乔欢；钱晓萍；张华刚；田婵；陈慰峰
目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中蛋白激酶G(PKG Iα)表达的影响.方法:对大鼠VSMCs培养并行细胞鉴定,分为对照组、低浓度环孢菌素A(CsA,0.5 mg/L)干预组、高浓度CsA(5 mg/L)干预组以及苯肾上腺素(PE)刺激组(5 mg/L CsA+10 μmol/L PE).其中CsA为CaN特异性抑制剂,PE为已知的CaN激活剂,能够刺激细胞增殖.应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot法定性及定量测定VSMCs增殖中PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平.结果:0.5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平与对照组相比差异无统计学意义,而5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA及蛋白的表达明显高于对照组,5 mg/L CsA+10 μmol/L PE组中PKG Iα mRNA的表达比5 mg/L CsA组减少了32.2%,蛋白的表达减少了36.7%,但仍明显高于对照组.结论:CaN能够调节培养VSMCs中PKG Iα的表达,增殖细胞用CaN特异性抑制剂CsA灭活CaN后,PKG Iα的表达明显增加,给予PE再次激活CaN后,PKG Iα的表达明显减少.
作者：马旃；孙宁玲 刊期： 2005年第06期
目的:观察血清瘦素在慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者营养不良发生中的作用,及其与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的关系. 方法:本试验纳入患者均为男性.47例COPD患者分为非营养不良组(COPD Ⅰ组)29例,营养不良组(COPDⅡ组)18 例.正常对照组34例.测定体重指数(body mass index,BMI)、理想体重百分比(percent ideal body weight,IBW%)、三头肌皮褶厚度(triceps skin-fold thickness,TSF)、上臂围(mid-upper arm circumference,MAC)、上臂肌围(mid-upper arm muscle circumference,MAMC)、血清瘦素、TNF-α浓度、血清前白蛋白(serum prealbumin,PA)、血清转铁蛋白(serum transferring,TF)、血清白蛋白(serum albumin,Alb)、总淋巴细胞计数(total lymphocytes count,TLC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(forced expiratory volume in one second,FEV1)、大口腔吸气压(maximal inspiration pressure,MIP)、大口腔呼气压(maximal expiration pressure,MEP)等指标.分析各组间各项指标的差异及相关性.瘦素测定用放射免疫法,TNF-α测定用ELISA法.结果 :(1)COPDⅡ组血清瘦素的质量浓度[(4.07±3.42) μg/L]明显低于COPD Ⅰ组[(9.72±6.67) μg/L]及正常对照组[(8.21±5.41) μg/L],差异有统计学意义(P<0.05).(2)COPDⅡ组血清TNF-α的质量浓度[(8.03±3.37) ng/L]与COPD Ⅰ组[(7.25±2.08) ng/L]相比差异无统计学意义.(3)各组血清瘦素浓度与TNF-α均无显著相关性.结论:在合并营养不良的COPD患者中,血清瘦素仍维持正常的生理调节.在COPD患者的能量代谢调节过程中,血清TNF-α与血清瘦素之间不存在相关性.
作者：杨翼萌；孙铁英；刘新民 刊期： 2005年第06期
目的:通过观察胸腺五肽(thymopentin, TP5)对慢性乙醇摄取小鼠觅酒行为和乙醇戒断后焦虑症状的影响,探讨TP5改善乙醇依赖的可能性.方法:依次强迫小鼠饮乙醇溶液:5%(体积分数)1周、10% (体积分数)1周、15%(体积分数)持续4周以建立慢性乙醇摄取模型.给药组连续腹腔注射TP5[0.2 mg/(kg·d), 0.4 mg/(kg·d)]14 d,对照组给予等体积生理盐水,测定给药前后小鼠乙醇(ethanol,E)和水(water,W)的摄取量,以E/(E+W)×100%作为其对乙醇选择的指标.用明暗箱和高架十字迷宫评定乙醇戒断后小鼠的焦虑程度.结果:(1)E/(E+W)×100%:TP5两剂量组药后值低于药前值.(2)明暗箱试验:TP5两剂量组明暗室间穿梭的次数及在明室内停留的时间药后值明显多于同组药前值和模型对照组药后值.(3)高架十字迷宫试验:TP5两剂量组药后在开臂内停留时间多于药前值和模型对照组药后值,在关臂内停留时间少于药前值.结论:TP5连续腹腔注射14天可减少慢性乙醇摄取小鼠对乙醇的选择,减轻乙醇戒断后的焦虑症状.
作者：韩雪莲；徐民；许德义 刊期： 2005年第06期
儿童期出现皮下组织弥漫性钙化或骨化改变属于罕见的临床表现,局部的骨骼肌钙化或骨化作为一种自限性疾病可以出现在手术、外伤或神经损伤之后.弥漫性的骨骼肌钙化可以见于获得性的皮肌炎,而弥漫性的骨骼肌骨化见于遗传性骨化性疾病,包括进行性骨化性肌炎、进行性骨发育异常和Albright遗传性骨营养障碍等遗传性疾病中[1,2].
作者：沈光莉；张巍；李漪；吕鹤；袁云 刊期： 2005年第06期
短路电流(short-circuit current, Isc)技术由丹麦科学家Ussing及Zerahn首先在上世纪50年代依据Hodgkin等提出的电压钳制(voltage clamp)原理开发出来[1],Isc技术已成为对所有类型上皮组织离子转运研究的有效方法之一,已广泛运用于生理、药理等实验之中.近年来,已有学者开始将Isc技术应用于中药现代化研究,并取得了一些初步成果,现将Isc技术原理、观察指标、上皮离子转运过程与离子通道、一般Isc技术的研究方法学及其在中药研究中的应用情况综述如下.
作者：袁劲松；李康；杨大坚；隋丽颖；刘颜；张超；郭长杰 刊期： 2005年第06期
目的:应用药理学方法建立在体大鼠的心血管钙化模型和体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化模型.方法:每日8时给予大鼠肌注维生素D3(300 000 U/kg体重)和尼古丁(25 mg/kg体重,混入花生油2 mL中) 灌胃,18时再灌胃1次.对照组动物肌注生理盐水和单纯花生油灌胃,方法同钙化组.两组动物以相同饲料饲养4周后进行心功能指标检测.取动脉血检测钙含量,并摘取心脏和主动脉血管称重,用von Kossa 染色方法检测钙沉积.培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞用β-磷酸甘油丙酮酸钠处理,培养14天后收集,检测钙含量并用von Kossa 染色方法检测钙沉积.结果:维生素D3和尼古丁诱导的心血管组织钙化大鼠(VDN组大鼠)体重比对照组轻(P＜0.01),左心室重与体重比值高(P＜0.01),血浆钙水平差异无统计学意义(P＞0.05),但心肌和主动脉钙含量均高于对照组(P＜0.01);心肌和主动脉碱性磷酸酶活性也高于对照组(P＜0.05和P＜0.01);VDN组大鼠von Kossa染色见心脏血管组织有大量钙盐的沉积.VDN大鼠平均动脉压(MBP)、心率(HR)和左心室舒张末期压(LVEDP)并无明显变化(P＞0.05),左心室内压变化速率即+LVdp/dtmax和-LVdp/dtmax均较对照组低(P＜0.05和P＜0.01).体外培养诱导钙化VSMC与对照相比较,钙化VSMC用von Kossa染色见有大量棕黑色颗粒沉积,钙化VSMC的钙含量、45Ca2+摄入及碱性磷酸酶活性均增加(P＜0.01).结论:用药理学方法于在体和离体水平均可以建立简便、经济、可靠、稳定、重现性好的钙化模型.
作者：郭玲；齐永芬 刊期： 2005年第06期
目的:观察Ph阳性慢性髓性白血病(Philadelphia chromosome-positive chronic myelogenous leukemia, Ph+CML)患者在甲磺酸伊马替尼治疗达细胞遗传学缓解后的疾病进展. 方法:对3例伊马替尼单药治疗有效的Ph+CML患者,包括第1次慢性期(例1)、第2次慢性期(例2)和加速期(例3)各1例,在治疗前及持续治疗后定期监测其血液学和细胞遗传学(G显带方法)变化. 结果:例1、例2和例3分别在伊马替尼治疗4个月、3个月和6个月时获得完全细胞遗传学缓解(complete cytogenetic remission, CCyR),但在随后的12个月、6个月和0个月(即服药的第16个月、9个月和6个月)时,分别发生了急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病和皮肤软组织髓外急变,同期骨髓染色体检查显示:例1和例3未检出Ph+细胞,呈完全正常核型,例2 Ph+细胞仅占20%. 结论:伊马替尼治疗Ph+CML获得CCyR后,患者仍可发生Ph阴性(Philadelphia chromosome-negative, Ph-)或Ph-为主的急性白血病或髓外急变.
作者：江倩；陈珊珊；江滨；江浩；陆颖；陆道培 刊期： 2005年第06期
目的:观察利多卡因对脑部微栓栓塞致大鼠学习记忆和胆碱能系统损害的影响.方法:雄性Wister大鼠随机分为:(1)对照组;(2)600微栓组和900微栓组,分别经右侧颈内动脉注射600和900个微球;(3)600保护组和900保护组,分别经右侧颈内动脉注射600和900个微球,并给予利多卡因.第7天起进行水迷宫测试.后取脑组织测定胆碱乙酰转移酶、胆碱酯酶活性和M受体结合活性.结果:(1)潜伏期 900微栓组明显长于对照组和600微栓组.(2)有效搜索策略百分比两个微栓组明显低于对照组;两个保护组则明显高于相应的微栓组.(3)胆碱乙酰转移酶活性皮层区域900微栓组和两个保护组均明显低于对照组,两个保护组还明显低于相应的微栓组;纹状体区域各微栓和保护组均明显低于对照组.(4)胆碱酯酶活性皮层区域900微栓组明显低于对照组和600微栓组,900保护组则明显高于900微栓组;海马区域各微栓和保护组均明显低于对照组.(5)M受体结合活性皮层区域900微栓组和两个保护组均明显低于对照组,两个保护组还明显低于相应的微栓组;海马和纹状体区域各微栓和保护组均明显低于对照组,两个保护组还明显低于相应的微栓组.结论:脑部微栓栓塞产生数量相关的大鼠学习记忆和中枢胆碱能系统损害.利多卡因减轻微栓栓塞所造成的学习记忆能障碍,对中枢胆碱能系统指标有进一步抑制作用.
作者：华震；王东信；王沛玉；左萍萍 刊期： 2005年第06期
目的:分析唐氏综合征(Down syndrome,DS)胎儿脑组织21号染色体(Chr21)基因的表达,探讨DS脑病变的分子机制.方法:采用优化的半定量RT-PCR法,以B2M为内参,检测了7个Chr21基因在DS胎儿及同龄对照胎儿大脑皮层及小脑组织中的表达.结果:Chr21基因DYRK1A, SYNJ1,PCP4(purkinje cell protein 4 gene), C21orf5, C21orf2 和C21orf106的表达在DS胎儿大脑皮层及小脑组织较正常对照均没有明显改变.ANA(abundant in neuroepithelium area)基因表达在DS胎儿小脑无明显改变,但在DS胎儿大脑皮层的表达显著升高.结论:细胞周期抑制性基因ANA的过表达可能与DS患者脑组织神经元细胞密度低有关.
作者：何湘君；张旗；马丽萍；杨丽君；沈浣；郭静竹 刊期： 2005年第06期
北京肿瘤医院自1999年开展超声引导射频消融(RFA)以来,共治疗符合RFA治疗适应证的肝细胞癌(HCC)256例(409人次).入选标准为:(1)肿瘤大径≤8.0 cm;(2)数目≤4个;(3)未明显侵犯周围其他重要脏器;(4)无门静脉或下腔静脉的广泛瘤栓;(5)凝血酶原活动度＞60%,血小板≥50×109/L.
作者：陈敏华；严昆；杨薇；高文；戴莹；霍苓；张晖；黄信孚 刊期： 2005年第06期
目的:研究反复热性惊厥(febrile seizures,FS)对发育期大鼠脑内硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)/胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)体系表达的影响.方法:采用热水浴诱导大鼠反复热性惊厥.隔日诱导惊厥1次,共诱导10次.发育期大鼠随机分为对照组(N组, n=8)及10次热性处理组(n=22).10次热性处理组依其是否出现惊厥又分为10次高热组(H组, n=9)及10次热性惊厥组(FS组,n=8).10次热性处理组中虽出现惊厥但不足10次者用于其他实验.用亚甲基蓝法测定大鼠血浆H2S含量;用原位杂交和免疫组化法分别观察CBS基因和蛋白表达情况.结果:FS组大鼠血浆H2S含量明显高于对照组和高热组,FS组大鼠海马CBS基因和蛋白表达明显高于对照组和高热组.结论:反复热性惊厥可使大鼠血浆H2S含量升高,并可使大鼠海马CBS基因和蛋白表达增强.
作者：韩颖；秦炯；常杏芝；杨志仙；杜军保 刊期： 2005年第06期
目的:总结视神经胶质瘤的临床特点和治疗经验,结合国内外文献探讨本病的临床表现、诊断方法、治疗方案及预后.方法:回顾分析过去 3年间我科收治的 7 例视神经胶质瘤患者的临床资料.结果:本组7例,发病平均年龄为18.7 岁,男女之比为4∶ 3,平均病程24.8个月,显微手术大部切除和近全切除率达 100%,术后尿崩较多见,术后患者临床症状均无加重.结论:视神经胶质瘤为良性肿瘤,预后较好,手术切除、及时处理术后并发症和恰当的放疗是治疗的关键.
作者：刘波；梁冶矢；石祥恩；张庆俊 刊期： 2005年第06期
目的:评价硬膜补片(Neuropatch,商品注册号:国药管字第2002-346032)治疗Chiari畸形合并脊髓空洞的疗效及术后反应.方法:2002年6月至2004年6月收治Chiari畸形合并脊髓空洞患者40例,所有患者均行枕大孔减压及硬膜成形术,其中20例应用硬膜补片行硬膜修补(硬膜补片组),余20例患者应用自体阔筋膜修补(自体筋膜组).观察指标包括两组间手术的时间、术后发热持续的时间、放置引流时间及引流量、术后应用激素及抗生素的时间、依据Tator评分评价术后效果.采用t及χ2进行数据分析.结果:硬膜补片组术后有12人(60%)出现发热,自体筋膜组有9人(45%)(χ2=0.902,P=0.342),脑脊液培养均阴性,硬膜补片组与自体筋膜组手术治疗改善均为17例(85%),两组在手术时间、术后发热、引流放置时间及引流量、术后应用抗生素的时间、术后疗效评价差异均无统计学意义,而术后发热持续时间(t=-2.913,P=0.045)及激素应用时间差异有显著性(t=-3.116,P=0.006),随访1～2年自体筋膜组有1例出现迟发伤口炎性肉芽肿,余无迟发感染发生.结论:Chiari畸形合并脊髓空洞手术中,硬膜补片(Neuropatch)是一可靠的修补硬膜缺损的硬膜替代物.
作者：刘彬；王振宇；李振东；马长城；孙建军；陈晓东 刊期： 2005年第06期
目的:在以一般人群为基础的中国成人双生子中探讨脂蛋白脂酶(LPL)基因S447X突变是否和血脂、血压有关联和连锁.方法:基于双生子登记系统,对双生子进行问卷、体检、生化指标测定以及S447X突变的检测.按性别分层,分别进行S447X突变与甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及其异常之间的单因素和控制混杂因素后的多因素关联分析.用基于Halesman-Elston回归的非参数同胞对连锁分析方法,在异卵双生子(DZ)中进行该突变位点和血脂、血压的连锁分析.结果:在962对成人双生子中,S447X突变等位基因的频率为8.6%;TG、HDL、SBP和DBP的遗传度分别为57%、68%、46%和44%;单因素和多因素关联分析显示,在女性双生子中,S447X突变和TG下降12.9%显著相关,也和SBP下降2.7 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、DBP下降1.8 mm Hg显著相关.而且,S447X突变和高TG异常、低HDL异常及高血压的发生风险降低也呈显著相关,OR值分别为0.38(95%CI:0.20～0.76)和0.49(95%CI:0.29～0.81)和0.47(95%CI:0.25～0.86).结论:在女性双生子中,S447X突变和血脂改善及血压降低相关,但在男性双生子中没有发现这种关联.也没有发现S447X突变位点和血脂及血压性状位点的连锁关系.因此,S447X突变和血脂及血压的关系可能是由于该突变和其它调节血脂和/或血压的功能性突变存在连锁不平衡所致.
作者：黄爱群；胡永华；徐波；詹思延；吕筠；秦颖；曹卫华；李立明 刊期： 2005年第06期
肾素血管紧张素系统( renin angiotensin system, RAS)[1]是维持血压、水和电解质平衡及心血管稳态的重要调控系统,从它的发现和确定它在心血管功能调控中的核心地位到现在的六十多年内,对RAS的研究主要集中在阐明这个内分泌轴中的各成员的代谢过程,以及它们各自精确的生物学效应.
作者：蒲丹；唐朝枢 刊期： 2005年第06期
目的:分析体外诱导的NY-ESO-1特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系的杀伤效应,为进一步分析NY-ESO-1蛋白作为疫苗用于治疗HCC的可能性提供实验支持.方法:从HLA-A2阳性的肝癌患者体内分离出外周血单个核细胞,用NY-ESO-1肽段体外诱导特异性杀伤性T淋巴细胞,并通过酶联免疫斑点法分析特异性杀伤性T淋巴细胞对稳定表达NY-ESO-1蛋白的HCC细胞系HepG2细胞的杀伤效应.结果:转染了NY-ESO-1的HepG2细胞(HLA-A2+)可有效地被NY-ESO-1157-165抗原肽诱导的特异性CD8+ T淋巴细胞所识别.效应细胞中大量GrB的释放表明其对稳定转染了NY-ESO-1基因的HepG2细胞有很强的杀伤作用.结论:HepG2细胞中表达的NY-ESO-1蛋白可被此肝癌细胞有效地加工处理,而且HLA-A2限制性的抗原肽NY-ESO-1157-165也可被有效地提呈到细胞表面,从而被效应T细胞所识别.
作者：乔欢；钱晓萍；张华刚；田婵；陈慰峰 刊期： 2005年第06期
目的:阐明雄激素与前列腺癌中雄激素应答基因PTTG1(pituitary tumor transforming gene 1)表达的关系.方法:选择基因芯片筛选的大鼠前列腺雄激素应答基因PTTG1,应用Northern Blot检测其在去势大鼠补充雄激素Mib(Mibolerone)前后在前列腺组织中的表达.应用免疫组化检测PTTG1在人前列腺癌组织中的表达,进一步以Northern Blot检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP及雄激素非依赖性前列腺癌细胞系 PC3和DU145中PTTG1的表达情况.结果:PTTG1在去势7 d的大鼠前列腺组织中没有表达,而补充Mib 2 d后即有显著的表达;PTTG1主要表达于人前列腺癌上皮细胞;0.1 nmol/L Mib作用48 h可显著上调LNCaP细胞PTTG1的表达;与LNCaP细胞比较,PC3和DU145中PTTG1的基础表达水平更高.结论:雄激素可显著上调大鼠前列腺组织及人前列腺癌细胞中PTTG1的表达,提示PTTG1可能在人前列腺癌的发生、发展中发挥重要的作用.
作者：辛殿祺；朱绪辉；来永庆；由然；那彦群；郭应禄；毛泽斌 刊期： 2005年第06期
目的:比较体外给药时灵芝孢子多糖(Gl-SP)和灵芝破壁孢子多糖(Gl-BSP)对小鼠脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞免疫调节活性的影响.方法:噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖、混合淋巴细胞培养反应(MLR)、自然杀伤细胞(NK细胞)活性;比色分析检测巨噬细胞吞噬中性红的能力;流式细胞术测定脾T细胞亚群;ELISA法测定白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)含量,生物法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)活性,Griess法测定NO含量.结果:当质量浓度为0.2～12.8 mg/L时两种多糖均可促进淋巴细胞增殖及丝裂原诱导的淋巴细胞增殖,提高NK细胞活性,增强腹腔巨噬细胞吞噬能力并促进TNF-α和NO分泌.两种多糖均可促进MLR,在质量浓度为12.8 mg/L时,Gl-BSP促增殖作用明显强于Gl-SP,Gl-SP或Gl-BSP(0.2～12.8 mg/L)可显著增加IL-2、IFN-γ的分泌,但相同浓度的Gl-BSP增加IL-2和IFN-γ分泌的作用均强于Gl-SP.在一定的浓度范围内,两种多糖均可显著增加双向MLR反应中CD3+T、CD4+T和CD8+T细胞百分率,Gl-BSP在质量浓度为0.2～12.8 mg/L或3.2～12.8 mg/L时,增加CD4+或CD8+T细胞的作用较Gl-SP更为显著.在质量浓度为0.2～0.8 mg/L时,Gl-BSP组的CD4+T和CD8+T细胞的比值大于Gl-SP组.结论:Gl-SP和Gl-BSP在体外试验中具有相似的免疫调节活性,Gl-BSP的某些免疫调节作用强于Gl-SP.
作者：王鹏云；王赛贞；林树钱；林志彬 刊期： 2005年第06期
目的:研究钙调神经磷酸酶(CaN)信号途径与蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)和蛋白激酶A(PKA)的相互调节在哮喘气道重塑发病中的作用.方法:建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,实验分为:哮喘组、CaN抑制剂环孢霉素A(CsA)组和对照组,采用磷酸化和去磷酸化方法测定肺组织CaN活性、MAPK活性、PKC活性、PKA活性.在离体培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中,以尾加压素Ⅱ(UⅡ)为刺激因素,测定CaN,PKC和MAPK活性以及它们之间的相互调节.结果:(1)哮喘组CaN活性、MAPK活性和PKC活性分别较对照组高19%(P<0.01)、28%(P<0.01)和35%(P<0.05),PKA活性较对照组低53%(P<0.01).CsA组CaN活性、MAPK活性和PKC活性分别较哮喘组低52%(P<0.01)、18%(P<0.05)和52%(P<0.01),PKA活性较哮喘组高2.65倍(P<0.01).(2)UⅡ 10-7 mol/L孵育20 min引起ASMC PKC和MAPK活性分别较对照组增加44%和24%(P<0.01),并呈时间依赖性引起ASMC中CaN活性增加,24 h为对照组的1.67倍(P<0.01).(3)与单用UⅡ 10-7 mol/L组比,CaN抑制剂CsA 10-6 mol/L使CaN活性降低了45%(P<0.01),MAPK抑制剂PD98059 50 μmol/L对CaN活性无明显影响(P>0.05),PKC抑制剂H7 50 μmol/L使CaN活性下降21%(P<0.05).(4)CsA 10-6 mol/L 作用使UⅡ 10-7 mol/L刺激的ASMC PKC活性下降了14%(P<0.05),对MAPK活性无明显影响(P>0.05).结论:在哮喘气道重塑的发生过程中,CaN与MAPK、PKC和PKA之间存在相互调节.
作者：陈亚红；姚婉贞；赵鸣武；庞永政；唐朝枢 刊期： 2005年第06期
目的:建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础.方法:构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的适时间和浓度.通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响.结果:转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外.四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白.四环素质量浓度在2 mg/L并作用60 h其表达水平即可达到高峰.P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用.结论:已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型.
作者：龚曼曼；孟麟；刘文斌；张建芝；寿成超 刊期： 2005年第06期
北京大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：北京大学
