张洪兵；井申荣
目的 制备小刺猴头菌发酵浸膏寡糖,并检测其对肠道菌群体外生长的影响.方法采用酶降解、酸降解两种方法 制备小刺猴头菌发酵浸膏寡糖,通过葡聚糖凝胶层析法与荧光辅助糖电泳法(fluorophore assisted carbohydrateelectrophoresis,FACE)进行分离分析,并观察不同降解条件产物对大肠埃希菌和鼠李糖乳杆菌体外生长的影响.结果 佳酶降解反应条件为料液比1∶45,反应温度50℃,反应时间5h,选取还原糖得率低(21.67％)、中(32.33％)、高(36.11％)3组寡糖产物,分别命名为HFP-M1、HFP-M2、HFP-M3;佳酸降解反应条件为反应温度25℃,pH 3,反应时间1h,选取还原糖得率低(39.72％)、中(44.93％)、高(48.25％)3组寡糖产物,分别命名为HFP-S1、HFP-S2、HFP-S3;层析结果显示,酸降解寡糖比酶降解寡糖相对分子质量小;FACE分析显示,在32％的凝胶浓度下,酶降解寡糖可分离出较明显的条带,而酸降解寡糖条带不太清晰;两种方法降解获得的6种寡糖均能显著抑制大肠埃希菌的繁殖,促进鼠李糖乳杆菌的生长,且效果优于小刺猴头菌发酵浸膏多糖.结论 采用酶降解和酸降解两种方法制备的小刺猴头菌发酵发酵浸膏寡糖对大肠埃希菌的繁殖具有抑制作用,对鼠李糖乳杆菌的生长均有促进作用.本实验为大分子小刺猴头菌发酵浸膏多糖及其降解产物应用于医药保健或功能性食品的开发提供了实验依据.
作者：杜金；隋玉龙；杨扬；胡静；吴宗翰；宋慧 刊期： 2014年第01期
目的 探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞溶骨性骨转移的抑制作用及其可能的机制.方法 将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为试验组(感染BMP9腺病毒)、空白对照组(未感染)及GFP对照组(感染GFP腺病毒),RT-PCR法检测各组细胞中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)基因mRNA的转录水平,Western blot法分别检测各组细胞中BMP9及OPG蛋白的表达水平.将BALB/c裸鼠分为空白对照组(注射空白对照细胞)、GFP对照组(注射GFP对照组细胞)及试验组(注射试验组细胞),每组5只,均经胫骨贴骨注射,1×106个/(0.3μl·只),X片成像技术分析各组裸鼠溶骨区域变化,免疫组化法检测各组裸鼠瘤体组织中OPG蛋白的表达.结果 试验组MDA-MB-231细胞中OPG基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于空白对照组和GFP对照组(P＜ 0.05),仅试验组细胞中有BMP9的表达.试验组裸鼠胫骨瘤体直径及溶骨区域均明显小于GFP对照组和空白对照组(P＜0.05),试验组裸鼠瘤体组织中OPG的表达量明显高于GFP对照组(P＜0.05).结论 BMP9可抑制MDA-MB-231细胞溶骨性骨转移,可能是通过上调OPG/RANKL/RANK系统中OPG的表达而发挥作用.本实验为探讨BMP9在肿瘤骨转移微环境中的作用机制奠定了基础.
作者：王建华；代红莹；胡礼仪；袁永强；唐治贵；张彦；王科 刊期： 2014年第01期
干扰素(interferon,IFN)是一种具有广泛生物活性的调节蛋白质,临床上主要用于抑制病毒的增殖.重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)是一种完全由人工设计的重组干扰素,是通过对14种天然亚型IFN序列的扫描,利用重组DNA技术,将这些亚型IFN蛋白质结构中每一位点上常见的氨基酸序列排列成一复合序列,再通过基因重组技术在大肠埃希菌中进行表达.
作者：董敏；刘静；罗亮；解红艳 刊期： 2014年第01期
目的 将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达.方法 利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westem blot分析.结果 测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30％,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性.结论 已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础.
作者：姚立红；徐一；陈爱珺；郭建强；薄洪；尉玉杰；张智清 刊期： 2014年第01期
目的 建立淋病奈瑟菌(Neisseria agonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、细小脲原体(Ureaplasma parvum,UP)多重荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法.方法 选择NG保守基因porA、解脲支原体(Ureaplasma urealytieum,UU)保守基因ure及CT保守基因trp作为目标检测基因,设计引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品,绘制标准曲线,建立多重FQ-PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性.用建立的方法对203份泌尿生殖道感染NG、CT、UP的临床样本进行同步检测,并与单重FQ-PCR法、常规PCR法及基因测序结果进行比较.结果 重组质粒标准品经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;建立的标准曲线起始DNA拷贝数与Ct值之间的线性关系良好,相关系数为0.998 ～ 1.000;该方法检测NG、CT和UP的灵敏度均可达102 copies/ml,检测范围可达109 ～ 102 copies/ml,相关系数分别为1.000、0.999和0.995;不与生殖道其他菌群如阴道霉菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、人型支原体、单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型及人乳头瘤病毒(16/18型)发生交叉反应;检测的203份样本中,多重FQ-PCR检测NG、CT、UP的阳性检出率分别为34.48％、30.54％、18.71％,与单重FQ-PCR法、基因测序法比较,差异无统计学意义(P＞0.05),3种方法阳性检出率均高于常规PCR法;与基因测序法相比,多重FQ-PCR法灵敏度为100％,3种病原体检测特异性均高于98.50％.结论 已成功建立NG、CT、UP多重FQ-PCR检测方法,该法检测时间短,特异性强,灵敏性高,适合于临床快速诊断.
作者：程鹏飞；唐景峰；程弘夏；刘绪；王业富 刊期： 2014年第01期
目的 探讨乳腺癌Ⅳ期患者血清黏蛋白1 (mucin 1,MUC1)抗体与MUC1抗原的结合反应,阐明MUC1抗体在乳腺癌Ⅳ期的中和作用.方法 分别采用斑点杂交及抑制试验、血清中和试验检测MUC1蛋白与乳腺癌Ⅳ期患者血清的特异性结合反应.结果 乳腺癌Ⅳ期患者血清MUC1抗体与MUC1蛋白的反应可被MUC1数目可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR)核心肽鼠抗人单克隆抗体阻断,而不能被乙型肝炎表面抗原鼠抗人单克隆抗体阻断;经M UC1蛋白中和后,乳腺癌Ⅳ期患者血清中MUC1抗体水平降低.结论 乳腺癌Ⅳ期患者血清MUC1抗体可中和MUC1抗原,可能具有抗肿瘤作用.
作者：唐艳；李亚荣；马桢赫；张培因；石光；曲荣锋；郑百红；于永利；王丽颖 刊期： 2014年第01期
目的 虚拟筛选基于结构的HIV-1整合酶抑制剂.方法 从PDB (Protein Data Bank)下载HIV-1整合酶催化核心结构域与LEDGF/p75整合酶结合结构域(integrase binding domain,IBD)的晶体结构(PDB ID:2B4J),通过AutoDockTools对结构进行处理;从ZINC数据库下载化合物结构,用PyRx处理和转换成pdbqt格式,建立一个处理后的化合物数据库;以HIV整合酶为靶点,通过新的虚拟筛选工具PyRx运行AutoDock Vina,对ZINC数据库的化合物进行虚拟筛选;分析得到的小分子抑制剂与整合酶之间的结合情况,并用PyMol对小分子抑制剂与整合酶的结合模式进行3D建模.结果 经3轮筛选,发现5个高活性的HIV-1整合酶抑制剂ZINC9486894、ZINC47636331、ZINC57383520、ZINC68964708、ZINC73549421;5个小分子抑制剂与整合酶之间的结合主要是氢键结合力和疏水相互作用.结论 通过PyRx运行AutoDock Vina,从ZINC数据库的化合物中筛选出5个新的HIV-1整合酶抑制剂.
作者：朱杰华；宋胜玉；谷万港 刊期： 2014年第01期
目的 探讨石菖蒲提取物的抗菌效果,并优化其提取工艺.方法 采用振荡浸提法制备石菖蒲提取物,以番茄灰霉病菌为供试菌,采用菌丝生长速率法测定提取物的抑菌率,筛选佳提取溶剂,并经固体培养基稀释法测定有效抑菌浓度.通过单因素试验优化石菖蒲抑菌成分的提取工艺,并在单因素试验的基础上,通过正交试验确定佳提取工艺组合.结果 石菖蒲佳提取溶剂为乙醇;石菖蒲乙醇提取物对番茄灰霉病菌的小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为0.04 g/ml,小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)为0.06 g/ml;佳提取工艺组合为温度38℃,时间12h,乙醇体积分数100％,料液比1∶12,转速240 r/min.结论 石菖蒲有机提取物对番茄灰霉病菌具有抑制作用;优化了乙醇提取条件,建立了有效的提取工艺,为以石菖蒲为材料研发中药杀菌剂提供了实验依据.
作者：刘铁秋；孙雪丹；卢发瑞；杨晓红；刘杨红；卢勇；曾宪垠 刊期： 2014年第01期
目的 构建人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段(scFv)噬菌体文库.方法 采用Trizol试剂提取尖吻蝮蛇咬伤后恢复期患者的外周血淋巴细胞的总RNA,用Oligotex@mRNA Mini Kits纯化获得总mRNA,逆转录合成总cDNA,针对人抗体轻链和重链可变区基因设计一系列特异性引物,以合成的总cDNA为模板,扩增得到抗体轻链和重链可变区基因库,再通过重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)将轻链和重链拼接得到scFv文库;将scFv基因双酶切后,插入T7噬菌体骨架进行包装,以尖吻蝮蛇蛇毒蛋白抗原进行4轮淘选,建立蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,采用噬斑法检测scFv噬菌体文库滴度并进行PCR及测序鉴定.结果 成功地将轻链和重链可变区基因库混合拼接得到scFv文库;经4轮淘选,蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库滴度为6.0×1014PFU/ml,抗体基因在噬菌体中表达的阳性率达50％以上,表达的scFv片段均为轻链和重链的杂合体,可较好的重现可变区的多样性.结论 已成功构建了人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,为下一步噬菌体文库的克隆构建和筛选奠定了基础.
作者：刘明华；曹宇亮；张雷；陈翔宇；向强；田君 刊期： 2014年第01期
免疫球蛋白结合蛋白[Immunoglobulin(Ig)-binding protein,IBP]是多种病原体产生的以非抗原形式与免疫球蛋白结合的蛋白,在病原体致病中发挥重要作用.这些蛋白各自具有独特的结构特征及结合特性,赋予其抗体纯化、抗体检测和抗体吸附的应用潜能,已广泛应用于科研、病原体感染抗体特异诊断、抗体药物纯化及临床免疫吸附治疗.应用重组技术所构建的融合IBP较好地保留了母体分子的结合特性,并很好地弥补了各自对不同IgG结合的不足,显著提升了在抗体纯化和免疫沉淀方面的应用优势.应用分子进化技术所获得的由不同IBP单结合结构域组合而成的新型进化免疫球蛋白结合分子(novel evolved immunoglobulin-binding molecule,NEIBM),具有母体IBP所没有的新的Ig结合模式,其中对Ig Fab κ轻链和VH3重链的双位点协同结合大大提高了与IgM的结合能力,并显示出在病原体特异性抗体检测中的应用优势.本文对主要的天然IBP、重组IBP和NEIBM的结构特征、结合特性及其应用作一综述.
作者：何婷；丁莹莹；潘卫 刊期： 2014年第01期
DepoVaxTM是一种新型疫苗递送系统,可以作为佐剂,与不同抗原作用,制备多种疫苗,用于肿瘤治疗及多种传染性疾病的预防.DepoVaxTM已被证明能够产生独特的贮存效应,且可吸引抗原提呈细胞至注射位点,从而刺激机体产生更为快速强大的免疫反应.本文就DepoVaxTM的结构和成分、作用机制及应用作一综述.
作者：张洪兵；井申荣 刊期： 2014年第01期
目的 探讨microRNA-125a-5p(miR-125a-5p)对巨噬细胞THP-1泡沫化过程的影响及其机制.方法 在Lipao2000的介导下,将miR-125a-5p的增强剂(mimics)/抑制剂(inhibition)(终浓度均为50 nmol/L)分别转染THP-1细胞24 h后,加入终浓度为100 mg/L的低密度脂蛋白(oxygenized-low density lipoprotein,ox-LDL),继续培养48 h,同时设空白对照组(未转染)及ox-LDL组(仅加入终浓度为100 mg/L的ox-LDL).采用油红O染色和脂质染色的半定量分析法检测miR-125a-5p对THP-1细胞泡沫化的影响;Cholesterol/Cholesteryl Ester Quantitation Kit检测miR-125a-5p对THP-1细胞泡沫化过程中脂质蓄积的影响;Real-time PCR和Western blot法检测miR-125a-5p对THP-1细胞中酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(acyl-coenzyme A:cholesterol acyhrasferase-1,ACAT-1)、ATP结合盒转运体A1(ATPbindingcasstte transporterA1,ABCA1)及细胞清道夫受体-A1(scavenger receptor-A1,SR-A1)mRNA及蛋白表达水平的影响.结果 与ox-LDL组比较,ox-LDL+ mimics组巨噬细胞泡沫化程度及脂质蓄积量均明显下降(P均＜0.05),ox-LDL+inhibition组均明显增加(P均＜0.05);ox-LDL+mimics组ACAT-1和SR-A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P均＜0.05);ox-LDL+inhibition组ACAT-1和SR-A1 mRNA及蛋白表达水平明显增加(P均＜0.05),而ABCA1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P均＜0.05).结论 miR-125a-5p可通过调解ACAT-1、ABCA1和SR-A1的表达水平,减少巨噬细胞内脂质类的堆积,抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,从而发挥抗动脉粥样硬化(atheroscler-osis,As)的作用.
作者：张凤香；关宁；李晨光；司忠义 刊期： 2014年第01期
目的 探讨经典Wnt信号通路关键节点β-catenin对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化的影响.方法 用重组腺病毒介导BMP9在C3H10T1/2细胞中过表达,联用β-catenin重组腺病毒上调β-catenin的表达,并通过RNA干扰抑制β-catenin的表达.分析C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的变化;RT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙蛋白(osteocalcin,OC)基因mRNA的转录水平;茜素红S染色检测细胞的钙盐沉积.结果 BMP9单独作用能诱导C3H10T1/2细胞向成骨方向分化,并增强细胞ALP活性;单独的β-catenin无成骨诱导作用,但可剂量依赖性地增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性,并促进BMP9诱导的细胞OPN和OC基因mRNA的转录水平及钙盐沉积;抑制β-catenin表达可显著降低BMP9诱导的C3H1OT1/2细胞的ALP活性(P＜0.05),下调OPN和OC基因mRNA的转录水平,并抑制钙盐沉积.结论 经典Wnt信号通路可能通过β-catenin协 同BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,且BMP9诱导的成骨分化可能需要通过Wnt/ β-catenin途径来实现.
作者：林良波；徐娇；张晓；符纯锋；王志强；周建武；毕杨；黄伟 刊期： 2014年第01期
目的 对糖苷水解酶第10家族(glucoside hydrolase family 10,GHF10)真菌木聚糖酶保守区及进化关系进行分析.方法 应用CLUSTALW2软件对41条GHF10真菌木聚糖酶氨基酸序列进行多序列比对分析,获得完全保守的氨基酸位点;应用Block Maker和Consensus软件对CLUSTALW2比对结果进一步分析,确定第10家族真菌木聚糖酶共有的保守区及保守氨基酸位点;应用Pymol软件对源于GenBank中登录的6种10家族木聚糖酶进行比对,并找到这41条序列中共有的β折叠和α螺旋;利用MEGA 4.0软件对CLUSTALW2比对结果构建系统进化树,并根据进化树进行分组.结果 41条序列长度虽然不等,但均包含E270和E405两个谷氨酸催化位点.通过序列比对,得到第10家族真菌木聚糖酶的5个高度保守区TPENSMK、RGHTLVWHSQLPSWV、WDVVEN、AKLYINDYYNL、TELDI以及20个完全保守的氨基酸位点,这些保守区和保守位点多数分布在木聚糖催化区域以及(β/α)8折叠桶的内壁上.根据木聚糖酶的亲缘关系,可将第10家族真菌木聚糖酶分为3个大组,其中第1和第3组的木聚糖酶分别有12和27种,且均来源于子囊菌门;第2组仅包含2种木聚糖酶序列,来源于Neocallimastigomycota和担子菌门.结论 分析了GHF10真菌木聚糖酶的保守区及进化关系,为木聚糖酶的工程改造奠定了基础.
作者：龚燕燕；朱天地；殷欣；邬敏辰；吴静 刊期： 2014年第01期
目的 采用高效阴离子交换色谱法测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量.方法 高效阴离子交换色谱法色谱条件:色谱柱:IonPac AS1 1-HC离子交换柱(4 mm× 250 mm);流动相:20 mmol/L的NaOH溶液,等度洗脱20 min,流速:1.0 ml/min;抑制器:ASRS 4 mm阴离子抑制器,抑制电流120 mA;检测器:电导检测器,检测池温度30℃,进样量:25μl.对建立的方法进行线性范围、检测限的确定以及准确性、精密性验证,并进行初步应用.结果 枸橼酸离子浓度在0.1～2.0 μg/ml范围内,对照品色谱峰面积与枸橼酸离子浓度呈良好的线性关系,r=0.9990,按信噪比(S/N)为3确定方法的检测限为0.01 μg/ml;准确性试验枸橼酸离子的总平均回收率为97.80％,RSD为0.69％;1份加样人凝血因子Ⅷ溶液连续测定6次峰面积的RSD为0.08％;高效阴离子交换色谱法、比色法及阳离子交换色谱法测定3批人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子含量的结果基本一致,均符合《中国药典》 三部(2010版)规定.结论 高效阴离子交换色谱法可用于测定人凝血因子Ⅷ中枸橼酸离子的含量,且该方法操作简便、快速,准确性、精密性高.
作者：张伟；任连杰；张彤；韩春霞 刊期： 2014年第01期
目的 建立脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中残余高碘酸钠含量的检测方法.方法 通过抗坏血酸将高碘酸根还原成碘离子,采用IonPac AS11-HC阴离子交换分析柱(4 mm×250 mm),上样量25μl,以50 mmol/LNaOH淋洗液等度洗脱,流速1.5 ml/min,电化学检测器测定还原出的I-,用Chromeleon色谱工作站记录并分析数据.对建立的方法进行专属性、准确性、重复性验证,确定该方法的低检出限和小定量限,并进行初步应用.结果 等浓度的抗坏血酸和高碘酸钠的反应比例为4∶1时,高碘酸根可完全还原为I-.对照品I-在10 μg/L～1 mg/L范围内,I-浓度和色谱峰面积呈良好的线性关系,r均大于0.999,回收率为91.66％～110.20％,RSD为0.2％ ～2.3％,小检出限为1 μg/L(信噪比3∶1),小定量限为5μg/L(信噪比10∶1).用建立的方法检测A群、C群、Y群和W135群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物各2批,均未检测出高碘酸钠.结论 离子色谱法可检测脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中的高碘酸钠含量,该方法操作简便、灵敏、快速,干扰小,重现性好,适用于对疫苗生产过程中的质量控制.
作者：傅元欣；马庆华；冯潇；雒丽红；魏然；高雪军 刊期： 2014年第01期
目的 对Benzonase非限制性核酸内切酶降解Vero细胞DNA的狂犬病疫苗进行动物安全性评价.方法 依据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》,对经Benzonase酶处理的冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)进行豚鼠全身主动过敏性试验、体外溶血性试验、大鼠急性毒性试验和家兔肌肉刺激试验,评价疫苗的安全性.结果 狂犬病疫苗豚鼠过敏反应发生率为50％,5 min后恢复正常;体外溶血结果为阴性;大鼠急性毒性试验未见异常;家兔肌肉刺激性试验在注射部位肌肉局部出现了极轻度到轻度的间质炎性细胞浸润、肌肉组织变性坏死及间质纤维组织增生,给药后2周,上述病变程度明显缓解.结论 利用Benzonase非限制性核酸内切酶降解Vero细胞DNA的狂犬病疫苗(酶残留量低于0.2 ng/ml)安全性良好,不影响其临床使用.
作者：戚凤春；崔燕平；何荣；张佳丽；黄明；章赟；胡燕平；王欣 刊期： 2014年第01期
目的 评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠的细胞免疫效果.方法 分别以不同剂量(1、2.5、5、10 μg/ml,均含铝佐剂1 mg/ml)、不同剂型(含铝佐剂1 mg/ml或不含铝佐剂)、不同免疫剂次(单次免疫或加强免疫)EV71灭活疫苗经腹腔免疫小鼠,0.5 ml/只,均设铝佐剂对照组(仅注射铝佐剂1 mg/ml).采用经典小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)培养方法制备正常小鼠DC,瑞氏染色法检测细胞形态,流式细胞术分析其表型及纯度;免疫磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离小鼠脾脏CD4+、CD8q淋巴细胞,流式细胞术检测细胞纯度.ELISPOT法检测各组免疫小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ的水平;细胞因子试剂盒检测小鼠淋巴细胞培养上清及小鼠血清中细胞因子的水平.结果 DC形态不规则,表面树枝状突起形态不同,细胞核较大且不规则;DC纯度为(81.39±9.24)％,可高水平表达MHⅡ(Ⅰ-A/Ⅰ-E)类分子,中度表达CD86和CD40.CD4+、CD8q细胞纯度分别为95.27％和94.08％.随着疫苗免疫剂量的增加,CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC显著增加,5μg/ml疫苗组达大值,且明显高于其他组(P均＜0.05);5μg/ml疫苗组淋巴细胞培养上清中IFNγ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、IL-5、TNF-α含量明显高于其他组(P＜0.05);1、2.5、5μg/ml疫苗组血清中IL-10含量明显高于铝佐剂对照组(P＜0.05),1μg/ml疫苗组明显低于2.5及5μg/ml疫苗组(P＜0.05).含铝佐剂疫苗组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平及血清中IL-10含量均明显高于无铝佐剂疫苗组(P均＜0.05).加强免疫组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平、血清中IL-10含量均明显高于单次免疫组(P均＜0.05).结论 EV71灭活疫苗可诱导小鼠产生特异性细胞免疫反应,本实验为其进一步人体临床试验研究奠定了基础.
作者：鲁卫卫；吴蕴怡；郝春生；宋冬梅；马淑花；刘宇；陈蕾；李秀玲 刊期： 2014年第01期
目的 制备肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)热休克蛋白(heat shock protein,HSP)ClpE多克隆抗体,并确定ClpE在S.pn表面的亚细胞定位.方法 应用PCR法从S.pn D39中扩增coE基因全长片段,克降入原核表达载体pET28a,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价,Western blot法鉴定抗体的特异性.ELISA法分析ClpE在S.pn表面的亚细胞定位.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的重组ClpE蛋白相对分子质量约83 000,表达量约占全菌总蛋白的60％,主要以可溶性上清形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90％;制备的ClpE多克隆抗体效价达1∶4 096 000,可与S.pn D39全菌发生特异性反应,S.pn D39在正常生长时可表达ClpE蛋白;ClpE在S.pn表面有表达.结论 成功制备了高效价和特异性的ClpE多克隆抗体,ClpE在S.pn表面可正常表达,为表面蛋白.
作者：蔡莺莺；闫文娟；张群；王虹；胥文春；何於娟；尹一兵；张雪梅 刊期： 2014年第01期
目的 制备鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白单克隆抗体,并进行鉴定.方法 用差速离心纯化的IBV四川分离株Sczy3免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合.利用IBV鼠高免血清建立间接ELISA,筛选杂交瘤细胞.强阳性孔经有限稀释法亚克隆,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水.用鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒鉴定单抗的亚型,Western blot法分析单抗的反应原性,ELISA法分析单抗的特异性及其与不同IBV毒株的交叉反应性.结果 经连续4次亚克隆,获得2株能稳定传代并分泌抗IBVSczy3株单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C8C1和2C 10E7,其腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600.2株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgM亚型;均可特异性识别S1蛋白;2株单抗只与IBV发生特异性反应,与新城疫病毒(Newcastle diseasevirus,NDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9亚型和AIV H5抗原均不反应,与其他5种基因型的10株IBV毒株均可产生交叉反应.结论 成功制备了2株IBV S1蛋白单克隆抗体,为IBV的检测、抗原表位筛选及致病机理的研究等提供了材料.
作者：邹年莉；王富妍；段真真；郭明萍；吴瑞婷；付润饶；文心田；曹三杰；黄勇 刊期： 2014年第01期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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