学术投稿

重组人β-淀粉样蛋白1-42在毕赤酵母中的表达与鉴定

申茉函;王全才;牟旭鹏;陈洪波;牛超;颜炜群

关键词:阿尔茨海默病, β-淀粉样蛋白, 毕赤酵母, 表达
摘要:目的:探索在毕赤酵母中表达人β-淀粉样蛋白1-42(hAβ1-42)的可行性.方法:以含有hAβ1-42基因的质粒为模板,采用PCR方法扩增所需DNA片段,与毕赤酵母表达载体pPICZa连接,构建重组质粒pPICZa-hAβ1-42并进行DNA测序分析.将其电击转化毕赤酵母菌株X-33,经SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物.结果:经测序证实,获得的hAβ1-42序列与基因合成的完全一致.SDS-PAGE显示,在约4 000处有一蛋白带,Western blotting证明表达产物与抗hAβ1-42抗体有特异性免疫反应.结论;本研究在毕赤酵母中成功地重组表达hAβ1-42.
吉林大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 蛋白质酪氨酸磷酸酶及相关疾病

    蛋白质酪氨酸磷酸酶家族是细胞信号转导中的重要调节因子,参与多种细胞功能的调控.本文作者概述了几种重要的蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPIB、TC-PTP、SHP-1、SHP-2、MEG2及PRL3等的功能,并介绍了其在许多人类疾病(癌症、心血管疾病、神经及代谢失调及自身免疫系统疾病等)的发生和发展中所起的重要作用.

    作者:李婉南;姜轶群;范晓迪;董洪钵 刊期: 2008年第06期

  • 去氢表雄酮及其代谢产物对人肿瘤细胞系的抗增殖作用

    目的:研究去氢表雄酮(DHEA)及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯(DHEAs)对HepG2和HT-29细胞增殖的抑制作用及其机制.方法:HepG2和HT-29细胞分别分为对照组、不同浓度(1、10、50、100及200 μmol·L-1)DHEA组和DHEAs组,孵育8、24、48及72 h后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和BrdU测定法检测DHEA对肿瘤细胞的生长抑制率,同时测定3-羟基-3-甲基戊二酸单酰A还原酶(HMGR)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:①MTT法结果显示,与对照组比较,不同浓度DHEA组HepG2和HT-29细胞增殖抑制率均显著增加(P<0.05).作用24 h时,100 μmol·L-1 DHEA组细胞增殖抑制率降低显著(P<0.05),而DHEAs组差异无显著性(P>0.05).②BrdU法结果显示,当DHEA浓度在50、100和200 μmol·L-1时细胞的生长均显著受到抑制,尤其以HepG2细胞的生长抑制率高(P<0.05).③DHEA对HepG2细胞HMGR活性抑制率为62%,对HT-29细胞HMGR活性抑制率为51%,而DHEAs则无明显作用.④100 μmol·L-1 DHEA抑制G6PD的效力为85%,而DHEAs的抑制效力仅为6%.⑤DHEA和DHEAs对细胞LDH的活性影响组间比较差异无显著性(P>0.05).结论:DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用,能明显降低细胞的G6PD或HMGR活性,DHEAs则无明显作用.

    作者:姜艳芳;赵平伟;谭岩;方艳秋;松崎静司 刊期: 2008年第06期

  • CPP-ACP与氟促进脱矿釉质再矿化的显微放射定量分析

    目的:研究不同浓度酪蛋白磷酸多肽-非结晶型磷酸钙(CPP-ACP)及其与氟(F)联合应用对牙釉质表层下脱矿再矿化的影响,为正畸后的釉质脱矿提供一种治疗途径.方法:取正畸拔除的前磨牙70颗,乳酸凝胶法制备人工早期釉质表层下脱矿后,按随机数字表法分为7组:5.0%CPP-ACP、1.0%CPP-ACP、0.1%CPP-ACP、5.0%CPP-ACFP、磷酸钙饱和溶液、饱和溶液+F及去离子水组.对各组进行显微放射照相并测量脱矿深度与脱矿量.结果:除去离子水组外,各组再矿化后较再矿化前脱矿深度和脱矿量均显著降低(P<0.05);5.0%CPP-ACFP组显著低于其他各组(P<0.05,P<0.01),5.0%CPP-ACP组与1.0%和0.1%CPP-ACP组比较脱矿深度和脱矿量显著降低(P<0.05,P<0.01),0.1%CPP-ACP组与磷酸钙饱和溶液、饱和溶液+F组比较差异无显著性(P>0.05),但均低于去离子水组(P<0.05,P<0.01).结论:CPP-ACP溶液可于体外使脱矿牙釉质发生再矿化,且矿化作用可被氟加强;再矿化作用与CPP稳定的钙磷浓度呈剂量-效应关系.

    作者:周春华;孙新华;黄洋;李博 刊期: 2008年第06期

  • 甲基化硒酸对人前列腺癌DUl45细胞增殖与凋亡的影响

    目的:观察甲基化硒酸(MSA)对DUl45前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用MTT比色法观察1.25、2.50和5.00 μmol·L-1MSA对DU145细胞增殖活力的抑制作用;吖啶橙染色观察MSA诱导细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡指数;免疫细胞化学技术观察细胞内激活的caspase-3的表达情况.结果:经1.25、2.50和5.00μmol·L-1MSA处理48 h后,DU145细胞生长抑制率分别为16.35%、38.10%和73.54%,3组间比较差异有显著性(P<0.01),随MSA浓度升高细胞生长抑制率增加,呈明显的剂量依赖性.吖啶橙荧光染色可见,经1.25、2.50和5.00μmol·L-1MSA处理后的细胞呈明显凋亡形态,并随药物剂量增加凋亡细胞数增多;流式细胞术结果显示,经1.25、2.50和5.00 μmol·L-1MSA处理48 h后,细胞凋亡率分别为,5.34%、8.71%和13.60%,3组间比较差异有显著性(P<0.05),随MSA浓度升高细胞凋亡率升高,呈剂量依赖关系;免疫细胞化学染色结果显示,随着MSA剂量增加,细胞内激活的caspase-3表达上调.结论:MSA对DU145细胞具有明显的抗肿瘤作用,其机制可能与激活的caspase途径诱导细胞凋亡有关.

    作者:刘艳波;赵丹;郭亚雄;赵丽晶;张海涛;董妍;赵丽娟;赵雪俭 刊期: 2008年第06期

  • 卵巢上皮性癌组织RhoC和MMP-2蛋白的表达及其临床意义

    目的:研究RhoC和MMP-2蛋白在卵巢上皮性癌组织中表达及其临床意义,为判定卵巢上皮性癌的生物学行为及预后提供依据.方法:采用免疫组织化学方法检测10例正常卵巢组织、12例卵巢上皮性良性肿瘤及91例卵巢上皮性癌组织中RhoC与MMP-2蛋白的表达,并与临床特征进行相关性分析.结果;RhoC及MMP-2蛋白在卵巢良性肿瘤和卵巢正常组织中的阳性表达率均为0,在卵巢上皮性癌组织中阳性表达率分别为37.3%和68.1%,RhoC和MMP-2蛋白在卵巢癌组织中的表达明显高于卵巢良性肿瘤和卵巢正常组织.中、低分化卵巢癌的阳性表达率明显高于高分化卵巢癌(P<0.05,P<0.005),Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌的阳性率明显高于Ⅰ~Ⅱ期卵巢癌(P<0.005),有转移的卵巢癌RhoC和MMP-2蛋白的阳性表达率明显高于无转移卵巢癌(P<0.005,P<0.05),卵巢癌组织中RhoC与MMP-2阳性表达呈正相关(r=0.492,P<0.05).结论:RhoC与MMP-2蛋白的表达与卵巢癌的细胞分化程度、临床分期及有无转移密切相关,且两者呈正相关.临床检测卵巢癌RhoC与MMP-2蛋白的表达,可以作为判断卵巢癌生物学行为及患者预后的参考指标.

    作者:潘颖;朱丹;司乃文;张文颖 刊期: 2008年第06期

  • 损伤肝组织匀浆诱导间充质干细胞甲胎蛋白和白蛋白的表达

    目的:建立分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,探讨损伤肝组织匀浆对MSCs的诱导分化作用.方法:采用密度梯度离心、贴壁培养法分离培养大鼠MSCs,以含10%损伤肝组织匀浆、10%FBS的L-DMEM培养基诱导培养,并在不同时间点采用免疫组织化学方法(SP)检测甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(Alb)的表达.结果:MSCs在含10%损伤肝组织匀浆的10%FBS L-DMEM培养基中培养,呈类上皮样细胞.诱导组在培养7 d时,大部分细胞呈AFP阳性表达(75.2%),与对照组比较差异有显著性(P<0.05);诱导培养14、21和28 d AFP表达阳性率分别为35.2%、12.3%和2.0 0A,组间比较差异有显著性(P<0.05);诱导组在培养7 d仅少数细胞Alb呈阳性表达(14.6%),诱导培养14、21和28 d Alb表达阳性率分别为67.6 oA、88.9%和95.6%,诱导组与对照组比较及不同时间点比较差异均有显著性(P<0.05).结论:此方法可获得纯度较高MSCS,损伤肝组织匀浆可诱导MSCs表达AFP和Alb.

    作者:赵文静;方艳秋;齐亚灵;刘婷;牛凤兰;谭岩 刊期: 2008年第06期

  • 慢性肺源性心脏病治疗前后心电图P波变化与预后的关系

    为探讨慢性肺源性心脏病的预后指标,本文作者对慢性肺源性心脏病急性发作期患者治疗前后心电图P波振幅的变化与预后的关系进行分析,现报道如下.

    作者:索金梅;周连春;阮红 刊期: 2008年第06期

  • 尾加压素Ⅱ及其受体在大鼠肾成纤维细胞中的表达及银杏叶的干预作用

    目的:探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对大鼠肾间质成纤维细胞尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体(GPR14)表达的影响和银杏叶(GBE)的干预作用.方法:体外培养大鼠肾成纤维细胞,以未处理细胞作为正常对照组,以AngⅡ作为刺激因素,分别加入终浓度为0、25、50、100和200 g·L-1的GBE,RT-PCR检测各组细胞UⅡ及GPR14 mRNA表达,免疫印迹法检测各组细胞UⅡ及GPR14蛋白含量,ELISA法检测培养上清中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)含量.结果:AngⅡ组UⅡ、GPR14表达量及培养上清中Col Ⅰ含量明显高于正常对照组(P<0.01),与AngⅡ刺激组比较,AngⅡ+GBE组UⅡ及GPRl4的mRNA表达量下降(P<0.01),蛋白含量减少(P<0.01或P<0.05),培养上清中Col Ⅰ含量明显降低(P<0.01或P<0.05).结论:GBE可抑制AngⅡ诱导的肾间质成纤维细胞UⅡ及受体mRNA表达,降低其蛋白含量,减少细胞外基质COl Ⅰ分泌.

    作者:王丹;李才;李相军;石艳;苗春生 刊期: 2008年第06期

  • CT定量测量老年2型糖尿病患者骨密度变化及其与血糖水平的相关性分析

    目的:分析老年2型糖尿病患者骨密度的变化及其与血糖水平的相关性,探讨血糖水平高低对其骨密度的影响.方法:采用定量CT对160例老年2型糖尿病患者(血糖及糖化血红蛋白控制正常组80例,血糖及糖化血红蛋白异常增高组80例)及健康老年人80例进行腰椎骨密度测定,检测血糖水平并分析其相关性;比较糖尿病高血糖组、糖尿病血糖控制正常组和健康老年对照组的骨质疏松的发生率.结果:糖尿病高血糖组骨密度低于对照组及糖尿病血糖控制正常组(P<0.05);糖尿病高血糖组骨质疏松症发生率明显高于对照组及糖尿病血糖控制正常组(P<0.05);老年2型糖尿病患者的骨密度与血糖水平呈负相关关系(老年男性组:r=-0.738 2,P=0.001 3;老年女性组:r=-0.834 3,p=0.000 7).结论:老年2型糖尿病患者的血糖水平影响骨密度,血糖水平越高,骨密度越低;血糖控制不佳的老年2型糖尿病患者更易患骨质疏松症.

    作者:王桂芝;乔俊华;梁萍;刘纯岩 刊期: 2008年第06期

  • 人低氧诱导因子1-α转染人骨髓内皮祖细胞的体外实验

    目的:将人低氧诱导因子1-α(HIF1-α)转染人骨髓内皮祖细胞(EPCs),为探讨转染HIF1-α基因的EPCs对梗塞心肌血管修复及血管再生能力提供依据.方法:密度梯度法分离人骨髓中单个核细胞,以1×106?mL-1细胞浓度接种于用纤维连接蛋白包被的培养皿中,培养14 d后采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性成分ecNOS、flk-1的表达;采用acLDL-Dil和FITC-UEA-1对细胞染色;采用LipofectamineTM 2000介导PCDNA3.0-HIF1-α质粒转染EPCs,RT-PCR检测HIF1-α的转录;ELISA检测细胞上清中VEGF表达;免疫印迹法检测HIF1-α蛋白表达.结果:培养第5天起,部分圆形单核细胞转化为梭形贴壁EPCs,7 d左右出现由数十个细胞形成的细胞集落,10 d后形成明显克隆.RT-PCR检测ecNOS在548 bp处出现条带,flk-1在819 bp处出现条带;acLDL-Dil和FITC-UEA-1双染色阳性;RT-PCR在383 bp处出现特异性条带;ELISA转染HIF1-α的EPCs上清中VEGF含量为(20.53±2.33)μg·L-1,未转染HIF1-α的EPCs上清中VEGF含量为(3.96±1.67)μg·L-1,两组比较差异有显著性(P<0.05).免疫印迹法(Western blotting)检测在相对分子质量120 000处出现条带.结论:PCDNA3.0-HIF1-α质粒成功转染EPCs.

    作者:姜振宇;宋晓燕;林海;姚程 刊期: 2008年第06期

  • 颈动脉滴注尿激酶合剂治疗脑梗塞(附16例报告)

    近年来,本院采用颈动脉加压滴注尿激酶及维脑路通合剂治疗脑梗塞,效果良好,现报道如下.1 临床资料治疗组16例,男性10例,女性6例,年龄39~65岁,平均年龄52.5岁;均为颈内动脉系统脑梗塞,其中脑梗塞7例,大面积脑梗塞2例(梗塞灶涉及2个脑叶或以上),腔隙性脑梗塞7例;除外脑出血、出血性梗塞、高血压病、胃溃疡、意识障碍、颈动脉高度狭窄、颈动脉窦反射亢进、支气管哮喘病及心、肝、肾功能障碍者;采用尿激酶、维脑路通合剂(生理盐水70 mL,普鲁卡因5 mL,维脑路通200 mg,尿激酶15万U)经颈动脉加压滴注,30 min内滴完,其后以每小时15万U静脉滴注12 h.

    作者:宫景峰;纪莉 刊期: 2008年第06期

  • 以针灸及食疗为主综合治疗失眠症58例

    1 临床资料1.1 一般资料本组58例单纯性失眠症患者,男性26例,女性32例,年龄22~66岁.以入睡时间、整晚睡眠时间、中间醒来时间及第2天精神状况作为主要观察指标.

    作者:张大旭;张博;王丹;张娅婕 刊期: 2008年第06期

  • 注射用阿奇霉素治疗呼吸道感染74例临床观察

    1 临床资料本组所选择呼吸道感染病例为门诊可随访者,少数为住院患者,共141例,随机分为治疗组和对照组.治疗组74例,男性39例,女性35例,年龄17~53岁,平均年龄45.3岁;其中急性咽炎12例,急性扁桃体炎10例,急性支气管炎20例,社区获得性肺炎15例,支气管扩张8例,哮喘继发感染9例.对照组67例,男性35例.女性32例,年龄17~55岁,平均年龄45.5岁;其中急性咽炎11例,急性扁桃体炎9例,急性支气管炎18例,社区获得性肺炎14例,支气管扩张7例,哮喘继发感染8例.

    作者:乔国伟;张野光 刊期: 2008年第06期

  • 芦荟膏对大鼠拔牙创愈合的促进作用

    目的:观察芦荟膏在大鼠拔牙创愈合过程中的促进作用.方法:60只Wistar大鼠拔除左右上颌第一磨牙,建立拔牙创动物模型,随机分为实验1和2组(30%和50%芦荟膏组,每组30只),右侧拔牙创内放入芦荟青作为实验组,左侧常规处理(不放任何药物)作为对照组.于处理后2、4、6、8、11及15 d肉眼观察拔牙创软组织愈合情况,测量创口面积,并进行组织学观察.结果:拔牙第4天以后,实验1组和实验2组拔牙创面积与对照组比较明显缩小,差异有显著性(P<0.05),且实验1组拔牙创面积小于实验2组(P<0.05).组织学观察可见,实验组拔牙创内新骨形成比对照组早,实验1组拔牙后15 d骨样组织填充满拔牙创,较对照组及实验2组愈合快.结论:芦荟膏具有促进拔牙创成纤维细胞增殖及肉芽组织和上皮细胞生长的作用,有利于牙槽新骨形成,促进拔牙创的早期愈合,且30%芦荟膏的作用优于50%芦荟膏.

    作者:孟培松;刘馥菲;毕良佳;胡成己;王娜 刊期: 2008年第06期

  • 原发性肺淋巴瘤的影像学诊断

    1 临床资料本组原发性肺淋巴瘤8例,男性6例,女性2例,年龄45~70岁.发热4例,咳嗽,咳痰带血丝3例,胸痛2例,咯血、乏力各1例,并发右上肢疼痛1例,无自觉症状经查体发现1例.8例均行胸片和CT检查.采用GE Lightspeed 16多层螺旋CT机,常规扫描层厚7.5 mm,层距为7.5 mm,薄层扫描层厚、层距均为1.25 mm.影像学诊断:肺癌5例,肺炎3例.

    作者:成钢;黄森 刊期: 2008年第06期

  • 微米光与高频电波刀治疗重度宫颈糜烂疗效比较

    宫颈糜烂是妇科常见疾病,其患病人数占妇科门诊总人数的40%~60%,目前主要用物理方法进行治疗.本院2005年4月-2007年12月采用微米光和高频电波刀治疗重度宫颈糜烂297例,现报道如下.

    作者:梁海;王鸿艳 刊期: 2008年第06期

  • 毛细胞型星形细胞瘤1例临床及病理分析

    毛细胞型星形细胞瘤(pilocytic astrocytoma)多见于10岁左右儿童和青少年,起源于胶质细胞的前体细胞.本文作者曾诊断1例成人毛细胞型星形细胞瘤患者,现报道如下.

    作者:孙凤丹;姜延航 刊期: 2008年第06期

  • 彩超诊断膀胱憩室并憩室内多发结石1例

    1 临床资料患者,男性,73岁.因尿频、尿急、尿不净等症状反复发作多次就诊.实验室检查尿常规经常出现红细胞及白细胞,临床诊断为泌尿系感染.近日患者尿频、尿急症状加重,来本院就诊.超声检查使用东芝SSA-350A彩色多普勒超声诊断仪,探头频率为3.5MHz.

    作者:尹鸿鹰;丛震宇;王丽萍 刊期: 2008年第06期

  • 人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定

    目的:进行人脂肪干细胞的分离、体外培养及鉴定,为组织工程的进一步研究提供实验依据.方法:将剪碎的人脂肪组织加入Ⅰ型胶原酶消化,离心.将细胞悬液置于6孔培养板中,37℃、5%CO2培养箱中培养,细胞达80%融合时进行传代.选取第3代细胞,进行免疫组织化学染色,检测细胞表面抗原标记物;选取第3代细胞,分为成骨诱导组和成脂诱导组,每组又分为诱导组(加入相应诱导培养基)及对照组(未经诱导的细胞).成骨诱导72 h后进行碱性磷酸酶(AKP)含量检测,8 d后进行茜素红染色,检验细胞内是否出现钙沉积;成脂诱导2周后进行油红O染色,检测细胞内是否形成脂滴.结果:培养细胞均有CD44、CD49d抗原阳性表达,不表达CD45、CD106抗原;成骨诱导72 h后,诱导组细胞内AKP含量(0.488 3 U?g-1prot)较对照组(0.063 2 U?g-1prot)明显增高(P<0.05);8 d后诱导组茜素红染色阳性,对照组阴性;成脂诱导2周后油红O脂肪颗粒染色为阳性,对照组为阴性.结论:利用原代细胞培养技术可成功地从人脂肪组织中分离出脂肪干细胞.

    作者:兰珊珊;赵自然;李玉新;鲍永利;王淼;张舵 刊期: 2008年第06期

  • GPI锚定蛋白检测诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床价值

    目的:探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者不同外周血细胞GPI锚定蛋白的表达情况,为PNH的诊断和鉴别诊断提供依据.方法:采用流式细胞术检测32例PNH患者外周血各类细胞膜上CD55、CD59、CDl6及CD14的表达百分率.结果:PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜上CD55、CD59表达均明显减少,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.001),且粒细胞上CD55、CD59表达率低于红细胞(P<0.05);血小板CD55、CD59表达率也较对照组减少(P<0.05);有27例PNH患者的淋巴细胞CD55、CD59表达降低,其缺失率达30%,低于粒细胞和红细胞;CDl6在粒细胞上表达量差异很大(34%~83%),与对照组比较差异有显著性(P<0.001);在单核细胞上可见CDl4表达缺失的PNH克隆,CD14表达比例明显低于正常对照组(P<0.001).结论:检测外周各系血细胞CD55和CD59可以使典型PNH的诊断更加可靠,使部分缺乏典型临床表现的PNH明确诊断.检测CD16和CD14对排除PNH具有重要意义.

    作者:段秀梅;车媛媛;谭岩;方艳秋;许淑芬;刘磊;孙牧男 刊期: 2008年第06期

吉林大学学报(医学版)杂志

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