学术投稿

人AADC基因的克隆

张智;赵焕英;段德义;徐群渊;杨慧

关键词:芳香族左旋氨基酸脱羧酶, 帕金森病, 基因治疗
摘要:为克隆表达人芳香族左旋氨基酸脱羧酶的基因,以了解此基因在多巴胺代谢过程中的作用,从人类胎儿黑质组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增1 442 bp的cDNA片段,将此片段克隆于pGEM-T载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析.结果表明克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的人AADC的cDNA全序列.
首都医科大学学报杂志相关文献
  • 人AADC基因的克隆

    为克隆表达人芳香族左旋氨基酸脱羧酶的基因,以了解此基因在多巴胺代谢过程中的作用,从人类胎儿黑质组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增1 442 bp的cDNA片段,将此片段克隆于pGEM-T载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析.结果表明克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的人AADC的cDNA全序列.

    作者:张智;赵焕英;段德义;徐群渊;杨慧 刊期: 2002年第01期

  • 电镜观察糖尿病模型大鼠神经网膜的超微结构

    为观察糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞的损害是否早于视网膜微循环改变,用链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)建立糖尿病动物模型,分别于模型建立后1周、2周、1月处死大鼠,电镜观察大鼠视网膜及其微血管的变化.结果:与正常对照组比较,糖尿病大鼠于模型建立后1周、2周,其神经网膜神经细胞和视网膜微血管无明显改变;模型建立后1月,其视网膜色素上皮层、神经网膜微血管基底膜和周细胞无明显改变,但其神经网膜从外丛状层至神经纤维层有明显变化,表现为线粒体数目减少,线粒体肿胀,嵴变短、消失和髓样变性.神经纤维层和内、外网状层细胞突起水肿,在神经纤维层尤其明显,在神经节细胞层可见暗细胞形成.由于神经纤维层细胞突起水肿明显,压迫其周围微血管,导致微血管管腔狭窄,甚至闭锁,但微血管内皮细胞及基底膜未见异常.结果提示:糖尿病早期大鼠在视网膜神经细胞损害已发生时,视网膜微血管内皮细胞和基底膜超微结构未见异常,神经网膜神经细胞的损害可能是糖尿病视网膜病变(DR)的早期表现.

    作者:卢艳;姬志娟;吴航;赵志炜;盛树力 刊期: 2002年第01期

  • PAMAM树状大分子对烟酸增溶效果的影响

    为研究聚酰胺-胺(PAMAM)树状大分子对弱酸性亲脂性药物烟酸的增溶作用,合成了以乙二胺为核的1.0~6.0代(G)PAMAM树状大分子,研究了不同pH值、不同质量浓度的树状大分子对烟酸增溶的影响.结果:pH值、质量浓度均影响PAMAM树状大分子溶液对烟酸的增溶效果.提示:增溶的主要原因是由于树状大分子的氨基与烟酸的羧基之间存在静电作用,PAMAM树状大分子可作为亲脂性弱酸性药物的增溶剂.

    作者:叶玲;张锦楠;周玉兰;顾微;刘永利;扈金平;朴东旭 刊期: 2002年第01期

  • 新生儿产伤性锁骨骨折141例分析

    为探讨分娩过程中引起新生儿锁骨骨折的有关因素,对我院17年间分娩的32 740例活产婴儿中发生锁骨骨折的141例进行回顾性分析.结果:阴道难产组新生儿锁骨骨折发生率高于阴道顺产组,随新生儿体质量增加,新生儿锁骨骨折发生率增高.新生儿锁骨骨折临床表现为患侧锁骨上窝肿胀、骨擦音;X线摄片为确诊手段.

    作者:姜桂英;吴庆庆 刊期: 2002年第01期

  • 实验性脊髓损伤的电生理检查法

    脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)实验研究的观察方法,主要包括脊髓功能观察、神经电生理检查和组织学观察等[1,2].脊髓功能观察,例如Tarlov运动分级法和斜坡法,虽比较直观,但是这种方法需要动物的配合,并且存在人为的主观因素干扰[3].诱发电位测定(神经电生理检查的主要方法)一直被认为是一种评价脊髓功能完整性的客观、可靠的指标[1~4].诱发电位(EP)是指人工或自然的刺激所引起的中枢神经的电位变化,可大体分为感觉诱发电位(sensory evoked potential,SEP)和运动诱发电位(motor evoked potential,MEP)[1].

    作者:邵雪梅;张茂先 刊期: 2002年第01期

  • 高密度无血清培养肝细胞的研究

    利用高密度无血清培养肝细胞,以观察体外肝细胞形态和分化特点、白蛋白合成及其mRNA表达,为生物人工肝提供理想的肝细胞来源.结果:培养肝细胞48 h后逐渐形成肝板样网络结构,伴胆小管形成.原位杂交显示所培养肝细胞具有良好的白蛋白mRNA表达.结果提示高密度无血清培养的肝细胞可形成类似体内肝细胞的形态和功能,可为生物人工肝提供理想的肝细胞来源.

    作者:张先杰;孙家邦;孙海晨;李非 刊期: 2002年第01期

  • APP-11肽对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

    为研究APP-11肽对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用,用链脲菌素诱发大鼠糖尿病,皮下注射APP-11肽4周,进行血尿素氮、肌酐、24 h尿白蛋白测定,并取肾脏皮质切片进行电镜观察.结果,DM大鼠血糖升高,胰岛素降低,血尿素氮增加,尿白蛋白排出量明显增加.电镜显示肾小球基底膜增厚,内皮细胞孔增大,足突断裂融合.应用APP-11肽组虽然未见血糖及其调节激素的改变,但尿素氮和尿白蛋白排出量明显减少;肾皮质超微结构趋于正常.结果提示APP-11肽对DM肾病具有明显改善作用,但有关机制还有待进一步研究.

    作者:贾克宝;赵志伟;张人玲;艾厚喜;赵咏梅;姬志娟;孙异临;盛树力 刊期: 2002年第01期

  • 氧感受与缺氧诱导因子-1

    氧的供求平衡是细胞代谢和生存所必需的.人与动物可通过多种生理反应适应缺氧,如促红细胞生成素(EPO)增多,使红细胞增多;酪氨酸羟化酶(TH)的诱导,通过颈动脉体促进肺通气;血管内皮生长因子(VEGF)增多,刺激血管再生;糖酵解酶增多,提供缺氧时所需能量[1].这些蛋白的基因调节有赖于精确地感受氧分压和后继的信号转导过程,从而活化缺氧诱导因子-1(HIF-1).HIF-1是一种异源二聚体转录因子,能与DNA结合,是效应基因转录的关键因子,并且是缺氧诱导基因转录和缺氧信息传递的共同路径[2].

    作者:唐希;吕国蔚 刊期: 2002年第01期

  • 体外冲击波碎石术治疗上尿路结石1 000例

    自1997年8月至1999年4月应用国产KDE-2D型碎石机治疗上尿路结石病人1000例,其中男731例,女269例,男∶女为2.72∶1;年龄5~81岁.结石共1136枚,其中肾结石248枚(铸型32枚),输尿管结石888枚(上段385枚,中段57枚,下段446枚).结石大小0.3 cm×(0.5~2.5) cm×4.0 cm.其中肾、输尿管和膀胱(KUB)平片不显影结石155枚.治疗方法:采用国产KDE-2D型碎石机,为X线定位水囊式机型,共治疗1534次.所有病人均未行任何麻醉,工作电压6.9~14.6 kV,每次治疗次数300~3500次.

    作者:张弋;孙玉成;王健;李进;高伟;王升晗 刊期: 2002年第01期

  • 石蜡切片的NOS免疫染色技术介绍

    一氧化氮是重要的肺动脉压介导/调节因子.测定一氧化氮的变化具有重要的临床和实验意义.由于一氧化氮的半衰期仅3~5 s,较难测定,故多采用测定其合成关键酶一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)的方法来反映一氧化氮的变化.国内外现多采用冰冻切片进行免疫组化染色[1~3]测定NOS,但此方法存在切片厚,结构易变形,染色效果及定位不够理想,标本不易长期保存等缺点.1998年9月至2000年4月,我们在肺动脉高压机制的研究中,采用石蜡切片方法进行NOS的免疫组化染色,克服了冰冻切片带来的不足,取得了较好的实验效果.

    作者:刘国贞;栾丽英;周光德;陈瑞芬;宋爱利 刊期: 2002年第01期

  • 朝阳医院和Nijmegen大学医院医师对前列腺增生性疾病病理诊断差异的比较

    由朝阳医院和荷兰Nijmegen大学医院的医师,分别对朝阳医院1996年1至8月连续104例前列腺增生性疾病的组织病理标本,应用Gleason国际分期标准进行诊断,并比较双方诊断结果.结果94例诊断相符(90.4%);10例有一定程度差异(9.6%),其中6例有轻微差异(5.8%),4例差异较大(3.8%).结果表明对相同的病理标本双方的诊断结果没有显著性差异,为双方进一步合作探讨中国与西方国家前列腺疾病发病率差异的原因奠定了基础.

    作者:张鑫;高居忠;管德林;许建军 刊期: 2002年第01期

  • 功能性子宫出血内膜血管CD34和LN的变化

    为探讨功能性子宫出血的原因,采用组织学和免疫组织化学方法,对功能性子宫出血的内膜与正常内膜进行了组织学和CD34及层粘连蛋白(LN)的比较观察.组织学观察显示:功能性子宫出血的内膜发育呈不同步状态,并有不同程度的局灶性出血,出血部位的血管多呈断裂像.经图像分析仪测定显示:出血内膜组织的血管内皮细胞CD34和血管基膜的LN阳性反应明显减弱.提示功能性子宫出血与血管中CD34和LN的减少有关.

    作者:张国境;路欣;许晴;上官芳芳;翁静;朱西庚;田素杰 刊期: 2002年第01期

  • 不同透析膜对凝血纤溶功能的影响

    为观察透析过程中不同透析膜对凝血纤溶作用的影响,对12例维持性血液透析患者采用交叉设计,使用铜仿膜和聚砜膜透析器透析,应用ELISA法检测透析过程中凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)、纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(PAP)、D-二聚体的动态变化,并用扫描电镜观察透析后透析器表面凝血情况.结果显示,用2种透析膜血透过程中TAT、PAP、D-二聚体均显著高于透析前水平,用铜仿膜透析TAT、PAP、D-二聚体均显著高于用聚砜膜.提示,从凝血纤溶激活看,聚砜膜生物相容性好于铜仿膜,长期使用生物相容性好的透析器可能会减少出凝血并发症.

    作者:孙懿;刘惠兰 刊期: 2002年第01期

  • 动物内脏微量元素测定预处理方法的改进

    样品的预处理是生物材料样品中微量元素测定的重要环节,据文献[1~3]报道,预处理大都采用混合酸(HNO3∶HClO4=4∶1) 对生物样品进行消化,但此消化法存在以下不足:①所需消化温度偏高,有的内脏中脂肪含量较多,温度过高,反应过于猛烈,易爆,损失大;②操作过于烦琐.为防止炭化,需操作者不断进行监测和补加混酸,试剂消耗量大,且产生大量的有害气体,对环境的污染相当严重,对操作人员身体健康造成很大危害,而且消化后,赶酸费时.本研究对预处理方法进行了改进,现报道如下.

    作者:张淑华;郭爱民;王晖;尹娜 刊期: 2002年第01期

  • 二价锰和三价锰对神经瘤细胞线粒体膜电位的影响

    采用0.25、0.50、0.75 mmol/L的二价锰和三价锰分别对神经瘤细胞(SH-SY5Y)染毒24 h,通过线粒体特异性染料罗丹明123进行荧光标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察染毒细胞的膜电位变化,并与未染毒的细胞对照组进行比较.结果表明二价锰和三价锰均可引起线粒体膜电位的改变(P<0.05),且随剂量增高,有降低趋势.此外,在0.50 mmol/L和0.75 mmol/L剂量下,三价锰引起的线粒体膜电位改变比二价锰更为明显.提示线粒体膜电位的改变是锰神经细胞毒性作用的重要环节.

    作者:刘祯;李国君;张杰;周春艺;李鹏高;赵春礼;杨慧;Wei Zheng;景鹏 刊期: 2002年第01期

  • 局部电位起源的判断方法

    细胞某部位产生的局部电位虽然不能无衰减地传到远方,但可借助细胞的电缆特性扩布到数百微米以外的邻近部位[1].本实验室根据局部电流作用原理,利用对应记录胞内、外电位的方法来推断局部电位的起源.实践证明这种方法是简便可靠的.

    作者:童学红;虞棻;李效义;谢燕;张淑华;张茂先;张英才 刊期: 2002年第01期

  • 用薄层层析法分离菠菜中的色素

    薄层层析法是一种常用的化学分析方法,用以往的薄层层析法分离菠菜中的5种色素(叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素和姜黄素),存在着提取不完全、分离效果差、展开剂毒性大等问题[1~4],不适合在教学中使用.本实验改进了传统的菠菜色素的提取和分离方法,采用丙酮-石油醚体系为提取剂,选择乙酸乙酯-石油醚-丙酮体系作展开剂,不但有效地提取分离了菠菜中5种色素,而且所用试剂毒性小,适于化学实验教学中使用.

    作者:宋学英;杨华;张枫;卢映霞 刊期: 2002年第01期

  • 培养小鼠原始生殖细胞饲养层体系的新方法——Sertoli细胞对小鼠原始生殖细胞营养作用的研究

    10~15日龄雄性昆明小鼠(提取SCs)和10日龄胚胎(提取PGCs).将PGCs以同样的浓度分别接种于铺有SCs饲养层和胚胎成纤维细胞饲养层的平皿中.培养至第7天,接种在SCs饲养层的PGCs发育成集落的数量是胚胎成纤维细胞饲养层中PGCs的5倍.PGCs集落体积也略大于胚胎成纤维细胞饲养层中的集落.PGCs集落呈鸟巢状,主要分布于SCs表面,细胞紧密聚集,边界清楚.AKP检测:从生殖嵴分离、提纯的PGCs和培养皿中生长的PGCs集落均呈AKP染色阳性.

    作者:路欣;许晴;孟庆峰;上官芳芳;史小林 刊期: 2002年第01期

  • 急性出血坏死性胰腺炎的发病机制

    急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)的发病机制十分复杂,近年来大量的实验研究证实,其发病机制除自身消化外,还有磷脂酶A和血栓素A2(TXA2)、胰蛋白酶和抗胰蛋白酶系统、溶酶体酶、氧自由基、胰血循环障碍和细胞膜稳定性、炎症介质等因素[1].特别是胰腺微循环障碍在本病发病中的作用越来越受到重视.

    作者:赵敏;陈瑞芬 刊期: 2002年第01期

  • 新生儿锁骨骨折与钙代谢

    新生儿锁骨骨折是新生儿产伤中为常见的1种,为了研究其是否与钙代谢有关,对我院1990年1月至1999年11月发生的新生儿锁骨骨折做了有关钙代谢方面的观察.

    作者:吴广琴;李雪梅;贾忠琴 刊期: 2002年第01期

首都医科大学学报杂志

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