秦炯；韩颖
目的:分析并比较测量端粒长度的DNA印迹法和实时定量PCR法在细胞衰老实际研究中的性能.方法:从不同代数(population doublings,PDs)的正常人成纤维细胞(2BS)中提取基因组DNA作为测试样本；对测量端粒长度的DNA印迹法和实时定量PCR法进行优化,以点杂交的方式分析地高辛配基标记检测系统的特异性和灵敏度；分别用两种方法反复测定同一样本的平行样或不同样本并分析比较两种方法测量端粒的分辨率和精确度.结果:实际测量端粒时,地高辛配基标记检测系统虽可检测出小于1 μg的基因组DNA,但优样本量为4～5 μg；DNA印迹法的分辨率约为150 bp,实时定量PCR法的分辨率约为300～400 bp,前者可分辨代龄相差少至2 PDs的2BS细胞端粒长度的差异,而后者只能分辨代龄相差5 PDs以上的端粒差异；实时定量PCR法重复测量误差超过10％,远大于DNA印迹法的2.5％ (P ＜0.001).结论:地高辛配基标记的DNA印迹检测系统完全适用于测量端粒长度,且性能优于实时定量PCR法,但后者方便快捷,可高通量处理样本,所以在细胞衰老研究中,应根据具体情况合理选择相应方法.
作者：高凌云；李国栋；童坦君 刊期： 2013年第02期
目的:考察羟丙基甲基纤维素(hydroxypropylmethyl cellulose,HPMC)作为亲水凝胶材料和调控层材料对骨架型缓释制剂体外释放的影响.方法:以盐酸地尔硫卓为水溶性模型药物,HPMC为亲水凝胶材料,分别制备盐酸地尔硫卓缓释片和具有调控层的双层骨架片,考察HPMC作为凝胶骨架材料和调控层材料对水溶性药物缓释制剂体外释放的影响.结果:改变HPMC的黏度,调节其用量由20％至40％可以减慢药物释放,但具有一定的限度；联合应用5％ ～20％的羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose sodium,CMC-Na)为骨架材料可以显著减慢药物体外前期的释放,达到24 h持续释放；当以HPMC和乙基纤维素(ethylcellulose,EC)为调控层辅料制备双层骨架片时,增加调控层的重量(为含药层的10％ ～40％)及调控层中HPMC的比例,能减慢药物释放,尤其减少了前期突释现象.结论:HPMC的黏度、用量及与骨架材料的联合应用等对药物的释放影响较大；在缓释片的基础上加上一层不含药物的调控层制备双层骨架片,可以有效控制缓释药物前期释放过快,改变药物释放规律.
作者：杨亚鹏；汪梦圆；常俊标；郭旻彤 刊期： 2013年第02期
目的:应用甲基CpG结合蛋白-2(methyl-CpG-binding protein 2,MECP2)基因突变筛查方法,检测孤独症患者的MECP2基因,探讨孤独症与MECP2基因的关系.方法:收集男性孤独症44例,均满足孤独症《美国精神障碍诊断和统计手册》第4版诊断标准,应用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)筛查MECP2基因变异,并进行DNA测序鉴定.对存在MECP2基因错义突变的病例进行家系调查.结果:在44例患者中经DHPLC筛查阳性和DNA测序发现,4例患者存在不同的MECP2基因突变,包括c.590C＞T(T197M)和c.602C＞ T(A201V)2种错义突变,以及c.1053C＞G、c.897C＞T 2种同义突变；17例的内含子3位于Exon 4前74位点C＞T,为SNP (rs2071569)；1例c.602C ＞T错义突变患者家系调查发现,突变来源于母亲及外祖父,母亲呈杂合子,为X染色体随机失活,母亲与外祖父智力均正常,外祖父有抑郁症.结论:在男性孤独症患者中,存在MECP2基因较高的变异率,MECP2基因在孤独症致病中可能起着一定作用,不除外是孤独症的易感基因.
作者：王三梅；李明；杨艳玲；潘虹；刘靖；潘凯枫；卜定方 刊期： 2013年第02期
早产儿是一组特殊的新生儿,其出生时胎龄小于37周.根据2012年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)报告,早产的发生率为5％～18％,每年全世界早产儿数量达1 500万.2010年,至少每10个新生儿中就有1个早产儿,每年因早产死亡的新生儿达110万[1].
作者：冯琪 刊期： 2013年第02期
目的:探讨临床表现、皮肤活检病理诊断和基因诊断在遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的诊断意义.方法:分析1例新生儿起病的遗传性营养不良性大疱性表皮松解症的临床和病理特点和基因诊断结果.结果:1例生后10 h入院新生儿,出生后即发现下肢有大片皮肤破损和糜烂,病变延伸至左侧踝关节和足底,住院后发现口腔内有血疱和水疱,住院期间皮肤受压和摩擦处多处出现新的大疱和皮肤脱落及皮肤糜烂.皮肤糜烂处分泌物和口腔分泌物细菌涂片和培养均未见细菌.取患儿皮肤做病理检查,结果光镜下可见真皮内有少量疏松结缔组织.电子显微镜下真皮层仅见少量纤维母细胞和胶原纤维,基质结构不清.大部分区域未见基底层,张力丝零散分布在真皮组织,部分区域有基底膜,但锚纤维结构不清,致密层变薄,符合遗传性营养不良性大疱性表皮松解症诊断标准.取患儿及其父母静脉血进行COL7A1基因检测,其母在COL7A1基因第13个外显子500上插入AGGG片段,其父在第98个外显子序列后剪切位点有一个G突变为A.患儿COL7A1基因出现复合杂合突变；突变位点分别与父亲和母亲位点一致,证实患儿遗传了来自父、母亲双方的突变基因,因此发病,其父母为表型正常的致病基因携带者.结论:对于临床怀疑遗传性大疱性表皮松解症患儿应先做皮肤病理检查,特别是通过电子显微镜超微结构观察做出初步分型,再根据病理类型进一步做相应基因检测确诊,如能对父母同时进行基因检测对今后优生可能有很大帮助.
作者：姜毅；侯新琳；李昕；林志淼；崔晨 刊期： 2013年第02期
目前研究发现,越来越多的累及肾的炎症性疾病与补体系统调节异常有关,如不典型溶血尿毒综合征(a-typical hemolytic uremic syndrome,aHUS)、中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophil cytoplasmic an-tibodies,ANCA)相关性小血管炎及儿童期起病的系统性红斑狼疮等,而各种原发性肾小球疾病与补体调节异常关系更为密切,如致密物沉积病(dense deposit disease,DDD)和C3肾小球肾炎等.
作者：肖慧捷；何瑞娟 刊期： 2013年第02期
目的:探讨γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯{N-[N-(3,5-difluorophena-cetyl-L-alanyl)]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT}对人牙髓细胞Notch信号通路是否有抑制作用,及对牙髓细胞增殖能力的影响.方法:收集临床上完整拔除的健康前磨牙或第三磨牙,采用酶消化法进行人牙髓细胞的原代培养和传代培养.从第4代开始在正常培养基中加入终浓度为5μmol/L的γ-分泌酶抑制剂DAPT,选择第4、8、10代细胞为检测细胞,采用实时荧光定量RT-PCR方法和基因芯片检测Notch信号通路相关基因的表达变化,用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞活性,绘制牙髓细胞增殖曲线,评价牙髓细胞的增殖状况.结果:加入DAPT后,实验组牙髓细胞Notch信号通路的下游基因Hes1、Hey1、NR4A2表达下降,同时,第8、10代牙髓细胞的增殖减慢,与对照组相比,差异有统计学意义.结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能有效抑制体外培养人牙髓细胞的Notch信号通路,使人牙髓细胞增殖减慢,影响细胞的正常生命周期.
作者：邹晓英；庄姮；岳林；高学军 刊期： 2013年第02期
目的:分析川崎病患儿血浆前白蛋白(prealbumin,PA)和C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的变化,探讨联合分析PA和CRP变化预测患者冠状动脉病变的意义.方法:回顾性分析2002年1月至2011年2月北京大学第一医院儿科收治的108例川崎病患者病例资料,包括血浆中PA、CRP水平和冠状动脉超声检查结果等.采用t检验、卡方检验以及ROC曲线分析等统计方法,对PA和CRP在疾病时的变化进行分析,并将其与冠状动脉病变进行相关性分析,以探讨联合分析血浆PA及CRP的变化在预测川崎病患者冠状动脉病变中的意义.结果:在川崎病患者的急性期,血浆PA水平为(44.6±34.9) mg/L,较正常参考值明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01)；而CRP水平为(88.4 ±46.7) mg/L,较正常参考值明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).在血浆PA＜80 mg/L的55例患者中,以76.5 mg/L为界限,CRP＜ 76.5 mg/L的患者发生冠状动脉扩张的比例明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PA和CRP在川崎病急性期有明显变化,联合分析PA和CRP的变化,对于预测冠状动脉病变可能具有重要意义.
作者：张春雨；刘丽丽；廖莹；杜军保；金红芳 刊期： 2013年第02期
目的:探讨123例原发性胆汁性肝硬化患者的临床表现与自身抗体谱的关系.方法:选取2008年至2010年解放军三零二医院收治的123例原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者进行回顾性分析,按照临床及病理分期分为肝硬化期70例和非肝硬化期53例,采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(anti-nuclear antibodies,ANA)和抗线粒体抗体(anti-mitoehondrial antibodies,AMA),采用免疫印记法(EUROLINE)检测抗线粒体抗体M2亚型(anti-mitochondrial antibodies-M2,AMA-M2)、抗早幼粒细胞白血病蛋白抗体(anti-promyelocytic leukemia,anti-PML)、抗核点型靶抗原蛋白100 000(anti-sp100 antibodies,anti-sp100)、抗核孔复合物210 000跨膜糖蛋白(an-ti-gp210 antibodies,anti-gp210)、抗重组M2融合蛋白抗体(anti-BCOADC-E2 PDC-E2OGDC-E2 antibodies,anti-BPO)、抗52 000核颗粒蛋白(anti-Ro-52 antibody,anti-52KD).结果:ANA、AMA、AMA-M2、anti-PML、anti-sp100和anti-52KD阳性率,肝硬化期分别49％、47％、51％、54％、31％和49％,非肝硬化期分别为38％、37％、51％、60％、30％和51％,两组间比较差异均无统计学意义(P均＞0.05)；anti-gp210阳性率:肝硬化期27％,非肝硬化期19％,两组间比较差异有统计学意义(P ＜0.01)；anti-gp210阳性的PBC患者较anti-gp210阴性的PBC患者白蛋白和胆碱酯酶偏低,转氨酶、胆红素、碱性磷酸酶和Mayo评分偏高,发展为肝衰竭概率大.结论:AMA有助于疾病的早期诊断,ANA阳性有助于AMA阴性患者的诊断；anti-gp210出现在PBC病程后期,anti-gp210阳性的PBC患者有更严重的胆汁淤积和肝功能损害.
作者：刘红虹；福军亮；徐军；罗生强；刘振文；王福生 刊期： 2013年第02期
目的:探讨北京市四区/县18月龄儿童发育迟缓的患病率、影响因素及病因学的流行病学特点.方法:2011年5月至9月在北京市选取顺义、大兴、密云和延庆4个郊区/县,对所有四区/县的18月龄儿童进行发育迟缓的流行病学调查.采用儿童保健三级网管理与临床研究相结合的模式,先由一级保健网的社区医生对入选儿童进行儿童发育问卷调查以及丹佛发育筛查测验(Denver developmental screening test,DDST)；再由二级保健网的区/县妇幼保健院医生采用Gesell对DDST筛查阳性儿童进行发育评估；诊断为发育迟缓的患儿,转诊至三级保健网医疗机构进行病因学诊断,并进行随访和后续评估.对诊断发育迟缓患儿,按照1∶4方式选择筛查结果为非发育迟缓的同性别和同居住社区的儿童,进行病例配比,采用SPSS 16.0进行数据描述及病例对照单因素分析.结果:北京市四区/县18月龄应筛查儿童4 037名,实际筛查3 182名,筛查率78.8％(3 182/4 037),诊断发育迟缓儿童22名,患病率6.91‰(22/3 182),其中15名为男性,7名为女性,男女比例为2.1∶1.顺义、大兴、密云与延庆四区/县发育迟缓患病率分别为3.45‰(4/1 160)、4.50‰(5/1 111)、15.87‰(7/441)和12.77‰(6/470).单因素分析结果显示,低收入家庭、母亲文化程度低、小于胎龄儿、多胎儿、生后严重疾病史、先天畸形以及体格发育迟缓是影响发育迟缓的主要因素(P＜0.05).结论:北京市四区/县78.8％的18月龄儿童发育迟缓筛查结果显示,发育迟缓患病率为6.91‰,而且具有性别和地区差异性,其发生与社会文化因素、生物学等多因素有关.
作者：周文娟；梁爱民；王凤芝；崔文红；王秀云；刘秋明；游红；贺春燕；彭金荣 刊期： 2013年第02期
目的:探讨青少年颞下颌关节骨关节病(temporomandibular joint osteoarthrosis,TMJOA)患病情况及锥形束CT(cone beam computed tomography,CBCT)X线片征象.方法:选取北京大学口腔医学院颞下颌关节病及口面痛治疗中心就诊的10～19岁颞下颌关节紊乱病(temporomandibular disorders,TMD)患者386例为患者组,因错殆畸形于北京大学口腔医学院正畸科就诊的10～19岁患者339例为对照组,两组病例均采用CBCT进行双侧颞下颌关节扫描.对两组患者TMJOA检出率及X线片征象进行分类比较.应用SPSS 13.0统计软件对两组数据进行统计分析.结果:(1)患者组TMJOA病例157例,检出率40.7％ (157/386),对照组TMJOA病例41例,检出率12.1％ (41/339),患者组TMJOA检出率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)患者组男性和女性TMJOA检出率分别为30.9％ (34/110)和44.6％ (123/276),差异有统计学意义(P＜0.05)；对照组分别为8.6％ (9/105)和13.7％(32/234),差异没有统计学意义(P＞0.05).(3)对两组TMJOA骨质改变类型构成比进行比较,患者组髁突骨皮质模糊(31.7％,65/205)、骨质小凹陷缺损和骨质较广泛破坏(共占25.4％,52/205)高于对照组[髁突骨皮质模糊占1/58(1.7％),骨质小凹陷缺损和骨质较广泛破坏共占3/58(5.2％),P均＜0.05],对照组髁突磨平变短(39.7％,23/58)和骨质硬化(39.7％,23/58)高于患者组[髁突磨平变短占13/205(6.3％),骨质硬化占30/205(14.6％),P均＜0.05].结论:青少年TMD患者及正畸患者中骨关节病并不罕见,TMD患者组骨关节病病例女性多见.患者组与对照组TMJOA X线片征象中溶解破坏类(包括髁突骨皮质模糊、骨质小凹陷缺损和骨质较广泛破坏)和相对稳定类(骨质硬化、骨质增生、囊样变、骨质磨损和磨平变短)的构成比差异有统计学意义.
作者：王志辉；姜岚；赵燕平；马绪臣 刊期： 2013年第02期
甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症可以导致多系统损伤,以中枢神经损伤为主,周围神经损伤较少见.本文拟就1例以周围神经损伤为主要表现的甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症患者进行研究.患儿为10岁男童,主因“双下肢无力1个月”就诊,既往轻度智力运动发育落后,轻度学习困难.3岁时曾有蛋白尿,经治疗后好转.8岁6个月时曾有抽搐,应用丙戊酸钠治疗后发作控制.体格检查显示双侧膝腱反射减弱,双侧跟腱反射未引出,浅深感觉未见异常,双侧巴氏征(+),肌电图检查证实为周围神经损伤.尿液甲基丙二酸及血清同型半胱氨酸显著升高,符合甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症诊断,MMACHC基因分析显示患者存在两个致病杂合突变(c.365A＞T和c.609G ＞A),证实为cblC缺陷.针对原发病,给予维生素B12、亚叶酸钙、左卡尼汀及甜菜碱治疗,患者病情逐步改善,半年后随访患儿无力症状消失,运动功能恢复,智力发育亦显著进步,可正常就读.本例患者提示,周围神经损伤也是甲基丙二酸尿症合并同型半胱氨酸血症的合并症之一,对不明原因周围神经疾病,尤其是伴有多系统受累的患者,应尽早行尿液有机酸分析及血清总同型半胱氨酸测定,以明确诊断,正确治疗,改善预后.
作者：季涛云；张月华；李飞天；秦炯；杨艳玲 刊期： 2013年第02期
目的:探讨游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)异常对人肾癌786-O细胞增殖以及整合素连接激酶(inte-grin-linked kinase,ILK)蛋白表达的影响.方法:分别用0、0.05、0.1和0.2 mmol/L的油酸(oleic acid,OA)作用人肾癌786-O细胞48 h,其中0 mmoL/L组作为对照组.利用MTT方法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Western blot方法检测各组细胞中ILK、Akt和p-Akt蛋白的表达水平.结果:MTT检测结果显示,0.05、0.1和0.2 mmol/L OA组与对照组相比,细胞增殖活性显著增高(光密度0.657±0.056、0.682±0.028、0.718±0.042 vs.0.495±0.034,P均＜0.001)；而不同浓度的OA对786-O细胞的凋亡作用并不明显(凋亡率2.42％ ±0.25％ vs.2.33％±0.87％ vs.2.25％±0.51％,P=0.082)；与对照组相比,OA组中的ILK、p-Akt蛋白表达显著上调.结论:FFAs通过刺激ILK/Akt通路可促进细胞增殖,可能与肾癌发生有关.
作者：刘振华；谢京；萧云备；袁也晴；张晓威；秦彩朋；郝一昌；徐涛；王晓峰 刊期： 2013年第02期
儿童神经科临床上存在大量的精神心理及行为障碍,处理不当可能严重影响患儿远期预后,尤其是儿童期的心理健康和成年后的人格成熟,应当引起高度关注[1-2].长期以来,由于神经、精神两个关联学科的分割,以及相关医学教育理念和措施的缺位,儿科(包括儿童神经科)医生都少有精神医学的系统培训,因此难以建立相关的神经-精神-行为医学模式,临床实践中对于普遍存在的精神行为障碍经常是视而不见或者有意避开.
作者：秦炯；韩颖 刊期： 2013年第02期
目的:了解201 1年ACR/EULAR类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)缓解标准与其他常用缓解标准的优劣及临床实用性.方法:现场问卷调查门诊或住院的RA患者,使用2011年ACR/EULAR、1981年ACR、DAS28及CDAI四种缓解标准进行评价,了解各缓解标准的缓解率及达到缓解患者的残余疾病活动度(residual disease activity)情况,对相关标准进行比较,评价各种标准的相关性、差异性和优缺点.结果:共完成调查问卷310份,其中有效问卷254份,有效率81.9％.1981年ACR、CDAI、2011年ACR/EULAR、DAS28缓解标准的缓解率分别为15.4％、23.2％、25.2％、38.2％,差异有统计学意义.ACR标准为严格,其缓解率低于其他缓解标准,差异有统计学意义(P＜0.05),无残余疾病活动度,而DAS28标准为宽松,其缓解率高于其他缓解标准,差异有统计学意义(P＜0.05),残余疾病活动度高于其他三种缓解标准,差异有统计学意义(P＜0.05).CDAI标准、2011年ACR/EULAR标准在缓解率及残余疾病活动度方面介于ACR及DAS28标准之间,但计算简单,适于临床应用.结论:4种RA缓解标准中ACR标准严格,无残余疾病活动度；DAS28标准宽松,计算复杂,残余疾病活动度高；CDAI、2011年ACR/EULAR标准计算简单,实用性强.
作者：路晓燕；李春；赵金霞；栗占国 刊期： 2013年第02期
近年来随着医学的发展,临床疾病谱也发生了变化,先天性疾病和遗传性疾病正替代传染性疾病成为与心血管疾病、癌症等并列的严重危害人类健康的疾病之一.人类基因组计划的完成和分子诊断技术的进步,有力地推动了医学遗传学的发展.在肾脏疾病中,大约10％ ～ 15％是因遗传性疾病或遗传因素所致[1].
作者：张琰琴；丁洁；王芳；张宏文 刊期： 2013年第02期
目的:探讨血清程序化细胞死亡因子5(programmed cell death 5 protein,PDCD5)水平在全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、脓毒症及重症脓毒症患者中的变化.方法:78例患者纳入本研究,其中SIRS(脓毒症除外)患者28例、脓毒症(重症脓毒症除外)患者23例、重症脓毒症患者27例,并选取健康对照22例,分别收集其静脉血清,采用酶联免疫吸附法检测PDCD5水平,比较PDCD5水平的差异.采用Spearman 相关分析评价血清PDCD5水平与急性生理和慢性健康状况评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHEⅡ)积分、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、白细胞计数、中性粒细胞计数和年龄等因素的相关性.结果:在SIRS组、脓毒症组及重症脓毒症组中,血清PDCD5水平分别为(19.07 ±8.91)、(29.03±13.27)及(42.83±17.32)μg/L,显著高于健康对照组的(0.32±0.02) μg/L(P＜0.05)；血清PDCD5水平在SIRS组、脓毒症组及重症脓毒症组中呈现依次升高的变化规律,组间差异具有统计学意义(P＜0.05).此外,血清PDCD5水平与APACHEⅡ积分呈正相关(r=0.572,P＜0.05).结论:脓毒症患者血清PDCD5水平随着病情加重呈升高趋势,提示PDCD5表达上调在脓毒症发生、发展中可能起到一定作用.
作者：刘慧琳；田勍；洪天配；刘桂花；潘欢；王海宁；高洪伟 刊期： 2013年第02期
Fabry病是由于溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A基因缺陷导致的X连锁隐性脂质贮积病,患者体内酰基鞘鞍醇三己糖进行性贮积,导致周围神经性疼痛,心、脑、肾、眼等多脏器损害,严重者可于青壮年死亡.但由于临床表现缺乏特异性,Fabry病早期诊断困难.本文报道1例男性患儿,4岁起出现双脚脚趾间断性刀割样疼痛,近2年加重伴双手手指胀痛,11岁时来院就医.患儿病程7年,曾接受多种止痛药物治疗无效,尚未出现心、脑、肾、皮肤、眼等脏器合并症,常规生化、免疫、肌电图、神经传导速度、脑影像学检查未见异常,诊断困难.外周血白细胞α-半乳糖苷酶A活性显著降低[1.0 nmol/(h·mg protein),正常对照值24.5 ～ 86.1 nmol(h·mg protein)],符合Fabry病诊断.基因分析显示,患儿α-半乳糖苷酶A基因ⅣS6 +2 T＞C剪切突变,其母亲及妹妹未携带相同突变,证实ⅣS6 +2 T＞C为新发突变.我国Fabry病发生情况不详,患者多起病隐匿,随着疾病进展逐渐出现发作性肢体疼痛及多脏器严重损害,引起尿毒症、心肌病、卒中,残障率及死亡率很高,早期的鉴别诊断至关重要.α-半乳糖苷酶活性检测是诊断Fabry病的关键,基因突变分析有助于确诊并指导家系的遗传咨询.
作者：刘玉鹏；黄昱；王峤；吴桐菲；马艳艳；李溪远；宋金青；杨艳玲 刊期： 2013年第02期
癫痫(epilepsy)是一种世界范围内常见的神经系统疾病.据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)的报告显示,癫痫的患病率在5.0‰～11.2‰,即大约全球有5 000万的活动性癫痫患者(经常有癫痫发作并需要抗癫痫药物维持治疗者).我国的癫痫患病率为7.2‰,推算之,目前我国大约有900万的癫痫患者.大多数的癫痫患者需要长期治疗,一部分患者甚至需要终身服药.
作者：姜玉武；谢涵 刊期： 2013年第02期
目的:研究自噬在顺铂引起膀胱癌细胞凋亡中的作用.方法:以膀胱癌细胞T24为细胞模型,利用透射电镜观察自噬泡形成,荧光显微镜观察转染绿色荧光蛋白和微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(green fluorescent protein and microtubule associated protein 1 light chain 3 fusion protein,GFP-LC3)的质粒的荧光聚集情况.应用蛋白质免疫印迹检测LC3-Ⅱ的积累,检测顺铂能否诱导膀胱癌T24细胞发生自噬.此外,蛋白质免疫印迹还被用来检测自噬相关信号通路哺乳动物雷帕霉素受体(mammal target of rapamycin,mTOR)及其下游相对分子质量70 000的核糖体蛋白质S6激酶(70 000 ribosomal protein S6 kinase,P-70S6K)的变化,以及凋亡标志蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的切割,之后利用3-(4,5-二甲基)-5-(3-羧甲基苯环)-2-(4-硫基苯)-2H-四唑盐复合物检测法[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt,MTS]观察在自噬促进剂雷帕霉素(rapamycin)存在与否的情况下顺铂引起的膀胱癌细胞活力变化.本实验还使用了RNA干扰技术敲降LC3表达.结果:电子显微镜显示相比对照组,顺铂可以引起膀胱癌细胞出现大量自噬泡.荧光显微镜观察GFP-LC3聚集程度,顺铂组也明显高于对照组.蛋白质免疫印迹检测LC3的结果发现顺铂组的LC3-Ⅱ含量随时间延长和顺铂浓度增加而明显增加,尤其是在48 h时,50与100 μmol/L顺铂处理下LC3-Ⅱ/Actin(％)的灰度值分别升高了30和44,而mTOR/P70S6K的磷酸化也受到顺铂处理的抑制,在48 h,100μmol/L顺铂处理下其磷酸化条带几乎完全被抑制.MTS结果发现顺铂可导致细胞活力的丢失,在50和100 μmol/L顺铂处理24 h时分别下降了12％和35％,而且用自噬促进剂雷帕霉素和顺铂联合处理组的细胞活力丢失大于单用顺铂处理的对照组(F=74.890,P ＜0.01).RNA干扰实验显示,敲降自噬相关基因LC3,可减少顺铂引起的PARP剪切,细胞凋亡减少.结论:发现顺铂可以引起膀胱癌细胞T24发生自噬,并发现该自噬的作用能促进顺铂诱导的细胞凋亡.
作者：杨轩；袁栋栋；姜学军；席志军 刊期： 2013年第02期
北京大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：北京大学
