学术投稿

携带神经营养因子-3基因的重组腺病毒的构建和鉴定

范迟;高下;徐琳;朱光洁;陈杰;麻晓峰;丁小琼;陆玲;周函

关键词:腺病毒, 人, 人神经营养素-3, 红色荧光蛋白, 耳蜗圆窗
摘要:目的:构建含人神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的重组腺病毒载体,为初步研究NT-3的在体功能做准备.方法:酶切法从已构建好的真核表达载体NT-3-pIRES2-DsRed2质粒中切下含有NT-3和DsRed2(包括连接区域pIRES2)的目的片段,将其插入到腺病毒骨架质粒pAdShuttle-CMV的多克隆位点中,电穿孔法将腺病毒骨架载体pAdShuttle-CMV-NT-3-DsRed2和预转入人肠杆菌BJ5183的穿梭载体pAdEasy-1进行细菌内同源重组.PacⅠ酶切线性化鉴定正确的同源重组载体,脂质体法转染293T细胞,包装形成表达NT-3目的蛋白和红色荧光的腺病毒.通过293T细胞3轮扩增病毒,氯化铯密度梯度离心,获得高滴度的纯化腺病毒.Western blot 方法检测蛋白表达情况.结果:同源重组质粒载体的DNA测序证实腺病毒载体中含有NT-3的目的片段,Western blot证实感染重组腺病毒的293T细胞中有相应的NT-3蛋白表达;病毒滴度为109 PFU/ml.结论:利用细菌内同源重组的方法可以成功构建同时表达NT-3蛋白和红色荧光的重组腺病毒.
蚌埠医学院学报杂志相关文献
  • 轮状病毒肠道外感染乳鼠模型的建立

    目的:建立轮状病毒(rotavirus,RV)肠道外感染乳鼠模型.方法:实验动物选用10~11日龄的清洁级ICR乳鼠,将32只乳鼠随机分为2组,每组16只,即RV肠道外感染组:乳鼠经腹腔注射150 μl猴RV SAl1(病毒滴度TCID50为10-4);对照组:乳鼠经腹腔注射150 μl生理盐水.接种后每天观察乳鼠的活动状况、饮食情况、毛色、体型、大便变化等,4天后处死,留取心、肝、肾、脾、肠进行病理学切片和匀浆培养.结果:感染组在接种RV后第2天开始出现食欲不振,体毛蓬松、无光泽,活动减少,呆滞、嗜睡,对刺激反应淡漠,大便量少,上述症状逐渐加重,到第4天症状明显,并有3只乳鼠出现腹泻,观察中累积腹泻率和发病率分别为18.75%和100.00%.光镜下肝、肾、脾、小肠有病理改变,且肝、肾、小肠组织匀浆培养72 h后出现不同程度细胞病变,余阴性.对照组乳鼠无明显变化.结论:该方法初步建立了RV肠道外感染乳鼠模型.

    作者:夏群;陈兰举;陈名武;周瑞;沈怀云;丁周志;徐家丽;薛莲;刘欣 刊期: 2010年第01期

  • 离断式肾盂成形术治疗肾盂输尿管连接部梗阻11例

    目的:探讨肾盂输尿管连接部梗阻的手术治疗效果.方法:对11例离断式肾盂成形术患者围手术期的各种临床指标和疗效进行回顾性分析.结果:所有患者均一次性手术成功.其中10例随访6个月至9年,肾积水均有明显改善.结论:离断式肾盂成形术可作为治疗肾盂输尿管连接部梗阻的首选术式.

    作者:李国华;陆露;王昆;胡伟 刊期: 2010年第01期

  • 预防医学专业本科实验教学改革探讨

    目的:对预防医学专业本科实验教学进行改革,提高实验教学质量.方法:把预防医学各专业课程的实验课内容整合为一门<预防医学实验教程>独立设置,在实验教材、教学内容、教学方法、实验考核模式及加强实验室管理等方面进行了改革.结果:通过对预防医学专业本科实验教学改革,提高了学生的创新意识及综合实验能力.结论:实验整合对实验教学具有促进作用,有利于预防医学专业创新人才的培养.

    作者:赵红;周纯先;江城梅;申玲;王建军;王春华;张杰;张玉媛;姚荣英;周占伟 刊期: 2010年第01期

  • 隆突下淋巴结清扫在食管癌根治术中的临床意义

    目的:探讨手术清扫隆突下淋巴结在食管癌根治术中的临床意义.方法:对265例食管癌根治手术的患者,术中常规清扫隆突下淋巴结,切除的淋巴结常规石蜡切片病理检查.结果:186例隆突下淋巴结肿大,肿大淋巴结发生率70.19%,有淋巴结转移9例,转移率4.84%,9例隆突下淋巴结转移患者在3年内均死于癌肿复发和(或)转移.结论:食管癌患者隆突下淋巴结肿大发生率极高,而癌肿转移率却很低,有隆突下淋巴结转移患者预后极差,须综合治疗.

    作者:赵璐;施开炯;王衡;胡少辉 刊期: 2010年第01期

  • 乳腺癌组织中p16基因的甲基化状态研究

    目的:探讨乳腺癌组织中p16基因启动子区域的甲基化状态.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测82例乳腺癌组织及30例乳腺良性病变的甲基化状态.结果:乳腺癌组织p16基因启动子甲基化阳性率为30.5%.乳腺癌患者癌组织p16基因启动子区域甲基化状态与肿瘤分期、肿块的大小、病理类型、月经状况、淋巴结转移、激素受体和家族史均无明显关系(P>0.05).结论:p16基因启动子区域甲基化参与了乳腺癌的发生,是一个早期事件,有可能作为乳腺癌的早期诊断和筛查的一个分子生物学指标.

    作者:郑荣生;张喆 刊期: 2010年第01期

  • 紫杉醇联合表阿霉素治疗乳腺癌不良反应的护理

    目的:探讨紫杉醇联合表阿霉素方案治疗乳腺癌不良反应的护理.方法:45例乳腺癌患者采用紫杉醇加表阿霉素治疗,21天为1周期,每位患者均完成2个周期以上.化疗前实施心理护理,化疗过程中强化护理,观察毒副反应,并进行针对性护理.结果:过敏反应3例,骨髓抑制17例,胃肠道反应31例,脱发45例,神经系统反应21例,心脏毒性反应1例,口腔溃疡2例.无Ⅳ度反应者.结论:乳腺癌患者化疗过程中实施相应的护理措施,保证了化疗的顺利完成.

    作者:吴子琳;魏少美;彭可勤;沈学敏 刊期: 2010年第01期

  • 复合平塞补片无张力修补腹股沟疝30例

    目的:探讨复合平塞补片治疗腹股沟疝的疗效.方法:回顾分析30例复合平塞补片无张力治疗腹股沟疝的临床资料.结果:术后除3例有轻度疼痛不适,经过热敷而消失外,其余无任何并发症,随访6~8个月,均无复发.结论:复合平塞补片修补术治疗老年腹股沟疝安全可靠.

    作者:高光荣 刊期: 2010年第01期

  • 介入热化疗治疗肝癌55例护理体会

    肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,因早期症状不明显,症状发现后已是中晚期,大多数患者已失去手术机会而选择非手术治疗[1].介入热化疗是利用介入技术将已加热至一定温度的药液通过导管并持续一定时间灌注到肿瘤局部的一种治疗方法.充分发挥热疗与化疗的协同作用,可提高肿瘤局部的药物浓度,增强对肿瘤细胞的杀伤作用,降低化疗不良反应,提高化疗疗效.现作报道.

    作者:孙玲;刘燕 刊期: 2010年第01期

  • 菱形皮瓣在面部缺损修复中的应用

    目的:探讨菱形皮瓣修复面部小面积缺损的疗效.方法:应用菱形皮瓣修复面部小面积缺损30例,缺损面积为0.5 cm×0.6 cm~3.0 cm×3.0 cm,供瓣区直接拉拢缝合.结果:术后30例皮瓣均成活良好,切口一期愈合,外形满意.结论:该方法操作方便,安全可靠,术后瘢痕不明显,适用于面部面积不大但又不宜直接缝合的创面的修复,值得推广.

    作者:周平辉;张莉;葛树星;李旭文;王怀谷 刊期: 2010年第01期

  • 蛲虫教学中虫卵形态的探讨与体会

    目的:探讨<人体寄生虫学>蛲虫卵形态的教学方法.方法:结合实验观察和教学实践,从蛲虫卵的立体形态、卵壳结构、卵盖的存在和卵的平面示意图等方面探讨合适的教学方法.结果:通过教学,学生掌握了蛲虫卵的形态结构,取得了良好教学效果.结论:利用多媒体手段将科研成果经归纳总结后展示给学生,有利于拓展学生的思路,提高课堂教学效果.

    作者:陈兴智;胡守锋;夏惠;杨小迪 刊期: 2010年第01期

  • 胰岛素样生长因子-Ⅰ与高血压关系的研究进展

    在原发性高血压的发生发展过程中,许多生长因子发挥了一定的作用.近来发现胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)不仅参与胚胎发育、创伤修复和肿瘤生长等过程的调节,而且还促进心肌细胞肥大和动脉平滑肌细胞增生,参与高血压及其靶器官受损的过程.现对IGF-Ⅰ与高血压关系的研究进展作一综述.

    作者:寿广丽;蔡鑫 刊期: 2010年第01期

  • PBL教学法在组织学与胚胎学教学中的应用初探

    目的:探讨PBL教学法在组织学与胚胎学教学中的应用效果.方法:将PBL教学法适当的运用到组织学与胚胎学的教学中,让学生通过问题来主动的学习知识,将相关的内容串联形成一条知识链.结果:学习效果事半功倍,同时也培养了学生的自学能力,分析能力,口头表达能力,教师自身素质也得到提高.结论:组织学与胚胎学教学中适当的运用PBL教学法能培养和发展学生的创造性思维,活化了所学的内容,激发了学生的学习兴趣,是一种值得推广的教学方法.

    作者:李徽徽;关宿东;卓煜娅 刊期: 2010年第01期

  • 社会支持与癌症化疗患者身心需要的分析研究

    目的:探讨癌症患者化疗期间与患者身心需要之间的关系.方法:通过问卷调查的方法,对150例癌症患者化疗间存在的身心需要与得到的社会支持进行相关性分析.结果:癌症化疗期间给予充分的社会支持与正常对照组差异有统计学意义(P<0.01);主要的身心需要为对护士穿刺技术的要求和对自身血管的保护.在生理及心理上希望得到更多的关心与帮助,避免减轻化疗时产生的不适反应,通过对患者社会支持情况的调查与分析,年龄>65岁的患者更希望得到社会的关心与支持.结论:应重视癌症患者化疗期间的社会支持,满足其身心需要,改善护理效果,帮助其树立抗癌信心,提高生存质量.

    作者:刘春梅;刘学华;何学林 刊期: 2010年第01期

  • 前交叉韧带重建术后患者健康相关生存质量评估

    目的:通过对前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)重建术后患者健康生存质量评估,评价Lysholm评分在关节镜ACL重建术后疗效评估中的作用.方法:对49例(50膝)接受关节镜ACL重建术的患者进行6~12个月的随访.在术前和术后6个月均对患者进行Lysholm评分和健康相关生存质量的评估,用简明健康状况调查量表(SF-36)评分,并分析Lysholm评分和SF-36各项评分之间的相关性.结果:患者术后6个月的Lysholm评分和SF-36各项评分均较术前有所改善(P<0.01),但SF-36各项评分的改善程度并不一致.结论:Lysholm评分能较好地评估ACL重建术对改善患者关节稳定性和缓解疼痛的疗效,但对于评价患者健康相关生存质量和其他方面的改善还存在局限性.SF-36评分引入到ACL重建术的疗效评估中有积极意义.

    作者:王维;王志强;苑秀华 刊期: 2010年第01期

  • Ⅱ类牵引在矫治安氏Ⅱ类错(牙合)中的应用体会

    目的:验证Ⅱ类牵引在矫治安氏Ⅱ类错(牙合)中的作用.方法:对15例安氏Ⅱ类错(牙合)患者应用Ⅱ类牵引调整前牙的覆(牙合)覆盖关系及磨牙关系.结果:15例患者在平均8个月的Ⅱ类牵引中,前牙的覆(牙合)覆盖都调节到了正常,磨牙关系都调整到中性.结论:Ⅱ类牵引能使安氏Ⅱ类错(牙合)患者的前牙覆(牙合)覆盖关系调整到正常,磨牙关系调整到中性.

    作者:孙军 刊期: 2010年第01期

  • 促红细胞生成素对低氧状态下神经干细胞增殖、分化的影响

    目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对低氧状态下神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖、分化的影响.方法:采用10%低氧环境中无血清悬浮培养胚鼠脑源性NSC;加入EPO,观察和计数NSC克隆形成率,MTT法检测NSC的生长情况;胎牛血清诱导细胞分化,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和神经胶质原纤维酸性蛋白(glia fibrillary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色检测NSC的分化情况.结果:培养的细胞经鉴定呈Nestin阳性,分化后部分细胞呈NSE阳性,部分细胞呈GFAP阳性.常氧和低氧组NSC的克隆形成率分别为(32.26±3.26)%和(48.93±4.34)%.低氧+EPO组NSC的克隆形成率比低氧组增加了17.26%;分化后,NSE阳性细胞数目增多.结论:低氧可促进NSC增殖,促进其向神经元方向分化;EPO能进一步促进NSC增殖及向神经元方向分化.

    作者:赵保明;赵莉;耿慧慧 刊期: 2010年第01期

  • 阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎疗效观察

    目的:观察阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的疗效.方法:34例慢性乙型肝炎患者口服阿德福韦酯,每次10 mg,每天1次,每3个月检测1次HBV DNA、肝功能及乙肝血清标志物.结果:治疗12个月时HBV DNA阴转17例,阴转率50%,其中HBV DNA<107拷贝/ml,阴转率为66.7%而HBV DNA≥107拷贝/ml,阴转率为23.0%,差异有统计学意义(P=0.032);ALT<2倍正常值,阴转1/5例,而ALT>2倍正常值,阴转率为71.4%,差异无统计学意义(P=0.111),HBV DNA阴转率与乙肝血清标志物模式无明显关系(P>0.05).结论:阿德福韦酯对低病毒载量的患者HBV DNA阴转率较高.

    作者:尚莉莉 刊期: 2010年第01期

  • 冠心病介入治疗术前不禁食的可行性研究

    目的:探讨冠心病介入治疗术前不禁食的可行性.方法:将行冠心病介入治疗手术的99例患者随机分为观察组和对照组,观察组45例术前进食半流质清淡饮食,量为正常的70%~80%,术前不禁水;对照组54例术前禁食6 h,禁饮4 h.观察两组口渴、饥饿、血压下降、误吸的发生率.结果:两组口渴、饥饿、血压下降发生率差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01),两组均无误吸病例.结论:冠心病介入治疗术前适当进食可减少患者不良反应,且不会增加误吸的危险.

    作者:蔡慧婷 刊期: 2010年第01期

  • 孟鲁司特治疗毛细支气管炎25例疗效观察

    目的:观察口服孟鲁司特辅助治疗毛细支气管炎的临床疗效.方法:49例毛细支气管炎患儿随机分为两组,治疗组25例,采用常规治疗加用孟鲁司特;对照组24例,仅采用常规治疗,比较两组患儿疗效及症状、体征改善时间.结果:治疗组疗效优于对照组(P<0.05),治疗组患儿的症状、体征缓解时间明显短于对照组(P<0.05).结论:口服孟鲁司特辅助治疗毛细支气管炎疗效确切,且安全方便.

    作者:高大明;马家明 刊期: 2010年第01期

  • 基质金属蛋白酶-7在消化道疾病中的表达

    基质金属蛋白酶(MMPs)是一类由结缔组织合成、分泌的蛋白水解酶家族.已被证明可以降解基底膜和细胞外基质(ECM),影响正常组织的再生与重建.肿瘤侵袭转移是一个复杂的过程,包括恶性肿瘤细胞从其原发灶脱离,穿过ECM和基膜,进入淋巴血管等过程,其中细胞外基质和基底膜的降解是必需的步骤.细胞外基质的降解需要专一的蛋白水解酶的作用.研究表明,MMPs的过度表达或活性的提高与肿瘤的生长、浸润和转移有密切关系.MMPs除了对肿瘤侵袭和转移起着重要作用之外,越来越多的证据表明,MMPs在良性和恶性肿瘤的生长、血管形成和促进转移灶的生长中也有重要作用.

    作者:任志;王启之 刊期: 2010年第01期

蚌埠医学院学报杂志

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主办:蚌埠医学院