高远梅;刘北忠;高艳军;张曦;胡秀秀;钟梁
目的 研究麻疹病毒沪-191株在鸡胚成纤维细胞中连续传代的遗传稳定性.方法 将麻疹病毒沪-191株原始种子批(P25)在鸡胚成纤维细胞上传代2次(P27)作为主种子批,继续传代3次(P30)作为工作种子批,继续传代至33(P33)和35(P35)代.对P25、P27、P30、P33和P35病毒基因组进行基因序列分析,并对所有代次病毒进行滴度测定.结果 麻疹病毒沪-191株在鸡胚成纤维细胞中从25代传至35代,其滴度维持在5.0~5.875 lgCCID50/ml之间;P25、P27 、P30、P33、P35 5个代次病毒的全基因组序列未发生任何核苷酸和氨基酸改变.结论 麻疹病毒沪-191株在鸡胚成纤维细胞连续传代,病毒滴度均一,基因组序列未发生改变,遗传稳定性良好.
作者:杨会强;康庄;倪谦枝;刘宇虹;温雪如;刘瑛;雍雪飞;刘杰;孙艳 刊期: 2013年第03期
目的 探讨B细胞参与MOG35-55诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encelphalomyelitis,EAE)小鼠模型的可能机制.方法 采用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型;采用临床评分检测EAE模型建立情况,HE和快蓝染色观察脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘状况,流式细胞术检测B细胞活化程度,免疫组化法检测脾组织生发中心的形成,ELISA法检测IgG1、IgG2a和IgG2b的分泌水平.结果 成功建立了MOG3-55诱导的EAE小鼠模型,EAE组临床评分明显高于弗氏完全佐剂(Complete Freund adjuvant,CFA)组(P<0.001),EAE组小鼠脊髓可见明显的炎性细胞浸润和脱髓鞘斑块;在EAE组发病起始期(免疫后第5天和第8天),外周免疫器官活化B细胞表达水平明显高于CFA组(P<0.01);在发病高峰期(免疫后第15天)EAE组小鼠脾中形成生发中心,而CFA组未见生发中心形成,且外周血抗MOG35-55抗体分泌水平明显高于CFA组(P<0.005).结论 MOG35-33肽段可以诱导B细胞活化,进而可能通过发挥体液免疫作用介导EAE疾病的发生.
作者:詹晓霞;杨金凤;刘宇;王心悦;谢晓丽;孙博;李呼伦 刊期: 2013年第03期
目的 探讨抑制NLS-RARα基因表达对急性早幼粒细胞白血病(Acute promyeolic leukemia,APL)细胞株HL-60增殖及分化的影响.方法 将针对NLS-RARα基因的shRNA真核表达质粒(干扰组)和阴性对照质粒(阴性对照组)采用脂质体法转染HL-60细胞,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染的细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活力;RT-PCR和QRT-PCR法检测细胞中NLS-RARα基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中NLS-RARα蛋白的表达水平;流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达及细胞周期的分布.结果 与阴性对照组和未转染组比较,干扰组HL-60细胞的增殖活力、NLS-RARα基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显下降(P<0.05);CD11b的表达明显升高(P<0.05);G1、G2期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少(P<0.05).结论 抑制NLS-RARα基因的表达可抑制HL-60细胞增殖,促进其分化.本实验为进一步研究APL发生发展的机制及APL的分子诊断和靶向治疗新途径奠定了基础.
作者:胡秀秀;刘北忠;钟梁;高远梅;张曦;吴秀娟;王慧;朱新瑜 刊期: 2013年第03期
目的 建立肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)在Cellspin系统中无血清微载体培养工艺,为生物反应器培养EV71工艺的建立奠定基础.方法 在Cellspin培养系统中对Vero细胞进行微载体培养,考察不同种类培养基MEM、DMEM/F12、VP-SFM、Opti-SFM、Opti-pro、MD505-199及不同微载体浓度3、5、10 g/L对细胞密度的影响.分别以MOI为0.2及2.0接种EV71至Vero细胞,考察病毒接种量对病毒增殖的影响.分别按培养上清、微载体洗脱液模式收毒,比较不同组分中EV71的抗原含量及TCID50.结果 采用5 g/L微载体、VP-SFM培养基时,Vero细胞的密度达4.40×106个/ml;按MOI为2.0染毒,72 h后即可收毒,较MOI为0.2的收毒时间早48 h,按MOI为0.2染毒,收获液上清中的抗原含量达193.5 U/ml,病毒滴度达8.43 Log10TCID50/ml;按上清加洗脱液模式收毒,抗原含量可达573 U/ml.结论 成功建立了无血清微载体培养Vero细胞生产EV71的方法,为生物反应器培养EV71工艺的建立奠定了基础.
作者:周正;高晗;杨志建;夏德镇;张高峡 刊期: 2013年第03期
目的 优化季也蒙毕赤酵母DQ11发酵酒糟水解液生产木糖醇的条件.方法 通过单因素试验和正交试验,优化季也蒙毕赤酵母DQ11发酵酒糟水解液生产木糖醇的发酵温度、初始pH值、转速和接种量,通过高效液相色谱法测定发酵液中木糖醇的含量;采用佳发酵条件发酵生产木糖醇,检测木糖醇含量.结果 摇瓶发酵酒糟水解液生产木糖醇的佳条件为:发酵温度28℃,起始pH值5.0,接种量5%(v/v),摇床转速180 r/min;以佳条件发酵酒糟水解液生产木糖醇的含量为9.016 g/L.结论 优化了季也蒙毕赤酵母DQ11发酵酒糟水解液生产木糖醇的条件,为以酒糟生产木糖醇的可能性提供了实验依据.
作者:张丽媛;姚笛;王颖;马萍 刊期: 2013年第03期
目的 分析2010年昆明市引起手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原埃可病毒9型(Echo virus 9,E9)分离株MSH-KM812 VP1基因的遗传特征.方法 分别采用RD细胞和Hep-2细胞对3份HFMD患儿粪便标本进行病毒分离,应用RT-PCR法分2段扩增病毒VP1基因,并进行序列测定.应用NCBI BLAST软件对所测定的节段序列进行比对;Omiga软件对所测定的节段序列的核苷酸及推导的氨基酸序列进行编辑、比对和拼接;应用Mega 5.05软件进行序列分析,并与15个E9参考株的VP1基因序列进行比较,构建基因系统进化树.结果 从3份HFMD患儿粪便标本中分离到1株E9,命名为MSH-KM812,其VP1区的核苷酸长度为888 bp.MSH-KM812株与其他15个E9参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为78.6% ~ 98.0%和87.5% ~ 99.3%,与中国分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.7%~98.0%和97.0% ~ 99.3%,其中与中国江苏分离株M10MF37 China 2010核苷酸和氨基酸序列同源性高,分别为98.0%和99.3%,而与德国分离株Hill的核苷酸和氨基酸序列同源性低,分别为78.6%和87.5%.基因进化树分析显示,MSH-KM812分离株与中国江苏分离株M10MF37 China 2010和中国山东分离株05189-SD-CHN-2005-E9属于同一个进化分枝.结论 MSH-KM812分离株为E9,与中国其他分离株同属一个进化分枝.
作者:潘玥;戴素萍;朱艳菊;李丽;邓新强;廖宏玮;刘雅灵;马绍辉 刊期: 2013年第03期
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质的作用及其可能的分子机制.方法 经小鼠腋窝皮下注射结肠腺癌C26细胞,建立肿瘤恶病质模型,并设正常对照组(HC组).将模型小鼠分为肿瘤恶病质组(CC组)和MG132治疗组(MG组),待小鼠进入恶病质状态后,CC组小鼠经腹腔注射0.1ml生理盐水,MG组小鼠经腹腔注射0.1mg/kg的MG132,7d后处死小鼠,称量小鼠肿瘤、左侧腓肠肌和附睾脂肪的重量,测量腓肠肌纤维横切面积,ELISA法检测血清中炎性因子TNF-α和IL-6的水平,RT-PCR及Western blot法检测腓肠肌中IKBa、P65、MuRF1和MAFbx基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平.结果 与CC组相比,MG组小鼠腓肠肌和附睾脂肪组织的重量分别增加了31.6%和39.5%(P<0.05),腓肠肌纤维横切面积增加了36.1%(P<0.05);血清中TNF-α和IL-6的水平分别降低了20.9%和42.0%(P<0.05);腓肠肌组织IKBa基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别升高了132.7%和56.5%(P<0.05),MuRF1基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了70.1%和42.6%(P<0.05),MAFbx基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了76.8%和47.3%(P<0.05),P65基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平分别降低了59.1%和53.1%(P<0.05).结论 MG132改善肿瘤恶病质的分子机制可能与抑制NF-κB途径及MuRF1和MAFbx的表达、抑制炎症反应及肿瘤生长有关.
作者:张刘平;唐华;寇耀;郑曰勇;陈志雄;安昌勇 刊期: 2013年第03期
目的 优化天然N-末端人白细胞介素-29(Human interleukin-29,hIL-29)成熟肽在毕赤酵母中的表达条件,高效表达天然N-末端hIL-29成熟肽.方法 采用单因素试验和L9(34)正交试验,分析摇瓶发酵条件下甲醇添加量、起始pH值、诱导时间及诱导温度对毕赤酵母工程菌GS115/hIL-29发酵液A450值的影响;用5L发酵罐初步探索工程菌株的高密度发酵策略.结果 影响重组毕赤酵母摇瓶发酵液A450值的因素重要性依次为:诱导温度>起始pH值>甲醇添加量>诱导时间,佳发酵条件为:起始pH值7.5、甲醇添加量1.5%、26℃诱导60 h,在此条件下,发酵液的A450值达1.72;高密度发酵策略为:pH7.5,甲醇与溶氧反相偶联,26℃诱导12h,在此条件下,目的蛋白的表达量明显高于摇瓶水平;高密度发酵12、24 h表达的蛋白与羊抗人IL-29多抗的反应强度明显高于摇瓶发酵表达的蛋白.结论 优化了工程菌株GS115/hIL-29摇瓶发酵和发酵罐高密度发酵条件,实现了重组天然N-末端hIL-29成熟肽在毕赤酵母GS115中的高效表达,为其进一步的中试放大工艺奠定了基础.
作者:郑海军;陆源;陈伟;蔡鲜;徐望;邬敏展;吴静 刊期: 2013年第03期
目的 观察重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(Recombinant Toxoplasma gondii phosphoglycerate mutase 2,rTgPGAM2)联合白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)或干扰素γ(Interferon γ,IFNγ)滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨IL-2和IFNγ的佐剂效应.方法 将48只BALB/c小鼠随机均分为6组:rTgPGAM2组(30 μg)、IL-2组(500 IU)、IFNγ组(1 000 IU)、rTgPGAM2(30 μg)+IL-2(500 IU)组和rTgPGAM2 (30 μg)+IFNγ(1 000 IU)组和对照组(20μl PBS),免疫途径均为滴鼻免疫,共免疫3次.末次免疫后第14天,颈椎脱臼处死小鼠,CCK-8法检测各组小鼠脾淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4和IL-10水平.结果 经rTgPGAM2刺激后,与对照组比较,各免疫组小鼠脾淋巴细胞刺激指数(Stimulation index,SI)均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组(P<0.01或P<0.05);经ConA刺激后,仅IL-2组SI显著高于对照组(P<0.01).各免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2和IFNγ含量均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组(P<0.01或P<0.05);rTgPGAM2组及其联合IL-2或IFNγ组IL-4含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-10的含量,只有IFNγ组和rTgPGAM2+ IFNγ组显著高于对照组(P<0.05).结论 rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ鼻内免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答优于rTgPGAM2单独免疫,表明IL-2和IFNγ具有良好的佐剂效应,IL-2的佐剂效应更佳.
作者:李雅清;王海龙;祝建疆;孟晓丽;杨建一;殷国荣 刊期: 2013年第03期
目的 分析重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的遗传多样性.方法 采用RT-PCR法从重庆地区中蜂囊状幼虫病病死幼虫体内扩增CSBV的2段结构蛋白和1段非结构蛋白的编码序列,并克隆至pMD18-T载体进行双向序列测定,所得序列在NCBI上进行BLAST搜索,以进行同源性分析;应用ClustalW2软件进行多序列比对分析;应用SNAP软件计算同义替换率(Synonymous substitution rate,dS)、非同义替换率(Nonsynonymous substitution rate,dN)及其比值(dS/dN);采用MEGA 4软件的邻接法(Neighbor-joining)中的大可能性算法(Maximum likelihood method)构建系统进化树.结果 CSBV重庆分离株片段SBl-2、SB6-7和SB14-15的序列同源性高于99.06%,序列保守,3个片段序列均只发现少数点变异碱基,属于亚洲型,与东方蜜蜂广州分离株和韩国分离株的亲缘关系近;CSBV重庆分离株存在特有的核苷酸和氨基酸位点,且与亚洲型分离株存在广泛的共有基序;亚洲型分离株的替换率高于欧洲型分离株.结论 CSBV分离株存在型特异的遗传变异规律.
作者:罗文华;张邑帆;沈克飞;曹兰;杨睿;卢茵 刊期: 2013年第03期
目的 在大肠杆菌中融合表达呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F2蛋白与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)早期分泌抗原靶6(Early secretory antigenic target-6,ESAT-6)蛋白,并进行纯化.方法 分别从MTB标准菌株H37Rv及含F蛋白全长基因的pMD18-T-f质粒中扩增esat-6-f2基因,插入原核表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30a-esat-6-f2,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,经镍离子亲和层析柱纯化.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;重组融合蛋白ESAT-6-F2相对分子质量约为21 000,主要以包涵体形式表达,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的融合蛋白纯度可达90%以上.结论 成功在大肠杆菌中表达并纯化了重组融合蛋白ESAT-6-F2,为进一步研究其免疫原性和免疫保护性奠定了基础.
作者:岳婷婷;井申荣;曾韦锟;黄芬 刊期: 2013年第03期
目的 探讨在体外模拟的肿瘤微环境中,骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)中STAT3的过度表达和激活对其恶性转变的影响.方法 通过MSCs分别与C6胶质瘤及星型胶质细胞间接共培养,模拟MSCs生长的肿瘤微环境,实验设实验组、阳性和阴性及空白对照组,MTT法检测各组细胞的增殖情况;RT-QPCR检测各组细胞中STAT3、CyclinD1及BCL-xl基因mRNA的表达水平;Western blot检测各组细胞中STAT3、P-STAT3、CyclinD及BCL-xl的蛋白表达水平;病理HE染色检测各组细胞注入裸鼠皮下成瘤情况.结果 实验组MSCs生长接触抑制明显减弱,增殖活性增高;实验组STAT3、CyclinD1及BCL-xl基因mRNA的表达水平均明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组STAT3、P-STAT3、CyclinD1及BCL-xl的蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);HE染色结果显示,实验组与阳性对照组细胞深染,聚集明显,排列不规则,细胞核大深染,瘤内有大量新生血管增生,可见组织坏死.结论 STAT3及P-STAT3的过度表达和激活,可能是造成MSCs在肿瘤微环中恶性转变的重要原因之一.
作者:崔向荣;朱静;田杰;邓兵;李娅莎;白璐 刊期: 2013年第03期
目的 探讨Arc基因表达及甲基化与幼龄鼠和成年鼠空间记忆形成的相关性.方法 应用Morris水迷宫对2月龄幼龄鼠和6月龄成年鼠进行定位航行训练,以判断其空间记忆形成情况.采用RT-PCR检测定位航行训练后大鼠海马组织Arc基因mRNA的转录水平,并对海马基因组DNA进行亚硫酸盐处理,采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测Arc基因的甲基化情况,并进行DNA甲基化序列分析.结果 随着定位航行训练入水次序及训练天数的增加,幼龄鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05);而成年鼠在训练当天随着入水次序的增加,逃避潜伏期缩短,但第2天逃避潜伏期不仅与入水次序有关,也随着放入点距离的增大,逃避潜伏期相对延长(P<0.05),至第3天逃避潜伏期与入水次序及距离均无关,形成稳定的记忆能力.成年鼠定位航行训练组海马组织Arc基因mRNA的转录水平显著高于正常对照组(P<0.01),且高于幼龄鼠(P<0.05).与幼龄鼠正常对照组相比,幼龄鼠和成年鼠定位航行训练组第8和24位点均无甲基化,成年鼠定位航行训练组与正常对照组相比,甲基化位点无变化.结论 幼龄鼠瞬时记忆能力接近成年鼠,但形成稳定记忆的能力弱于成年鼠.Arc启动子甲基化影响其mRNA的表达,而Arc基因mRNA的转录水平与大鼠空间记忆能力及年龄相关,进一步证实了甲基化参与调解学习和记忆.
作者:叶保国;滕士勇;李新白;宋雪松;麻海春;朱庆三 刊期: 2013年第03期
硒蛋白P(Selenoprotein P,Sepp1)是一种由2个结构域构成的分泌性糖蛋白.血浆中多数Sepp1均源于肝脏,肝脏合成的Sepp1能影响整个机体的硒含量,因此Sepp1在维持机体内硒的动态平衡和分布上起着关键作用.另外,血浆中的Sepp1能够调控微量元素硒缺乏,也是检测硒含量的指标之一.本文就Sepp1结构及功能的研究进展作一综述.
作者:毛景东 刊期: 2013年第03期
目的 探讨髓母细胞瘤中β-连环蛋白(β-catenin)、血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelia growth factor receptor-2,VEGFR-2)和SUFU(Suppressor of fused)的表达及其相关性.方法 采用免疫组化SP法检测33份髓母细胞瘤和10份瘤旁正常小脑组织中β-catenin、VEGFR-2和SUFU的表达情况,并分析三者之间表达的相关性.结果 33份髓母细胞瘤组织中,β-catenin、VEGFR-2和SUFU的阳性率分别为66.7%(22/33)、87.9%(29/33)和30.3%(10/33),正常小脑组织中的阳性率分别为10%(1/10)、10%(1/10)和90%(9/10),髓母细胞瘤中3种蛋白的表达与正常小脑组织比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);髓母细胞瘤中β-catenin与VEGFR-2的表达呈正相关,与SUFU的表达呈负相关.结论 β-catenin、VEGFR-2和SUFU与髓母细胞瘤的发生发展密切相关.
作者:高敏娜;张雄;张红梅;李昱 刊期: 2013年第03期
目的 探讨帕罗西汀对慢性不可预见温和刺激(Chronic unpredicted mild stress,CUMS)的抑郁症大鼠抑郁行为的影响及其机制.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(NG)、模型组(MG)、帕罗西汀模型组(PMG)及帕罗西汀对照组(PNG),MG组和PMG组采用孤养结合CUMS方式复制大鼠抑郁模型,每天PMG组和PNG组灌胃盐酸帕罗西汀1.8 mg/kg,NG组和MG组灌胃等体积的5%CMC-Na溶液.通过高架十字迷宫试验和糖水偏好试验评价大鼠的抑郁行为;采用常规生物化学方法测定大鼠大脑皮层丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性;RT-PCR检测海马5-羟色胺转运体(5-Hydroxytryptamine transporter,5-HTT)和去甲肾上腺素转运体(Noradrenaline transporter,NET)基因mRNA的转录水平.结果 与NG组相比,MG组大鼠进入开放臂的次数和停留时间显著减少(P<0.叭或P<0.001),而在封闭臂停留的时间明显延长(P<0.01);糖水偏好百分率显著下降(P<0.001);大脑皮层MDA含量显著升高(P<0.01),SOD和CAT活性显著降低(P<0.05);海马5-HTT和脑桥NET基因mRNA的转录水平均显著降低(P<0.001).帕罗西汀能明显抑制CUMS诱导的上述改变(P<0.05),而对正常大鼠无显著影响(P<0.05).结论 帕罗西汀能明显改善CUMS所致的大鼠抑郁行为,其机制与增强机体抗氧化应激能力、上调海马5-HTT和脑桥NET基因mRNA的转录水平有关.
作者:邱红梅;王涵;李娜;文威;周岐新 刊期: 2013年第03期
目的 建立测定重组人干扰素α1b(Recombinant human interferon α1b,rhIFNα1b)蛋白质含量的HPLC检测方法,并进行验证.方法 应用HPLC外标法测定IFNα1b对照品的蛋白质含量,并对方法的线性及精密度进行验证.采用建立的HPLC外标法测定3批rhIFNα1b样品的蛋白质含量,并与Lowry法的检测结果进行比较.结果 蛋白质在进样量5~50 μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.998 1);用建立的方法重复进样6次,检测rhIFNα1b对照品溶液的蛋白质含量,相对标准偏差(RSD)为0.92%,<2%;用建立的方法检测0812001、0812003、0812006批rhIFNα1b样品溶液的蛋白质含量分别为0.465、0.503和0.496 mg/ml;HPLC外标法与Lowry法测定的蛋白质浓度有一定的差异,HPLC法的RSD<2%,Lowry法的RSD> 4%,HPLC法的精密度较Lowry法好.结论 建立了测定rhIFNα1b蛋白质含量的HPLC外标法,该方法操作简便,精密度较好,可用于IFNα1b原液蛋白质含量的检测.
作者:周倩;李玉华 刊期: 2013年第03期
目的 对2008~2010年北京和青岛地区流行的33株柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus A16,CA16)分离株的全基因序列进行分析.方法 收集2008 ~ 2010年北京和青岛地区CA16感染患者咽拭子标本,采用Vero细胞对病毒进行分离,并经噬斑纯化.提取病毒RNA,采用RT-PCR法分段扩增CA16全长基因,经序列测定和拼接后,利用DNAStar和MEGA5.10软件分析全基因序列.结果 经病毒分离和噬斑纯化,共获得33株CA16分离株;33个分离株之间的核苷酸序列同源性大于90.9%,与CA16国际标准株G10各区段的核苷酸序列同源性为72.7%~89.0%,氨基酸序列同源性为79.3%~100.0%;与近年中国分离的CA16 SZ/HK08-7株同源性较高,全基因组同源性大于91.5%,各区段核苷酸序列同源性均大于83.7%;在基于VP1序列的种系进化树中,BJWG16、BJWG17、BJWG20等23个分离株属于C1亚型,其余10个分离株属于C3亚型.结论 2008 ~ 2010年北京和青岛地区流行的33株CA16分离株均为C基因型.本研究对我国CA16分子流行病学、毒力位点的研究以及疫苗株的选择具有重要意义.
作者:王潇潇;郝春生;李懿;吴蕴怡;郭会杰;刘宇;马淑花;李秀玲 刊期: 2013年第03期
目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法 将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只.玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5~19.5天分别每日灌胃玉米油(2ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药.取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况.结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组(P<0.000 1),Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组(P<0.01);DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组(P<0.000 1).结论 孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关.
作者:刘东尧;吴盛德;华燚;何文飞;何昀;陈柏林;龙春兰;魏光辉 刊期: 2013年第03期
目的 探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)表达和活性的影响.方法 用不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖活力的影响;Western blot检测HeLa细胞中GAPDH蛋白表达的变化;GENMED细胞GAPDH活性终点比色法定量检测了GAPDH的活力.结果 经Sutent处理24 h后,HeLa细胞的增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为10.283 μmol/L;Sutent可明显降低HeLa细胞中GAPDH蛋白的表达量,并能直接抑制GAPDH的活力.结论 Sutent可抑制HeLa细胞的增殖,降低GAPDH蛋白的表达量及活力,显示了其作为多靶点药物的重要研究价值.
作者:展瑞岩;杨红;张元新;葛雅琨;李世军;施维;郑昆 刊期: 2013年第03期