学术投稿

应用实时RT-PCR技术的mRNA定量分析

杨建荣;陈晓东

关键词:应用, 实时, 分子生物学技术, 定量分析, 基因转录水平, 肿瘤细胞, 表达水平, 检测, 基因功能研究, 生物动力学, 肿瘤进展, 耐药基因, 临床诊断, 基因治疗, 化疗疗效, 存活状态, 外周血, 评价, 调节, 病菌
摘要:1 mRNA定量的意义 特定基因的表达水平可反映细胞的生长、存活状态,对特定基因转录水平的定量分析已成为基因功能研究的核心部分[1].近,分子生物学技术的飞速发展使得mRNA定量分析用于临床诊断成为现实,其应用涉及面很广,包括检测肿瘤细胞耐药基因的调节与表达、化疗疗效的分析、基因治疗的生物动力学与转录、表达水平的研究;并提供了评价肿瘤进展,检测外周血中肿瘤细胞的有效手段;此外,RNA定量分析还可用于病菌、病毒的检测[2-6].
中国实验诊断学杂志相关文献
  • 子宫颈上皮样平滑肌瘤1例

    患者,女性,36岁,因性交后偶有阴道出血3年,突发性阴道出血1天,于2000年9月14日人院.B超显示子宫大小正常,宫颈内见3.0 cm×2.8 cm×2.5 cm中低回声肿块.妇科检查:外阴正常,子宫前位,大小正常,宫颈外口扩张,突出一带蒂的核桃大实质性肿物,质稍硬,灰红色,表面有活动性出血.由根部切除肿瘤送病理.临床诊断:宫颈粘膜下平滑肌瘤.

    作者:周小斐;朱宇;隋明 刊期: 2002年第03期

  • 端粒、端粒酶与消化道肿瘤

    端粒的结构、功能,端粒酶的结构、功能及在癌变中的作用使之成为当前研究的热点.本文就端粒、端粒酶及其在消化道肿瘤中的表达、端粒酶检测及端粒酶抑制剂等方面做一综述.1 端粒与端粒酶1.1 端粒端粒是位于线形染色体末端的一种保护结构,Muller和Mcclintock在30、40年代就认识到了染色体的端粒.

    作者:杜松涛;刘维藩 刊期: 2002年第03期

  • 慢性乙肝患者淋巴细胞亚群检测及临床应用

    慢性乙肝患者对乙肝病毒存在不同程度的免疫耐受,是乙型肝炎慢性化的重要机理.消除患者对乙肝病毒的耐受状态,提高对病毒的免疫力是治疗乙肝的关键.有关免疫治疗结论不一,我们对在1994-1995年,收治的乙型肝炎患者检测治疗前后外周血淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平和CD4+/CD8+比值,以及乙肝病毒标记物的变化,并且随访1~5年.发现治疗前CD4+水平和CD4+/CD8+比值,对预测胸腺肽治疗慢性乙型肝炎的疗效有重要价值,现报道如下.

    作者:王长嘉;韩伟;刘宇琼;路洪艳;房长茂 刊期: 2002年第03期

  • 乙肝病毒Pre S1与HBV M和HBV DNA检测的相关性分析

    目的了解Pre S1与HBV M和HBV DNA检测的关系及其临床应用价值.方法Pre S1检测采用ELISA方法,HBV M检测采用电化学免疫发光法,HBV DNA检测采用荧光定量PCR法.结果Pre S1在HBeAg(+)组的检出率86.9%,明显高于其他HBVM模式组(P<0.01);Pre S1检出乙肝病毒的灵敏性高于HBeAg检测,检测灵敏度为80.9%(HBeAg为61.8%),检测有效率为86.1%(HBeAg为75.7%).结论Pre S1与HBeAg具有较好的相关性,其检测灵敏性(与HBV DNA的相关性)和检测有效率都优于HBeAg检测,具有较好的临床应用价值.

    作者:崔杰峰;潘柏申;贾哲甫;宋斌斌 刊期: 2002年第03期

  • 两种方法检测铜蓝蛋白的结果分析及在肝豆状核变性诊断中的应用

    铜蓝蛋白(ceruloplasmin,CP或CER)具有氧化酶特性,又称铜氧化酶,近年来CP测定在造血系统肿瘤、肝胆疾病等的临床应用得到重视,对肝豆状核变性(HLD)的诊断具有特异性.现将两种测定CP的方法介绍如下.

    作者:俞连琴;骆益华;陆怡德 刊期: 2002年第03期

  • 脑颜面神经血管瘤综合征的CT表现

    脑颜面神经血管瘤综合征,又称斯-威氏综合征,比较少见,系先天性疾病,病例报告如下.1 一般资料患者6例,男性2例,女性4例,年龄1.8~8岁,平均年龄4.2岁.我院采用CE1600I型CT机,扫描层面厚10 mm、间隔10 mm,先平扫,再做增强扫描.造影剂:安其格纳芬50 ml,肘静脉注射.有5例见脑表面有脑回样或波浪状钙化影,其中位于顶叶有3例、枕叶有1例,另1例钙化广泛,累及双侧颞顶叶脑组织.

    作者:刘旭辉;黄成;郭士伟 刊期: 2002年第03期

  • 急性一氧化碳中毒患者血浆超氧化物歧化酶与碳氧血红蛋白相关性研究

    急性一氧化碳(CO)中毒为我国北方冬季常见病,因发病急,病情较重,部分病例预后凶险,造成神经系统的不同程度损害后遗症,对其发病的原因,中毒表现,神经系统改变,已有较多研究,但对血浆超氧化物歧化酶(SOD)的改变及与碳氧血红蛋白(Hb-CO)的相关关系尚未见报道,为此本文就急性CO中毒患者血浆SOD的改变,以及与HbCO的关系,作了比较观察.

    作者:杜简秋;崔俊彪;刘淑杰;王淑侠;安然 刊期: 2002年第03期

  • 腹膜透析前后患者的血脂和脂蛋白(a)水平及与冠状动脉心脏病关系的探讨

    目的观察经腹膜透析前后患者的血清脂类、载脂蛋白、脂蛋白(a)[LP(a)]水平,并探讨与冠状动脉心脏病之间的关系.方法采用日立7170型全自动生化分析仪,日本第一化学药品株式会和中科院中生公司的试剂,对67例尿毒症患者进行腹膜透析前后的血清脂类、载脂蛋白、LP(a)水平检测.结果67例腹膜透析后6个月内的患者血清脂蛋白(a)为308±202mg/L,较82例对照组134±109mg/L,有显著性差异(P<0.001),与腹膜透析前患者血清脂蛋白(a)331±199mg/L比较,经统计学处理,无显著性差异(P>0.05),其中38例腹膜透析患者在透析后6个月、1年、2年分别检测了血清Lp(a)水平,其值分别为284±221 mg/L,263±207 mg/L和246±201 mg/L,它们之间无显著性差异.67例腹膜透析患者在透析前和透析后检测脂类、脂蛋白、载脂蛋白,其TC、LDL-C、ApoB较自身透析前呈增高水平(P<0.001,P<0.05,P<0.05).TG、HDL-C、ApoAI透析后较透析前增高(P均>0.05).结论腹膜透析患者血清Lp(a)水平明显增高,约是正常对照的2.4倍,其值在透析过程中无明显变化,透析前后发生冠心病的患者与未发生冠心病的患者血清Lp(a)水平无显著性差异,未见尿毒症患者血清Lp(a)与冠心病的发生有显著的相关性,TC、LDL-C、ApoB透析后较透析前呈明显增高,有显著性差异.TG、HDDL-C、ApoAI透析后较透析前也有增高,无显著性差异.

    作者:李国权;郑丹侠 刊期: 2002年第03期

  • 急性弥漫性腹膜炎患者血清中自细胞介素-10的检测及意义

    目的检测急性弥漫性腹膜炎患者血清中白细胞介素-10(IL-10),并探讨IL-10在急性弥漫性腹膜炎发病中意义.方法41例急性弥漫性腹膜炎患者和20例健康人血清IL-10的测定采用双抗体夹心ELISA检测法.结果急性弥漫性腹膜炎患者入院时、术后第1、3、6天血清IL-10浓度分别为423.7±31.6、351.2±27.3、224.5±23.6、103.6±21.7 pg/ml,健康人血清IL-10浓度为92.5±21.6 pg/ml.与健康人比较,急性弥漫性腹膜炎患者入院时血清IL-10明显升高(P<0.01),术后第1、3、6天逐渐下降至正常.结论IL-10增加是机体的一种防御反应.

    作者:戴东;汪根树;谭小宇;杜松涛;曾宪成 刊期: 2002年第03期

  • 正确评估肝脏的实验诊断检查

    肝脏的生理、生化功能复杂,为检查肝脏状态和组织有无损伤,从不同角度设计了很多的实验检查项目,包括肝脏各种功能、病理损伤、病原生物感染、异常增生和肿瘤标志物等.随着科技的发展又增添了许多新的项目,如与肝脏有关的细胞因子、粘附分子、细胞外基质、免疫和基因检查.这些检查的准确性、特异性与敏感性各有不同,相互差别很大,应客观评价它们的临床意义.

    作者:孙荣武 刊期: 2002年第03期

  • 军团菌肺炎的临床及病理分析探讨

    军团菌肺炎临床表现复杂,病情轻重程度差异悬殊,常规实验室检查及影像学诊断缺乏特异性等原因,致使部分病人不能及时得到治疗,甚至贻误抢救时机.本文报告2例军团菌肺炎,对军团菌肺炎进行l临床与病理分析研究,探讨提高军团菌肺炎诊断水平的途径.

    作者:罗莉;潘惠娟;张新武;李全民 刊期: 2002年第03期

  • 艾滋病误诊为肺结核病1例

    1 病历摘要患者,男性,35岁,曾有献血史,近半年来,反复发热、寒战,于2001年10月在我院门诊就医.患者于94年5月曾有2次采血史,当时为压积红细胞、血浆进行了还输.2000年4月7日,无诱因出现发热,体温37.5~39℃,无明显规律,明显消瘦、咳嗽,咯出物伴少许血液,曾在当地医院治疗,后转到北京某医院诊断为肺结核病,应用多种抗结核药,无明显效果.

    作者:肖鑫 刊期: 2002年第03期

  • 拉米夫定间接阻断肝纤维化形成的研究

    目的探讨拉米夫定间接阻断肝纤维化形成.方法对30例慢性活动性乙型肝炎患者治疗前和拉米夫定治疗3、6、9个月后的血清,分别采用荧光全定量PCR法测定HBV DNA浓度和竞争性放射免疫法测定层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PⅢ)、Ⅳ型胶原(ⅣC)水平并进行比较.结果治疗前和治疗3、6、9个月后,HBVDNA的含量(x±s)分别是18 678.9±9 895.2、1 472.7±762.5、134.4±216.5、24.8±42.8(fg/ml),LN为189.9±42.8、150.0±24.6、133.7±18.5、123.0±11.7(μg/L),HA为225.1±108.2、177.7±88.5、123.9±43.3、99.5±19.8(μg/L),PⅢ为184.3±83.5、136.8±56.2、115.3±30.0、102.3±26.1(μg/L),ⅣC为 119.7±31.9、93.5±19.2、84.7±22.9、65.8±10.8(μg/L).治疗前后各项指标差异十分显著(P<0.01).结论拉米夫定不仅抑制HBV DNA复制效果理想,而且间接阻断肝纤维化的形成十分显效.

    作者:陈然峰;陈国军;黄晓文;陈孟春 刊期: 2002年第03期

  • 血清中骨钙素水平的临床观察

    骨钙素(Osteocalcin)是49~50个氨基酸组成的多肽.是骨组织中丰富的非胶原性蛋白,又称为骨谷氨酸蛋白(bone gla protein,BGP),是成骨细胞分化的标志之一.其作用是促进羟磷灰石在骨基质的沉着,成骨细胞产生和分泌的BGP有2/3与羟磷灰石结晶结合沉着在骨基质,1/3进入血循环.

    作者:潘莉莉;李强;卢丽萍 刊期: 2002年第03期

  • 甲状腺功能减退症并发急性心肌梗死1例

    甲状腺功能减退症(甲减)易并发动脉粥样硬化及冠心病,既往有冠心病的患者,合并甲减可加速病情发展,可导致心肌梗死,但是,甲减的早期临床表现缺乏特异性,常易漏诊或误诊,本文报告1例甲减并发急性心肌梗死.

    作者:王凤艳;张明秋 刊期: 2002年第03期

  • 全氟辛烷对角膜影响的实验研究

    目的观察全氟辛烷残留前房时对角膜的影响,探讨取出残留前房全氟辛烷的适宜时间.方法向实验组兔眼前房中注入全氟辛烷,观察不同时间内角膜在裂隙灯显微镜、光镜、扫描电镜下和台盼蓝、茜素红染色后的变化.结果实验组的角膜2周时只在扫描电镜下出现变化,4周时的检查结果显示角膜明显改变.结论全氟辛烷长时间残留眼内可引起角膜内皮细胞的损伤,应尽早取出前房内的全氟辛烷.

    作者:赵振全;赵梅生;宋跃 刊期: 2002年第03期

  • 术前不同时间缺血对大鼠80%肝切除的影响

    目的观察术前不同时间缺血对大鼠80%肝切除术后肝功能的影响,并对其作用机制进行探讨.方法18只大鼠分成3组,15 min肝右叶缺血组,30 min肝右叶缺血组,对照组只开腹,分离肝右叶血管,24 h后行缺血肝叶亚铁血红素氧化酶-1免疫组化染色和ATP酶活性测定,同时行肝左叶和尾状叶切除,观察肝切除前、肝切除后1、2、3、和第5日肝功能指标GOT、GPT和LDH变化,第5日测定肝再生指数.结果缺血组缺血后24h,对照组肝细胞亚铁血红素氧化酶-1染色阴性,15 min缺血组肝细胞亚铁血红素氧化酶-1染色阳性,30min缺血组肝细胞亚铁血红素氧化酶-1染色强阳性,并由中央小静脉周围向汇管区逐渐减弱,3组肝ATP酶活性无差异;80%肝切除后第5日,缺血15 min组血清GOT、GPT和LDH明显低于对照组和缺血30 min组(P<0.05),肝功能恢复较对照组快,3组肝再生指数无明显差异(P>0.05).结论肝缺血15 min后24 h,肝细胞亚铁血红素氧化酶-1被大量诱导产生,短时间缺血可以改善肝切除术后肝功能,缺血组肝切除术后肝功能的迅速改善可能与亚铁血红素氧化酶-1的诱生有关.

    作者:张海山;房学东;张德恒;包大庆;张海霞 刊期: 2002年第03期

  • 应用荧光PCR技术检测6500例患者血清HBV DNA的实验研究

    目的揭示血清乙肝病毒标志物(HBVM)与血清HbV DNA含量相关性.方法采用ELISA法对血清、HB-VM进行检测;对HBVM阳性6500例患者血清采用荧光PCR法定量检测HBV DNA.结果在HBVM阳性的6500例血清中,有3 982例占61.3%,HBVM标志物阳性者血清均有HBV DNA阳性.血清HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性者HBVDNA阳性率占96.9%,大于106copies/mi者占72.1%,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA阳性率占21.9%,HBVDNA定量大于103copies/ml,且小于等于104copies/ml者占78.1%.结论血清HBVM阳性患者中约60%的血清HBVDNA阳性,且HBeAg阳性中HBV DNA阳性率及血清HBV DNA均明显高于抗-HBe阳性者.在抗-HBs、抗-HBc阳性者血清内也有HBV DNA阳性者,采用荧光PCR定量检测HBV DNA技术先进结果准确.

    作者:高俊芬;张翠萍;孙庆国;王佳楠;桑颖 刊期: 2002年第03期

  • SLE患者外周血Tc1/Tc2与CD4/CD25双阳性细胞关联性分析

    目的分析SLE患者外周血CD8淋巴细胞分泌的细胞因子与CD4/CD25双阳性细胞反应格局与疾病的关联性.方法用三色免疫荧光单细胞染色法检测了11例SLE患者外周血CD8T细胞分泌的细胞因子与CD4/CD5双阳性细胞的表达.结果所检测11例SLE患者中有3例表现为Tc0,即同时分泌IFN-γ和IL-4的Tc细胞.4例以分泌IFN-γ为主,为Tc1,4例以分泌IL-4为主,为Tc2.同时测定了SLE病人与正常对照组CD4/CD25双阳性细胞群发现CD4/CD25双阳性细胞群在活动期SLE中显著低下[(17.54±4.11%)%,而对照组为(35.42±3.30)%].结论SLE患者外周血中CD8亚群表现为异质性,且与CD4/CD25双阳性细胞有关.至于其在SLE发病中的意义正在进一步研究中.

    作者:邱潮林;费新娣;周翔;梅虹;李宁丽;王树军;马安伦;余奇文;张冬青 刊期: 2002年第03期

  • 病毒性肝炎甲胎蛋白检测的临床意义

    血清甲胎蛋白(AFP)是早期诊断原发性肝细胞癌(PHC)常用的检测指标,但其增高也可见于急、慢性肝病患者,本文对89例病毒性肝炎患者血清A胛进行检测,就其临床意义作一探讨.

    作者:陶科;秦立新 刊期: 2002年第03期

中国实验诊断学杂志

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主办:吉林大学中日联谊医院 上海交通大学医学院附属瑞金医院