学术投稿

犬骨髓间充质干细胞的分离纯化与体外培养方法的探讨

曹浩;葛建军;吴胜东;徐盛松

关键词:间充质干细胞, 细胞培养技术, 骨髓细胞
摘要:目的 探讨可靠、纯度高的犬骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分离、培养、鉴定方法.方法 利用密度梯度离心,结合贴壁培养法获得BMMSCs;应用流式细胞仪对BMMSCs表面标志蛋白进行细胞鉴定.结果 采用Percoll分离液进行密度梯度离心可获得纯度较高的BMMSCs,接种细胞生长良好;G1期、S期、G2期细胞所占比例分别为82.4%、10.6%、7.0%;分离培养的细胞:强表达CD44、CD14阴性、CD34阴性、Cdlla阴性、HLA-DR阳性率为1.1%.结论 采用Percoll分离液能够较好地进行犬BMMSCs的体外分离、培养与扩增.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 胸段食管癌喉返神经周围淋巴结清扫的临床意义

    整块切除及区域淋巴结清扫是目前治疗食管癌常用的手术方法.区域淋巴结彻底廓清是食管癌根治术的重要组成部分,其中喉返神经周围淋巴结是胸段食管癌的淋巴结主要转移部位,该处淋巴结的清扫对减少术后上纵隔及颈部复发,以及选择颈清扫术与否有重要指导意义.2002年3月~2005年8月,我们对55例胸段食管癌进行了三区域淋巴结清扫术,其中胸段喉返神经周围淋巴结重点清除,现报道如下.

    作者:吴君旭;于在诚 刊期: 2006年第06期

  • 经胸超声心动图指导房间隔缺损封堵术

    目的 探讨经胸超声心动图不同切面在指导房间隔缺损封堵术中的应用.方法 77例房间隔缺损患者在经胸超声心动图指引下接受心导管封堵术,超声评价缺损大小及位置并结合球囊测量缺损直径而选择相应的封堵器.结果 74例患者成功放置了封堵器,缺损大小为(24.36±8.23)mm,选择的封堵器直径为(26.54±10.36)mm,与超声测量值相关性很好(r=0.92,P<0.01).结论 超声可以直接指导房间隔封堵器的选择与封堵.

    作者:史学功;汪太平;徐岩;朱红军;赵勇 刊期: 2006年第06期

  • 精神分裂症患者工作记忆的研究

    目的 探讨精神分裂症患者和正常人群的工作记忆的差异以及精神分裂症患者的症状与工作记忆成绩的关系.方法 采用字母版n-back实验范式中的2-back测试分别对40名精神分裂症患者和40名健康成年人进行工作记忆测试,比较两组2-back任务成绩的差异;同时对精神分裂症患者进行阳性与阴性症状量表(PANSS)评分.结果 精神分裂症患者组工作记忆的成绩正确率(0.67±0.1)和反应时(0.97 s±0.12 s)与正常对照相比(分别为0.86±0.08、0.75s±0.07 s)差异均有显著性(P<0.01).精神分裂症患者的工作记忆成绩正确率与精神症状之间不相关;而反应时与PANSS总分、妄想症状评分、幻觉症状评分、一般精神症状评分、阳性症状评分以及阴性症状评分之间的相关性有统计学意义(分别为r=0.847,P<0.001;r=0.797,P<0.001;r=0.826,P<0.001;r=0.809,P<0.001;r=0.501,P=0.001;r=0.366,P=0.028).结论 精神分裂症患者的工作记忆明显受损;精神症状对精神分裂症患者工作记忆的加工可能有一定的影响.

    作者:靳胜春;汪凯;王克永 刊期: 2006年第06期

  • 铜陵市城区3 146名儿童高血压患病率调查

    目的 了解健康儿童的血压水平和小学生高血压的患病率.方法 采用整群随机抽样的方法抽取铜陵市城区2所小学1~6年级6~13岁的学生3 146名作为调查对象,测量血压,登记家族史、饮食习惯、年龄、性别,测量体重、身高等.结果 不同性别的儿童血压与年龄、体重、身高呈正相关,且差异有显著性(P<0.05),儿童高血压总患病率为6.90%(217/3 146),其中男生为7.41%(123/1 659),女生为6.32%(94/1 487);不同肥胖程度的儿童之间高血压的患病率差异有显著性(P<0.01).结论 儿童期血压与年龄、体重和身高密切相关,超重及肥胖儿童的高血压患病率较正常儿童高.提示儿童期减少肥胖、改善营养结构对于预防儿童高血压具有重要意义.

    作者:宋文辉;江文胜;高进;洪防;黄旭升 刊期: 2006年第06期

  • SPARC在胃癌组织中的表达

    目的 检测SPARC在人胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌浸润转移的关系.方法 运用免疫组化S-P法检测108例胃癌和89例正常胃黏膜组织中SPARC的表达情况.结果 SPARC主要表达在胃癌的间质细胞,少数表达在胃癌细胞.SPARC在胃癌组织间质细胞的阳性表达率(88.0%)显著高于正常胃黏膜组织(14.1%)(P<0.01).肿瘤细胞SPARC表达与胃癌生物学特性及临床各病理因素均无相关性;而间质细胞SPARC的表达与胃癌的淋巴结转移及临床分期有相关性,与性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、远处转移均无相关性.结论 SPARC在胃癌间质过度表达可能促进胃癌的转移,可作为判断胃癌生物学行为的重要指标.

    作者:李杨;吴继锋;张红;秦蓉;王道斌 刊期: 2006年第06期

  • 肝硬化食管静脉曲张破裂出血风险的分析

    目的 探讨肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血风险的危险因素.方法 肝硬化伴有食管静脉曲张患者202例,其中出血组112例,未出血组90例,通过单因素分析和Logistic回归分析,分析临床各项指标与出血的关系,同时评价北意大利内镜协会出血风险指数在出血风险预测中的作用.结果 出血组和未出血组在病程、门静脉直径、脾静脉直径、脾脏指数、红色征以及食管静脉曲张Grade分级比较差异具有显著性(P<0.05);Logistic回归模型显示肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血的主要预测因素为病程、凝血酶原活动度及红色征.出血组出血风险指数明显高于未出血组(P<0.01),进一步分层分析显示入院期间再出血组凝血酶原活动度明显低于未再出血组(P<0.01),再出血组出血风险指数和未再出血组比较差异无显著性(P>0.05).结论 病程、凝血酶原活动度及红色征是肝硬化并发食管静脉曲张破裂出血的危险因素,出血风险指数在预测出血方面具有重要作用.

    作者:曹海龙;张磊;梅俏;许建明 刊期: 2006年第06期

  • 犬骨髓间充质干细胞的分离纯化与体外培养方法的探讨

    目的 探讨可靠、纯度高的犬骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分离、培养、鉴定方法.方法 利用密度梯度离心,结合贴壁培养法获得BMMSCs;应用流式细胞仪对BMMSCs表面标志蛋白进行细胞鉴定.结果 采用Percoll分离液进行密度梯度离心可获得纯度较高的BMMSCs,接种细胞生长良好;G1期、S期、G2期细胞所占比例分别为82.4%、10.6%、7.0%;分离培养的细胞:强表达CD44、CD14阴性、CD34阴性、Cdlla阴性、HLA-DR阳性率为1.1%.结论 采用Percoll分离液能够较好地进行犬BMMSCs的体外分离、培养与扩增.

    作者:曹浩;葛建军;吴胜东;徐盛松 刊期: 2006年第06期

  • 先天性心脏病合并肺动脉高压患者心内直视术后吸入NO对肺功能的影响

    肺动脉高压是左向右分流先天性心脏病中主要并发症之一,由于存在肺血管内皮细胞功能异常,患者在行体外循环手术时更易受到全身炎症反应综合征及缺血再灌注损伤的影响[1],使术后肺功能不全,成为影响患者预后常见原因之一.近年来研究表明[2],术后吸入NO可以减轻体外循环后肺损伤,降低肺动脉压力,改善肺功能.我科对先天性心脏病合并重度肺动脉高压患者心内直视术后吸入NO,临床效果满意.

    作者:高从荣;周汝元;林敏;葛圣林;葛建军;高晴云;张士兵;张飞;周德纯 刊期: 2006年第06期

  • 利塞膦酸钠对原发性骨质疏松症患者骨密度和骨转换指标的影响

    目的 评价利塞膦酸钠对原发性骨质疏松症骨密度和骨转换指标的影响.方法 采用随机双盲对照试验方法,将筛选合格的60例受试者分为两组(试验组30例:利塞膦酸钠片+钙尔奇D;对照组30例:安慰剂+钙尔奇D).两组服药12个月,于试验0、3、6、9、12个月进行随访,观察腰椎骨密度(BMD)、血碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)等相关有效指标.结果 ①试验组治疗12个月与基线比较,腰椎骨密度提高13.41%,与对照组相比差异有显著性(P<0.05).②12个月骨密度综合疗效为:治疗12个月试验组和对照组总有效率分别为93.10%和80.77%.③血骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶和碱性磷酸酶治疗后6个月和12个月均降低,其中试验组血碱性磷酸酶降低的程度大于对照组,差异有显著性(P<0.05).结论 利塞膦酸钠能提高原发性骨质疏松症患者的骨密度和降低其骨转换,从而有效防治骨质疏松.

    作者:黄大祥;王长江;王佑民;潘天荣;钟兴 刊期: 2006年第06期

  • 人胰高血糖素样肽-1突变体基因的构建和表达

    目的 构建人胰高血糖素样肽-1突变体(2Gly-hGLP-1)基因,并表达GST2-Gly-hGLP-1.方法 用限制性内切酶双酶切载有hGLP cDNA的重组克隆质粒PMD18T simple和原核表达质粒pGEX-4T-1,将GLP-1定向插入原核表达载体pGEX-4T-1+中,筛选出阳性克隆.在获得重组hGLP-1基因工程菌的基础上,利用定向突变的技术改造其第2位丙氨酸为甘氨酸,经酶切克隆于pGEX-4T-1+中,构建pGEX-4T-1+/2Gly-hGLP-1表达载体.转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达.结果 经测序分析,证明2Gly-hGLP-1已经克隆到pGEX-4T-1+中.Western blot证实,该蛋白可被特异性hGLP-1识别.结论 成功构建和表达了人胰高血糖素样肽-1突变体原核表达质粒.

    作者:刘莉;胡红琳;丁振兴;王佑民 刊期: 2006年第06期

  • 罗格列酮对糖尿病大鼠尿蛋白排泄率的影响

    目的 观察罗格列酮对糖尿病大鼠尿蛋白排泄率的影响,以了解其对糖尿病肾损害的保护作用.方法 将大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)和罗格列酮治疗组(R组).糖尿病大鼠模型建立后,R组以罗格列酮5mg/(kg·d)灌胃,C组和D组灌以相应量的生理盐水,分别于实验第2、4、8周测其尿白蛋白和尿视黄醇结合蛋白排泄率.结果 各时间点R组尿白蛋白和尿视黄醇结合蛋白排泄率均高于C组,但明显低于D组(P<0.01).结论 罗格列酮可以减轻糖尿病大鼠肾小球和肾小管的损害,降低尿白蛋白和尿视黄醇结合蛋白排泄率,对糖尿病大鼠肾脏起到一定的保护作用.

    作者:李秀财;杨光伟;叶山东;范爱红;陈燕;王迎新 刊期: 2006年第06期

  • 人巨细胞病毒地方分离株的鉴定及其UL83序列分析

    目的 鉴定从合肥市某医院先天性脑瘫患儿尿标本中分离的4株人巨细胞病毒(HCMV)毒株并对其UL83基因序列进行分析,为HCMV感染的预防及pp65蛋白疫苗的研制提供参考依据.方法 应用细胞培养法复苏病毒,间接免疫荧光法检测pp65蛋白表达,并用特异性引物对UL83基因进行PCR,扩增的产物经凝胶纯化后测序;序列结果运用DNAMAN软件和GenBank登录的3株代表性HCMV毒株进行核苷酸和氨基酸序列比对.结果 HCMV AD169株与HCMV-1分离株的UL83基因核苷酸及编码氨基酸序列的同源性均为100%,与其余3株的同源性也达99.26%~99.69%;4株HCMV分离株与Merlin株、Towne株在相应基因片段核苷酸及氨基酸的同源性低的分别为98.95%,99.06%.结论 UL83序列分析结果表明,HCMV UL83编码pp65蛋白的优势抗原决定簇氨基酸序列无变化.

    作者:史永林;陈敬贤;王明丽 刊期: 2006年第06期

  • 白介素-10在鼻息肉中的表达

    目的 探讨白介素(IL)-10在鼻息肉中的表达及其意义.方法 运用免疫组化方法检测IL-10在30例鼻息肉和14例正常下鼻甲组织中的表达,对IL-10阳性细胞的类型、分布进行分析.结果 IL-10在鼻息肉组织中表达较正常下鼻甲组织明显增强,差异有显著性(P<0.01).IL-10主要表达于鼻息肉的上皮细胞及炎性细胞中.结论 IL-10在鼻息肉组织内的多种炎性细胞中明显表达,能客观反应免疫或炎症反应的程度,提示IL-10在鼻息肉中可能发挥重要的抗炎作用.

    作者:朱俊;吴强;方平;沙泉 刊期: 2006年第06期

  • 婴幼儿血管瘤的综合治疗

    目的 探讨糖皮质激素及手术治疗婴幼儿血管瘤的效果.方法 对26例年龄<3个月婴儿血管瘤采用盐酸曲安奈德瘤体内注射(1 mg/cm2,总量不超过2 mg/kg),每2~4周1次,共3~5次.对50例年龄>3个月婴幼儿血管瘤(其中10例术前1个月内曾接受过1~2次的瘤体内注射糖皮质激素治疗),予以手术切除,缺损较大者以皮片移植或皮瓣转移修复.结果 26例草霉状血管瘤经激素注射后1~2次充血减轻,4~5次后所有瘤体均变平,边缘萎缩.50例中38例创口直缝合,3例植皮,9例以局部皮瓣转移修复,术后皮瓣均成活,形态良好.结论 激素注射是控制年龄<3个月患儿血管瘤的安全、可靠、简便的方法;对年龄>3个月患儿因可耐受手术及麻醉则以手术切除效果为佳.

    作者:盛辉;曹东升;张林;丁浩;王邦河;汪春兰 刊期: 2006年第06期

  • 黄蜀葵花总黄酮预处理对大鼠脑缺血再灌注性损伤的保护作用

    目的 探讨黄蜀葵花总黄酮(TFA)对大鼠脑缺血再灌注损伤的预适应样保护作用.方法 采用间断静脉推注TFA模拟预适应的实验方法,观察大鼠大脑中动脉栓塞再灌致脑梗死面积、血清中乳酸脱氢酶(LDH)和一氧化氮合酶(NOS)活性以及血清中前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量等指标的变化.结果 TFA(160、80、40、20 mg/kg)预处理明显减少脑梗塞面积并可明显降低血清中LDH活性、MDA和PGE2含量,同时明显增加血清中NOS活性和NO含量.结论 黄蜀葵花总黄酮预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤具有缺血预适应样的保护作用.

    作者:文继月;陈志武 刊期: 2006年第06期

  • 霉酚酸酯对大鼠肾毒血清肾炎肾小球肝细胞生长因子与转化生长因子-β1 表达的影响

    目的 探讨霉酚酸酯对大鼠肾毒血清肾炎肾小球肝细胞生长因子(HGF)与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 大鼠分为正常对照组、模型组、霉酚酸酯治疗组,每组各10只.治疗组给予霉酚酸酯20 mg/(kg·d)灌胃,2周后测定各组24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平,应用免疫组化方法观察肾小球HGF与TGF-β1表达.结果 与模型组相比,霉酚酸酯治疗组能明显减少24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮水平(P<0.01),显著增加肾毒血清肾炎大鼠肾小球HGF表达(P<0.01),减少TGF-β1表达(P<0.01).结论 该研究提示促进肾小球内HGF表达、抑制TGF-β1生成可能是霉酚酸酯减轻肾毒血清肾炎肾组织损伤程度,抑制新月体形成的机制之一.

    作者:郭劲;张伯科;钱浩;王坤;赵珉;梁维龙;阚春明;戴宏 刊期: 2006年第06期

  • 甲磺酸罗哌卡因在下腹及会阴部手术术后硬膜外镇痛效果

    盐酸罗哌卡因是一种长效酰胺类局麻药,0.2%~0.25%浓度用于术后镇痛效果确切[1-2].甲磺酸罗哌卡因是将盐酸罗哌卡因的盐酸根改为甲磺酸根后的一种新型长效酰胺类局麻药[3].本研究以0.238%甲磺酸罗哌卡因用于下腹部及会阴部手术术后硬膜外镇痛并评价其可行性.

    作者:徐光红;李侠;张健 刊期: 2006年第06期

  • 虎杖苷对胃缺血再灌注损伤的保护作用

    目的 观察虎杖苷(PD)对大鼠胃缺血再灌注损伤(GIRI)的保护作用及与抗氧化的关系.方法 用小动脉夹夹闭腹腔动脉30 min,复灌60 min的方法建立大鼠GIRI模型,观察各组胃黏膜损伤指数及胃组织脂质过氧化物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量的变化.结果 PD可明显减轻损伤模型中的胃黏膜损伤指数;能明显降低胃组织MDA含量,增加胃组织SOD、GSH-Px、NO、NOS水平.结论 PD通过抑制胃缺血再灌注时氧自由基产生,提高组织抗氧化能力,对GIRI具有保护作用.

    作者:郭洁云;赵维中;朱文庆;汪琳;黄大可 刊期: 2006年第06期

  • 利用组织芯片研究明胶酶及其抑制因子在乳腺癌中的表达

    目的 研究明胶酶(MMP-2、MMP-9)及其抑制因子(TIMP-1、TIMP-2)在乳腺癌侵袭转移中的表达意义.方法 采用组织芯片平台,应用免疫组织化学方法结合计算机图像分析技术检测160例浸润性乳腺癌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达及其相应比值大小.结果 乳腺癌组织MMP-2、MMP-9蛋白表达和MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2蛋白表达比值均与腋淋巴结受累、TNM分期呈正相关(P<0.01);TIMP-2蛋白表达与腋淋巴结受累呈负相关(P<0.05);MMP-9/TIMP-1和MMP-2/TIMP-2比值大小均与肿块大小呈正相关(P<0.05);MMP-9表达与年龄呈负相关(P<0.05).在乳腺癌组织MMP-2和TIMP-2蛋白表达、MMP-9和TIMP-1蛋白表达均呈显著正相关(r=0.665、0.702,P<0.01).结论 明胶酶及其抑制因子在乳腺癌的侵袭转移中发挥了重要作用,两者表达比值可作为一个提示肿瘤侵袭转移的重要潜在标志.

    作者:吴正升;吴强;杨枫 刊期: 2006年第06期

  • 反向高效液相法测定血浆中多西紫杉醇的含量

    目的 建立一种快速、准确的高效液相色谱法测定多西紫杉醇在血浆中的含量.方法 血浆样品经乙醚提取后,以乙腈:0.1%磷酸(1∶1)为流动相,经ODS C18色谱柱分离,230 nm波长检测.结果 多西紫杉醇浓度在0.0781~5.000 mg/L范围内线性良好(n=5;r=0.999 2),低检测浓度为0.04 mg/L;低、中、高3个浓度的提取回收率>80%,日内、日间相对标准差<8%.结论 该方法准确、快速,可满足临床血药浓度的检测及药动学研究的需要.

    作者:李娜;孙国平;金涌;李俊 刊期: 2006年第06期

安徽医科大学学报杂志

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