左绍志；张桐嘉；常乐；杨滨僮；宫鹏涛；李建华；杨举；李赫；张国才
按科学的免疫程序,有计划地给儿童接种疫苗,对有效保障儿童健康起到了巨大的作用.但是,疫苗作为一种生物制品,对于接种疫苗的个体来说是一种异物,接种后有可能引起一系列的生理功能紊乱、病理变化及免疫反应[1],如未能得到足够关注和及时处置,不仅给受种者带来损害,还会影响公众对疫苗的信任,给计划免疫政策的实施带来阻力.本文在中国全文期刊数据库和万方数据库中,检索1993～2013年公开发表的疫苗接种后不良反应相关个案报道,从中提取发表年份、篇名、发表杂志名称、作者及其单位、接种疫苗种类、临床诊断、处理情况、病人转归,并将以上资料输入Excel软件,对文献及个案的分布特征进行科学严谨的分析,深入了解不良反应的类型及处置方法,为制定预防接种不良反应应对策略提供数据.现将结果报道如下.
作者：张延炀；路明霞；王燕；叶莹；马雅婷；王长双；张肖肖；郭万申 刊期： 2014年第04期
目的 构建人P4HB基因真核表达质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的表达.方法 采用RT-PCR法从正常人肝细胞HL7702中扩增P4HB基因片段,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB,在脂质体LipofectamineTM 2000介导下转染A549细胞,通过G418加压筛选,建立稳定转染细胞系,通过qPCR和Western blot法检测转染细胞中P4HB基因mRNA的水平及蛋白的表达水平.结果 重组真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB经双酶切(BamH I／EcoR I)和测序证实构建正确;质粒pcDNA3.1-P4HB转染的A549细胞中P4HB基因mRNA的水平为空载体转染的细胞和未转染细胞的102倍;质粒pcDNA3.1-P4HB转染的A549细胞中P4HB蛋白的表达量(1.71)较未转染的A549细胞(1.11)明显升高.结论 成功构建了P4HB基因真核表达质粒pcDNA3.1-P4HB,转染A549细胞后,P4HB基因在mRNA水平和蛋白水平均出现了较强的表达,表明P4HB基因已稳定转染入A549细胞中.本实验为进一步研究P4HB对人肺癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响奠定了基础.
作者：孙玲玲；林丽珠；周京旭 刊期： 2014年第04期
目的 制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg.方法 利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对HBsAg亚型鉴别试验进行验证.结果 共获得抗两亚型HBsAg的单克隆抗体7株;鉴别试验抗原的佳包被剂量为10 μg; 1H6和4D3株单抗检测2份编盲adw亚型HBsAg样品的adwA 450/adrA450值均大于2,判定其为adw亚型;1E9株单抗检测2份编盲adr亚型HBsAg样品adrA450/adwA450值均大于2,判定其为adr亚型;3A5株单抗检测4份编盲样品的adrA450/adwA450值和adwA 450/adrA450值均小于2,未能区分两亚型HBsAg.结论 抗adr亚型单抗1E9株及抗adw亚型单抗1H6株和4D3株可用于adr亚型汉逊酵母乙肝疫苗研制过程中HBsAg亚型的鉴别.
作者：马锐；张国强；李津；张德有；王曦；张小刚；王远征；魏静；赵铠 刊期： 2014年第04期
目的 原核表达科尔沁牛中性粒细胞防御素5(bovine neutrophil 1β-defensin 5,BNBD5),并进行纯化.方法 用Trizol试剂提取牛外周血中性粒细胞总RNA,RT-PCR法扩增BNBD5的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5,并进行测序,应用DNA Star生物分析软件对科尔沁牛BNBD5与其他物种(绵羊、山羊、驯鹿、家鼠、人类、鳜鱼、中华蜜蜂)B防御素的核苷酸序列进行同源性比较及进化树分析;对科尔沁牛与其他品种牛(新疆荷斯坦牛、印度水牛、荷兰弗里斯兰牛)B防御素的BNBD5核苷酸序列进行进行同源性比较及进化树分析;将构建正确的重组克隆质粒pMD 18-T-BNBD5亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-BNBD5,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达后,利用Ni离子亲和柱纯化,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物.结果 通过PCR扩增获得了195 bp的BNBD5全长cDNA序列,为一个完整的开放阅读框(ORF),与GenBank中登录的BNBD5编码区序列(AJ278799)相似性达93.4％,推导该序列编码45个氨基酸残基,并含有防御素的特征性分子结构,即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基;共有13处碱基出现突变,导致其推导的氨基酸序列出现8处变异,但6个保守型半胱氨酸位点均未出现变异.与其他物种的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与山羊、绵羊同源性高,达80％以上;与中华蜜蜂同源性低,在10％以下.与其他品种牛的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与新疆荷斯坦牛同源性高,达90％以上;与荷兰弗里斯牛的同源性低,约66％.质粒pET-30a-BNBD5经PCR及单双酶切鉴定证明构建正确,表达及纯化蛋白相对分子质量约10 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的25.1％,纯化产物含量达2.15 mg/ml.结论 成功表达并纯化了科尔沁牛BNBD5.
作者：锡林高娃；陈鹏；乌日汗；吴金花；布日额 刊期： 2014年第04期
目的 探讨慢性轻度不可预见性刺激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)致大鼠抑郁行为的性差异与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis,HPA)功能和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的相关性.方法 将60只SD大鼠(雌雄各半)经open-field法筛选后,随机分为雌性对照组(CF)、雄性对照组(CM)、雌性模型组(SF)及雄性模型组(SM),每组15只.CF和CM组5只／笼;SF组和SM组采用孤养及CUMS方式建立大鼠抑郁模型.通过高架迷宫和糖水消耗试验评价大鼠焦虑抑郁行为程度;放射免疫法检测大鼠血清中皮质酮(corticosterone,CORT)的含量;荧光定量PCR和Western blot法分别检测大鼠海马BDNF和下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(corticotropin-releasing factor,CRF) mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.结果 与CF和CM组相比,SF和SM组大鼠糖水偏爱率、进入高架迷宫开臂次数、向下探究次数和在开臂停留时间均显著减少(P＜0.05),血清中CORT含量增高(P＜0.01),海马BDNF mRNA的转录水平和蛋白表达水平显著下降(P＜0.01),下丘脑CRFmRNA的转录水平和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05);SM组大鼠糖水偏爱率、进入高架迷宫开臂和闭臂次数、直立及向下探究次数、中央区停留时间、血清中CORT含量及下丘脑CRF mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著低于SF组(P＜ 0.05),而在闭臂停留时间显著长于SF组(P＜0.05).结论 CUMS致大鼠焦虑抑郁行为的性别差异与HPA轴功能和BDNF表达有关,为进一步研究抑郁症的性别差异机制及寻找可能的防治措施提供了实验依据.
作者：秦丽娟；汪丽佳；刘丹；刘任；周岐新 刊期： 2014年第04期
目的 探讨甲磺酸去铁胺(deferoxamine,DFO)佐剂对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus antigen,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将不同剂量的DFO(0.6、1、4、8 mg)佐剂分别与HAV抗原18 EU混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV 18 EU)、铝佐剂对照组(铝佐剂300 μg+HAV抗原18 EU)和复合佐剂组(HAV抗原18EU+DFO1 mg+铝佐剂150 μg),均经腹部皮下多点注射,0.2 ml/只,共免疫1次.分别于免疫后第4、8、12、16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平,并进行安全性试验.结果 除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗-HAV IgG;除DFO 0.6 mg组外,抗体滴度均在第8周达峰值;不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组,其中DFO 4 mg和8 mg组在8～ 16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05),但与铝佐剂对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);在8～ 16周时,同一时间DFO 4 mg、DFO 8 mg和复合佐剂组的抗体水平较高,并能维持较长时间,至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平.结论 DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂.
作者：罗婷；李虹娟；王霄；段志青；李萍；王海漩；胡凝珠；胡云章 刊期： 2014年第04期
目的 探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对人子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞转化的影响.方法 原代培养人子宫肌层成纤维细胞,经免疫细胞化学法鉴定后,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别以0.1、1、10、100 nmol/LET-1作用24 h,另以10 nmol/L ET-1分别作用6、12、24、48 h,设未处理细胞作为对照,采用实时定量PCR(real-timequantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测各组细胞α-SMA mRNA及蛋白的表达水平.结果 人子宫肌层成纤维细胞的α-SMA蛋白染色呈阴性,波形蛋白染色呈阳性;不同浓度ET-1作用细胞24 h后,均可检测到α-SMA mRNA及蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),其中10 nmol/L ET-1实验组表达量高,与0.1和1 nmol／L ET-1实验组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);经10 nmol／L ET-1作用不同时间的实验组,α-SMA mRNA及蛋白均有表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05),其中以作用48 h实验组表达高,与作用6、12、24 h实验组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ET-1可促进子宫肌层成纤维细胞向成肌纤维细胞的转化.
作者：段赵宁；唐良萏；牟晓玲；张婧 刊期： 2014年第04期
目的 构建牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2基因真核表达质粒,并在宫颈癌HeLa细胞中进行表达.方法 以牛Ⅱ型链球菌基因组为模板,采用PCR法扩增van B2基因,克隆至真核表达载体pVAX-1中,构建重组表达质粒pVAX-1-van B2.采用FuGENE HD Transfection Reagent试剂盒将重组表达质粒转染HeLa细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测转染细胞中van B2基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Western blot法检测转染细胞中van B2蛋白的表达.结果 重组表达质粒pVAX-1-van B2经双酶切及测序鉴定构建正确;重组表达质粒转染HeLa细胞48 h后,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR及Western blot分析分别可见570 bp及相对分子质量20 900的目的条带.结论 成功构建了牛Ⅱ型链球菌van B2基因的真核重组表达质粒,并在HeLa细胞中成功表达.本实验为进一步研究牛Ⅱ型链球菌对抗生素的耐药性机制及其与van B2基因的相关性奠定了基础.
作者：刘燕；布日额；锡林高娃；白靓 刊期： 2014年第04期
目的 采用干热法对纯化的人血浆载脂蛋白AⅠ(apolipoprotein A Ⅰ,ApoA Ⅰ)冻干品进行病毒灭活处理,并对灭活效果进行验证.方法 将脂包膜病毒伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯(Sindbis)病毒及非脂包膜病毒脑心肌炎(encephalomyocarditis,EMC)病毒按1∶9(v∶v)的比例分别加至3批ApoA Ⅰ样品中,冻干后于水浴中(100±1)℃加热30 min灭活,分别于加热后5、10、20、30 min取样,检测病毒滴度,绘制病毒灭活动力学曲线,并检测干热法灭活病毒对目的蛋白理化性质及生物活性的影响.结果 干热法对ApoA Ⅰ样品中的脂包膜和非脂包膜病毒均可有效灭活,灭活20 min后,3种指示病毒的滴度均迅速下降;干热法灭活后,冻干品的外观、复溶时间、复溶后澄明度、目的蛋白的平均回收率(95.44％)均符合要求,样品的SDS-PAGE、Westemblot图谱、免疫电泳行为、二级结构和生物活性均无显著变化.结论 干热法能有效灭活脂包膜和非脂包膜病毒;在ApoA Ⅰ纯化工艺中采用S/D法和干热法两步病毒灭活步骤,可保证制品的安全性.
作者：卞炯；何毅明；吴玮；刁武平；朱威 刊期： 2014年第04期
目的 在大肠埃希菌中表达重组毒素rCCK8PE38,并检测其对结肠癌细胞的杀伤活性.方法 采用分子生物学技术将反向翻译的8肽胆囊收缩素(cholecystokinin8,CCK8)与绿脓杆菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)38基因融合,构建重组表达质粒pET-rCCK8PE38,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.通过细胞杀伤试验检测表达的重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞、其他癌细胞系和一些正常细胞的杀伤活性.结果 重组表达质粒pET-rCCK8PE38经双酶切证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为40 000,表达量约占全菌总蛋白的40％;重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞HCT-8有明显的杀伤效果,对其他癌细胞系和正常细胞无杀伤活性.结论 成功在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组毒素rCCK8PE38,其可高效特异地识别并杀伤结肠癌细胞HCT-8.
作者：高世奇；宋杰；胡盼；冯小丽；佟伟华；柳增善 刊期： 2014年第04期
目的 利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV) 16L1蛋白.方法 从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTED1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PiehiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平.结果 重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α-指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达.结论 成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案.
作者：金晓媚；姚宇峰；黄惟巍；杨旭；孙文佳；刘存宝；龙琼；马雁冰 刊期： 2014年第04期
目的 探讨低氧诱导因子-1α (hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对人甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭转移的影响,并探讨其分子机制.方法 用5％O2的低氧培养箱培养FRO细胞不同时间(0、2、4、8、12 h),倒置显微镜下观察细胞形态的变化,Western blot法检测细胞中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关蛋白HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的表达;另设FRO细胞常氧组、HIF-1α特异性抑制剂3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苯甲基吲哚(YC-1)+常氧组、YC-1+低氧组、常氧+HIF-1α激活剂氯化钴(CoCl2)组,采用Westem blot法检测各组细胞中HIF-1α和EMT相关蛋白的表达,Transwell侵袭和迁移试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力.结果 随着低氧培养时间的延长,FRO细胞逐渐发生间质样改变,低氧12 hHIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量较0h显著升高(P＜0.01),上皮细胞特征性蛋白E-cadherin的表达持续降低(P＜0.01).YC-1+低氧组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显著降低(P＜0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著升高(P＜0.05).低氧组和常氧+ CoCl2组与常氧组比较,HIF-1α蛋白的表达量显著升高(P＜0.01);常氧+CoCl2组与常氧组比较,Snail、Vimentin、MMP2蛋白的表达量显著升高(P＜0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著降低(P＜0.01);常氧+CoCl2组与低氧组比较,HIF-1α、Snail、Vimentin蛋白的表达量显著升高(P＜0.01),E-cadherin蛋白的表达量显著降低(P＜0.01),MMP2蛋白的表达量差异无统计学意义(P＞0.05).低氧组和常氧+ CoCl2组的穿膜细胞数和迁移细胞数均较常氧组显著增多(P＜0.01).结论 低氧使FRO细胞中HIF-1α高表达,HIF-1可上调Snail、Vimentin和MMP2的表达,下调E-cadherin 的表达,对FRO细胞的侵袭转移具有促进作用.
作者：杨俊艳；王旎；刘智敏；董超然；刘小花 刊期： 2014年第04期
目的 探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及可能的机制.方法 取对数生长期的鼻咽癌CNE-2细胞,经裸鼠背部皮下注射,1×107个／(0.2ml·只),待瘤体大径为4 ～6mm时,取20只模型裸鼠,随机分为4组:对照组(经腹腔注射生理盐水)、放疗组(每次每只裸鼠经肿瘤局部给予5GyX射线照射,每3d照射1次,共3次)、GPS组(经腹腔注射GPS,30 mg/kg,每次0.3ml,每72 h给药1次,共5次)和GPS联合放疗组(经腹腔注射GPS,30 mg／kg,每次0.3ml,每72 h给药1次,共5次;末次给药48 h后开始放疗,每只每次经肿瘤局部给予5 GyX射线照射,每3d照射1次,共3次).开始给药3周后处死裸鼠,取瘤体,称重,测量肿瘤的长、短径,计算肿瘤体积及抑制率;HE染色观察移植瘤组织病理学改变;Real-time PCR检测移植瘤组织中β-catenin基因mRNA的转录水平;免疫组织化学和Westem blot法检测移植瘤组织中β-catenin蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,GPS组、放疗组和GPS联合放疗组的肿瘤体积及瘤重均明显下降(P＜0.05),抑制率分别为29.87％、52.60％和74.68％;镜下观察可见,GPS联合放疗组细胞凋亡明显,多数细胞核完全溶解,细胞结构消失,坏死的肿瘤组织呈现均质红染表现;GPS联合放疗组移植瘤中β-catenin mRNA及蛋白的表达水平均显著下降(P均＜0.05).结论 GPS可抑制CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,且对鼻咽癌的放疗具有增敏作用,其机制可能与抑制β-catenin的表达有关.
作者：范家铭；李静；姜蓉；王亚平；李春莉；黄江菊 刊期： 2014年第04期
血栓性疾病(thrombotic disease)已成为全球人类死亡的主要原因,每年约720万人死于该病.而血小板(blood platelet)的功能与血栓性疾病的发生发展密切相关,如血小板相关组织因子(tissue factor,TF)、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、血小板表面Fc受体γ链(Fc receptor gamma-chain)、平均血小板体积(mean platelet volume,MPV)、P选择素(p-selectin)、血小板膜糖蛋白V(glycoproteinV,GPV)以及血小板内皮细胞黏附分子-1 (platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)等均参与血栓形成过程.本文就血小板相关因子在血栓性疾病中的作用作一综述,为临床心血管疾病的治疗提供参考.
作者：赵艳芳 刊期： 2014年第04期
目的 比较用于乙型肝炎疫苗的3种寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotide,CpG ODN)佐剂体外的免疫活性.方法 分别将CpG ODN 684(沃森公司)、CpG ODN 1018(Dynavax公司)和CpG ODN 7909(Coley公司)序列体外刺激免疫人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和人树突状细胞系GEN,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法检测人PBMC增殖活力,ELISA法检测GEN细胞中IL-6和IFNα水平.结果 CpG ODN 7909、CpG ODN 1018和CpG ODN 684诱导人PBMC的增殖水平明显高于未刺激的对照组,差异有统计学意义(P＜0.000 1),其中CpG ODN 684和CpG ODN 7909序列诱导人PBMC的增殖水平相似,略高于CpG ODN 1018序列;3种CpG ODN在体外对免疫细胞均具有明显的活化作用,其中CpG ODN 684和CpG ODN 7909序列体外活化免疫细胞产生的IL-6和IFNα水平相似,但高于CpG ODN 1018序列.结论 沃森公司CpG ODN 684序列体外活化免疫细胞功能与Coley公司CpG ODN 7909序列相似,略优于Dynavax公司CpG ODN 1018序列.
作者：张梦霏；王丽丽；丁敏；李伟；周长征；徐娅妮；李镭；魏云林；杨喆 刊期： 2014年第04期
目的 对吉林省汉坦病毒(Hantavirus,HV)宿主动物携带病毒进行遗传进化分析.方法 采集吉林省不同地区鼠肺样品,应用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定出HV感染的阳性样本,利用Trizol试剂提取病毒RNA,RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因,并进行测序,应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析,并与汉城病毒(Seoul virus,SEOV)参考株进行比较;利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析;利用MEGA 5.0软件进行系统发生分析.结果 共捕获719只啮齿动物,其中褐家鼠(R.norvegicus)555只,黑线姬鼠(A.agrarius)74只,小家鼠(M.musculus)90只,HV抗原阳性率为1.39％(10/719);10份阳性样本中,7份来自褐家鼠,2份来自小家鼠,1份来自黑线姬鼠.用全长S引物扩增得到的10株病毒全长S基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在92.8％～95.1％之间,与其他SEOV核苷酸同源性在90.2％～94.7％之间;用M引物扩增得到的部分基因片段,经同源性分析比较发现,各序列间的核苷酸同源性在96.5％～99.5％之间,而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5％ ～ 97.7％之间;10株病毒全部属于SEOV.黑线姬鼠G蛋白365 ～ 769位点间有5个氨基酸差异位点(V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I),小家鼠G蛋白365～769位点间主要有5个氨基酸差异位点(C378G/R、F420L、Q436P/R、E535G／A和C589G/W),但同种间在378、436、535和589位点也有差异;黑线姬鼠N蛋白l ～ 430位点间存在P298L变异;小家鼠N蛋白变异位点较多,主要在M24K／N、A37D、I140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异.分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支.结论 研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主,其遗传进化呈现多样性.
作者：范胜涛；高晓龙；李元果；应瑛；国娇；张钊伟；刘红；吴静；杨松涛 刊期： 2014年第04期
戊型病毒性肝炎(简称戊肝)是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)感染引起的急性病毒性肝炎.我国是戊肝高发地区,国家卫生和计划生育委员会传染病报告系统统计显示,我国戊肝发病人数呈明显上升趋势,2012年首次超过甲型肝炎,成为急性肝炎的第一大病因[1].戊肝平均住院治疗费用在各类病毒性肝炎中高(约2万元以上)[2],加重了患者的负担.在科技部、卫计委、教育部等各级领导的关心与支持下,2012年10月27日,全球首支戊肝疫苗在厦门成功实现产业化,并走向市场,对我国乃至世界各地的戊肝防控均有重要意义[3].但与其他病毒性肝炎相比,戊肝处于长期被忽视的状态.因此,本文对2013年5月和6月参加病毒性肝炎相关会议的部分人群进行问卷调查工作,以了解人们对戊肝和戊肝疫苗的认知情况和接种意愿.
作者：刘威；闵莉；张秋芬 刊期： 2014年第04期
目的 评价非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除效果.方法 将不同终浓度的Benzonase 非限制性核酸内切酶加入狂犬病病毒收获液中,在PBS或Tris两种缓冲体系下,以不同温度酶解不同时间,经分子筛层析纯化后,采用罗氏Ⅱ型高效地高辛DNA标记和检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中DNA的残留量,用确定的酶处理条件,采用酶检测试剂盒检测狂犬病病毒收获液中非限制性核酸内切酶的残留量,采用ELASA法检测抗原含量.结果 非限制性核酸内切酶的处理浓度为50 ～ 90 U／ml,缓冲体系为PBS或Tris,经37℃处理2～3h,转入18 ～ 26℃处理12～18 h酶解,再经分子筛层析纯化后,狂犬病病毒收获液中的Vero细胞DNA去除率在80％以上,病毒抗原回收率在75％以上;用确定的酶处理条件处理狂犬病病毒收获液,可使狂犬病病毒与Benzonase非限制性核酸内切酶完全分离.结论 采用非限制性核酸内切酶可有效去除狂犬病疫苗中Vero细胞残留DNA.
作者：崔燕平；何荣；戚凤春；何晓燕；陈坤；任国辉；汤峰；徐琳；周佳丽 刊期： 2014年第04期
目的 利用磁珠分离法结合定量PCR技术,建立单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留量的检测方法,并进行验证及初步应用.方法 通过磁珠分离法提取样品中的残留DNA,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析.对建立的方法进行种属特异性、准确性及精密性验证,并对5个厂家15批单克隆抗体类产品中的残留DNA进行测定.结果 该方法检测CHO细胞DNA残留的低准确定量浓度可达1×10-3 pg/μl,DNA含量在1×10-3 ～ 102 pg／μl范围内曲线线性良好,标准曲线的相关系数为0.994;该方法能特异性地检测CHO细胞DNA,对其他种属的DNA无扩增反应;该方法检测不同DNA加标量样品的DNA回收率相近,均值均在90％以上,3次测定的相对标准偏差均小于20％,92.6％加标样品的DNA回收率在70％～130％之间;该方法检测15批单克隆抗体类产品的DNA残留量均小于100 pg／剂量,符合《中国药典》三部(2010版)有关CHO细胞残余DNA的要求.结论 磁珠分离法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点,定量PCR法能够简便、快速、准确地对不同工艺的单克隆抗体产品中CHO细胞DNA残留进行定量测定.
作者：王兰；李萌；郭玮；于传飞；高凯 刊期： 2014年第04期
目的 利用大肠埃希菌(E.coli)表达系统异源表达细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1),并与细胞色素P450氧化还原酶(cytochromeP450 oxidoreductase,POR)实现共表达,使其具有代谢活性,为药物代谢的研究提供单一性的酶源.方法 以人肝组织RNA为模板,RT-PCR扩增CYP2E1基因,插入pCW空载体,构建重组表达质粒pCW-2E1,转化E.coli DH5α,IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定;利用双启动子原理构建CYP2E1与POR共表达的重组质粒pCW-2E 1-POR,采用对氨基苯酚法检测CYP2E1重组酶的代谢活性,并对不同培养时间(18、28、38 h)的代谢活性进行比较.结果 质粒pCW-2E1经PCR鉴定,证明构建正确;表达的重组人CYP2E1蛋白相对分子质量约56 000,主要以可溶性形式表达.质粒pCW-2E1-POR经PCR及酶切鉴定,证明构建正确;导入质粒pCW-2E1-POR的重组菌提取的蛋白样品具有明显的代谢活性,培养18、28、38 h后,代谢活性均值分别为(0.195±0.004)、(0.189±0.003)和(0.192±0.004) nmol/(min·mg),差异无统计学意义(P＞0.05),但与导入质粒pCW-2E1的重组菌提取的蛋白样品的代谢活性相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建了具有代谢活性的CYP2E1重组酶,且3个培养时间段之间的代谢活性无明显差异.
作者：徐彬彬；张海风；刘秀；赵勤；王俊平；单杰 刊期： 2014年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
