陈婷；刘嘉；王晓；刁勇
目的 建立生物反应器培养分泌重组人干扰素β1a(IFNβ1a)的CHO细胞的工艺,探讨CHO细胞表达分泌IFNβ1a的反应动力学规律.方法 应用15L生物反应器悬浮微载体方式培养CHO工程细胞,比较不同时期细胞的生长形态、数量、生物活性、灌流量、葡萄糖消耗量及其他物理参数的变化规律.结果 15L生物反应器中在初始pH 6.86～7.20,溶氧30％～ 70％,温度36.8 ～ 37.2℃,微载体4 g/L,罐流量6.5 L/h的条件下连续培养40 d,CHO工程细胞的密度维持在5×105个/ml之间,收获的细胞液中重组人IFNβ1a的生物活性为2.5×104～4.0×105 IU/ml,葡萄糖消耗量在0.5～2.5 mg/ml之间.结论 初步建立了15 L生物反应器培养分泌重组人IFNβ1a的CHO细胞的工艺,为进一步建立工业化生产工艺奠定了基础.
作者：王妍；张丽君；黄志斌；张英；梁雯荻 刊期： 2013年第10期
目的 分析山东省潍坊市2011 ～ 2012年疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的发生特征,评价AEFI监测系统运转情况及预防接种安全性.方法 通过AEFI监测系统,收集全市2011年1月1日至2012年12月31日报告的AEFI个案数据,采用描述性流行病学方法和卡方检验进行数据分析.结果 2011 ～2012年全市AEFI监测系统共报告AEFI 1 836例,报告发生率为39.75/10万,2012年报告发生率(42.79/10万)高于2011年(36.57/10万),差异有统计学意义(P＜0.01).在1 836例AEFI中,男女性别比为1.34:1;≤1岁占79.63％;病例报告主要集中在8～11月份,占52.67％;报告疫苗以国家免疫规划疫苗(National Immunization Pro-gram,NIP)为主;一般反应占97.50％,报告发生率为38.76/10万,以单纯发热、局部红肿伴有硬结和单纯局部红肿为主,异常反应占2.07％,报告发生率为0.83/10万,以过敏性反应和卡介苗淋巴结炎为主,偶合症占0.33％,报告发生率为0.13/10万,心因性反应和待定分别1例,占0.05％,报告发生率为0.02/10万,大多数病例已痊愈.估算全市NIP不良反应报告发生率为6.45 ～ 109.30/10万.2011 ～ 2012年全市12个县市区均有AEFI个案报告,报告县覆盖率、48 h及时报告率和48 h及时调查率均达到100％.结论 全市AEFI系统的监测灵敏性尚需继续提高,AEFI多发生在低年龄儿童和夏秋季节,疫苗以NIP为主,应重点监测;NIP不良反应报告发生率均在预期发生范围内,安全性良好.
作者：王绍清；黄炳花 刊期： 2013年第10期
目的 制备鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)M蛋白单克隆抗体,并进行鉴定.方法 利用IBV Sczy3株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法筛选杂交瘤细胞,强阳性孔经有限稀释法亚克隆,制备抗IBV M蛋白单克隆抗体.对制备的单抗进行单抗亚型、腹水ELISA效价、特异性、交叉反应性鉴定及Western blot分析.结果 获得2株能稳定分泌抗IBV M蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2C10和7H6,单抗亚型分别为IgM和IgG1;腹水ELISA效价分别为1∶25 600和1∶12 800;2株单抗均只与IBV发生特异性反应,而与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H9亚型、AIV H5抗原和鸡传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)均不反应;2株单抗与5种基因型的其他10株IBV均有良好的反应性.结论 制备出2株针对IBV M蛋白的单抗,为今后更深入地研究该蛋白的分子生物学功能、抗原表位的鉴定及抗原捕获ELISA方法的建立等提供了有力的工具.
作者：王富妍；任雅；邹年莉；郭明萍；吴瑞婷；付润饶；文心田；曹三杰；黄勇 刊期： 2013年第10期
目的 对啤酒酵母多糖进行提取和水解,并对获得的酵母多糖组分进行分析.方法 采用碱法-酶法提取啤酒酵母多糖,并进行提纯,采用苯酚-硫酸法测定所提取多糖中的总糖含量,并计算多糖收率,凯氏定氮法测定蛋白含量.用三氟乙酸法(trifluoroacetic acid,TFA)水解多糖,采用Waters suger park-1色谱柱和蒸发光检测器进行液相检测,以确定不同酵母多糖的组分.结果 获得的3种酵母多糖成分DT1、DT2、DT3的总糖含量分别为94.61％、95.89％、94.56％,收率分别为9.3％、3.6％、23.4％,各多糖的蛋白含量分别为2.98％、1.89％、3.34％.用2 mol/L的TFA,于110 ℃下水解6h,对标准葡聚糖的水解率可达95％,且对3种酵母多糖均有较好的水解效果.通过碱法-酶法可获得甘露聚糖DT1;可溶性葡聚糖DT2,葡聚糖含量占总糖含量的90.6％;不溶性葡聚糖DT3,葡聚糖含量占总糖含量的98％以上;3种多糖均含有少量的蛋白质.结论 碱法-酶法提取酵母可获得3种高纯度的酵母多糖,2 mol/L的TFA在110 ℃下对酵母多糖水解6h,适于多糖组分的分离分析.
作者：韩晓阳；徐泽平；周传兵；冯文娟；刘洁磊；吴浩飞 刊期： 2013年第10期
目的 利用Real-time PCR法检测朊病毒病相关miRNA在不同发病脏器和细胞中的表达变化.方法 提取羊痒病因子22L毒株感染的BALB/c小鼠大脑、海马、延髓、脾脏以及羊痒病因子22L毒株感染的鼠神经瘤ScN2a细胞总RNA,通过特殊设计的茎环结构的反转录引物进行反转录,应用ABI step one plus system定量PCR仪进行定量检测;对Real-time PCR进行特异性和重复性验证;采用SYBR Green荧光染料法,以U6 RNA作为内参照,2-△△Q法进行miRNA表达相对定量分析,检测小鼠发病脏器中和细胞中miR-7a、miR-128、miR-135a、miR-146a、miR-152、miR-24-2*、miR-380-3p、miR-448-5p的表达.结果 Real-time PCR法检测朊病毒病相关miRNA特异性和重复性良好.各组中miRNA改变5倍以上的有发病终末期小鼠大脑中的miR-146a,海马中的miR-128、miR-135a、miR-152,延髓中的miR-448-5p,ScN2a细胞中的miR-146a,脾脏中的miR-152,其中脾脏中的miR-152显著上调,为18.98倍.结论 朊病毒病中这些上调或下调的miRNA能调控细胞内多种代谢和信号传导途径发生异常,引起细胞及组织器官发生病理学变化.
作者：刘志培；孟轲音；鞠传静；李忠义；刘虓虓；徐静；白焕力；李莎；朱淼 刊期： 2013年第10期
目的 探讨苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/p-catenin信号通路下游靶基因表达的影响.方法 用不同浓度的苦参碱(0.5、1.0、2.0 g/L)处理TF-1细胞,另设对照组(不加苦参碱).苦参碱作用48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组TF-1细胞中SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的表达水平,并分析SALL4基因与β-catenin、C-myc及Cyclin DI表达的相关性;Western blot法检测各组TF-1细胞中SALL4蛋白的表达水平.结果 经不同浓度苦参碱处理48 h后,TF-1细胞中SALL4、β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达水平及SALL4蛋白的表达水平与对照组相比,均明显下降,且呈浓度依赖性(P＜0.05);SALL4基因与p-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达明显相关(rs值分别为0.912、0.818和0.832,P均＜0.o1).结论 苦参碱对TF-1细胞中SALL4基因和蛋白表达及Wnt/p-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的抑制可能在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中起重要作用.
作者：周陈姣；史丽君；傅雷华；王兰；喻依川；胡成琳；陈林 刊期： 2013年第10期
目的 制备卵巢癌相关抗原CA125R单克隆抗体,并进行鉴定.方法 将CA125一段串联重复序列(CA125R)基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-l,构建重组表达质粒pGEX-CA125R,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-CA125R融合蛋白.表达的融合蛋白经GST亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备CA125单克隆抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性,单克隆抗体亚类测定试剂盒分析单抗的亚类.腹水诱生法大量制备单抗,SDS-PAGE分析单抗的纯度,间接ELISA法检测单抗的效价.结果 重组原核表达质粒pGEX-CA125R经双酶切及测序,证实构建正确;纯化的GST-CA 125R融合蛋白相对分子质量约44 000,纯度约为95％,可与小鼠抗GST单克隆抗体发生特异性反应;获得1株可稳定分泌抗CA125单克隆抗体的杂交瘤细胞株3-B2,其分泌的单抗能特异识别GST-CA125R融合蛋白和天然CA125糖蛋白,其抗体亚型为IgG2a型;纯化的腹水单抗纯度约为90％,效价达1×106以上.结论 成功获得1株能特异性识别天然CA125糖蛋白的单克隆抗体细胞株,并经腹水诱生法大量制备了抗体,为CA125临床检测试剂盒的研发奠定了基础.
作者：梁勤东；马婷婷；董晋豫；李武县；汪先桃；李紫微；王秦；熊海玉；涂植光 刊期： 2013年第10期
目的 优化治疗用质粒DNA十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)纯化工艺,为其规模化生产奠定基础.方法 采用碱裂解法裂解含质粒pEGFP的大肠埃希菌(E.coli)DH5α菌种,在碱裂解液中加入不同终浓度的CTAB及不同终浓度的NaCl、KAc、LiCl、CaCl2、MgCl2溶液,确定CTAB纯化质粒DNA的佳浓度,并分析盐对质粒DNA选择性释放的影响.分别采用BCA蛋白浓度测定试剂盒、内毒素检测试剂盒和Real time-PCR法检测纯化的质粒DNA中宿主蛋白含量、内毒素含量和细菌基因组DNA含量;通过A549细胞及动物转染试验检测纯化质粒DNA的体外和体内生物活性.结果 CTAB纯化质粒DNA的佳浓度为0.004％;用NaCl、KAc或LiCl提取的质粒DNA中,RNA均未完全去除,而用CaCl2或MgCl2提取的质粒DNA中,RNA含量(RNA/nucleic acid)均小于1％,CaCl2佳终浓度范围为0.4～0.5 mol/L,MgCl2佳浓度范围为0.3～0.4 mol/L;使用0.4 mol/LMgCl2的CTAB法纯化的质粒pEGFP的杂蛋白质、细菌基因组DNA、内毒素和RNA含量均符合FDA对治疗用质粒DNA的要求;纯化的质粒pEGFP DNA回收率达80％以上,且体外生物活性显著高于市售试剂盒纯化的质粒(P＜0.05),而体内生物活性与试剂盒纯化的质粒相当(P＞0.05).结论 优化了CTAB法纯化质粒DNA的工艺,该方法操作简便,经济高效,纯化得到的质粒DNA各项指标均符合FDA质量标准,且转染基因表达效率较高,质量可靠,适用于质粒DNA的大规模纯化生产.
作者：陈婷；刘嘉；王晓；刁勇 刊期： 2013年第10期
狂犬病是重要的人兽共患疾病,在我国,每年约有2000 ～ 3000人死于狂犬病.固有免疫是机体针对病毒等病原的第一道非特异的防线,同时,也对特异性的获得性免疫应答产生影响.目前,固有免疫中RIG-I通路及其抗病毒作用机制研究深入广泛.狂犬病病毒进化中获得诸多针对宿主特别是固有免疫应答的逃逸机制,针对该机制的研究对于狂犬病的预防、诊断及治疗具有重要意义,同时,也为其他病毒的免疫逃逸相关研究奠定基础.
作者：王林栋 刊期： 2013年第10期
目的 探讨血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)过表达对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后心室重构的影响及其可能的分子机制.方法 采用开胸结扎冠状动脉法建立SD大鼠AMI模型,将模型大鼠随机分为MI、MI+(NS)、MI+ AdEGFP、MI+ AdACE2组,另设SHAM(假手术)组,每组15只,MI+ NS、MI+ AdEGFP和MI+ AdACE2组沿心肌梗死周边区选取5个点,通过直接心肌内注射方式分别注射NS、AdEGFP和AdACE2,SHAM和MI组不注射.术后4周末,采用Western blot法检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中ACE2、α-SMA、MKP-1、ERK1/2、p-ERK1/2、P38、TGF-β1蛋白的表达;HE染色后于普通显微镜下观察心肌组织结构及细胞炎症变化,天狼猩红-饱和苦味酸染色后于普通显微镜及偏振光显微镜下分别观察心肌胶原表达分布情况;SP免疫组化染色法检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中AngⅡ、Ang(1-7)、α-SMA蛋白的表达,同时采用ELISA法检测Ang(1-7)蛋白的表达;使用羟脯氨酸试剂盒检测大鼠心肌梗死周边区心肌组织中羟脯氨酸含量.结果 术后4周末,MI+ AdACE2组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中ACE2蛋白的表达量显著高于其他各组,同时Ang(1-7)蛋白的表达量也显著升高(P＜0.05);与SHAM组相比,MI、MI+ NS、MI+ AdEGFP组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中AngⅡ、Ang(1-7)、α-SMA蛋白的表达量显著升高(P＜0.05),MI+AdACE2组与MI、MI+NS、MI+AdEGFP组相比,AngⅡ、α-SMA蛋白表达水平降低,Ang(1-7)蛋白表达水平升高更显著;与MI、MI+ NS、MI+ AdEGFP各组相比,MI+ AdACE2组大鼠心肌梗死周边区心肌组织中MKP-1蛋白的表达水平明显增加(P＜0.05),p-ERK、P38、TGF-β1蛋白的表达水平降低,羟脯氨酸含量显著降低(P＜0.05);HE染色和天狼猩红-饱和苦味酸染色证实,ACE2对AMI后梗死周边区的炎症反应和胶原重塑均有明显的改善作用.结论 ACE2在心肌过表达能有效改善大鼠AMI后心肌梗死周边区心肌纤维化进程,缓解心室重构,其机制可能与ACE2调节肾素-血管紧张素系统(rennin-angiotensin system,RAS)、平衡丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)活性相关.
作者：张全军；殷跃辉；吕瑾；范晋奇；邹立力；张波 刊期： 2013年第10期
目的 建立基因治疗用pUC 118-ski质粒DNA的纯化工艺,并进行质量鉴定.方法 采用碱裂解法粗提质粒,PEG/MgCl2沉淀法初步纯化后,依次通过Sepharose 6 FF分子筛层析、PlasmidSelect Xtra亲和层析和SOURCE30Q离子交换层析纯化质粒DNA.纯化的质粒DNA经琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋质粒的比例;紫外分光光度计测定质粒的A260和A280值,以A260/A280比值评价其纯度;CCK-8法检测质粒促原代培养的大鼠皮肤成纤维细胞的增殖活性;BCA法和鲎试剂凝胶法分别检测质粒DNA中残留的蛋白质和内毒素含量;PCR法检测质粒中细菌基因组DNA的含量.结果 经Sepharose 6 FF分子筛层析可有效去除质粒DNA中的RNA,经PlasmidSelect Xtra亲和层析能将超螺旋质粒DNA(scDNA)与开环质粒DNA(ocDNA)有效分离,经SOURCE30Q离子交换层析获得的质粒DNA纯度很高,但出现了少量ocDNA.获得的质粒DNA纯品中超螺旋质粒所占比例大于90.5％;纯度(A260/A280)为1.83;促原代培养的大鼠成纤维细胞的增殖活性与空载体组相比提高了22.9％ (P＜0.05),与纯化前的质粒促细胞增殖活性一致;内毒素含量小于50 Eu/mg;几乎检测不到蛋白质残留;细菌基因组DNA残留量小于1.2μg/mg.结论 建立了基因治疗用pUC 118-ski质粒DNA的纯化工艺,纯化产品的质量指标均符合国家食品药品监督管理局(SFDA)的标准,为申请该基因药物的临床试验及大规模制备质粒DNA奠定了基础.
作者：彭艳；李平；刘苹；周元国 刊期： 2013年第10期
目的 优化肉毒梭菌培养液的澄清过滤工艺,并对过滤效果进行验证.方法 选择不同型号的过滤器组合对A型肉毒梭菌培养液进行一级、二级澄清过滤,筛选佳过滤器组合;用佳过滤器组合对扩大培养批量的A、B、E、F型肉毒梭菌培养液进行澄清过滤.结果 P700K+ 50P过滤器组合对A型肉毒梭菌培养液进行一级、二级澄清过滤的效果佳;用该过滤器组合对扩大培养批量的A、B、E、F型肉毒梭菌培养液进行澄清过滤,各型均可达到预期的试验目标.结论 筛选出P700K+ 50P为A、B、E、F型肉毒梭菌培养液澄清过滤的佳过滤器组合,为肉毒梭菌培养液澄清过滤工艺的进一步优化提供了实验依据.
作者：高建军；李育合；孟祥玉；曹馨匀；武毅；刘伟涛；谢小荣；窦强 刊期： 2013年第10期
目的 研究不同抗原剂量的亚单位疫苗对小鼠的免疫效果.方法 将重组LTB-VP1和BSA蛋白分别用氢氧化铝吸附后,制备成不同浓度的亚单位疫苗,以100、50、20、10、5和1μg/只的剂量免疫昆明小鼠,共免疫3次.于初次免疫后第14、28、42、56天断尾采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平和特异性IgG1/IgG2a比率,并采用尿素变性法检测小鼠血清中抗体相对亲合力指数(abidity index,AI).结果 LTB-VP1和BSA抗原激发的抗体水平随免疫次数的增加而不断升高,与抗原剂量呈非线性关系,不同抗原的合适使用剂量也不相同.LTB-VP1抗原以20 μg/只剂量产生的抗体水平和抗体的AI值高;IgG1/IgG2a平均值为1.04,各剂量组Th1/Th2型免疫反应处在一种平衡状态.BSA抗原在5和100 μg/只剂量时激发的抗体水平相近,抗体的AI值差异有统计学意义(P＜0.05);IgG1/IgG2a平均值为2.4,各剂量组以Th2型免疫反应为主.结论 抗体水平不随抗原剂量的增加而增加,低剂量抗原即可产生较好的免疫效果,为兽用疫苗的临床使用提供了数据参考.
作者：喻凯；田世成；屈泰龙；余兴龙 刊期： 2013年第10期
目的 对柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus groups A type 16,CoxA 16)4个毒株进行免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析.方法 提取CoxA 16 G20、KM/M08、MY08和KM208病毒RNA,PCR扩增VP1基因,并进行测序;利用MEGA4.0软件中Bootstrap Test of phylogeny→Neighbor-joining方法对13株CoxA16基于VP1基因全序列构建CoxA 16种系进化树并进行基因分型,使用DNAMAN软件对4个毒株VP1核苷酸序列的同源性及其蛋白质氨基酸序列差异位点进行分析.分别用纯化灭活后的4株CoxA16免疫BALB/c小鼠,于初次免疫和二次免疫后的第14、28天采血,分离血清,Westem blot法检测G20毒株免疫的小鼠血清中抗体的的特异性;微量中和试验法检测血清中和抗体效价并进行交叉中和试验.结果 G20、MY08和KM208毒株属于B2b基因型,而KM/M08毒株属于B2a基因型;4个毒株间VP1基因核苷酸序列的同源性为91.8％～99.0％;MY08与其他3个毒株相比,在VP1的第102位(N→D)、241位(E→K)和248位(T→A)上存在3个差异氨基酸位点.G20毒株的抗血清可特异识别CoxA16的VP1和VP2蛋白,具有良好的免疫原性;各实验组二次免疫后第28天中和抗体效价均高于其他检测时期,其中MY08组中和抗体效价明显低于其他3组,差异有统计学意义(P＜0.01);G20、KM/M08、和KM208毒株间的交叉保护能力优于MY08毒株对G20、KM/M08和KM208毒株的交叉保护能力,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 4株CoxA 16灭活后均能诱导机体产生相应的中和抗体和交叉保护能力,其中G20、KM/M08和KM208毒株在灭活后,显示了更好的免疫原性和毒株间交叉保护能力.
作者：谢振锋；普晶；黄泓泰；刘正玲；董承红；刘龙丁；王丽春 刊期： 2013年第10期
目的 构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2-hsp 70,并筛选稳定表达Her2蛋白的细胞株.方法 采用RT-PCR法扩增人乳腺癌SKBR-3细胞中Her2和hsp70基因,插入质粒pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70,经双酶切后,回收hsp70基因,连接人质粒pcDNA3.1-Her2的N-末端,构建重组表达质粒pcDNA3.1-Her2-hsp 70.将质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1-Her2-hsp70分别转染小鼠乳腺癌4T-1细胞,采用Westernblot法检测Her2蛋白的表达.结果 重组表达质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70及pcDNA3.1-Her2-hsp70经双酶切鉴定,证明构建;转染质粒pcDNA3.1-Her2-hsp70的4T-1细胞中可见相对分子质量约65 000的Her2蛋白的表达.结论 已成功构建了重组质粒pcDNA3.1-Her2、pcDNA3.1-hsp70及pcDNA3.1-Her2-hsp70,并获得了稳定表达Her2蛋白的小鼠乳腺癌4T-1细胞,为进一步探讨佐剂辅助异种抗原产生的抗肿瘤免疫效应奠定了基础.
作者：李小红；朱江木；王明丽；王朝阳；齐义军；黄红莹；姬新颖 刊期： 2013年第10期
目的 在大肠埃希菌中融合表达绿脓杆菌外毒素A(pseudomonas exotoxin A,PEA)受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65),并进行纯化.方法 从含PEA的质粒中扩增PEA受体结合区亚基PEA Ⅰ,克隆至pET-28a-HSP65质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-HSP65-PEA Ⅰ,转化大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE分析;利用抗PEA受体结合区单抗杂交瘤细胞制备抗PEA受体结合亚基单抗,偶联免疫亲和层析介质,将表达的重组蛋白经DEAE Sepharose 4FF阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析和免疫亲和层析进行纯化.结果 重组质粒经PCR鉴定及测序,证明构建正确;表达的重组HSP65-PEA Ⅰ蛋白相对分子质量约93 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的30％以上;抗PEA受体结合亚基单抗效价可达1∶10000.纯化的重组HSP65-PEA Ⅰ蛋白纯度达90％以上.结论 已成功在大肠埃希菌中表达并纯化了重组融合蛋白HSP65-PEA Ⅰ,为防止PA感染后多器官衰竭综合征的免疫制剂的研究奠定了基础.
作者：冯越；张国利；赵福广；万忠海；岳玉环；吴广谋；田园；刘雪；张亮 刊期： 2013年第10期
目的 探讨钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)对金黄色葡萄球菌肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)发挥超抗原活性的作用.方法 以终浓度为0.5、1、2、3和4μg/ml的重组野生型rSEC2及其增强型突变体蛋白mSEC2(T20L/G22E/H118A/H122A)刺激SD大鼠脾淋巴细胞,MTT法检测大鼠脾淋巴细胞增殖水平;检测终浓度为1 μg/ml的rSEC2和mSEC2在诱导大鼠脾淋巴细胞增殖过程中CaN活性的变化、终浓度为0.1、0.5、1、2和3μg/ml的CaN特异性抑制剂环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)对该过程的影响,以及CaN3个亚基CaN Aα、CaN Aβ、CaN B在mRNA水平上的变化.结果 在低浓度rSEC2和mSEC2刺激下,大鼠脾淋巴细胞增殖指数(proliferation index,PI)与给药浓度成正比,高浓度刺激下,可明显抑制大鼠脾淋巴细胞的增殖,1μg/ml浓度增殖效果好;CsA对大鼠脾淋巴细胞增殖具有较强的抑制作用,呈明显的剂量依赖性,当CsA浓度为0.5～1 μg/ml时,rSEC2和mSEC2的刺激作用即被完全抑制;CaN的活性及其相关亚基(CaN Aβ和CaN B)mRNA水平与其超抗原的刺激增殖活性具有明显相关性.结论 CaN对SEC2发挥超抗原活性具有重要作用,为提高SEC2的临床应用价值及规避毒副作用奠定了理论基础.
作者：刘彦礼；张惠文；徐明恺；孙健；张成刚 刊期： 2013年第10期
目的 构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶调节亚基C2(ATP-dependent Clp regulatory subunit C2,ClpC2)基因的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白.方法 以MTBH37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增ClpC2基因,插入表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-ClpC2,经双酶切及测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约46 000,可与鼠抗组氨酸单克隆抗体特异性结合.结论 已成功构建了重组表达质粒pET32a(+)-ClpC2,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpC2蛋白的生物学功能奠定了基础.
作者：穆柳青；李岱容；张春燕；杨静；冯鑫；杨春 刊期： 2013年第10期
目的 探讨丹皮酚对人卵巢癌SKOV3细胞的促凋亡作用及其可能的机制.方法 用25、50、100、200、400 μg/ml丹皮酚处理SKOV3细胞,设未经丹皮酚处理的细胞为对照组,24 h后,采用MTF法检测细胞增殖情况;用50、100、200μg/ml丹皮酚处理SKOV3细胞,设未经丹皮酚处理的细胞为对照组,24 h后,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)、Hoechst染色法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测caspase3及survivin蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,各浓度丹皮酚对SKOV3细胞的增殖均有明显的抑制作用,呈浓度依赖性(P＜0.05),IC50值为200.06 μg/ml; 100、200 μg/ml浓度组中SKOV3细胞凋亡率分别为(35.33±1.32)％、(39.56±1.27)％,与对照组[(9.01±1.21)％]相比明显增加(P＜0.05);丹皮酚100、200 μg/ml浓度组中发生凋亡的细胞数量较对照组多;丹皮酚处理后细胞凋亡相关蛋白survivin表达降低,而caspase3表达增加,高浓度组与低浓度组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 丹皮酚能显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与其调控凋亡相关蛋白survivin、caspase3表达变化有关.
作者：曾凡清；张蕾；马明艾；康楷；吴南顺 刊期： 2013年第10期
目的 观察肝X受体(liver X receptor,LXR)激动剂GW3965预处理对大鼠肝移植缺血再灌注损伤(ischemiareperfution injury,IRI)的影响及其对肝功能的保护作用.方法 将雄性SD大鼠随机分为2组,GW3965预处理组于供体大鼠尾静脉注射LXR激动剂GW3965,0.3 mg/kg;对照组于相同部位注射相同剂量的生理盐水.参照改进的Kamada两袖套法建立大鼠原位肝移植模型,分别于肝移植术后3、6、24 h,采用全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,Western blot法测定移植肝脏组织中白细胞介素-1受体相关激酶-4(interleukin-1 receptor-associated kinase-4,IRAK-4)、干扰素调节因子3(interferon-regulator 3,IRF3)蛋白的表达,凝胶迁移试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)测定核因子-kappa B(nuclear factor-κB,NF-κB)的相对活性度,并观察肝脏组织的病理学变化.结果 与对照组比较,GW3965预处理组血清中ALT、TNF-α含量在各时间点均明显降低(P＜0.05),肝脏组织中IRAK-4、IRF3蛋白的表达以及NF-κB相对活性度也明显降低(P＜0.05);GW3965预处理组各时间点肝组织的损伤均较对照组明显减轻.结论 LXR激动剂GW3965可抑制TLR4信号通路中的IRAK-4、IRF3蛋白的表达水平和NF-κB的活化,从而减轻肝移植IRI,在肝脏移植IRI中起到保护作用.
作者：夏丰；成名翔；涂兵；龚建平；薛强 刊期： 2013年第10期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
