第28天,用ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平以及作体外脾淋巴细胞增殖试验检查小鼠的特异性细胞免疫水平;用10 ID50贝氏柯克斯体腹腔注射攻击免疫小鼠,攻击后第7天病理学检查小鼠脏器的组织病变和染色镜检脾脏的贝氏柯克斯体.结果:SDS-PAGE和免疫印迹分析证明重组质粒转化的大肠杆菌产生了34×103重组蛋白,重组蛋白能与贝氏柯克斯体感染小鼠血清发生特异性反应.ELISA法检测出免疫小鼠血清中有高滴度的抗重组蛋白抗体,免疫小鼠的体外淋巴细胞增殖水平显著高于非免疫小鼠.组织病理学检查发现免疫小鼠的肺、肝、脾无明显病变,仅个别小鼠脾脏存在少量柯克斯体,而非免疫小鼠的肺、肝、脾病变十分明显,脾脏肿大并含有大量的柯克斯体.结论:重组34×103外膜蛋白具有的免疫保护性,能够诱导机体产生有效的抗贝氏柯克斯体的体液和细胞免疫应答.
作者：魏文进；温博海；邱玲；牛东升；陈梅玲；高宁 刊期： 2004年第04期
目的:研制具备负压净化功能的救护车,用于运送非典型肺炎一类的急性传染病员.方法:救护车病室自成一区,采用负压净化系统对周围环境进行防护,负压范围为-30～-80 Pa,负压净化系统由负压净化装置和监测报警装置组成.通过以CO2气体为模拟污染源,对救护车病室内气溶胶颗粒的流向与分布进行测量.结果:CO2为替代污染气体的扩散范围以病室中部区域为主,在病室前部和后部得到了有效的抑制.结论:传染病员救护车负压净化系统能够有效抑制急性传染病员在运送途中对沿途周围环境的污染与病毒的传播.
作者：孙景工；刘亚军；徐新喜；祁建城；刘志国；谭树林 刊期： 2004年第04期
为了增强抗体的效应功能,人们尝试多种方法改造抗体分子,双特异性抗体是改善抗体治疗效果的发展方向之一,现已成为抗体工程研究领域的热点.随着分子生物学技术的迅速发展,出现了基因工程双特异性抗体的多种构建模式,并且有多种基因工程双特异性抗体制剂已经用于肿瘤的临床诊断和治疗试验.本文对基因工程双特异性抗体的构建模式按照双特异性微抗体、双链抗体、单链双特异性抗体和多价双特异性抗体4类进行了综述.
作者：解志刚；郭宁；沈倍奋 刊期： 2004年第04期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
