学术投稿

人MT2A基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达

李新颖;潘林鑫;耿慧武;刘君;刘晓颖;范礼斌

关键词:金属硫蛋白, 细胞定位, 转染, 免疫印迹
摘要:目的 用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人金属硫蛋白2A(MT2A)真核表达载体,用其转染HEK 293T,COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位.方法 设计带FLAG-tag的引物,以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增MT2A全长序列,然后插入pCDNA 3.1中构建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;脂质体法转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位.结果 正确构建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;其在HEK 293T细胞中能有效地表达;免疫荧光实验表明在COS-7细胞中,MT2A主要分布在细胞质内.结论 该研究结果为了解MT2A 在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 基质金属蛋白酶-2的结构和功能

    基质金属蛋白酶(MMP)-2是由多种细胞分泌的明胶酶,能够降解多种细胞外基质,在动物和人体内发挥着重要的生理和病理功能.本文就近年来MMP-2在蛋白结构、生理和病理功能方面的研究进展做一综述.并指出MMP-2作为疾病预后指标和治疗靶标时应该注意的问题.

    作者:孙春凤 刊期: 2013年第03期

  • 高频超声在脑卒中偏瘫患者周围神经病变的临床研究

    目的 观察脑卒中偏瘫患者正中神经、尺神经的超声变化.方法 运用超声技术分别检测100例脑卒中偏瘫患者双侧正中神经、尺神经的横截面积(CSA)以及边界.在偏瘫侧与非偏瘫侧、患者双侧与正常对照组之间进行比较,并分析CSA与年龄、病程之间的相关性.结果 尺神经患侧较健侧在肘管入口处明显增粗(P<0.05);正中神经、尺神经双侧均较正常对照组明显增粗(P<0.05);患侧与健侧异常检出率差异无统计学意义;CSA与年龄呈正相关.结论 脑卒中偏瘫患者周围神经可出现双侧病变,运用超声可观察到CSA的增粗,可用于指导临床诊断和治疗.

    作者:蒲云涛;吴珊;王春蕾;何珊 刊期: 2013年第03期

  • 白藜芦醇对糖尿病大鼠肾脏足细胞nephrin表达的研究

    目的 观察白藜芦醇对糖尿病大鼠足细胞nephrin表达的影响.方法 SD大鼠分为正常对照组、糖尿病肾病(DN)组、白藜芦醇(Res)组.SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液.造模成功后Res组给予Res(75 mg/kg)灌胃.12周后取肾组织行常规病理检查,观察各组血糖(BS)、肾功能、24 h尿白蛋白排泄率(UAER)、单肾重/体重等,光镜下观察肾脏结构变化,Western blot分析技术检测肾脏足细胞nephrin的表达.结果 ① 与正常对照组相比,DN组UAER、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)均显著上升(P<0.05),Res组上述指标除BS外较DN组均有改善(P<0.05);② 与正常对照组相比,DN组足细胞相关分子nephrin蛋白表达下调,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);Res组nephrin表达较DN组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Res对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin表达有关.

    作者:丁洪成;廖春分;程长明 刊期: 2013年第03期

  • P2受体介导对大鼠三叉神经节神经元电压门控性钙离子通道的作用

    目的 应用全细胞膜片钳研究P2受体介导对大鼠的三叉神经节(TG)神经元上电压门控性钙离子通道(VGCC)的作用.方法 急性分离大鼠TG神经元细胞,通过全细胞膜片钳记录电压门控性钙离子通道电流,分别灌流腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)及P2X、P2Y受体的激动剂,观察其对VGCC电流的作用.结果 ATP对大鼠TG神经元细胞的VGCC电流有可逆的抑制作用(P<0.05),P2X受体激动剂αβ-meATP能够显著抑制TG神经元的VGCC电流(P<0.05),而P2Y受体激动剂2-MeSADP对VGCC电流无明显作用.结论 P2受体介导对大鼠的TG神经元上VGCC电流有抑制作用.

    作者:孙晖;李国超;解敏;刘悦雁;李忠稳;王烈成;王元银;周健;张志愿 刊期: 2013年第03期

  • 栀子柏皮汤对α-萘异硫氰酸酯诱导的肝内胆汁淤积大鼠的保护作用

    目的 探讨栀子柏皮汤对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的肝内胆汁淤积大鼠的保护作用及可能机制.方法 实验组大鼠灌胃给予栀子柏皮汤7 d,第7天给药后4 h给ANIT造模.48 h后,测血清总胆红素(TBIL)含量、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)活性及肝匀浆组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.RT-PCR法及Western blot法检测胆汁代谢相关的转运体胆盐输出泵(BSEP)、钠-牛磺酸共转运体(NTCP)及氧化应激相关酶细胞色素CYP2E1的表达.结果 栀子柏皮汤能够呈剂量依赖性的降低血清TBIL、ALP、ALT、AST、GGT及肝组织中MDA、GSH含量;提高肝组织中SOD、GSH-Px活性;增加肝组织中BSEP的表达,降低NTCP及CYP2E1的表达.结论 栀子柏皮汤对ANIT诱导的肝内胆汁淤积大鼠具有保护作用,其作用机制可能与调控胆汁代谢相关转运体及抗氧化损伤有关.

    作者:曹璐;李俊;黄成;韩静文 刊期: 2013年第03期

  • HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究

    目的 观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMV AD169株能跨种属感染MEF提供依据.方法 将100 TCID50 HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d 的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达.结果 观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMV AD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势.结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖.

    作者:吉阳;任鹏;陈敬贤;王明丽 刊期: 2013年第03期

  • 心脏直视射频消融同期行左房减容手术治疗风湿瓣膜病合并心房纤颤

    回顾性分析56例收缩末期的巨大左心房[内径为78~210(96.5±33.2)mm]行左房折叠术并同期行心房纤颤直视射频消融术及瓣膜置换手术的患者的临床资料,在合并心房纤颤的瓣膜病手术的同时对巨大左心房行左心房折叠术,并同期行改良直视射频消融术.术后恢复窦性心律比例较满意,心功能恢复效果良好.

    作者:石开虎;龚文辉;徐盛松;宣海洋;张珂;占红英 刊期: 2013年第03期

  • 比例测量尺在上前牙冠延长术中的应用

    回顾性分析使用比例测量尺对12例患者26颗上前牙行冠延长术的临床疗效,并探寻术后佳修复时机.术后8~12周行冠修复,龈缘协调性良好,牙周状况良好,修复效果较好.使用比例测量尺行冠延长术使得术者能客观掌握美学的佳比例,修复后获得较好的美学效果.

    作者:汪婧;徐燕;黄万元;程楠;路晶晶 刊期: 2013年第03期

  • 左心耳闭塞预防心房颤动血栓的研究进展

    心房颤动(简称房颤)患者易发生血栓栓塞,超过90%的心源性血栓来自左心耳.而很多情况房颤的心室率控制可作为治疗首选,故预防血栓尤为重要,华法林是目前公认的有效抗凝用药,但使用有局限性,目前可通过外科手术及介入方法闭塞左心耳减少房颤血栓的发生率.现就左心耳的解剖和血栓栓塞的关系、闭塞左心耳的方法、封堵装置的研究现状及进展作一综述.

    作者:崔婷 刊期: 2013年第03期

  • DNT细胞的扩增及其对胰腺癌Panc-1细胞的影响

    目的 探讨TCR+CD+3CD-4CD-8(DNT)双阴T细胞对人胰腺癌细胞系Panc-1的影响.方法 应用抗体吸附法扩增人外周血DNT细胞,采用流式细胞仪检测所得细胞表型,选择多组对照观察DNT细胞对裸鼠荷瘤的生长曲线和抑瘤率的影响,应用RT-PCR检测不同浓度DNT细胞与Panc-1细胞体外培养后Fas/FasL的表达情况.结果 经过12 d左右的培养,每孔细胞数量可达1.0×106个以上.流式细胞仪鉴定细胞表型为CD+3CD-4CD-8.与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组对裸鼠荷瘤的肿瘤生长曲线及抑瘤率的差异有统计学意义,实验组的抑瘤率达44.75%.DNT细胞与胰腺癌细胞共培养后,胰腺癌细胞在mRNA水平的Fas表达量明显上升,差异有统计学意义;FasL表达略有下调,差异无统计学意义.结论 DNT细胞能抑制胰腺癌Panc-1细胞株增殖,Fas/FasL途径为其作用机制之一.

    作者:杨仁保;陈炯;卢寅;武文;周杭城;陈龙江;胡立威 刊期: 2013年第03期

  • 自体软骨移植在单侧唇裂鼻畸形整复中的应用

    目的 探讨自体软骨移植在单侧唇裂继发鼻畸形整复中的应用.方法 术前对患者鼻翼软骨、鼻中隔软骨等亚细结构的发育状况进行分析,在充分解剖复位的基础上,采用自体软骨植入等方法,重塑鼻部形态.结果 本组单侧唇裂术后鼻畸形患者14例,通过自体软骨移植矫正,随访6个月~1年,外鼻形态持久、满意,移植物无外露、感染等并发症.结论 采用自体软骨移植修复单侧唇裂继发鼻畸形,能够获得良好的鼻通气功能和稳定、满意的鼻部形态.

    作者:谢远亮;杜晓扬;水庆付;王明刚;赵李平 刊期: 2013年第03期

  • 双蒂带状肌筋膜甲状软骨外膜瓣在下咽癌术后修复中的应用

    回顾性分析采用双蒂颈前带状肌筋膜甲状软骨外膜瓣修复36例下咽癌术后组织缺损的临床资料.8例术后并发咽瘘,后成功治愈;14例术后2~3周内恢复了吞咽功能;16例行喉功能保留手术患者恢复发音功能,能进行日常语言交流;2例因严重呛咳不能拔管,根据Kaplan-Meier法计算出3、5年生存率分别为48.5%、22.2%.双蒂颈前带状肌筋膜甲状软骨外膜瓣操作简单,取材方便,是一种比较理想的修复下咽癌术后组织缺损的材料.

    作者:牛开元;刘业海;陈文文;吴开乐;赵益;高潮兵;吴静;陆地红 刊期: 2013年第03期

  • COPD大鼠肺血管重构与气管重塑的实验研究

    目的 观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠造模成功后2周肺血管重构及气管重塑状况,探讨两者的相关性.方法 将32只大鼠随机分为空白对照组(16只),COPD模型组(8只),COPD 6周组(8只).用气管内注入脂多糖(LPS)及烟熏方法制作COPD模型.于第4周处死空白对照组及COPD模型组大鼠各8只,第6周处死空白对照组及COPD 6周组各8只.观察COPD大鼠造模成功后2周肺血管超微结构的变化及细支气管平滑肌和胶原厚度变化.结果 COPD 6周组肺微小动脉内皮细胞胞质内吞饮小泡较COPD模型组增多,线粒体空泡变性,内膜下可见内皮细胞悬空,肺毛细血管内皮细胞胞核有明显固缩,核间隙、板层体空泡化及内质网扩张较COPD模型组明显;COPD 6周组管壁面积占血管总面积的百分比、管壁厚度占外径的百分比 、管壁面积与气管总面积比值、管壁厚度与气管外径比值均高于COPD模型组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 COPD大鼠造模成功后2周肺血管重构及气管重塑具有一定的相关性,由于气道重塑的进展产生低氧血症,长期慢性缺氧可导致肺循环结构的进一步重构.

    作者:张伟;谷明明;孙璐璐;韩佳;姚玉强 刊期: 2013年第03期

  • 黄芪总苷诱导NB4细胞凋亡的线粒体通路的研究

    目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的线粒体传导通路的影响.方法 将不同浓度的TA(200、300、400 μg/ml)作用于NB4细胞,体外培养48 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;采用RT-PCR测定细胞内Bcl-2和Bax mRNA变化;使用分光光度法测定细胞内caspase-3的活性变化.结果 TA作用于NB4细胞48 h后,各浓度组的凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),在TA(200、300、400 μg/ml)组凋亡率呈浓度依赖性增加,各组之间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各浓度组Bcl-2 mRNA及线粒体膜电位的表达明显下降,caspase-3的表达明显升高(P<0.05);Bax mRNA的表达无明显差异.结论 TA可以诱导NB4细胞凋亡,具有体外抗白血病效应,并且可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡.

    作者:谢希;夏瑞祥 刊期: 2013年第03期

  • 甲型H1N1流行性感冒裂解疫苗的安全性分析

    目的 了解甲型H1N1流感裂解疫苗疑似预防接种异常反应(AEFI)的特征,评价甲型H1N1流行性感冒(简称甲流)裂解疫苗安全性.方法 通过中国免疫规划监测信息管理系统收集甘肃省接种甲型H1N1流感裂解疫苗后报告的AEFI个案数据,采用描述性分析方法、应用Poisson分布检验对相关指标进行流行病学分析.结果 ① AEFI报告总发生率为36.28/10万,不良反应发生率为29.53/10万;② 女性AEFI报告发生率高于男性(P<0.01),5岁以下儿童AEFI报告发生率高于其他年龄组(P<0.05);学生AEFI报告发生率较其他人群高(P<0.01);③ AEFI多发生在接种后1 d之内,临床表现主要以发热、红肿、硬结为主.结论 接种甲型H1N1流感裂解疫苗后,发生AEFI以一般反应为主,严重反应发生率较低.甲型H1N1流感裂解疫苗安全性相对较高.

    作者:安婧;张晓曙;梁雪枫;李慧 刊期: 2013年第03期

  • ARIMA模型在合肥市疟疾发病预测中的应用

    目的 探讨自回归求和移动平均(ARIMA)模型预测合肥市疟疾发病率的可行性,并预测疟疾月发病趋势.方法 应用SPSS 13.0软件对合肥市疟疾逐月发病率建立ARIMA模型,利用2011年疟疾月发病率对模型参数进行校正从而预测2012年疟疾月发病率.结果 模型ARIMA(1,1,1)(1,1,0)12是合肥市疟疾拟合的佳模型,预测值与实际值基本吻合,且实际值均在预测值95%可信区间范围内,其外推预测的平均相对误差为2.57%.结论 用时间序列模型对疟疾发病情况的拟合结果满意,预测效果良好,可用于预测未来疟疾的变动趋势,为疟疾预防控制措施的制定提供重要依据.

    作者:樊雯婧;陆群;邹立巍;仰凤桃;王波;武松;翟金霞 刊期: 2013年第03期

  • CD4+CD25+CD127low调节性T细胞在结核性及恶性胸腔积液患者中的表达及意义

    目的 探讨CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg细胞)在结核性及恶性胸腔积液患者外周血及胸腔积液中的表达及其临床意义.方法 收集初诊结核性及恶性胸腔积液患者各20例,采用流式细胞仪检测两组患者外周血及胸腔积液中CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的表达;另外选择正常健康体检人员20例记为对照组,测定其外周血CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的表达.结果 结核性及恶性胸腔积液患者外周血CD4+CD25+CD127low占CD4+细胞比例分别为:(7.88±2.16)%、(10.46±1.37)%,较对照组(4.74±0.74)%明显升高(P<0.05);结核性和恶性胸腔积液中CD4+CD25+CD127low占CD4+细胞比例分别为:(8.45±1.39)%、(18.98±5.24)%,均高于同组别及对照组外周血水平(P<0.05),并且恶性胸腔积液中CD4+CD25+CD127low占CD4+细胞比例明显高于结核性胸腔积液(P<0.05).结论 CD4+CD25+CD127lowTreg细胞在结核性及恶性胸腔积液患者的外周血及胸腔积液中表达比例的升高,表明其可能通过对机体免疫力的调节而参与疾病的发生发展,且其在胸腔积液中表达的高低变化可能作为结核性及恶性胸腔积液诊断的一项辅助性指标.

    作者:钱晓君;赵磊;陆友金;王会平 刊期: 2013年第03期

  • 特异性阻断Kv1.5通道对心房颤动患者缝隙连接蛋白40表达的影响

    目的 利用伊布利特特异性阻断超速延迟整流性钾通道 (Kv1.5)后对缝隙连接蛋白(Cx)40表达的影响,探讨Kv1.5通道可能是心房肌缝隙连接蛋白下游信号传导通路之一,揭示心房颤动(AF)的可能发生机制.方法 实验标本取自风湿性心脏病接受心脏瓣膜置换手术患者的右心耳组织,根据患者术前心律将标本分为2组:风湿性心脏病[窦性心律组(SR组)]和风湿性心脏病合并AF组(AF组).采用酶解法分离风湿性心脏病接受手术患者心房肌细胞、培养心房肌细胞和运用Western blot技术检测两组心房肌细胞运用伊布利特特异性阻断Kv1.5通道前后Cx40的表达情况.结果 利用伊布利特特异性阻断Kv1.5通道后,AF组患者心房心肌细胞Cx40的表达水平较阻断前明显增加(P<0.01);而在SR组中,阻断前后Cx40/GAPDH比值的变化不明显.结论 Kv1.5通道的开放状态可能会影响Cx40的表达,从而揭示AF的发生机制中电重构可能会引起结构重构.

    作者:张珂;石开虎;徐盛松;曹炜;宣海洋;沙纪名 刊期: 2013年第03期

  • ICU机械通气患者谵妄亚型分析

    目的 探讨ICU机械通气患者谵妄亚型的发生率及风险因素.方法 采用前瞻性队列研究,收集ICU机械通气患者的基线资料,应用简体中文版意识模糊评估法(CAM-ICU)对患者进行评估.结果 共有235例机械通气患者纳入样本,151例(64.26%)发生谵妄,其中活动增多型谵妄33例(21.85%),活动减少型谵妄84例(55.63%),混合型谵妄为34例(22.52%).应用Logistic回归分析发现,年龄和呼吸系统疾病分别是活动减少型和混合型谵妄的风险因素(OR=2.365,OR=1.312;OR=1.376,OR=1.352).结论 ICU机械通气患者活动减少型谵妄发生率高,其次为混合型、活动增多型谵妄.活动减少型和混合型谵妄有共同的独立风险因素.

    作者:庞礴;査佳安;方长太;朱春燕 刊期: 2013年第03期

  • 黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠大脑皮层5-HT1AR-β-arrestin2-akt信号通路的影响

    目的 探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制.方法 60只 SD大鼠随机均分为正常组、模型组、SRP (400、200、100 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组.采用7种不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化;免疫组化法测定大脑皮层区5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)的表达;Western blot法分析大脑皮层区5-HT1AR、β-arrestin2、akt蛋白表达水平.结果 应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠体重降低、自主活动次数减少,处于抑郁状态.免疫组化法及Western blot法结果显示,与正常组相比,模型组大脑皮层5-HT1AR表达降低,β-arrestin2、akt表达升高 (P<0.05),而SRP组可以逆转这种现象(P<0.05,P<0.01).结论 中药SRP的抗抑郁作用可能与调节5-HT1AR/β-arrestin2/akt信号通路有关.

    作者:陈程;胡婷婷;黄莺;杨静谟;徐婷娟;徐维平;魏伟 刊期: 2013年第03期

安徽医科大学学报杂志

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主管:安徽省教育厅

主办:安徽医科大学