学术投稿

重组pAd/CMV/V5-DEST-p16质粒的构建

姚彬;胡勇;熊自忠;李旭

关键词:基因, p16, 腺病毒科/遗传学, DNA, 重组
摘要:摘要目的构建并鉴定pAd/CMV/V5-DEST-p16重组腺病毒质粒.方法合成人p16-INK4表达基因,构建pENTR1A-p16质粒.通过LR反应,入口克隆pENTR1A-p16质粒的外源性合成的修饰后的p16 cDNA,取代目的质粒pAd/CMV/V5-DEST中的ccdB基因,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-p16,测序证实质粒含有目的基因.结果构建了p16重组腺病毒质粒,为研究p16-INK4的作用创造了条件.结论用通路克隆系统构建重组p16腺病毒质粒稳定、可靠、方便.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 人巨细胞病毒增殖性感染新生乳鼠大脑皮质神经细胞

    摘要目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)AD169株在体外增殖性感染新生乳鼠大脑皮质神经细胞.方法 在长成单层的Balb/c新生乳鼠的大脑皮质神经细胞培养物上,接种TCID50为5×103/3 ml的HCMV AD169株感染的HF细胞上清液.通过相差显微镜、PCR、RT-PCR、间接免疫荧光、TCID50、透射电镜等方法观察和鉴定HCMV在神经细胞内的感染状况.结果 接种病毒的大脑皮质神经细胞在感染后第1天即可观察到特征性细胞病变效应,且随着感染时间的延长病变逐渐加重;HCMV IE和UL83 DNA及mRNA检测均可见阳性条带;HCMV pp65蛋白免疫荧光检测亦为阳性,蛋白质表达量随着培养时间的延长明显提高;TCID50检测随着感染时间的延长病毒滴度逐渐上升;在神经元胞浆内通过透射电镜观察到病毒颗粒.结论 HCMV AD169株可能具有增殖性感染乳鼠大脑皮质神经细胞的能力.

    作者:蔡亦红;高荣保;王明丽 刊期: 2006年第03期

  • HLA-DRB1等位基因在皖籍类风湿关节炎患者的分布

    摘要目的探讨HLA-DRB1基因在皖籍类风湿关节炎患者的分布,以寻找皖籍类风湿关节炎患者的易感性和保护性HLA-DRB1等位基因及这些等位基因的意义.方法采集类风湿关节炎患者(106例)和正常对照(340例)外周静脉血,采用SSP多重PCR技术扩增两组成员HLA-DRB1等位基因.计算并比较两组等位基因携带率.结果 HLA-DRB 1*04、DRB 1*09和DRB 1*1001在RA组的频率显著高于正常对照组,两组差异有显著性(P<0.01);而HLA-DRB 1*11、DRB 1*15和DRB 1*07的频率显著低于对照组,两组差异有显著性(P<0.01);其余等位基因在两组分布差异无显著性(P>0.05).结论 HLA-DRB 1*04、DRB 1*09和DRB 1*1001可能是皖籍RA患者的易感性等位基因,HLA-DRB 1*11、DRB 1*15和DRB1*07可能是保护性等位基因.

    作者:蒋真;李向培;钱龙;厉小梅;汪国生;张宏;王玮;阎文英 刊期: 2006年第03期

  • 重组pAd/CMV/V5-DEST-p16质粒的构建

    摘要目的构建并鉴定pAd/CMV/V5-DEST-p16重组腺病毒质粒.方法合成人p16-INK4表达基因,构建pENTR1A-p16质粒.通过LR反应,入口克隆pENTR1A-p16质粒的外源性合成的修饰后的p16 cDNA,取代目的质粒pAd/CMV/V5-DEST中的ccdB基因,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-p16,测序证实质粒含有目的基因.结果构建了p16重组腺病毒质粒,为研究p16-INK4的作用创造了条件.结论用通路克隆系统构建重组p16腺病毒质粒稳定、可靠、方便.

    作者:姚彬;胡勇;熊自忠;李旭 刊期: 2006年第03期

  • 瘢痕疙瘩的临床和流行病学特征

    目的了解中国人瘢痕疙瘩患者的临床和流行病学的特点.方法采用SPSS 13.0软件对550例瘢痕疙瘩先证者流行病学分析并用Falconer法计算遗传度.结果发病年龄(22.61±12.34)岁,男女之间差异无显著性.有家系患者比无家系患者病情更重且此种差异有显著性(χ2=8.430,P<0.05).有家系患者中58.20%为多发患者,而无家系患者中该比例为47.40%,两者差异有显著性(χ2=5.167,P<0.05).患者一、二和三级亲属的遗传度分别是71.55%、40.51%和17.14%,加权平均遗传度为58.89%.结论年轻人好发且无性别差异,遗传因素可能在发病中起重要作用.

    作者:周顺铭;杨森;李伟;王剑;何素敏;梁燕华;王红艳;张学军 刊期: 2006年第03期

  • 248例辅助生殖技术后双胎妊娠结局

    目的探讨辅助生殖技术后多胎妊娠的临床结局.方法回顾性对照分析42例辅助生殖技术后双胎(A组)与143例辅助生殖技术后单胎(B组)、54例自然受孕双胎(C组)的孕期并发症、分娩方式及围产儿结局.结果辅助生殖双胎组卵巢过度刺激综合征、早产、胎膜早破、低体重儿发生率高于单胎组,而妊娠高血压疾病、妊娠期糖尿病等合并症的发生率与单胎组差异无显著性;辅助生殖双胎组与自然受孕双胎组母体合并症发生率差异无显著性,且新生儿预后良好.结论辅助生殖治疗多胎妊娠率高,为高危孕妇,故要予以高度重视,加强监护.

    作者:吴娟;曹云霞 刊期: 2006年第03期

  • CBA、C57BL/6bkl小鼠对脉冲性噪音损伤敏感性的研究

    摘要目的研究CBA、C57BL/6bkl小鼠对脉冲性噪音损伤的敏感性.方法小鼠共分为8组,第1、2、3组为CBA小鼠(n分别为9、10、10)分别给予160 dB SPL 50、100、150次脉冲噪音暴露,第4、5、6组为C57BL/6 bkl小鼠(n皆为10),分别给予160 dB SPL 50、100、150次脉冲噪音暴露,第7、8组为CBA和C57BL/6bkl小鼠对照组(n=10),无噪音暴露.在噪音暴露前、噪音后24 h及28 d测听觉脑干诱发电位.结果给予160 dB SPL 50次脉冲噪音暴露后,CBA只出现暂时性阈值漂移,C57 BL/6bkl出现暂时性和永久的阈值漂移,给予160 dB 100次和150次脉冲噪音暴露后,CBA和C57BL/6 bkl均出现暂时性和永久性阈值漂移.对照组无阈值漂移.结论 C57BL/6bkl小鼠对脉冲性噪音更敏感,耳蜗铺片形态学亦支持上述结论.

    作者:童步升;Malou Hultcranz;Goran Laurell;段茂利 刊期: 2006年第03期

  • 维甲酸联合三氧化二砷对NB4细胞NF-κB、ROS表达的影响

    摘要目的探讨全反式维甲酸(ATRA)联合三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞的生长以及核因子-κB(NF-κB)、活性氧(ROS)表达的影响.方法选择NB4细胞,加入ATRA和不同剂量的As2O3,观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测CD11 b、ROS、NF-κB的变化,DNA片段梯度观察细胞凋亡.结果 0.5 μmol/L As2O3下调了1 μmol/L ATRA诱导的NB4细胞的分化凋亡发生,同时抑制了NF-κB的激活,提高了ROS水平.2 μmol/L As2O3联合同浓度ATRA对增殖抑制、诱导凋亡更明显.结论 ATRA联合As2O3对NB4细胞具有分化和凋亡的双重效应.

    作者:黄震琪;夏瑞祥;曾庆曙 刊期: 2006年第03期

  • 宫颈癌患者术前介入治疗的疗效观察

    摘要目的评价经子宫动脉灌注化疗对宫颈癌Ⅰb2-Ⅱb的近期疗效.方法 对20例宫颈癌患者Ⅰb2期(6例)、Ⅱa期(4例)、Ⅱb期(10例)采用seldinger技术行双侧子宫动脉灌注化疗、栓塞,观察介入治疗的疗效.结果 经介入治疗后所有宫颈癌患者症状均得到缓解,症状缓解率为100%(20/20),20例患者中肿瘤体积缩小达50%以上的17例,肿瘤完全消退的1例,肿块体积缩小的总有效率为90%(18/20) ,所有患者在介入治疗后10~14 d均接受了宫颈癌根治术.结论 经子宫动脉介入化疗、栓塞对Ⅰb2-Ⅱb期巨块型宫颈癌有满意的近期疗效.

    作者:张莉萍;周家德;张德志;柯小样 刊期: 2006年第03期

  • 汉族人寻常性痤疮的家族危险性研究

    目的探讨遗传因素在汉族青年人寻常性痤疮发病中的作用.方法采用病例对照的方法比较患者和对照组一级亲属的患病情况.共计征集患者975例,健康志愿者580例,其一级亲属分别有3 009人和1 825人.患者的一级亲属中共计有1 085人曾患痤疮,对照组的一级亲属中共计有223人曾患痤疮.结果患者的一级亲属患病风险显著高于对照组(OR:4.05),95% 可信区间 (CI):3.45~4.76.结论证实家族性因素在寻常性痤疮的发病中起着重要的作用.

    作者:徐生新;王海林;范星;孙良丹;杨森;王培光;肖风丽;高敏;崔勇;任韵清;杜文辉;权晟;张学军 刊期: 2006年第03期

  • 丝裂霉素C对兔准分子激光上皮下角膜磨镶术后角膜haze形成的影响

    目的探讨丝裂霉素C(MMC)对兔准分子激光上皮下角膜磨镶术(LASEK)后角膜雾状混浊(haze)的影响.方法对27只青紫兰兔双眼行LASEK手术,术后54眼随机分为3组,即0.02% MMC治疗组(18眼)、0.1%氟米龙治疗组(18眼)和空白对照组(18眼).术后用裂隙灯显微镜观察角膜haze的形成情况;分别于1周、1月、2月取兔眼角膜,行光镜和透射电镜检查.结果术后1周、1月、2月,丝裂霉素C组角膜haze明显轻于对照组(P<0.05),MMC组术区前部基质内角膜成纤维细胞数较对照组和氟米龙组少(P<0.05),后两组间差异无显著性(P>0.05),三组间角膜上皮愈合时间差异无显著性(P>0.05).结论 LASEK术后MMC可抑制角膜基质成纤维细胞的增生及胶原纤维的合成,减少haze的形成,且无明显副作用,是一种有效抑制haze形成的药物.

    作者:刘杰;陈逖;朱美玲;陶黎明;范伟杰;汪永;陈柯 刊期: 2006年第03期

  • 银杏叶提取物对血管性痴呆小鼠的影响

    摘要目的观察银杏叶提取物对小鼠全脑缺血再灌注所致血管性痴呆的影响.方法不完全结扎颈总动脉5min后复灌以造成小鼠血管性痴呆模型,采用电迷宫来观察银杏叶提取物对学习记忆功能的影响;采用试剂盒方法检测对脑内AchE的影响.结果银杏叶提取物可使模型小鼠学习反应时间缩短,记忆潜伏时间延长,错误次数减少;可抑制AchE的活性.结论银杏叶提取物可改善全脑缺血再灌注小鼠的学习记忆能力,提高脑内乙酰胆碱功能,提示对血管性痴呆有保护作用.

    作者:程景林;王爱玲;周玲玲 刊期: 2006年第03期

  • 缺氧缺血性脑病新生儿听力筛查

    目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)对听力的影响及可能导致听力障碍的高危因素.方法应用丹麦耳声发射仪(TEOAE)对HIE患儿和正常儿出生后42 d内进行听力筛查.结果 HIE患儿TEOAE通过率61.5%,与对照组差异有显著性(P<0.05),且多因素Logistic回归分析提示,早产、HIE临床分度、高胆红素血症是其高危因素.结论新生儿HIE能引起新生儿听力障碍,早产、HIE临床分度、高胆红素血症可能是影响HIE新生儿TEOAE不通过的高危因素.

    作者:程雁;王俐俐;宣桂华;张晓敏 刊期: 2006年第03期

  • Caspase-3与Survivin在肝细胞肝癌中的表达

    目的探讨Caspase-3及Survivin在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达.方法采用免疫组织化学SP法分别检测48例HCC、40例癌旁组织、25例肝硬化及8例正常肝组织中Caspase-3和Survivin的表达.结果① Survivin在肝硬化、癌旁肝组织及HCC组织中阳性率分别为8%、5%及43.8%(P<0.01),Survivin 在高、中、低分化HCC组织中的表达阳性率差异无显著性(P>0.05).② Caspase-3在正常肝组织、肝硬化、癌旁肝组织及HCC组织中阳性率分别为87.5%、84%、85%及60.4%,Caspase-3在正常肝脏与HCC组织中表达的差异具有显著性(P<0.05),Caspase-3在高、中、低分化HCC组织中的表达阳性率差异无显著性(P>0.05).③ Caspase-3和Survivin在HCC组织中表达呈明显的负相关性(r=-0.39,P<0.01).④ Survivin和Caspase-3的阳性表达率与HCC患者的临床病理特征无关(P>0.05);但Survivin的阳性表达与HCC的大小相关.结论 HCC中Survivin的高表达及Caspase-3的失表达可能与HCC的生长有关,在HCC中Caspase-3和Survivin表达的负相关性可能与HCC的发生发展有密切关系,与预后的关系有待进一步研究.

    作者:王维利;孟刚 刊期: 2006年第03期

  • 缺血再灌注对大鼠视网膜氧自由基及形态的影响

    摘要目的观察缺血再灌注(RIR)过程中大鼠视网膜氧自由基(OFR)及视网膜形态的变化过程.方法采用前房灌注液体形成16 kPa高眼压而建立RIR模型.检测视网膜组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及行视网膜光学显微镜的组织学观察.结果与空白对照组相比,缺血组SOD、MDA水平分别有明显降低与升高(P<0.05);与缺血组相比,再灌注各组SOD水平继续降低(P<0.05),MDA水平继续升高(P<0.05).缺血再灌注各组大鼠视网膜细胞丢失明显,逐渐由水肿变为萎缩损伤,较空白对照组严重.结论 OFR含量在视网膜缺血再灌注过程中逐渐升高,可导致视网膜持续性病变.

    作者:鲍宁;范伟杰;陶黎明 刊期: 2006年第03期

  • 经枕小脑幕锁孔入路松果体区的应用显微解剖

    目的探讨开展松果体区病变锁孔手术的可行性.方法应用显微外科解剖学技术,对经甲醛固定、动静脉血管内分别灌注红、蓝乳胶的10具成人尸头标本,按手术入路逐层解剖.观察手术径路中环池、四叠体池、胼胝体压部、三脑室后部、大脑大静脉系统、松果体、四叠体的显露范围.结果经枕小脑幕锁孔手术入路对松果体区的显露满意,有充足的手术操作空间,而无效脑暴露少,对脑组织的牵拉损伤小.结论经枕小脑幕锁孔手术入路行松果体区手术是可行的.

    作者:朱安凯;万经海;韩卉;王先祥 刊期: 2006年第03期

  • 装修后居室空气污染调查

    目的探讨装修后居室空气污染状况.方法选择装修结束1周内的住宅70户,检测室内空气中甲醛、苯、甲苯和二甲苯的浓度,同时调查其居室使用面积、购买装修材料和家具的总费用.结果室内空气中甲醛、甲醛、苯、甲苯和二甲苯的超标率分别为42.9%、40.1%、58.6%、72.1%,按单位面积所花费的购买装修材料和家具总费用的均数0.05分组,比较两组之间四种污染的浓度,经统计学分析有意义,固定住房面积后,随着购买装修材料和家具总费用的增加,室内空气中苯和二甲苯的含量也逐渐增加.结论室内装修可导致室内空气中甲醛、苯及其同系物的污染,污染程度与购买装修材料的量和家具总花费成正比.

    作者:操基玉;姚孝元;苏普玉;陈道俊;余秋月;储成顶;陶芳标 刊期: 2006年第03期

  • 急性粒细胞白血病染色体杂合性缺失

    目的探讨染色体微卫星不稳定性和杂合性缺失与急性白血病发生的相关性.方法应用PCR-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染技术检测7 q22-36微卫星不稳定性和杂合性缺失现象.结果在24例急性粒细胞性白血病中,有9例发生了杂合性缺失,发生率为37.50%,D7S515、D7S523、D7S636、D7S487的发生率分别为16.67%(4/24)、8.33%(2/24)、8.33%(2/24)和4.17%(1/24).结论白血病患者染色体上的多位点微卫星改变,提示白血病的发生、发展与染色体的多部位、多步骤改变有关.

    作者:曾庆曙;倪婧;汪渊;周青;王永庆 刊期: 2006年第03期

  • 缓释氟尿嘧啶局部植入在乳腺癌中的治疗作用

    摘要目的探讨缓释氟尿嘧啶局部植入在乳腺癌中的治疗作用.方法应用TUNEL法及免疫组化SP法分别检测治疗组和对照组的乳腺癌细胞的凋亡指数、增殖细胞核抗原和微血管密度的表达.结果治疗组肿瘤细胞凋亡指数与对照组相比明显增高(P<0.01);治疗组肿瘤细胞增殖细胞核抗原及微血管密度与对照组相比明显降低(P<0.05);治疗组和对照组肿瘤细胞凋亡指数与增殖细胞核抗原的阳性表达均呈负相关(P<0.05);治疗组无明显的化疗不良反应.结论缓释氟尿嘧啶的局部化疗能诱导乳腺癌肿瘤细胞发生凋亡,并能抑制乳腺癌肿瘤细胞的增殖及微血管生成.

    作者:聂秀青;王本忠;朱立新;万圣云 刊期: 2006年第03期

  • 杜鹃花总黄酮预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

    摘要目的观察杜鹃花总黄酮(TFR)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法建立Langendorff离体大鼠心脏模型.观察心脏冠脉流量(CF)、心肌中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)及一氧化氮(NO)等的变化.用离体器官法测定家兔主动脉环张力的变化.结果 12.5、25、50和100 mg/L TFR-PP可明显地抑制缺血再灌致大鼠心脏CF的减少和心肌中MDA含量的升高及NO含量和NOS活性的下降;25、50和100 mg/L TFR-PP可明显地抑制心肌中CK和SOD活性的下降;50和100 mg/L TFR-PP可明显地抑制心肌中LDH活性的下降.在0.033~2.70 g/L范围内,TFR可分别松弛由KCl和苯肾上腺素诱导的家兔主动脉环的收缩,TFR的血管松弛作用可被内向整流型钾通道(KIR)的阻断剂BaCl2(10-4mol/L)及大电导Ca2+-敏感性钾通道(BKCa)的阻断剂TEA(3×10-3 mol/L)明显地减弱,但去除血管内皮和用前列腺环素(PGI2)合成酶抑制剂Indo(0.1 mmol/L)及NO合酶抑制剂L-NAME(0.1 mmol/L)预处理后对TFR的血管松弛作用无明显的影响.结论 TFR-PP对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有明显保护作用,其作用可能与减少自由基过氧化、增加NO生成、血管松弛及开放KIR及BKCa等有关.

    作者:张建华;武征;陈志武 刊期: 2006年第03期

  • 大剂量纳洛酮治疗安眠药合并酒精混合中毒患者疗效观察

    目的 观察不同剂量纳洛酮治疗急性安眠药、酒精混合中毒的临床疗效.方法 70例混合中毒患者随机分为大剂量组和常规剂量组,对两组催醒时间、症状持续时间、治疗24 h前后APACHE-Ⅱ、Glasgow评分进行统计分析.结果 大剂量组催醒时间、症状持续时间比常规剂量组短(P<0.05),两组治疗24 h后APACHE-Ⅱ、Glasgow评分差异均有显著性(P<0.01),大剂量组APACHE-Ⅱ、Glasgow评分改善幅度较常规剂量组差异有显著性(P<0.05).结论 安眠药、酒精混合中毒时选用大剂量纳络酮治疗比常规剂量效果更显著.

    作者:俞锐敏;章仕坚;蒋亚斌;黄新智;蒋建华 刊期: 2006年第03期

安徽医科大学学报杂志

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