学术投稿

霍乱弧菌NhaA基因的扩增、克隆和初步鉴定

张世英;洪帮兴;司徒潮满;江丽芳;郭辉玉

关键词:弧菌, 霍乱/遗传学, 聚合酶链反应, 克隆, 分子
摘要:目的体外扩增、克隆霍乱弧菌O1群和O139群1 149 bp的NhaA基因片段. 方法采用PCR方法扩增NhaA基因,经限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切后用低熔点琼脂糖法回收纯化,插入pcDNA3载体的多克隆位点,构建重组体,转化大肠杆菌,并对克隆基因进行酶切鉴定. 结果分别从霍乱弧菌O1群和O139群扩增出1 149 bp的NhaA基因片段,所构建的重组体经酶切分析和预期结果一致. 结论成功扩增并克隆我国散发霍乱O1群和O139群NhaA基因,为研究霍乱流行规律和基因疫苗提供了重要的实验依据.
中华疾病控制杂志相关文献
  • 儿童神经系统药源性疾病的流行病学分析

    目的了解儿童神经系统药源性疾病(DID)的分布.方法对1960~1997年国内公开报道的154例儿童神经系统DID病例进行统计分析.结果儿童神经系统DID中经口服和母亲服用药物所致的分别为81例和6例;引起儿童神经系统DID的药物种类系抗生素居首位,以氨基糖苷类抗生素种类多见;甲氧氯普胺是引起儿童神经系统DID的常见药物,也是引起锥体外系疾病的主要药物(36例),儿童神经系统DID居前3位的是锥体外系疾病、癫痫和脑炎.结论我国儿童神经系统DID较常见,应明确小儿用药指征,杜绝药物滥用,制定个体化给药的合理方案,特别注意孕妇、哺乳期妇女的药物选择.

    作者:金嵘;郑荣远 刊期: 2001年第04期

  • 氧化、抗氧化与动脉粥样硬化

    机体氧化应激状态升高,导致LDL的氧化.氧化LDL含有大量自然LDL中并不存在的氧化产物,这些氧化产物在体外细胞培养系统中显示的结果表明其可能具有促动脉粥样硬化的作用.而有些研究却发现部分氧化产物具有抗动脉粥样硬化作用.存在于脂蛋白内的或能被动脉壁细胞摄取的抗氧化物质在一些情况下显示了促氧化作用.这些研究说明了氧化、抗氧化与动脉粥样硬化形成之间的复杂性,抗氧化治疗是否可作为心血管疾病治疗的一种手段还需做大量的研究.

    作者:祝杰;凌文华 刊期: 2001年第04期

  • 应激性溃疡出血的疗效观察

    笔者自1999年3月至2001年4月应用大黄联合凝血酶治疗应激性溃疡出血16例,现报道如下:1 资料和方法1.1 临床资料治疗组男12例,女4例,年龄23~67 a;其中慢性阻塞性肺病并呼衰3例,败血症3例,脑血管意外4例,重度有机磷中毒3例,急性心肌梗塞并室颤1例,肾功能衰竭2例.对照组男11例,女5例,年龄26~69 a;其中慢性阻塞性肺病并呼衰2例,感染性休克3例,脑血管病6例,肾功能衰竭2例,灭鼠药中毒1例,除草剂中毒2例.以上病例均有应激性溃疡的高危因素存在;既往无消化性溃疡病史,在应激后1~10 d内出现呕血和黑便,排除口咽部出血和消化道机械擦伤.两组一般资料比较无统计学差异,具有可比性.

    作者:李晓霞 刊期: 2001年第04期

  • 五河县1998~1999年中小学生视力低下调查

    对五河县中小学生1998~1999年视力低下发病率进行调查,结果如下.1 对象与方法1.1 对象全县城关地区的3所中学、4所小学所有有两年体检记录的学生.共统计分析10 529名学生体检资料,各年级学生均超过500人.1.2 方法采用对数视力表、人工照明视力检查箱,检查人员为县卫生防疫站体检组人员,检查结果记录于<中小学生体格检查表>.有一只裸眼视力<5.0者即判为视力低下.本次检查为视力低下而上学年体格记录为正常者判为新发视力低下;以新发视力低下数/(新发视力低下数+本年度正常数)×100%计算视力低下发病率.

    作者:张元友;张静 刊期: 2001年第04期

  • 鉴定致病菌毒力因子方法的进展

    综述鉴定致病菌毒力因子的分子生物学和遗传分析方法,如签名标记法、简并引物PCR、体内表达技术、差减杂交法、随机引物PCR、差异显示技术、酵母双杂交系统和噬菌体显示系统等.

    作者:吴振龙;聂军 刊期: 2001年第04期

  • 病例交叉研究

    传统流行病学方法多集中于对长期暴露所引起的慢性疾病研究,而对于急性病(如心肌梗死、车祸等)的研究相对较少,同时对照选择所造成的偏倚一直是传统流行病学研究难以克服的问题.因此,Maclure 1991年首次提出病例交叉研究(case-crossover study),它是一种用于研究短暂暴露对罕见急性病的瞬间影响的流行病学方法.该方法目前已被广泛应用于心脏病、伤害、车祸等方面的研究.1 定义及有关概念1.1 定义选择发生某种急性事件的病例,分别调查事件发生时及事件发生前的暴露情况及程度,以判断暴露危险因子与某事件有无关联及关联程度大小的一种观察性研究方法.1.2 暴露效应期即因为暴露所致的危险度增加或减少的一个时间段.如果暴露作用前有一迟滞期(delay)和/或暴露存在后遗效应期(carryover),暴露效应期则不同于暴露期.因此,暴露效应期可定义为暴露后遗效应期与迟滞期之差.每一次暴露都有一个效应期.例如,某一体力活动对身体的影响持续30 min,那么在这30 min内,个体对某些事件(如心肌梗死)的危险性增加.

    作者:胡以松 刊期: 2001年第04期

  • 乙丙型和乙戊型肝炎病毒双重感染的危险因素

    目的了解乙型病毒性肝炎(Hepatitis B)患者重叠感染丙型肝炎病毒(HCV)或戊型肝炎病毒(HEV)的危险因素. 方法对55例HBV和HCV双重感染及51例HBV和HEV双重感染病例,以1∶1配对方式选取对照,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和聚合酶链反应(PCR)法检测各型肝炎病毒感染指标,配对χ2分析和多因素条件logistic回归分析法确定危险因素. 结果单因素分析发现:输液史、牙科手术史、输血史、家庭外肝炎接触史、外餐习惯等因素与乙丙型肝炎病毒双重感染有关,其OR值分别为5.67、23.0、41.0、8.0、3.0.logistic多因素逐步回归分析,输血史为乙丙型肝炎病毒双重感染的独立危险因素.家庭成员肝炎史和家庭外肝炎接触史与乙戊型肝炎病毒双重感染有相关性,其OR值分别为35.0和12.0.家庭成员乙型肝炎史为乙戊型肝炎病毒双重感染的危险因素. 结论输血史为乙丙型肝炎病毒双重感染的危险因素,家庭成员乙型肝炎史为乙戊型肝炎病毒双重感染的危险因素.

    作者:张冠群;李艳;杨翌;汪保国;陈思东 刊期: 2001年第04期

  • 联合用药治疗晚期非小细胞肺癌20例疗效观察

    非小细胞肺癌(NSCLC),特别是晚期NSCLC,临床化疗效果多不满意.阜阳市人民医院肿瘤科自1998~2001年用国产异环磷酰胺(IFO)(江苏恒瑞制药公司生产)+足叶乙甙(VP16)+顺铂(DDP)治疗20例晚期NSCLC,结果报告如下.1 材料与方法1.1 病例选择病例均为晚期NSCLC,其中术后复发2例,所有病例均有病理学诊断依据.其中鳞癌10例、腺癌8例、低分化腺癌1例、粘液腺癌1例,20例中男性15例、女性5例,年龄35~70 a,中位年龄52 a.20例病人中,Ⅲ期1例,Ⅵ期19例.

    作者:胡文军;杨洲;张武;孙翠玲 刊期: 2001年第04期

  • 铜陵地区10 528例初诊皮肤病临床分析

    为了解中小城市综合性医院门诊皮肤病的分布情况,以便更好地开展门诊临床工作.本文统计分析例,男∶女之比为1.67∶1;14 a以下2 008例占19.1%,其中男1 134例,女874例;60 a以上907例占8.8%,其中男710例,女197例.共涉及400余种皮肤病;少见病占5%,疑难病占1%.由表1可见变态反应性皮肤病占57%以上,其中第1位是皮炎,第2位是湿疹,这两类病也是门诊就诊率高的皮肤病.临床诊断上有皮炎、湿疹之分,但这两种病从广义上讲性质相同[2],因此实际工作中临床医师可根据自己的经验、皮疹状态或部位、年龄、习惯,作出相应的诊断,不必为既像皮炎又像湿疹的患者在诊断上徘徊.荨麻疹的百分比相当高,占4%,居第4位,属皮肤科急诊之列,患者以突发剧痒风团块,部分伴有胃肠道症状为特征,应引起皮肤科临床医师重视.阴囊湿疹占0.9%,是困扰男性的常见顽固性皮肤病.

    作者:沈善峰;许玉林 刊期: 2001年第04期

  • 海南省新生儿破伤风高发区外环境破伤风杆菌检测

    新生儿破伤风(neonatal tetanus,NT)是新生儿感染破伤风杆菌导致发病及死亡的疾病,已成为发展中国家重要的公共卫生问题.消灭NT是世界卫生组织(WHO)提出的2000年全球性目标.海南省属NT高发地区.发病率2.73%,病死率90.8%[1],占新生儿死因的首位,为准确掌握NT发病的环境因素,确定预防策略,笔者于1997年11月对海南省陵水县进行NT高发区外环境相关因素破伤风杆菌检测分析,结果报告如下.野病毒.自1992年起,安徽省已连续8年未发现脊灰野病毒.

    作者:周笑娉;陈忠良;刘长秀 刊期: 2001年第04期

  • 猬迭宫绦虫幼虫含重复序列的cDNA的分子克隆

    目的从分子水平研究猬迭宫绦虫幼虫--裂头蚴的某些蛋白抗原的基因结构.方法用鼠抗裂头蚴多克隆抗体筛选裂头蚴cDNA文库,筛选出的阳性克隆,经亚克隆,测序后,分析其一级结构特点.以克隆出的cDNA 作探针进行Northern杂交实验,检测mRNA的长度.结果从cDNA文库中筛选出两个克隆(长度分别是366 bp和458 bp).两个克隆的5'端都没有起始密码;3'端都没有poly(A),但是其中一个克隆有poly(A)信号.两个克隆都有一个由123个核苷酸组成的重复单位,其中只有一个核苷酸不同.重复单位编码的41个氨基酸内有一个糖基位点,中性氨基酸占41.46%.Northern杂交结果显示,裂头蚴从1.5 kb到4 kb处有多个很强的杂交带,而成虫没有杂交带.结论裂头蚴体内含有丰富的由重复单位组成的分子量大小不同的抗原.

    作者:刘殿武;朱冰;王晓波;丁月新;刘树贤 刊期: 2001年第04期

  • 霍乱弧菌NhaA基因的扩增、克隆和初步鉴定

    目的体外扩增、克隆霍乱弧菌O1群和O139群1 149 bp的NhaA基因片段. 方法采用PCR方法扩增NhaA基因,经限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切后用低熔点琼脂糖法回收纯化,插入pcDNA3载体的多克隆位点,构建重组体,转化大肠杆菌,并对克隆基因进行酶切鉴定. 结果分别从霍乱弧菌O1群和O139群扩增出1 149 bp的NhaA基因片段,所构建的重组体经酶切分析和预期结果一致. 结论成功扩增并克隆我国散发霍乱O1群和O139群NhaA基因,为研究霍乱流行规律和基因疫苗提供了重要的实验依据.

    作者:张世英;洪帮兴;司徒潮满;江丽芳;郭辉玉 刊期: 2001年第04期

  • 15 379例住院病例医院感染调查分析

    医院感染(hospital infection)的监控与管理已成为医院管理的一个重要组成部分.为了解广东省汕头市中心医院医院感染的流行病学特点,进一步做好医院感染的监测及管理工作,现对15 379例住院患者进行了回顾性调查,报告如下.1 对象与方法对1998年8月~1999年8月期间入住该院16个临床科室的15 379位患者的病历采用回顾性调查方法,依照国家卫生部医政司医院感染监控协调小组制订的医院感染诊断标准确定医院感染.

    作者:周霓;陈少虹;张桂琴 刊期: 2001年第04期

  • 变应原体外检测500例结果分析

    变态反应疾病是一种常见病.国内变态反应疾病患者当以亿计[1].北京地区变态反应疾病的总患病率为37.7%[2],哈尔滨市变态反应疾病的患病情况尚未见报道.现将哈尔滨市1996年5月至1997年12月500例门诊病人的变应原进行体外检测,结果报告如下.1 材料与方法1.1 病例来源 500例病人均为门诊就诊的病例.其中支气管哮喘180例,占36%;男性299例,女性201例;年龄4~90 a.1.2 抗原来源变应原试剂由法玛西亚公司提供.1.3 检测方法用变应原检测病人血清(采集静脉血,分离出血清);集中10份以上血样上机检测,根据病人量每周做1次,标本用冰箱保存.

    作者:安立新;刘电力;赵景波;张少民 刊期: 2001年第04期

  • 某灌区干渠影响血吸虫病扩散因素的研究

    陈村灌区于1971年开始修建,到1998年,主渠道全部建成,全长108.38 km,由总干渠→东干渠→北分干渠组成.这3个干渠间建有节制闸控制水位,各自成为一个独立的灌区.近年来,宣州市佟公坝和南陵县柏山渠灌区,实现自流灌溉后,均出现血吸虫病严重扩散;陈村总干渠灌区实现自流灌溉后15年,也出现血吸虫病严重扩散.陈村东干渠灌区实现自流灌溉后,极有可能重蹈复辙.对这个问题,必须十分重视.为了防止或减轻东干渠灌区血吸虫病扩散,本文就东干渠灌区血吸虫病扩散的可能性及预防对策进行探讨.

    作者:郑厚福;李纪宣 刊期: 2001年第04期

  • 1980~2000年深圳市法定传染病发病谱分析

    本文通过分析1980~2000年深圳市法定传染病发病情况,探讨各种传染病的发生和流行规律,明确现阶段传染病防制中遇到的主要问题和对策.1 材料和方法1.1 传染病登记报告制度 1980~1989年,主要依据<传染病管理条例>(简称<条例>)进行;1990~2000年,按照<传染病防治法>从事疫情报告.各级各类医疗保健机构,区、市卫生防疫站等承担传染病报告卡的收集、整理、汇总、分析和质量控制等工作,确保了资料的及时、准确和可靠.1.2 法定传染病报告病种变迁 1980~1989年,<条例>规定甲乙类传染病共计25种;1990~1995年,<传染病防治法>在乙类传染病中增加了艾滋病、淋病、梅毒和登革热,取消了<条例>中回归热、恙虫病和森林脑炎的报告,并将流感划归丙类传染病管理;1996~2000年,又将肺结核、新生儿破伤风划归乙类传染病管理.本文主要对甲、乙类传染病进行发病动态分析.1.3 统计分析用深圳市统计局提供的全市人口数计算发病率和死亡率.

    作者:张顺祥;张欣;谢旭 刊期: 2001年第04期

  • 母婴同室卫生消毒质量分析

    母婴同室是使新生儿由集中式的统一管理改为开放式的分散管理,如何做好母婴同室的消毒隔离工作是产科工作面临的新课题.为了解母婴同室的卫生状况,笔者对广西壮族自治区内14家医院母婴同室病房进行调查,结果报告如下.1 调查方法1.1 空气含菌量在每个被调查的医院随机抽查两间母婴同室病房,闭门窗用普通营养琼脂平皿暴露法于房间的东、南、西、北、中采样5 min后,携回实验室,置37℃恒温培养48 h计算细菌菌落总数.

    作者:蓝才燕;陈式一;李队开 刊期: 2001年第04期

  • 1960~1999年上海市静安区痢疾疫情分析

    对上海市静安区1960~1999年痢疾的流行特征进行分析,现报告如下.1 流行特征1.1 流行强度及地区分布 1960~1999年全区共发病262 062例,平均发病率为1 343.93/10万.疫情分布在区内各个街道,江宁、曹家渡、静安寺、石二、南西等街道,平均发病率波动于1 242.66/10万~1 468.02/10万.1.2 季节分布全年均有发病,1960~1999年发病数按月构成比平均数分别为:1月6.17%、2月5.12%、3月5.20%、4月5.50%、5月6.66%、6月7.79%、7月10.97%、8月13.64%、9月13.88%、10月11.74%、11月7.51%、12月5.84%,发病高峰主要集中在8~10月.1960年,月发病率高的8月份为570.1/10万,是月发病率低的1月份的4.2倍;到1999年月发病率高的9月份为10.75/10万,是月发病率低的1月份的6.68倍.

    作者:郭亚文;沈铭华 刊期: 2001年第04期

  • 基因组的不稳定性与肿瘤

    微小卫星(microsatellite, MS)和数目可变的重复序列(variable number of tandem repeat,VNTR)皆属高度重复序列,不同个体其重复序列的重复次数不同,具有长度多态性.资料表明,这种长度多态性是造成基因组不稳定性的主要原因.目前国内外对基因组的不稳定性与肿瘤关系的报道还不多,许多还在探索之中.本文就对基因组中高度重复序列的MS和VNTR的不稳定性与肿瘤关系进行综述.

    作者:陈传德;吴中亮;雷毅雄 刊期: 2001年第04期

  • 128名孕妇破伤风抗体检测

    新生儿破伤风(neonatal tetanus, NNT)为一种严重威胁新生儿健康和生命的疾病,是造成新生儿死亡的主要原因之一.新生儿体内破伤风抗体主要是胎传抗体,且通常具有与母亲相同的破伤风抗体水平,因此开展孕妇的破伤风抗体水平调查对控制和消除NNT具有重要意义.现将1999年保定市的调查结果报告如下.

    作者:刘兰芬;梁勇;吴凯;柳绪婷;张振国;王岩 刊期: 2001年第04期

中华疾病控制杂志

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主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会 安徽医科大学