李婷；李勇；李晓东
目的 探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对人子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞转化的影响.方法 原代培养人子宫肌层成纤维细胞,经免疫细胞化学法鉴定后,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别以0.1、1、10、100 nmol/LET-1作用24 h,另以10 nmol/L ET-1分别作用6、12、24、48 h,设未处理细胞作为对照,采用实时定量PCR(real-timequantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测各组细胞α-SMA mRNA及蛋白的表达水平.结果 人子宫肌层成纤维细胞的α-SMA蛋白染色呈阴性,波形蛋白染色呈阳性;不同浓度ET-1作用细胞24 h后,均可检测到α-SMA mRNA及蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),其中10 nmol/L ET-1实验组表达量高,与0.1和1 nmol／L ET-1实验组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);经10 nmol／L ET-1作用不同时间的实验组,α-SMA mRNA及蛋白均有表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05),其中以作用48 h实验组表达高,与作用6、12、24 h实验组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ET-1可促进子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞的转化.
作者：段赵宁；唐良萏；牟晓玲；张婧 刊期： 2014年第04期
目的 探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将两种佐剂均按低(100 μg)、中(500 μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原18 EU)和铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300 μg),共9组,均经腹部皮下多点注射,共免疫1次.分别于免疫后第4、8、12、16周采血,分离血清,采用ELISA法检测抗-HAV IgG抗体水平.免疫后第16周处死小鼠,分别取甘草酸二铵和苦参素佳剂量组及生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,进行病理观察.结果 免疫后第4、8、12、16周,除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清中均可检测到抗-HAV IgG抗体,且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外,均在第8周达峰值;甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平均明显高于HAV抗原对照组(P＜0.05),其中甘草酸二铵低剂量组的抗体水平高,且在第8周时超过铝佐剂对照组;苦参素各剂量组小鼠免疫后各周血清抗-HAVIgG抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P＜0.05),其中苦参素低剂量组抗体水平高,其抗体水平在第12周达峰值.实验期间,各组小鼠均未出现异常表现,各组织均未发现病理改变.结论 甘草酸二铵和苦参素均能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值.
作者：王霄；罗婷；李虹娟；段志青；王陈芸；王海漩；胡云章；胡凝珠 刊期： 2014年第04期
目的 比较用于乙型肝炎疫苗的3种寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotide,CpG ODN)佐剂体外的免疫活性.方法 分别将CpG ODN 684(沃森公司)、CpG ODN 1018(Dynavax公司)和CpG ODN 7909(Coley公司)序列体外刺激免疫人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和人树突状细胞系GEN,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法检测人PBMC增殖活力,ELISA法检测GEN细胞中IL-6和IFNα水平.结果 CpG ODN 7909、CpG ODN 1018和CpG ODN 684诱导人PBMC的增殖水平明显高于未刺激的对照组,差异有统计学意义(P＜0.000 1),其中CpG ODN 684和CpG ODN 7909序列诱导人PBMC的增殖水平相似,略高于CpG ODN 1018序列;3种CpG ODN在体外对免疫细胞均具有明显的活化作用,其中CpG ODN 684和CpG ODN 7909序列体外活化免疫细胞产生的IL-6和IFNα水平相似,但高于CpG ODN 1018序列.结论 沃森公司CpG ODN 684序列体外活化免疫细胞功能与Coley公司CpG ODN 7909序列相似,略优于Dynavax公司CpG ODN 1018序列.
作者：张梦霏；王丽丽；丁敏；李伟；周长征；徐娅妮；李镭；魏云林；杨喆 刊期： 2014年第04期
目的 制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg.方法 利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对HBsAg亚型鉴别试验进行验证.结果 共获得抗两亚型HBsAg的单克隆抗体7株;鉴别试验抗原的佳包被剂量为10 μg; 1H6和4D3株单抗检测2份编盲adw亚型HBsAg样品的adwA 450/adrA450值均大于2,判定其为adw亚型;1E9株单抗检测2份编盲adr亚型HBsAg样品adrA450/adwA450值均大于2,判定其为adr亚型;3A5株单抗检测4份编盲样品的adrA450/adwA450值和adwA 450/adrA450值均小于2,未能区分两亚型HBsAg.结论 抗adr亚型单抗1E9株及抗adw亚型单抗1H6株和4D3株可用于adr亚型汉逊酵母乙肝疫苗研制过程中HBsAg亚型的鉴别.
作者：马锐；张国强；李津；张德有；王曦；张小刚；王远征；魏静；赵铠 刊期： 2014年第04期
目的 探讨慢性轻度不可预见性刺激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)致大鼠抑郁行为的性差异与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis,HPA)功能和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的相关性.方法 将60只SD大鼠(雌雄各半)经open-field法筛选后,随机分为雌性对照组(CF)、雄性对照组(CM)、雌性模型组(SF)及雄性模型组(SM),每组15只.CF和CM组5只／笼;SF组和SM组采用孤养及CUMS方式建立大鼠抑郁模型.通过高架迷宫和糖水消耗试验评价大鼠焦虑抑郁行为程度;放射免疫法检测大鼠血清中皮质酮(corticosterone,CORT)的含量;荧光定量PCR和Western blot法分别检测大鼠海马BDNF和下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin-releasing factor,CRF) mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.结果 与CF和CM组相比,SF和SM组大鼠糖水偏爱率、进入高架迷宫开臂次数、向下探究次数和在开臂停留时间均显著减少(P＜0.05),血清中CORT含量增高(P＜0.01),海马BDNF mRNA的转录水平和蛋白表达水平显著下降(P＜0.01),下丘脑CRFmRNA的转录水平和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);SM组大鼠糖水偏爱率、进入高架迷宫开臂和闭臂次数、直立及向下探究次数、中央区停留时间、血清中CORT含量及下丘脑CRF mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著低于SF组(P＜ 0.05),而在闭臂停留时间显著长于SF组(P＜0.05).结论 CUMS致大鼠焦虑抑郁行为的性别差异与HPA轴功能和BDNF表达有关,为进一步研究抑郁症的性别差异机制及寻找可能的防治措施提供了实验依据.
作者：秦丽娟；汪丽佳；刘丹；刘任；周岐新 刊期： 2014年第04期
目的 采用组织块培养法和胶原酶消化法体外培养大鼠脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs),并对两种培养方法进行比较分析.方法 分离SD大鼠腹股沟处脂肪组织,分别采用组织块培养法和胶原酶消化法获取ADSCs,并对其进行原代培养和传代培养,观察细胞形态,比较细胞的产量和增殖能力;分别用化学成脂诱导剂和化学成骨诱导剂诱导ADSCs分化,观察其分化情况,并计算成脂量.结果 组织块培养法和胶原酶消化法培养ADSCs的成功率分别为79％和53％,获得的第4代ADSCs多为成纤维细胞样,长梭形或纺锤形,无形态学差异,传至第8代,细胞生长状态良好,传代后细胞性状均一,生物学特性稳定;培养第7天,组织块培养法每毫克脂肪组织获得的细胞产量高于胶原酶消化法,差异有统计学意义(P＜0.05);第4代ADSCs生长曲线均为相似的“S”型,细胞倍增时间分别为96.56和95.84 h;ADSCs均可向脂肪细胞和骨细胞方向分化,培养第7天,两组间成脂量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脂肪组织块培养法是更适合的体外获取ADSCs的方法.
作者：李婷；李勇；李晓东 刊期： 2014年第04期
按科学的免疫程序,有计划地给儿童接种疫苗,对有效保障儿童健康起到了巨大的作用.但是,疫苗作为一种生物制品,对于接种疫苗的个体来说是一种异物,接种后有可能引起一系列的生理功能紊乱、病理变化及免疫反应[1],如未能得到足够关注和及时处置,不仅给受种者带来损害,还会影响公众对疫苗的信任,给计划免疫政策的实施带来阻力.本文在中国全文期刊数据库和万方数据库中,检索1993～2013年公开发表的疫苗接种后不良反应相关个案报道,从中提取发表年份、篇名、发表杂志名称、作者及其单位、接种疫苗种类、临床诊断、处理情况、病人转归,并将以上资料输入Excel软件,对文献及个案的分布特征进行科学严谨的分析,深入了解不良反应的类型及处置方法,为制定预防接种不良反应应对策略提供数据.现将结果报道如下.
作者：张延炀；路明霞；王燕；叶莹；马雅婷；王长双；张肖肖；郭万申 刊期： 2014年第04期
目的 原核表达旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1,并进行鉴定.方法 以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增CK-1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CK-1,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG分别诱导表达3、4、5h,表达产物进行12％ SDS-PAGE分析.以纯化的旋毛虫肌幼虫免疫小鼠制备鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清,以H7402细胞免疫小鼠制备鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清,以重组CK-1蛋白免疫小鼠制备鼠抗CK-1蛋白阳性血清,分别以其作为一抗,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET-28a(+)-CK-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;IPTG佳诱导时间为4h,表达的重组CK-1蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.5％;重组CK-1蛋白可被鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清和鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清识别,鼠抗CK-1蛋白阳性血清可识别旋毛虫肌幼虫蛋白和H7402全细胞蛋白,在相对分子质量38 500处均可见特异性条带,表明重组CK-1蛋白是一个交叉抗原,且具有良好的反应原性.结论 原核表达了旋毛虫CK-1基因,为进一步研究旋毛虫的抗肿瘤效应奠定了基础.
作者：左绍志；张桐嘉；常乐；杨滨僮；宫鹏涛；李建华；杨举；李赫；张国才 刊期： 2014年第04期
治疗性单克隆抗体的市场需求日益增长,因此如何分离得到高产的稳定表达细胞株及缩短研发过程成为此类研究的热点.在整个治疗性单克隆抗体的研发过程中,哺乳动物细胞表达载体的设计及其优化作为第一步就显得尤为重要.本文从基因转录水平的作用元件、作用方式、基因扩增与筛选标签及位置效应与整合位点的优化对治疗性单克隆抗体表达载体的设计与优化策略作一综述.
作者：安晨 刊期： 2014年第04期
目的 构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定.方法 利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO 1-892、shRNA-ENO 1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6／GFP／Neo载体连接,构建ENO1RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平.结果 pGPU6／GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60％;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础.
作者：张虹亮；计红；耿仁德；薛琳琳；杨焕民；王建发；司鸿飞；王慧；甘艺 刊期： 2014年第04期
目的 利用大肠埃希菌(E.coli)表达系统异源表达细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1),并与细胞色素P450氧化还原酶(cytochromeP450 oxidoreductase,POR)实现共表达,使其具有代谢活性,为药物代谢的研究提供单一性的酶源.方法 以人肝组织RNA为模板,RT-PCR扩增CYP2E1基因,插入pCW空载体,构建重组表达质粒pCW-2E1,转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定;利用双启动子原理构建CYP2E1与POR共表达的重组质粒pCW-2E 1-POR,采用对氨基苯酚法检测CYP2E1重组酶的代谢活性,并对不同培养时间(18、28、38 h)的代谢活性进行比较.结果 质粒pCW-2E1经PCR鉴定,证明构建正确;表达的重组人CYP2E1蛋白相对分子质量约56 000,主要以可溶性形式表达.质粒pCW-2E1-POR经PCR及酶切鉴定,证明构建正确;导入质粒pCW-2E1-POR的重组菌提取的蛋白样品具有明显的代谢活性,培养18、28、38 h后,代谢活性均值分别为(0.195±0.004)、(0.189±0.003)和(0.192±0.004) nmol/(min·mg),差异无统计学意义(P＞0.05),但与导入质粒pCW-2E1的重组菌提取的蛋白样品的代谢活性相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建了具有代谢活性的CYP2E1重组酶,且3个培养时间段之间的代谢活性无明显差异.
作者：徐彬彬；张海风；刘秀；赵勤；王俊平；单杰 刊期： 2014年第04期
目的 探讨小脑症1 (microcephalin 1,MCPH1)基因过表达对人肺癌细胞A549凋亡的影响.方法 将质粒pcDNA3.1(-)／MCPH1转染肺癌细胞株A549,并设阴性对照组[pcDNA3.1(-)质粒转染]和未转染组.转染48 h后,采用qRT-PCR法检测各组细胞中MCPH1基因mRNA的转录水平;转染72 h后,Western blot法检测各组细胞中MCPH1蛋白的表达水平,流式细胞术分析细胞的凋亡情况.结果 质粒pcDNA3.1(-)／MCPH1转染A549细胞后,均可明显上调细胞中MCPH1基因mRNA和蛋白的表达,与阴性对照组和未转染组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);质粒pcDNA3.1(-)／MCPH1转染组细胞凋亡率[(16.82±1.29)％]较阴性对照组[(6.27±0.88)％]和未转染组[(5.36±0.43)％]明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MCPH1过表达后可明显促进A549细胞的凋亡,为进一步研究MCPH1基因在肺癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础.
作者：张冀；吴晓彬；麦力；袁成福；刘革力；易发平；卜友泉；宋方洲 刊期： 2014年第04期
目的 探讨甲磺酸去铁胺(deferoxamine,DFO)佐剂对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus antigen,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将不同剂量的DFO(0.6、1、4、8 mg)佐剂分别与HAV抗原18 EU混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV 18 EU)、铝佐剂对照组(铝佐剂300 μg+HAV抗原18 EU)和复合佐剂组(HAV抗原18EU+DFO1 mg+铝佐剂150 μg),均经腹部皮下多点注射,0.2 ml/只,共免疫1次.分别于免疫后第4、8、12、16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平,并进行安全性试验.结果 除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗-HAV IgG;除DFO 0.6 mg组外,抗体滴度均在第8周达峰值;不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组,其中DFO 4 mg和8 mg组在8～ 16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05),但与铝佐剂对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);在8～ 16周时,同一时间DFO 4 mg、DFO 8 mg和复合佐剂组的抗体水平较高,并能维持较长时间,至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平.结论 DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂.
作者：罗婷；李虹娟；王霄；段志青；李萍；王海漩；胡凝珠；胡云章 刊期： 2014年第04期
肾衰竭(kidney failure,KF)是临床常见肾脏疾病,常由肾毒性物质或肾脏严重缺血等因素引起,根据其发病时程,可进一步分为急性肾衰竭(acute kidney failure,AKF)和慢性肾衰竭(chronic kidney failure,CKF).近年来,随着各项医疗技术的发展,许多疾病均得到了有效控制,但是,KF这种疾病尚未得到有效治疗,相关的死亡率也未得到明显改善,其发病率甚至有逐年增高的趋势.目前,相关研究表明,骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)对KF具有一定的治疗作用.本文就近年来BMSCs在KF治疗方面的研究进展作一综述.
作者：王海霞；赵巍 刊期： 2014年第04期
目的 对吉林省汉坦病毒(Hantavirus,HV)宿主动物携带病毒进行遗传进化分析.方法 采集吉林省不同地区鼠肺样品,应用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定出HV感染的阳性样本,利用Trizol试剂提取病毒RNA,RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因,并进行测序,应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析,并与汉城病毒(Seoul virus,SEOV)参考株进行比较;利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析;利用MEGA 5.0软件进行系统发生分析.结果 共捕获719只啮齿动物,其中褐家鼠(R.norvegicus)555只,黑线姬鼠(A.agrarius)74只,小家鼠(M.musculus)90只,HV抗原阳性率为1.39％(10/719);10份阳性样本中,7份来自褐家鼠,2份来自小家鼠,1份来自黑线姬鼠.用全长S引物扩增得到的10株病毒全长S基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在92.8％～95.1％之间,与其他SEOV核苷酸同源性在90.2％～94.7％之间;用M引物扩增得到的部分基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在96.5％～99.5％之间,而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5％ ～ 97.7％之间;10株病毒全部属于SEOV.黑线姬鼠G蛋白365 ～ 769位点间有5个氨基酸差异位点(V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I),小家鼠G蛋白365～769位点间主要有5个氨基酸差异位点(C378G/R、F420L、Q436P/R、E535G／A和C589G/W),但同种间在378、436、535和589位点也有差异;黑线姬鼠N蛋白l ～ 430位点间存在P298L变异;小家鼠N蛋白变异位点较多,主要在M24K／N、A37D、I140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异.分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支.结论 研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主,其遗传进化呈现多样性.
作者：范胜涛；高晓龙；李元果；应瑛；国娇；张钊伟；刘红；吴静；杨松涛 刊期： 2014年第04期
目的 采用干热法对纯化的人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein A Ⅰ,ApoA Ⅰ)冻干品进行病毒灭活处理,并对灭活效果进行验证.方法 将脂包膜病毒伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯(Sindbis)病毒及非脂包膜病毒脑心肌炎(encephalomyocarditis,EMC)病毒按1∶9(v∶v)的比例分别加至3批ApoA Ⅰ样品中,冻干后于水浴中(100±1)℃加热30 min灭活,分别于加热后5、10、20、30 min取样,检测病毒滴度,绘制病毒灭活动力学曲线,并检测干热法灭活病毒对目的蛋白理化性质及生物活性的影响.结果 干热法对ApoA Ⅰ样品中的脂包膜和非脂包膜病毒均可有效灭活,灭活20 min后,3种指示病毒的滴度均迅速下降;干热法灭活后,冻干品的外观、复溶时间、复溶后澄明度、目的蛋白的平均回收率(95.44％)均符合要求,样品的SDS-PAGE、Westemblot图谱、免疫电泳行为、二级结构和生物活性均无显著变化.结论 干热法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒;在ApoA Ⅰ纯化工艺中采用S/D法和干热法两步病毒灭活步骤,可保证制品的安全性.
作者：卞炯；何毅明；吴玮；刁武平；朱威 刊期： 2014年第04期
目的 利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV) 16L1蛋白.方法 从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTED1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PiehiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平.结果 重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α-指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达.结论 成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案.
作者：金晓媚；姚宇峰；黄惟巍；杨旭；孙文佳；刘存宝；龙琼；马雁冰 刊期： 2014年第04期
目的 构建牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2基因真核表达质粒,并在宫颈癌HeLa细胞中进行表达.方法 以牛Ⅱ型链球菌基因组为模板,采用PCR法扩增van B2基因,克隆至真核表达载体pVAX-1中,构建重组表达质粒pVAX-1-van B2.采用FuGENE HD Transfection Reagent试剂盒将重组表达质粒转染HeLa细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测转染细胞中van B2基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Western blot法检测转染细胞中van B2蛋白的表达.结果 重组表达质粒pVAX-1-van B2经双酶切及测序鉴定构建正确;重组表达质粒转染HeLa细胞48 h后,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR及Western blot分析分别可见570 bp及相对分子质量20 900的目的条带.结论 成功构建了牛Ⅱ型链球菌van B2基因的真核重组表达质粒,并在HeLa细胞中成功表达.本实验为进一步研究牛Ⅱ型链球菌对抗生素的耐药性机制及其与van B2基因的相关性奠定了基础.
作者：刘燕；布日额；锡林高娃；白靓 刊期： 2014年第04期
目的 在大肠埃希菌中表达重组毒素rCCK8PE38,并检测其对结肠癌细胞的杀伤活性.方法 采用分子生物学技术将反向翻译的8肽胆囊收缩素(cholecystokinin8,CCK8)与绿脓杆菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)38基因融合,构建重组表达质粒pET-rCCK8PE38,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.通过细胞杀伤试验检测表达的重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞、其他癌细胞系和一些正常细胞的杀伤活性.结果 重组表达质粒pET-rCCK8PE38经双酶切证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为40 000,表达量约占全菌总蛋白的40％;重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞HCT-8有明显的杀伤效果,对其他癌细胞系和正常细胞无杀伤活性.结论 成功在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组毒素rCCK8PE38,其可高效特异地识别并杀伤结肠癌细胞HCT-8.
作者：高世奇；宋杰；胡盼；冯小丽；佟伟华；柳增善 刊期： 2014年第04期
目的 评价非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除效果.方法 将不同终浓度的Benzonase 非限制性核酸内切酶加入狂犬病病毒收获液中,在PBS或Tris两种缓冲体系下,以不同温度酶解不同时间,经分子筛层析纯化后,采用罗氏Ⅱ型高效地高辛DNA标记和检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中DNA的残留量,用确定的酶处理条件,采用酶检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中非限制性核酸内切酶的残留量,采用ELASA法检测抗原含量.结果 非限制性核酸内切酶的处理浓度为50 ～ 90 U／ml,缓冲体系为PBS或Tris,经37℃处理2～3h,转入18 ～ 26℃处理12～18 h酶解,再经分子筛层析纯化后,狂犬病病毒收获液中的Vero细胞DNA去除率在80％以上,病毒抗原回收率在75％以上;用确定的酶处理条件处理狂犬病病毒收获液,可使狂犬病病毒与Benzonase非限制性核酸内切酶完全分离.结论 采用非限制性核酸内切酶可有效去除狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA.
作者：崔燕平；何荣；戚凤春；何晓燕；陈坤；任国辉；汤峰；徐琳；周佳丽 刊期： 2014年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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