学术投稿

实时定量PCR检测大鼠神经激肽1受体mRNA方法的建立及评价

姚刚;满玉红;毛西京;于挺敏

关键词:实时定量PCR, SYBR Green Ⅰ, 神经激肽, 大鼠, Wistar
摘要:目的:建立检测大鼠神经激肽1(NK1)受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法,为检测大鼠NK1受体基因表达提供有效的手段.方法:提取大鼠中脑总RNA,扩增NK1受体基因片段,将其克隆入pMD-18T载体,制作NK1受体标准品质粒;应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品质粒进行实时PCR分析,评价所建立方法的检测灵敏度;对PCR产物进行溶解曲线分析评价其特异性.结果:成功构建NK1受体标准品质粒,经酶切及测序鉴定,目的片段已插入pMD-18T载体;所建立的实时定量PCR方法的低检测限度均为每反应102个拷贝,在每反应102~109拷贝范围内,荧光信号达到设定阈值所经历的循环数(Ct值)与起始模板浓度具有良好的线性关系,r=0.999.结论:所建立的检测大鼠NK1受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有敏感性高、特异性强和线性范围广等特点,适用于对大鼠各种组织NK1受体的大量样本检测.
吉林大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 肝肿瘤造影图像质量与声诺维造影剂用量的关系

    1 临床资料1.1 一般资料肝肿瘤患者60例,男性33例,女性27例,年龄23~72岁,平均(54±12.8)岁,病灶直径6~93mm.1.2 检查方法 采用东芝Toshiba Aplio彩色多普勒超声显像仪,探头中心频率3.5 MHz,机械指数0.07~0.10.造影剂使用SonoVue(Bracco,Italy),造影微泡为磷脂包裹的六氟化硫(SF6).

    作者:李国政;苑敏;丰立忠;吴子芳;刘增强;刘丽艳 刊期: 2011年第02期

  • 抵抗素-420C/G基因多态性与中国东北地区汉族人群2型糖尿病大血管病变相关性分析

    目的:研究中国东北地区汉族人群抵抗素(RETN)-420C/G基因单核苷酸多态性(SNPs)的等位基因、基因型频率分布及其与2型糖尿病(T2DM)大血管病变之间的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对180例样本[T2DM并发大血管病变组60例,单纯T2DM组60例,正常对照(ND)组60例],进行基因分型及频率测定.结果:T2DM并发大血管病变组及单纯T2DM组等位基因频率及CC/GC+GG基因型分布与ND组比较差异均有统计学意义(P<0.01);T2DM并发大血管病变组等位基因频率及CC/GC+GG基因型分布与单纯T2DM组比较差异亦有统计学意义(P<0.05),T2DM并发大血管病变组GC+GG基因型频率明显高于单纯T2DM组.结论:RETN-420C/G基因多态性与中国东北地区汉族人群T2DM及其大血管病变的发生有相关性.

    作者:孙亚东;马彦 刊期: 2011年第02期

  • 腰交感神经切除术治疗血栓闭塞性脉管炎的研究进展

    血栓闭塞性脉管炎(TAO)是一种累及中小动静脉的阶段性闭塞性炎症疾病.腰交感神经切除术(LS) 通过使动脉痉挛逆转、改善肢体缺血状态、缓解疼痛、促进溃疡愈合成为TAO主要的外科治疗方法,虽然LS有70余年的历史,但手术作用仍有争议.本文作者对LS治疗TAO的现状和并发症的防治做一综述.

    作者:张阳;孙思翘;赵文光;王嘉桔 刊期: 2011年第02期

  • 表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用

    目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据.方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况.结果:成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,将2个载体瞬时共转染PEF;经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP,在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达.而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达.结论:重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶,并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点,删除两同向loxP间的DNA片段.

    作者:周杨;朱建国;唐小春;闫森;宋娜;张明军;李莉;欧阳红生;逄大欣 刊期: 2011年第02期

  • 特异性下调GRP78基因表达对卵巢癌细胞耐药性的影响

    目的:探讨RNA干扰技术沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因对人卵巢癌细胞耐药性的影响,阐明GRP78基因沉默逆转肿瘤细胞耐药性的生物学机制.方法:构建pSilencerTM3.0-H1-GRP78 siRNA重组质粒,脂质体介导转染至SKOV3/DDP细胞;RT-PCR和Western blotting法检测GRP78基因的蛋白的表达;Western blotting法检测caspase-4和caspase-3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:转染GRP78 siRNA重组质粒的SKOV3/DDP细胞GRP78基因和蛋白表达较转染空质粒组明显降低(P<0.05);加用顺铂后,转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组较未转染GRP78 siRNA重组质粒细胞组caspase-4和caspase-3表达明显增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增加(P<0.05).结论:抑制GRP78基因表达能通过上调caspase-4和caspase-3表达及增加顺铂诱导的SKOV3/DDP细胞凋亡率,降低SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性.

    作者:范丽梅;张立会;崔松花;崔满华 刊期: 2011年第02期

  • 全凭静脉麻醉下脑电双频谱指数监测在术中知晓预防中的作用

    目的:探讨全凭静脉麻醉下应用脑电双频谱指数(BIS)监测术中知晓的发生情况,评价BIS监测对术中知晓的预防作用.方法:丙泊酚全凭静脉麻醉下行择期手术患者300例,随机分成A、B两组(n=150).两组患者均进行BIS监测,A组根据BIS值调控麻醉深度,确保麻醉期间BIS值<60;B组术中遮蔽BIS值,根据经验调控麻醉深度.记录两组患者麻醉诱导、手术开始、麻醉停药、手术结束、麻醉苏醒、拔管时BIS值及术中知晓的发生情况.结果:两组患者基础BIS值、诱导结束时、清醒时及拔管时BIS值比较差异无统计学意义(P>0.05),手术开始时、麻醉维持和麻醉结束时BIS值比较差异有统计学意义(P<0.05).A组无知晓病例及怀疑知晓病例.B组无知晓病例,但存在2例怀疑知晓病例,2组怀疑知晓率比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:全凭静脉麻醉时采用BIS监测能够维持合适的麻醉深度,预防术中知晓的发生.

    作者:曲晓霞;麻海春;苑野;冯春生 刊期: 2011年第02期

  • 酒石酸唑吡坦片治疗睡眠障碍的临床疗效观察

    1 临床资料1.1 一般资料 2009年3月-2010年3月在本院门诊就诊的睡眠障碍患者122例,均符合<中国精神疾病分类方案与诊断标准>(CCND-2-R)中关于睡眠障碍的诊断标准,其中男性76例,女性46例,年龄22~73岁,平均年龄(45.2±5.4)岁,病程1~15个月.所有患者每晚入睡困难,每晚醒2次以上,每晚总睡眠时间<6 h,伴有睡眠不深、多梦等睡眠障碍表现,白天困倦、工作效率下降.所有患者均无心、肺、肾等功能障碍及严重基础性疾病,无服用抗精神病药物病史,无酒石酸唑吡坦片用药禁忌,排除妊娠期或哺乳期妇女.

    作者:樊文萍 刊期: 2011年第02期

  • 镍铬烤瓷冠修复后牙龈及龈沟液中镍和铬含量的变化

    目的:探讨镍铬烤瓷冠修复后牙龈组织和龈沟液中镍和铬含量的变化,为修复材料的选择提供参考.方法:选择镍铬烤瓷修复后牙龈增生并需行牙龈修整术者作为实验组,需要拔除第三磨牙且口内无任何修复体者为对照组,使用Whatman 3号滤纸汲取龈沟液并切取牙龈,运用电感耦合等离子体质谱法测量牙龈组织及龈沟液中镍和铬的含量.结果:实验组牙龈组织和龈沟液中的镍和铬含量均高于对照组,两组龈沟液中的铬含量比较差异有统计学意义(P<0.05),两组牙龈组织及龈沟液中的镍含量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:镍铬烤瓷冠修复后的镍和铬离子在牙龈组织及龈沟液中沉积,对牙龈组织有影响.

    作者:沈晓艇;刘丽;章燕珍 刊期: 2011年第02期

  • 核桃楸树皮乙酸乙酯提取物对原位移植荷胃癌小鼠的抑瘤作用

    目的:研究核桃楸树皮乙酸乙酯提取物(HYT)对原位移植荷胃癌小鼠的抑瘤作用及其对免疫功能的影响,阐明HYT抗胃癌作用机理,为研发低毒高效的抗胃癌中草药提供理论依据.方法:建立HYT灌胃的原位移植荷胃癌小鼠研究模型,分为HYF高剂量组(60 mg·kg-1)、HYF低剂量组(40 mg·kg-1)、假手术组、阳性对照组(5-FU)及阴性对照组,观察每组小鼠抑瘤率及胸腺、脾脏指数,采用ELISA法及流式细胞术等检测荷胃癌小鼠IL-4 、IL-12、TNF-α水平及T淋巴细胞亚群情况.结果:HYT高剂量组抑瘤率与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);与阴性对照组比较,HYT高剂量组小鼠胸腺指数及脾脏指数明显增加(P<0.05),IL-12水平升高(P<0.05),IL-4水平降低(P<0.05),TNF-α水平升高(P<0.05),T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比值升高(P<0.05).结论:HYT可以增强机体免疫功能,具有明确的抑瘤作用,可以作为抗胃癌低毒高效的中草药.

    作者:林瑞新;杨淑莉;房学东;宫路路;张研 刊期: 2011年第02期

  • 亚硝酸盐对尿液标本总蛋白检测结果的影响:附40例临床分析

    1 资料与方法1.1 一般资料 本院2010年6月-2010年8月接诊的门诊患者新鲜尿液标本40份.1.2 检测方法 ①精密度试验:取新鲜尿液标本2份,尿液总蛋白浓度分别为样本Ⅰ160mg·L-1和样本Ⅱ560mg·L-1,做日内精密度试验.②亚硝酸盐干扰试验:40份不同总蛋白浓度尿液标本分为4组.第1组浓度约135mg·L-1,第2组浓度约300 mg·L-1,第3组浓度约450mg·L-1,第4组浓度约600 mg·L-1,每组尿液标本各10份,每份标本分6管,每管2mL尿液,分别加入6个不同剂量的亚硝酸盐10 μL,其浓度分别为0、50、100、200、400和800 μmol·L-1.

    作者:张艳华 刊期: 2011年第02期

  • 病毒性心肌炎73例临床分析

    1 临床资料1.1 一般资料 本院2005年3月-2010年7月间收治急性病毒性心肌炎73例,男性46例,女性27例,年龄18~23岁,均符合1999年全国心肌炎心肌病专题研讨会制定的诊断标准,排除其他心脏疾病、甲亢及精神因素.其中束支传导阻滞13例,1例为完全性左束支传导阻滞;室性早搏21例;心电广泛性ST-T改变17例.有11例既往患该病,其中7例已反复发病数次,且治疗效果不佳,医生接诊后行X胸片、心电图、心脏彩超、心肌酶及肌钙蛋白Ⅰ检查.

    作者:姜利杰;祝雁 刊期: 2011年第02期

  • 彩色多普勒超声在肾上腺占位性病变诊断中的应用

    1 临床资料1.1 一般资料 收集本院2007年10月-2009年9月行超声检查肾上腺占位性病变35例,其中肾上腺皮质腺瘤15例,转移癌2例,肾上腺囊肿5例,神经母细胞瘤2例,肾上腺皮质癌7例,嗜铬细胞瘤4例,全部经手术及病理证实.

    作者:张镔;杨雷;李雪晶;张蔚;田朋 刊期: 2011年第02期

  • 不同酸蚀处理方法对氟斑牙托槽脱落率的影响

    目的:观察不同酸蚀方法对氟斑牙粘结托槽的脱落率的影响,筛选一种降低氟斑牙托槽脱落率的临床可行的酸蚀方法.方法:选择14例中度氟斑牙患者的226颗牙齿为研究对象,按左右分为28个区,随机分为4组(每组7个区):分别为酸蚀1 min组(n=56)、酸蚀2 min组(n=57)、酸蚀3 min组(n=57)和酸蚀2次组(n=56),记录第4、8和12周托槽脱落率和托槽脱落后牙面上残留的粘接剂残留指数(ARI).结果:酸蚀2次组和酸蚀2 min组的托槽脱落率明显低于酸蚀1 min组和3 min组(P<0.05);ARI高于酸蚀1 min组和3 min组(P<0.05).酸蚀2次组的托槽脱落率低于酸蚀2 min组,但差异无统计学意义(P>0.05);ARI高于酸蚀2 min组,但差异亦无统计学意义(P>0.05).各组前磨牙脱落率均明显高于前牙(P<0.05),酸蚀2次组的前磨牙脱落率低于其他各组(P<0.05).结论:酸蚀2 min能明显降低氟斑牙托槽脱落率,2次酸蚀比1次酸蚀托槽脱落率降低,尤其是前磨牙托槽脱落率明显降低.

    作者:史瑞新;朱宪春;陈远萍;周延民 刊期: 2011年第02期

  • 五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响

    目的:探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制.方法:48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清.SW579细胞分为空白组、阴性对照组和药物组.空白组为15%小牛血清的RPMI-1640培养液,阴性对照组细胞加入阴性组大鼠的纯化血清,药物组分别加入不同浓度(100、200 和 400 mg·kg-1)的含药血清,AO/EB荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting检测细胞survivin的表达.结果:流式细胞术结果显示,低、中和高剂量药物组细胞凋亡率为8.63%、35.63%和38.32%,明显高于空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率(4.23%和4.10%)(P<0.01),并随剂量增加而增加.阴性对照组细胞生长抑制率为(0.12±0.06)%,低、中和高剂量药物组细胞生长抑制率为(27.51±1.62)%、(34.69±0.79)% 和(45.83±1.33)%,药物组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).Western blotting 检测低、中、高剂量药物组细胞survivin的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).结论:五味子多糖能有效抑制人甲状腺癌细胞株SW579中survivin基因表达,诱导SW579细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖.

    作者:许珂玉;肖建英 刊期: 2011年第02期

  • 髓内钉与钢板治疗肱骨干骨折患者的疗效及安全性比较

    目的:通过对新鲜肱骨干骨折患者分别采用顺行交锁髓内钉和锁定加压钢板治疗,比较两种方法的疗效及安全性.方法:42例新鲜肱骨干骨折患者随机分为髓内钉固定组和钢板固定组,分别采用两种方法治疗,术后随访时间10~25个月,平均13个月.随访期间失访患者7例,得到随访患者35例(髓内钉组21例,钢板组14例),比较两组患者的术后功能恢复情况、愈合时间及并发症发生率.结果:钢板固定组的优良率(92.8%)高于髓内钉固定组(71.5%)(P<0.05);髓内钉组延迟愈合(>16周)患者10例(47.6%),钢板组延迟愈合患者3例(21.4%),延迟愈合率组间差异有统计学意义(P<0.05).髓内钉组无桡神经损伤、无感染;钢板组桡神经一过性损伤1例(7.1%),发生感染1例(7.1%).结论:新鲜肱骨干骨折患者采用交锁髓内钉固定和钢板固定均可达到治疗目的,钢板固定后功能恢复优于髓内钉固定,钢板固定后延迟愈合患者比例低于髓内钉固定患者,临床可根据骨折的部位和类型选择内固定;在适应证相同的情况下,建议使用钢板内固定治疗新鲜肱骨干骨折.

    作者:李丹;王刚;谷贵山;王铁军;孙大辉 刊期: 2011年第02期

  • 直肠癌患者周围淋巴结转移的临床及病理特征分析

    目的:总结保留盆腔植物神经的直肠癌扩大根治术中直肠周围各组淋巴结的转移规律,探讨现阶段侧方淋巴结清扫的意义.方法:接受保留盆腔植物神经的直肠癌扩大根治术患者114例,清除淋巴结并行常规病理学方法(HE染色)观察,分析直肠周围淋巴结转移情况.结果:114例患者中有46例发生淋巴结转移,总的淋巴结转移率为40.4%(46/114),其中直肠系膜淋巴结转移率为39.5%(45/114),肠系膜下动脉根部淋巴结转移率为3.9%(2/51),侧方淋巴结转移率为9.6%(11/114);共取出淋巴结2 463枚,转移淋巴结数209枚,总转移度为8.5%(209/2 463),其中直肠系膜淋巴结转移度为14.8%(187/1 264),肠系膜下动脉根部淋巴结转移度为1.7%(3/175),侧方淋巴结转移度为1.9%(19/1 024).直肠系膜淋巴结的转移率及转移度明显高于肠系膜下动脉根部淋巴结及侧方淋巴结(P<0.05);直肠系膜淋巴结的转移率及转移度与Duke's分期、肿瘤浸润深度有明显关联性(P<0.05),侧方淋巴结转移率及转移度Duke's分期和分化程度具有明显关联性(P<0.05).结论:选择性的直肠癌扩大根治术在现阶段是可行的.

    作者:王旻;季福健;金洪勇;陈学博;于杰;房学东 刊期: 2011年第02期

  • 儿童木村病1例报告

    1 临床资料患儿,男,11岁.因反复左眼突出2年余入院.患儿2年前发现左眼突出,逐渐明显,入院前2个月曾就诊于本院眼科,诊断为眼眶异物行手术治疗,病理显示肿物呈灰褐色,切面灰白质硬.镜下示:左眼眶内泪腺导管周围有大量急、慢性炎细胞浸润,纤维组织增生,嗜酸性粒细胞丰富,有淋巴滤泡形成.术后患儿左眼恢复正常,给予球后注射激素治疗.

    作者:陈鹏;许忠;田昕;张思瑾;郑百红;郭楠;刘锋 刊期: 2011年第02期

  • 超短波配合浅刺多穴法治疗周期性面神经麻痹38例

    周期性面神经麻痹是理疗科的常见病和多发病,在冬春两季多见,本文作者采用超短波配合浅刺多穴法治疗38例周围性面神经麻痹患者,疗效满意,现报道如下.

    作者:曲有莲;刘淑娟;孙丽娟 刊期: 2011年第02期

  • 三氧化二砷对T315I突变细胞株KBM5R细胞周期的影响

    目的:探讨三氧化二砷(ATO)对T315I突变的伊马替尼(IM)耐药慢性粒细胞白血病(CML)细胞株KBM5R细胞周期的影响,为对抗CML患者的IM耐药性提供理论依据.方法:选择野生型KBM5细胞作为T315I点突变KBM5R细胞的阴性对照组,根据是否经过ATO处理将实验分为KBM5R细胞空白对照组、KBM5R细胞ATO处理组、KBM5细胞空白对照组和KBM5细胞ATO处理组.应用MTT法检测IM和ATO作用后KBM5和KBM5R细胞的增殖活性;流式细胞术检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期的变化;Western blotting法检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期调节相关蛋白P21和P27表达的变化.结果:IM作用后耐药组KBM5R细胞IC50与野生型KBM5细胞比较明显增高(P<0.01);不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 μmol·L-1)ATO于不同时间点(24、48、72和96 h)作用于KBM5和KBM5R细胞,与空白对照组比较,ATO处理组细胞均表现为显著的增殖抑制,且随药物浓度增加或作用时间延长细胞的增殖抑制率显著增加(P<0.05);在相同的药物浓度和时间点,ATO对KBM5R细胞的增殖抑制作用强于野生型KBM5细胞(P<0.05);2.0、4.0和8.0 μmol· L-1 ATO作用细胞48 h后,KBM5和KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例均随药物剂量的增加而增加,且相同药物浓度时KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例与KBM5细胞比较差异无统计学意义(P>0.05);ATO作用KBM5和KBM5R细胞48 h后,2.0、4.0和8.0 μmol·L-1 ATO处理组与空白对照组比较细胞内P21和P27蛋白表达均增加,且随药物剂量增加而增加.结论:ATO通过上调P21和P27蛋白水平使KBM5R细胞周期阻滞于G2/M期,细胞周期阻滞是ATO抑制T315I点突变细胞株KBM5R增殖的原因之一.

    作者:李小丰;刘秋菊;李景贺;王秀丽;沈卫章;卢爱萍;郏博;陈鹏 刊期: 2011年第02期

  • IHC与FISH检测乳腺癌HER2状态一致性的对比研究及其临床意义

    目的:对比研究免疫组织化学方法(IHC)检测乳腺癌HER2蛋白表达和荧光原位杂交技术(FISH)检测HER2基因状态的一致性,并评价其临床意义.方法:采用IHC法及FISH法分别检测77例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本的HER2蛋白表达和HER2基因状态,并进行对比分析.结果:77例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本用IHC检测HER2蛋白表达阳性者37例,占总数的48.05%(37/77);表达阴性者40例,占51.95%(40/77).FISH检测HER2基因扩增32例,占41.56%(32/77);基因非扩增45例,占58.44%(45/77).37例HER2蛋白为阳性的患者中,HER2基因扩增30例,符合率为81.08%(30/37);40例HER2蛋白为阴性的患者中,HER2基因非扩增38例,符合率为95.00%(38/40).两种方法检测结果比较差异无统计学意义(χ2=1.78,P=0.1824).Kappa检验结果,κ=0.7647,表明一致性较好.结论:IHC检测乳腺癌HER2蛋白与FISH检测HER2基因结果一致性较高.

    作者:邵飞飞;康丽花;刘敏;白晶;宋艳秋 刊期: 2011年第02期

吉林大学学报(医学版)杂志

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