学术投稿

石蜡切片的NOS免疫染色技术介绍

刘国贞;栾丽英;周光德;陈瑞芬;宋爱利

关键词:石蜡切片, 免疫染色, 一氧化氮合酶, 免疫组化染色, 氮的变化, 测定, 冰冻切片, 肺动脉压, 方法, 临床和实验, 实验效果, 染色效果, 调节因子, 关键酶, 高压机, 半衰期, 理想, 结构, 合成, 国内
摘要:一氧化氮是重要的肺动脉压介导/调节因子.测定一氧化氮的变化具有重要的临床和实验意义.由于一氧化氮的半衰期仅3~5 s,较难测定,故多采用测定其合成关键酶一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)的方法来反映一氧化氮的变化.国内外现多采用冰冻切片进行免疫组化染色[1~3]测定NOS,但此方法存在切片厚,结构易变形,染色效果及定位不够理想,标本不易长期保存等缺点.1998年9月至2000年4月,我们在肺动脉高压机制的研究中,采用石蜡切片方法进行NOS的免疫组化染色,克服了冰冻切片带来的不足,取得了较好的实验效果.
首都医科大学学报杂志相关文献
  • 局部电位起源的判断方法

    细胞某部位产生的局部电位虽然不能无衰减地传到远方,但可借助细胞的电缆特性扩布到数百微米以外的邻近部位[1].本实验室根据局部电流作用原理,利用对应记录胞内、外电位的方法来推断局部电位的起源.实践证明这种方法是简便可靠的.

    作者:童学红;虞棻;李效义;谢燕;张淑华;张茂先;张英才 刊期: 2002年第01期

  • 动物内脏微量元素测定预处理方法的改进

    样品的预处理是生物材料样品中微量元素测定的重要环节,据文献[1~3]报道,预处理大都采用混合酸(HNO3∶HClO4=4∶1) 对生物样品进行消化,但此消化法存在以下不足:①所需消化温度偏高,有的内脏中脂肪含量较多,温度过高,反应过于猛烈,易爆,损失大;②操作过于烦琐.为防止炭化,需操作者不断进行监测和补加混酸,试剂消耗量大,且产生大量的有害气体,对环境的污染相当严重,对操作人员身体健康造成很大危害,而且消化后,赶酸费时.本研究对预处理方法进行了改进,现报道如下.

    作者:张淑华;郭爱民;王晖;尹娜 刊期: 2002年第01期

  • 二价锰和三价锰对神经瘤细胞线粒体膜电位的影响

    采用0.25、0.50、0.75 mmol/L的二价锰和三价锰分别对神经瘤细胞(SH-SY5Y)染毒24 h,通过线粒体特异性染料罗丹明123进行荧光标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察染毒细胞的膜电位变化,并与未染毒的细胞对照组进行比较.结果表明二价锰和三价锰均可引起线粒体膜电位的改变(P<0.05),且随剂量增高,有降低趋势.此外,在0.50 mmol/L和0.75 mmol/L剂量下,三价锰引起的线粒体膜电位改变比二价锰更为明显.提示线粒体膜电位的改变是锰神经细胞毒性作用的重要环节.

    作者:刘祯;李国君;张杰;周春艺;李鹏高;赵春礼;杨慧;Wei Zheng;景鹏 刊期: 2002年第01期

  • PAMAM树状大分子对烟酸增溶效果的影响

    为研究聚酰胺-胺(PAMAM)树状大分子对弱酸性亲脂性药物烟酸的增溶作用,合成了以乙二胺为核的1.0~6.0代(G)PAMAM树状大分子,研究了不同pH值、不同质量浓度的树状大分子对烟酸增溶的影响.结果:pH值、质量浓度均影响PAMAM树状大分子溶液对烟酸的增溶效果.提示:增溶的主要原因是由于树状大分子的氨基与烟酸的羧基之间存在静电作用,PAMAM树状大分子可作为亲脂性弱酸性药物的增溶剂.

    作者:叶玲;张锦楠;周玉兰;顾微;刘永利;扈金平;朴东旭 刊期: 2002年第01期

  • 肝静脉阻断后肝癌、癌周、肺组织及血浆中粘附分子-1的表达

    采用EnVisionTM免疫组化方法,观察肝癌模型Wistar大鼠肝静脉阻断后肝癌及癌周组织、邻近肝叶、肺组织粘附分子-1(ICAM-1)的表达变化,采用免疫测定法观察血浆中ICAM-1的变化,以探讨肝静脉阻断对肝癌生长、侵袭和转移的影响.发现:肝静脉阻断后肝癌组织ICAM-1的表达率为18.8%(9/48),较对照组(66.7%,8/12)明显下调(P<0.01);癌周组织ICAM-1的阳性表达率为33.3%(16/48),肝左中叶ICAM-1的阳性表达率为39.6%(19/48),与对照组比较均未见差异,而肺组织ICAM-1的表达率为70.8%(34/48),明显高于对照组(25.0%,3/12),P<0.05).肝静脉阻断后血浆ICAM-1含量明显高于肝静脉阻断前(P<0.01),对照组手术前后血浆ICAM-1含量无明显变化.结果提示肝癌肝静脉阻断可促进癌细胞向远隔器官(肺组织)转移.

    作者:徐光勋;潘承恩;刘青光 刊期: 2002年第01期

  • 新生儿产伤性锁骨骨折141例分析

    为探讨分娩过程中引起新生儿锁骨骨折的有关因素,对我院17年间分娩的32 740例活产婴儿中发生锁骨骨折的141例进行回顾性分析.结果:阴道难产组新生儿锁骨骨折发生率高于阴道顺产组,随新生儿体质量增加,新生儿锁骨骨折发生率增高.新生儿锁骨骨折临床表现为患侧锁骨上窝肿胀、骨擦音;X线摄片为确诊手段.

    作者:姜桂英;吴庆庆 刊期: 2002年第01期

  • 实验性脊髓损伤的电生理检查法

    脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)实验研究的观察方法,主要包括脊髓功能观察、神经电生理检查和组织学观察等[1,2].脊髓功能观察,例如Tarlov运动分级法和斜坡法,虽比较直观,但是这种方法需要动物的配合,并且存在人为的主观因素干扰[3].诱发电位测定(神经电生理检查的主要方法)一直被认为是一种评价脊髓功能完整性的客观、可靠的指标[1~4].诱发电位(EP)是指人工或自然的刺激所引起的中枢神经的电位变化,可大体分为感觉诱发电位(sensory evoked potential,SEP)和运动诱发电位(motor evoked potential,MEP)[1].

    作者:邵雪梅;张茂先 刊期: 2002年第01期

  • 心肌细胞钙离子荧光强度数据的数值处理方法比较

    为比较多种用于减少非周期生理信号序列中的随机误差的线性叠加法,分析心房肌细胞的钙离子荧光强度满足的分布函数,提取特征参数(斜率和时间常数),对6个豚鼠心房肌细胞,建立3种不同浓度的CGRP组和空白对照组,用共聚焦显微镜记录下24组心房肌细胞的钙离子荧光强度数据;对这些数据进行校准、叠加、非线性拟合和提取特征参数.叠加方法包括等权平均叠加、主分量叠加、奇异值分解和大似然叠加.选择Gamma分布函数作为拟合函数,使用小二乘法进行拟合,并从Gamma函数计算特征参数.结果:①给出4种叠加方法的加权系数,4种线性叠加法的加权系数比较接近,特别是主分量法、奇异值分解法和大似然法的加权系数几乎一样.对于主分量法,6个细胞的加权系数分别是0.162、0.171、0.167、0.162、0.170和0.168.②叠加后的荧光强度特征更加明显.③给出特征参数(斜率和时间常数).用主分量叠加法得到的3种不同浓度水平的CGRP组和空白对照组的斜率分别是1 277、1 326、2 039和818,时间常数分别是0.33、0.29、0.19和0.27.结果提示:对于只具有一个主要成分的实验数据,推荐使用主分量叠加法.这种方法比较简单,用它可以得到很好的叠加结果,拟合出很好的分布函数并提取出特征参数.

    作者:阎岩;刘学宗;王先明;钮伟真 刊期: 2002年第01期

  • 氧感受与缺氧诱导因子-1

    氧的供求平衡是细胞代谢和生存所必需的.人与动物可通过多种生理反应适应缺氧,如促红细胞生成素(EPO)增多,使红细胞增多;酪氨酸羟化酶(TH)的诱导,通过颈动脉体促进肺通气;血管内皮生长因子(VEGF)增多,刺激血管再生;糖酵解酶增多,提供缺氧时所需能量[1].这些蛋白的基因调节有赖于精确地感受氧分压和后继的信号转导过程,从而活化缺氧诱导因子-1(HIF-1).HIF-1是一种异源二聚体转录因子,能与DNA结合,是效应基因转录的关键因子,并且是缺氧诱导基因转录和缺氧信息传递的共同路径[2].

    作者:唐希;吕国蔚 刊期: 2002年第01期

  • 石蜡切片的NOS免疫染色技术介绍

    一氧化氮是重要的肺动脉压介导/调节因子.测定一氧化氮的变化具有重要的临床和实验意义.由于一氧化氮的半衰期仅3~5 s,较难测定,故多采用测定其合成关键酶一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)的方法来反映一氧化氮的变化.国内外现多采用冰冻切片进行免疫组化染色[1~3]测定NOS,但此方法存在切片厚,结构易变形,染色效果及定位不够理想,标本不易长期保存等缺点.1998年9月至2000年4月,我们在肺动脉高压机制的研究中,采用石蜡切片方法进行NOS的免疫组化染色,克服了冰冻切片带来的不足,取得了较好的实验效果.

    作者:刘国贞;栾丽英;周光德;陈瑞芬;宋爱利 刊期: 2002年第01期

  • 儿童卡波希肉瘤与HIV等相关病毒感染

    为提高对小儿卡波希肉瘤 (Kaposi sarcoma,KS)的认识,对14例非洲小儿KS的临床资料、HIV抗体检测结果和组织病理学结果进行分析.结果:14例患儿活组织病理学观察均符合KS诊断,其中12例(85.71%)HIV抗体阳性.HIV抗体阳性的患儿中,婴幼儿组(6月~3岁)5例(41.7%),4~6岁1例(8.3%),7~9岁3例(25.0%),10~14岁3例(25.0%);淋巴结型KS占75%,皮肤型占25%.提示:小儿HIV感染相关型KS并不少见,以婴幼儿组发病率高,以淋巴结型KS为主要临床表现类型;应提高对本病的认识,及时诊断患儿.

    作者:王秀兰;张长淮 刊期: 2002年第01期

  • APP-11肽对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

    为研究APP-11肽对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用,用链脲菌素诱发大鼠糖尿病,皮下注射APP-11肽4周,进行血尿素氮、肌酐、24 h尿白蛋白测定,并取肾脏皮质切片进行电镜观察.结果,DM大鼠血糖升高,胰岛素降低,血尿素氮增加,尿白蛋白排出量明显增加.电镜显示肾小球基底膜增厚,内皮细胞孔增大,足突断裂融合.应用APP-11肽组虽然未见血糖及其调节激素的改变,但尿素氮和尿白蛋白排出量明显减少;肾皮质超微结构趋于正常.结果提示APP-11肽对DM肾病具有明显改善作用,但有关机制还有待进一步研究.

    作者:贾克宝;赵志伟;张人玲;艾厚喜;赵咏梅;姬志娟;孙异临;盛树力 刊期: 2002年第01期

  • 人AADC基因的克隆

    为克隆表达人芳香族左旋氨基酸脱羧酶的基因,以了解此基因在多巴胺代谢过程中的作用,从人类胎儿黑质组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增1 442 bp的cDNA片段,将此片段克隆于pGEM-T载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析.结果表明克隆的cDNA与GenBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的人AADC的cDNA全序列.

    作者:张智;赵焕英;段德义;徐群渊;杨慧 刊期: 2002年第01期

  • 高密度无血清培养肝细胞的研究

    利用高密度无血清培养肝细胞,以观察体外肝细胞形态和分化特点、白蛋白合成及其mRNA表达,为生物人工肝提供理想的肝细胞来源.结果:培养肝细胞48 h后逐渐形成肝板样网络结构,伴胆小管形成.原位杂交显示所培养肝细胞具有良好的白蛋白mRNA表达.结果提示高密度无血清培养的肝细胞可形成类似体内肝细胞的形态和功能,可为生物人工肝提供理想的肝细胞来源.

    作者:张先杰;孙家邦;孙海晨;李非 刊期: 2002年第01期

  • 18F-FDG PET脑显像对AD的诊断和分度

    为探讨18F-FDG(脱氧萄葡糖)PET脑显像对Alzheimer病(AD)的诊断和评价程度的标准,对AD组患者和正常老年组行静脉注射18F-FDG后行PET脑断层显像,求出双侧额叶、顶叶、颞叶、枕叶、小脑皮质、基底节和丘脑的单位容积平均计数值,然后计算出各结构计数与小脑计数的比值.结果显示,正常对照组(19例)大脑各叶皮质、基底节和丘脑的计数分别与小脑计数的比值相当稳定,变异范围较窄,变异系数2.78%~8.95%.以正常对照组顶叶、额叶、颞叶皮质与小脑计数比值的均数减去2个标准差作为判断代谢异常减低的界值,则轻度、中度、重度AD患者的灵敏度分别为66.7%(4/6),85.7%(6/7),100%(4/4);正常对照组无1例被误诊为AD,特异性为100%.17例AD患者大脑皮质放射性减低的范围随痴呆程度加重而扩大.轻度AD只有顶叶受累,中度和重度AD颞叶和额叶也受累,其中左额叶与小脑的计数比值减低程度是区别中度和重度AD的重要指标.结果表明,将顶叶、额叶、颞叶与小脑计数比值减低的范围和程度相结合,可以诊断AD并对AD痴呆程度做出较准确的评价.

    作者:苏玉盛;马云川;张新卿;李德鹏;张琳瑛;尚建文 刊期: 2002年第01期

  • 缺氧预适应过程中的小鼠脑一氧化氮下调

    Downregulation of nitric oxide in the brain of mice during their hypoxic preconditioning.J Appl Physiol 91:1193~1198,2001.An animal model of hypoxic preconditioning was produced in mice by repeated exposure to autohypoxic condition.The animals' tolerance times to hypoxia were 1.7,1.8,2.1 and 2.3 times longer in runs 2,3,4 and 5,respectively,than that in run 1,and their oxygen consumption and heart and respiration rates were progressively and significantly slowed down during the repetitive exposure to hypoxia.L-arginine concentration,nitric oxide (NO) synthase-positive cells,NO synthase activity,and NO content in the whole brain and the subregions telencephalon,diencephalons,and brain stem were significantly increased during the first exposure and were,instead of continuing to increase,significantly decreased in run 4 after the second and third exposure.Tolerance times under the hypoxic condition were significantly shortened and prolonged when preadministration of L-arginine and its analog,respectively,was made.These results indicate that NO in the brain is downregulated under condition of hypoxic preconditioning and negatively involved in increased tolerance to hypoxia.

    作者:吕国蔚;刘宏雁 刊期: 2002年第01期

  • 不同透析膜对凝血纤溶功能的影响

    为观察透析过程中不同透析膜对凝血纤溶作用的影响,对12例维持性血液透析患者采用交叉设计,使用铜仿膜和聚砜膜透析器透析,应用ELISA法检测透析过程中凝血酶-抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT)、纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(PAP)、D-二聚体的动态变化,并用扫描电镜观察透析后透析器表面凝血情况.结果显示,用2种透析膜血透过程中TAT、PAP、D-二聚体均显著高于透析前水平,用铜仿膜透析TAT、PAP、D-二聚体均显著高于用聚砜膜.提示,从凝血纤溶激活看,聚砜膜生物相容性好于铜仿膜,长期使用生物相容性好的透析器可能会减少出凝血并发症.

    作者:孙懿;刘惠兰 刊期: 2002年第01期

  • 功能性子宫出血内膜血管CD34和LN的变化

    为探讨功能性子宫出血的原因,采用组织学和免疫组织化学方法,对功能性子宫出血的内膜与正常内膜进行了组织学和CD34及层粘连蛋白(LN)的比较观察.组织学观察显示:功能性子宫出血的内膜发育呈不同步状态,并有不同程度的局灶性出血,出血部位的血管多呈断裂像.经图像分析仪测定显示:出血内膜组织的血管内皮细胞CD34和血管基膜的LN阳性反应明显减弱.提示功能性子宫出血与血管中CD34和LN的减少有关.

    作者:张国境;路欣;许晴;上官芳芳;翁静;朱西庚;田素杰 刊期: 2002年第01期

  • 慢性乙型肝炎的病理与临床诊断

    为提高慢性乙型肝炎临床诊断的正确性,对202例慢性乙型肝炎患者的临床表现、血清总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB)、凝血酶原活动度(PTA)、谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白/球蛋白比值(A/G)、γ-球蛋白(γ-G)和病理分级分度进行对比分析.结果显示:临床表现如乏力、食欲缺乏、厌油、腹胀、鼻/牙龈出血、肝掌、蜘蛛痣、脾静脉增宽、胆囊炎与肝组织炎症活动密切相关;TBil、ALT、γ-G上升及A/G比值、PTA下降均与肝组织炎症程度加重有关.轻度慢性肝炎以ALB和γ-G与病理符合率较高,分别为92.7%和90.2%;中度慢性肝炎以单一血液学指标为标准与病理符合率较低,为2.5%~45.0%;重度慢性肝炎PTA、ALB、TBil的单项符合率分别为41.0%、38.5%和25.6%.若对6项血液学指标综合判定,则轻、中、重度慢性肝炎临床与病理诊断符合率分别达到95.9%、77.5%和74.4%.由此可见,临床诊断时要高度重视临床症状和体征的变化,同时需结合多种血液指标综合判定.

    作者:马洪波;郎振为;金荣华;黄春;金瑞 刊期: 2002年第01期

  • 培养小鼠原始生殖细胞饲养层体系的新方法——Sertoli细胞对小鼠原始生殖细胞营养作用的研究

    10~15日龄雄性昆明小鼠(提取SCs)和10日龄胚胎(提取PGCs).将PGCs以同样的浓度分别接种于铺有SCs饲养层和胚胎成纤维细胞饲养层的平皿中.培养至第7天,接种在SCs饲养层的PGCs发育成集落的数量是胚胎成纤维细胞饲养层中PGCs的5倍.PGCs集落体积也略大于胚胎成纤维细胞饲养层中的集落.PGCs集落呈鸟巢状,主要分布于SCs表面,细胞紧密聚集,边界清楚.AKP检测:从生殖嵴分离、提纯的PGCs和培养皿中生长的PGCs集落均呈AKP染色阳性.

    作者:路欣;许晴;孟庆峰;上官芳芳;史小林 刊期: 2002年第01期

首都医科大学学报杂志

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