解志刚；郭宁；沈倍奋
目的:鉴定端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域.方法:通过hPOT1的不同长度缺失突变体与EGFP绿色荧光蛋白融合,转染细胞后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位.结果:确定了hPOT1进核序列是定位于第355～375位氨基酸之间的富含碱性氨基酸序列,其中R372,R373影响hPOT1的细胞核内定位.结论:鉴定出hPOT1的核定位结构域,该结构域影响了hPOT1不同形式剪接体蛋白的细胞内分布.为进一步研究hPOT1在端粒末端调控中的作用提供了线索.
作者：林坚；陈皓；白云秀；金蕊；张彬；黄翠芬；黄君健 刊期： 2004年第04期
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我国是发病率居第3位的恶性肿瘤,每年确诊患者达 11万之多 ,预后甚差[1].HCC的血供特性对影像诊断和手术方案的选择具有十分重要的意义.
作者：李功杰；杨立；史晓林；王殿军；王悦华；李晓兵 刊期： 2004年第04期
目的:原核细胞表达贝氏柯克斯体34×103外膜蛋白基因,评价34×103重组外膜蛋白的免疫保护性.方法:用PCR从我国贝氏柯克斯体分离株的基因组中扩增34×103外膜蛋白基因,用该基因与原核表达质粒重组,构建重组表达质粒;用IPTG诱导重组质粒在大肠杆菌细胞内表达重组蛋白.用重组蛋白皮下接种免疫BALB/c小鼠2次,在加强免疫后的第28天,用ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平以及作体外脾淋巴细胞增殖试验检查小鼠的特异性细胞免疫水平;用10 ID50贝氏柯克斯体腹腔注射攻击免疫小鼠,攻击后第7天病理学检查小鼠脏器的组织病变和染色镜检脾脏的贝氏柯克斯体.结果:SDS-PAGE和免疫印迹分析证明重组质粒转化的大肠杆菌产生了34×103重组蛋白,重组蛋白能与贝氏柯克斯体感染小鼠血清发生特异性反应.ELISA法检测出免疫小鼠血清中有高滴度的抗重组蛋白抗体,免疫小鼠的体外淋巴细胞增殖水平显著高于非免疫小鼠.组织病理学检查发现免疫小鼠的肺、肝、脾无明显病变,仅个别小鼠脾脏存在少量柯克斯体,而非免疫小鼠的肺、肝、脾病变十分明显,脾脏肿大并含有大量的柯克斯体.结论:重组34×103外膜蛋白具有的免疫保护性,能够诱导机体产生有效的抗贝氏柯克斯体的体液和细胞免疫应答.
作者：魏文进；温博海；邱玲；牛东升；陈梅玲；高宁 刊期： 2004年第04期
NF-κB是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子.它可以参与机体的炎症反应、免疫反应、细胞分化与凋亡及其他应激反应.NF-κB启动基因的表达涉及到IKK的激活、IκB磷酸化和泛素化、IκB裂解、NF-κB向核内的迁移、NF-κB与DNA的结合等过程.NF-κB的过度激活会引起一系列的疾病,如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎等,利用药物或通过转基因方法来抑制以NF-κB为核心的信号转导途径可能会成为防治某些疾病的途径.
作者：鲍国强；李莉；章扬培 刊期： 2004年第04期
本文综述了近年来电喷雾等软电离质谱技术用于手性识别的研究进展.其研究方法主要分为对映体标记法、离子-分子反应法以及动力学方法等3类.通过综述对质谱技术用于手性识别的不足之处以及未来主要发展趋势进行了讨论.
作者：吴弼东；谢剑炜 刊期： 2004年第04期
目的:建立共同稳定表达大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体的哺乳动物细胞表达系统.方法:采用脂质体介导的方法,将编码大鼠μ阿片受体和人咪唑啉-1受体的基因导入CHO细胞中,以放射配体-受体结合试验分析受体的表达水平,用cAMP积累试验分析表达受体的功能.结果:在共同稳定表达大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体的CHO细胞中,表达的μ阿片受体对3H-二丙诺啡(diprenorphine)的Kd和Bmax值分别为(0.24 ± 0.02)nmol/L和(1.83±0.13)pmol/mg蛋白;表达的咪唑啉-1受体对3H-可乐定的Kd和Bmax值分别为(3.72±0.25)nmol/L和(43.59±6.83)fmol/106细胞.表达的μ阿片受体抑制福司科林(forskolin)刺激下cAMP的积累,表达的咪唑啉-1受体抑制吗啡慢性处理、纳洛酮催促引起的cAMP超射.结论:首次建立了共同稳定表达μ阿片受体和咪唑啉-1受体的细胞模型.
作者：吴宁；苏瑞斌；徐波；李锦；秦伯益 刊期： 2004年第04期
泡囊短波单胞菌(Brevundimonas vesicularis)是一种较罕见的非发酵性病原性假单胞菌,其致病力较强,可以引起中枢神经系统感染或菌血症[1,2].近期我们发现了一例泡囊短波单胞菌所致M2型急性髓性白血病患者肺部感染的病例,经检索中国生物医学期刊数据库,尚无泡囊短波单胞菌导致肺部感染的报道.现报告如下.
作者：陈建魁；尹秀云；杜燕；张鹏；姚平；金欣；高亚兵 刊期： 2004年第04期
目的:建立表达大鼠NMDA(N-methyl-D-aspartate)受体NR1a与NR2A亚单位重组体的细胞模型,研究其生物学及药理学特性.方法:利用脂质体转染方法将大鼠NR1a与NR2A亚单位重组体共转染到HEK-293细胞中,在细胞培养48～72 h后,利用膜片钳全细胞记录技术,观察和分析L-谷氨酸诱发的NMDA受体电流.结果:向转染后的HEK-293细胞表面喷射NMDA受体激动剂L-谷氨酸可在38%细胞上诱发出瞬时内向电流,该电流可被NMDA受体选择性拮抗剂D-AP5(50 μmol/L)完全阻断.L-谷氨酸诱发的电流具有快速失敏的动力学特征和内向整流特性,衰减时间常数(τ值)为(53±9)ms(n=20).L-谷氨酸诱发电流的EC50值为(8.5±0.5)μmol/L.结论:成功地将NR1a与NR2A亚单位转染入HEK-293细胞并形成NMDA受体的功能性表达,为进一步深入研究NMDA受体不同亚单位组成与其功能的关系及其药理学特性奠定了基础.
作者：张树卓；武文；何滢；翁谢川；郑建全 刊期： 2004年第04期
医院感染(nosocomial infection)是在医院或其他医疗保健机构内发生的各种感染,包括细菌性和真菌性医院感染.近年来,随着科学技术的飞快发展,各种先进诊疗技术层出不穷,新型抗生素亦应运而生.但是,随之出现的负面效应也呈现出越来越多的趋势,尤其是介入性诊断和治疗手段逐年增多,临床上广谱抗生素和免疫抑制剂的滥用,导致耐药菌株逐年增多,体内正常菌群发生了很大变化[1,2].很多体内的条件致病菌转变成致病菌,这在血液病和恶性肿瘤等免疫力低下的患者中表现尤为突出.因此,临床微生物工作者应积极做好医院感染病原学诊断和医院感染监测工作,定期将医院感染的优势菌群和耐药性监测情况反馈到临床一线,指导临床医师合理使用抗生素,减少耐药菌株的产生和传播,控制医院感染的发生.我们对我院恶性肿瘤和血液病患者发生医院感染的优势菌群和耐药性情况进行了监测,现报告如下.
作者：尹秀云；陈建魁；白云；姚平；金欣；佟雅丽；杜宇；郑纳新；张鹏 刊期： 2004年第04期
恶性肿瘤是威胁人类生命的严重疾病之一,对肿瘤的治疗以手术、放疗和化疗三大手段为主.在放疗过程中由于患者白细胞数量下降等机体自身功能的低下常常不得不暂停治疗,待白细胞数目回升到一定水平才能再行治疗.这种状况影响了放疗效果,因此,国内外学者研究出一种放射增敏剂,在放疗前使用,使肿瘤细胞对射线的敏感性提高,照射低剂量可以达到高剂量的效果,而机体本身的各项功能不会下降过多,可使放疗持续下去,提高放疗效果.
作者：骆传环；黄荣清；肖炳坤；梁乾德；舒融；梁晓东；张宁 刊期： 2004年第04期
目的: 制备抗A型产气荚膜梭菌毒素α(CPTα)单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性.方法:利用工程菌株E.coli M15/pQE30-CPTα表达的重组A型CPTα带有6个组氨酸(6×his)标签的特性, 经Ni-NTA螯合亲和层析方法纯化后,用纯化的重组CPTα免疫BALB/c鼠,以常规杂交瘤细胞融合技术、HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选,并分析其亚类及中和保护作用.结果: 获得一株能稳定分泌抗CPTα的mAb杂交瘤细胞株4E2,其分泌抗体亚类为IgG1.该mAb与重组CPTα和天然CPTα均可发生特异性反应,并可保护小鼠抵抗2倍小致死剂量CPTα的攻击,属中和性抗体.结论: 应用纯化的重组CPTα成功地获得了特异性的中和抗体mAb 4E2,为A型CPTα诊断抗体和治疗性抗体的研制奠定了基础.
作者：王景林；杨利敏；吴东林；康琳 刊期： 2004年第04期
以战斗力系统中重要、易损的军人为保障对象的军事医学,实质上保障的是战斗力.军事医学以战斗力的保持、再生与提高为根本目的,军事医学本质上是战斗力医学.军事医学发展与转型的根本动因是战斗力的发展与转型,新军事变革及全维卫勤呼唤全维战斗力医学;医学模式对军事医学也有重要影响,生物心理社会医学模式要求军事医学的内涵实现由生物单维向生物心理社会全维的扩展.全维战斗力医学是针对全维战场环境对军人全维健康的威胁,注重维护军人军事作业能力,以全时域军人健康的保持、恢复与促进为目标,以军队战斗力的全维保护为目的医学科学理论与技术,是新军事变革时代的军事医学.全维战斗力医学的领域较传统军事医学有较大扩展.对于中国特色的军事医学变革,全维战斗力医学概念的提出是有益的理论探索.
作者：雷二庆；吴乐山 刊期： 2004年第04期
O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是细胞中一种重要的DNA损伤修复酶,它在抵御烷化剂所致的细胞突变和死亡中起重要作用.本文综述了近年来关于MGMT的新研究,内容包括MGMT的基因结构与功能,MGMT的分布及其影响因素,MGMT与肿瘤发生、发展及治疗的关系.
作者：崔灵芝；章扬培；宋三泰 刊期： 2004年第04期
1 材料和方法1.1 可拆卸的96孔培养板使用丹麦Nunc公司的96孔可拆卸酶联板(拆卸为8条,每条12孔),订购货号437915.因为该酶联板不是无菌级的,不能直接应用于细胞培养,又不能耐受高压灭菌,故采用高剂量放射线(如放射性钴源)照射灭菌,随后按照无菌级别处理,接种细胞.
作者：赵永岐；杨怡；吴燕；刘淑红；葛学铭；范明 刊期： 2004年第04期
目的:构建p185HER-2蛋白胞外区的原核表达载体,实现p185HER-2蛋白胞外区的表达.以纯化p185HER-2蛋白胞外区为靶,从噬菌体肽库中筛选其结合肽,用于肿瘤导向治疗.方法:从含有HER-2全长cDNA的质粒psv2-cerbB-2中克隆了人p185HER-2蛋白胞外区cDNA,将此cDNA克隆到pET-30a+表达载体中,构建p185蛋白胞外区的表达载体.表达的p185HER-2蛋白胞外区通过Zn2+螯合层析柱进行纯化.以纯化的p185HER-2蛋白胞外区为靶,通过淘洗方法进行噬菌体肽库筛选.结果与结论:构建了p185HER-2蛋白胞外区的原核表达载体,实现了p185HER-2蛋白胞外区的高表达.通过Zn2+螯合层析柱实现一步纯化,p185HER-2蛋白胞外区的纯度达到95%.从噬菌体随机环七肽库中找到了一组具有核心序列p185HER-2蛋白胞外区结合肽.这些p185HER-2蛋白胞外区结合肽有可能成为肿瘤治疗的新的候选分子.
作者：王清明；范国才；陈吉中；曾庆银；陈惠鹏 刊期： 2004年第04期
目的: 克隆表达大肠杆菌脱氢奎尼酸合成酶基因aroB,并测定其生物学活性.方法: 根据大肠杆菌中aroB基因的序列设计了一对引物,利用PCR技术扩增得到aroB基因,将其克隆入pGEM-Teasy载体中,以双脱氧法进行测序,然后再克隆入高效原核表达载体pBV220,对该重组子的SD序列进行调节后利用温度诱导表达,并测酶的生物活性.结果: 构建了aroB基因的克隆和表达重组子,经SD序列调节后,aroB基因获得高效表达,SDS-PAGE图谱显示新增38.8×103蛋白带,酶活性测定结果表明脱氢奎尼酸合成酶的相对酶活性为5.4.结论: 实现了脱氢奎尼酸合成酶基因在大肠杆菌中的高效表达,为构建产脱氢奎尼酸工程菌种奠定了基础.
作者：常会波；刘云；吴建新；徐琪寿 刊期： 2004年第04期
神经细胞形态万千、功能各异,而要研究其在整体中的功能,单靠简单的胚胎及新生动物的原代神经元或传代的杂交神经胶质瘤细胞是行不通的.脊髓背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)是躯体和内脏感觉信号中枢途径的第一站,其初级感觉神经元是伤害性感觉信息从外周到中枢的重要传导站,该部位的受体、递质及离子通道现已成为痛觉研究和新型镇痛药开发的重要靶位[1].而DRG小细胞上河豚毒素(tetrodotoxin, TTX)不敏感钠通道在慢性痛中的改变及其离体后的可检测性的发现,实现了人们能够用离体单细胞的离子通道来研究痛觉的长久梦想[2].
作者：刘茵；陈京红；宫泽辉 刊期： 2004年第04期
目的:荧光标记物是目前杂交型基因芯片所检测的主要目标底物,本实验比较了3种基于PCR的荧光标记方法在基因芯片检测中的应用效果.方法:荧光分子标记的引物或荧光分子修饰的核苷酸可以在PCR反应中通过Taq,Pfu等DNA聚合酶掺入到PCR产物中,在此过程中,荧光分子又可以通过不同的方法掺入到PCR产物中.方法1:直接将荧光分子化学合成在引物的5′端;方法2:在PCR反应体系中加入荧光分子修饰的核苷酸单体,由DNA聚合酶将其掺入PCR产物中;方法3:对PCR产物通过非模板依赖性的酶促加尾反应在其3′端随机加入荧光修饰的核苷酸.本实验优化了3种荧光标记方法,并以检测CYP3A4基因外显子5中4个核苷酸位点的探针微阵列为例,比较了检测效果.结果:在各自优化的实验条件下,从扩增、标记效率以及芯片杂交的信号强度、背景、分辨率等方面进行比较,3种方法得到的荧光标记样品无明显区别,但后两种方法操作过程复杂,使用成本高,对反应条件苛刻.结论:3种基于PCR扩增的荧光标记方法均可以提供优质的荧光标记探针或样品(底物),在实际应用中,各自有不同的特点及适用范围.
作者：文思远；陈苏红；张敏丽；王升启 刊期： 2004年第04期
目的:构建我国SARS病毒BJ01株基因组全序列的亚cDNA克隆,为进一步构建该毒株的全长感染性cDNA克隆奠定基础.方法:根据BJ01株病毒基因组序列中含有的特异酶切位点,利用DNAstar软件设计7对引物,然后通过RT-PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的7个cDNA片段,并分别将其克隆至pGEM-T Easy或Topo载体.结果与结论:已构建出SARS-CoV BJ01株基因组的7个亚cDNA克隆,经酶切鉴定和序列测定表明,所获得的cDNA克隆为BJ01株病毒的特异序列.
作者：赵卓；韩剑峰；范宝昌；陈水平；姜涛；于曼；何维明；祝庆余；秦鄂德 刊期： 2004年第04期
为了增强抗体的效应功能,人们尝试多种方法改造抗体分子,双特异性抗体是改善抗体治疗效果的发展方向之一,现已成为抗体工程研究领域的热点.随着分子生物学技术的迅速发展,出现了基因工程双特异性抗体的多种构建模式,并且有多种基因工程双特异性抗体制剂已经用于肿瘤的临床诊断和治疗试验.本文对基因工程双特异性抗体的构建模式按照双特异性微抗体、双链抗体、单链双特异性抗体和多价双特异性抗体4类进行了综述.
作者：解志刚；郭宁；沈倍奋 刊期： 2004年第04期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
