杨会强;倪谦枝;刘杰;汪伟;孙艳;李玉华
目的 探讨不同种类与剂量乙型肝炎疫苗在青年中的免疫效果及安全性.方法 在江西省上饶市卫生学校抽取乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阴性、健康状况良好的15~20岁学生910名,随机分为A、B、C3组,按照0、1、6月免疫程序,分别经上臂外侧三角肌全程接种3针10 μg/ml重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)、20 μg/ml重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)和10 μg/ml重组乙型肝炎疫苗(酵母),全程免疫后1个月采集接种者静脉血,分离血清,采用放射免疫法检测抗-HBs水平,并进行安全性观察.结果 全程免疫后1个月,A组与C组抗体阳转率、抗-HBs GMC水平和分布相近,差异均无统计学意义(P>0.05);B组的抗体阳转率、抗-HBs GMC水平和≥500 mIU/ml的分布均明显高于A组和C组(P均<0.01),抗-HBs GMC< 10和10~ 499 mlU/ml的分布显著低于A组和C组(P<0.01或<0.001).有1名接种者在接种后0.5h有局部疼痛症状,第2天疼痛消失,未见其他局部及全身不良反应.结论 接种高剂量乙肝疫苗的抗-HBs阳转率和抗-HBs GMC水平均高于低剂量乙肝疫苗,提示青年应接种高剂量乙肝疫苗,以建立有效的防御乙肝的免疫屏障.
作者:郑俐敏;黄素玲;孙志坚 刊期: 2013年第12期
目的 比较儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)CD34+CD38-细胞群在非肥胖糖尿病(non obese diabetic,NOD)/重症联合免疫缺陷(severe combined immunodeficient,SCID)小鼠与在NOD/SCID基础上敲除IL-2Rγ链的小鼠(NOD scid gamma,NSG)体内的复制能力.方法 采用免疫磁珠法分选ALL患儿骨髓CD34+CD38-细胞(作为阳性细胞)及其他各群细胞(CD34+CD38+、CD34-CD38-、CD34-CD38+,作为阴性对照细胞),经尾静脉分别注射于NOD/SCID或NSG小鼠体内,104个/只,连续监测小鼠的发病情况并记录小鼠生存时间;进行小鼠外周血白血病细胞计数及外周血、骨髓血涂片检查;将濒死小鼠处死后,取肝、脾组织,进行病理学检查.结果 CD34+CD38-细胞注射入小鼠体内后,NOD/SCID小鼠的存活期为56 ~ 150 d,NSG小鼠的存活期为13 ~ 120 d;NOD/SCID小鼠外周血白细胞数量缓慢升高直至死亡或处死,NSG小鼠外周血白细胞数量从第7天开始升高,至75 d左右达高峰;NOD/SCID小鼠和NSG小鼠分别于注射CD34+CD38-细胞3周和2周后外周血涂片可见白血病细胞,NSG小鼠外周血涂片发现更多的蓝染幼稚细胞;NSG小鼠骨髓涂片中发现更多的圆形、外源整齐、蓝色深染的幼稚细胞;NSG小鼠脾脏组织中有明显的炎细胞团块,且组织疏松,NOD/SCID小鼠脾脏组织中未发现明显的炎细胞团块,且组织相对致密,两种小鼠的肝脏组织中均未发现明显的炎细胞团块和组织结构改变.结论 ALL CD34+C38-细胞在NOD/SCID小鼠及NSG小鼠体内均能增殖复制出白血病,NSG小鼠复制白血病的时间更短,恶性程度更高,且白血病的复制过程更接近人类白血病的病理过程.本实验为白血病发病机理的研究和临床用药的评价提供了更好的载体.
作者:刘姗;周晓燕;秦茹;舒逸;邹琳 刊期: 2013年第12期
目的 采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定钩端螺旋体疫苗中的苯酚含量.方法 色谱条件:色谱柱:Novo-Pak C-18层析柱(3.9mm× 150mm,4μm),流动相:甲醇-超纯水(40∶60,v∶v),流速:1.0 ml/min,检测波长:270 nm,柱温:30℃,进样量:10μl.对建立的方法进行线性范围、精密性、重现性、准确性验证及初步应用.结果 苯酚浓度在18.552 ~ 129.864 μg/ml范围内,色谱峰面积与苯酚浓度呈良好的线性关系(r=0.999 7);苯酚对照品溶液连续进样6次,主峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.25%,保留时间的RSD为0.10%;用建立的方法检测6份钩端螺旋体疫苗样品中苯酚含量的RSD为0.5%;准确性试验的总平均回收率为100.6%,RSD为1.0%; HPLC法和溴量滴定法测定4批钩端螺旋体疫苗样品中苯酚含量的结果基本一致.结论 HPLC法可以更准确地测定苯酚含量,且该方法操作简便、快速,精密性高,重现性好,无干扰,适用于钩端螺旋体疫苗成品中苯酚含量的检测.
作者:张瑾;王瑾;杨英超;张影;薄淑英;王国柱;辛晓芳 刊期: 2013年第12期
目的 构建信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)β基因重组腺病毒质粒,并在小鼠乳腺癌4T1细胞中进行表达.方法 用HindⅢ和Xba Ⅰ双酶切质粒pcDNA-Zeo-STAT3β-C4 flag,获得目的基因STAT3β,克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV中,将构建正确的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-STAT3β经Pme Ⅰ酶切线性化,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌(E.coli)BJ5183中,获得重组腺病毒质粒pAd-STAT3β,转染HEK293A细胞,包装出重组腺病毒,经扩增、CsCl梯度离心纯化后,检测病毒滴度.收集病毒,以50 MOI感染小鼠乳腺癌4T1细胞,RT-PCR及Western blot法检测STAT3β水平.结果 重组穿梭质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;重组腺病毒质粒经单酶切鉴定,证明构建正确;扩增、纯化后重组腺病毒滴度可达1.1×1013 pfu/ml.重组腺病毒Ad-STAT3β感染的小鼠乳腺癌4T1细胞,在转录和蛋白水平上均有STAT3β基因的表达.结论 成功构建了重组腺病毒质粒pAd-STAT3β,并在小鼠乳腺癌4T1细胞中表达目的基因STAT3β,为进一步研究乳腺癌的治疗奠定了基础.
作者:唐浩;党微旗;曹红;王林;陈婷梅 刊期: 2013年第12期
哮喘是仅次于癌症的世界第二大致死、致残疾病,造成的经济负担超过结核病和艾滋病的总和.严重的哮喘目前尚不能治愈,迫切需要新的有效的疾病干预手段.临床研究显示,白细胞介素-13 (inteffeukin-13,IL-13)与哮喘密切相关,动物模型研究也表明,IL-13在哮喘病理机制中处于核心位置.目前,IL-13单克隆抗体治疗哮喘在国外已处于Ⅱ期临床试验,以疫苗形式诱导持续的IL-13中和抗体,对哮喘这样的慢性疾病而言较之单抗更具应用潜能.本文对抗IL-13疫苗治疗哮喘的研究进展作一综述.
作者:唐增华 刊期: 2013年第12期
目的 建立检测白喉毒素突变体CRM197细菌内毒素(bacterial endotoxin)含量的动态显色法(kinetic chromogenic assay,KCA).方法 按照《中国药典》三部(2010版)要求,用细菌内毒素检查用水(bacterial endotoxin,BET)稀释细菌内毒素工作标准品制备细菌内毒素标准曲线系列溶液,各浓度均设3个平行孔,分别与动态显色鲎试剂(kinetic chromogenic analysis tachypleus amebocyte lysate,KCA TAL)反应,绘制标准曲线,验证标准曲线的可靠性,确定佳线性范围、测定范围及低检测限(limit of quantitation,LOQ),验证方法的精密性和准确性,并进行初步应用.结果 标准曲线的回归方程为:y=-0.263x+2.741,R2=0.997,相关系数的绝对值|r|≥0.980,阴性对照的反应时间大于标准曲线低点的反应时间,各复孔的变异系数(CV)<10%;内毒素浓度在0.02~2.50EU/ml时,线性关系良好,LOQ为0.02 EU/ml;3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素检测结果的CV均<5%,加入高、中、低3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素的3批供试品检测结果的CV均<10%,回收率在95% ~ 143%之间;采用建立的方法检测10批次CRM197样品的细菌内毒素含量,回收率在77%~118%之间,其中8批样品的内毒素含量合格.结论 动态显色法检测CRM197中内毒素的含量精密性和准确性良好,能快速、定量检测样品中的内毒素含量,抗干扰能力强,可用于CRM197研制过程中的质量控制.
作者:邓杰;张珂;袁涛;李春阳 刊期: 2013年第12期
目的 构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响.方法 以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-c-ski,经Pme Ⅰ线性化后,转化感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒,经Pac Ⅰ线性化后,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒,经扩增及纯化后测定病毒滴度.将纯化的重组腺病毒感染乳腺癌CAFs,采用Western blot法检测感染细胞中c-Ski蛋白的表达水平;MTT法和细胞计数法检测重组腺病毒对CAFs细胞增殖活力的影响.结果 重组腺病毒质粒经Pac Ⅰ酶切鉴定证明构建正确;转染HEK-293细胞48 h后可见大量绿色荧光蛋白的表达,纯化的重组腺病毒的滴度为3.11×1010IFU/ml;感染重组腺病毒的乳腺癌CAFs中c-Ski蛋白的表达水平明显高于空病毒组和空白对照组(P<0.001),且增殖活力明显高于空白对照组(P<0.05).结论 成功构建了表达c-ski基因的重组腺病毒质粒,其可明显促进CAFs的增殖,为进一步研究c-Ski对CAFs增殖分化等生物学功能的影响及作用机制提供了实验依据.
作者:王黎阳;赵浏阳;彭琼乐;孙艳;柳满然 刊期: 2013年第12期
目的 采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析重组酿酒酵母表达的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构性状.方法 采用HPLC法,分别以磷酸盐缓冲液和含去垢剂SDS的磷酸盐缓冲液为流动相,分析3批重组酿酒酵母表达的纯化HBsAg VLP的出峰规律.结果 3批纯化的HBsAg样品在不含SDS的流动相条件下,均只在(15.39±0.01) min处出现单一的相对分子质量2 000 000的HBsAg VLP峰,峰面积积分百分含量为(100.00±0.0)%.3批纯化的HBsAg样品在含SDS的流动相条件下,在(15.07±0.02) min处出现相对分子质量2 000 000的HBsAg VLP峰,峰面积积分百分含量为(55.07±0.05)%;在(28.62±0.04) min处出现1个相对分子质量24 000的P24亚基多肽峰,峰面积积分百分含量为(44.93±0.04)%.结论 HBsAg在常规保存条件下为P24亚基通过非共价键或(和)共价键聚合形成的相对分子质量为2 000 000的大分子蛋白颗粒,在含SDS的条件下,HBsAg颗粒可部分解聚为P24亚基.
作者:孙玉杰;马锐;马晓宇;刘旭;王瑜;盛玉博;王辉;黄浩;陈兴 刊期: 2013年第12期
目的 监测2012年吉林省蛟河市14周岁以下儿童麻疹和脊髓灰质炎抗体水平,评估适龄儿童免疫水平.方法 随机调查了蛟河市9个乡镇的14周岁以下儿童3 157名,采用ELISA法检测麻疹和脊髓灰质炎IgG抗体水平,并采用Excel 2003软件及卡方检验计算器V1.61统计软件进行统计学分析.结果 不同乡镇儿童脊髓灰质炎IgG抗体阳性率在93.29%~ 98.70%之间,样本总体阳性率为97.02%;麻疹IgG抗体阳性率在94.59%~ 98.55%之间,样本总体阳性率为96.0%;各乡镇间儿童脊髓灰质炎IgG抗体阳性率差异有统计学意义(P<0.05),各乡镇间儿童麻疹IgG抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.10).不同年龄组儿童脊髓灰质炎IgG抗体阳性率在96.30% ~97.74%之间,麻疹IgG抗体阳性率在95.17%~ 97.74%之间;各年龄组间儿童脊髓灰质炎IgG抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05),各年龄组间麻疹IgG抗体阳性率差异有统计学意义(P<0.05).结论 蛟河市14岁以下儿童人群具有较高的脊髓灰质炎和麻疹免疫抗体水平,已形成了有效的针对麻疹和脊髓灰质炎的免疫屏障.
作者:祁庆贺;哈杰;范学彬 刊期: 2013年第12期
目的 建立猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)荧光定量PCR检测方法,并进行验证及初步应用.方法 根据GenBank中登录的PPV NADL-2株序列,针对VP2区设计引物,以提取的PPV核酸为模板,进行荧光定量PCR扩增;优化反应体系及反应条件,并进行专属性、重复性和敏感性验证.用建立的荧光定量PCR法检测辛酸沉淀及L、P、S公司生产的纳米膜过滤器去除制品中PPV的效果.结果 优化后的荧光定量PCR反应体系:Eva Green预混液7.5μl,上下游引物各0.5μl,模板DNA 1μl,补加dH2O至15 μl;反应条件:95 ℃ 3 min,95℃10s和60℃10s,共40个循环;模板浓度的对数值与循环数的相关性较好(R2=0.999),扩增效率为102.5%.该方法可特异性扩增PPV,而对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、牛细小病毒(bovine parvovirus,BPV)、鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)及猪肾细胞PK-15无扩增反应;试验内CV为0.79%~2.81%,试验间CV为1.23% ~2.21%,均<5%,低检测限为102 copies/μl.辛酸沉淀可使样品中PPV浓度下降5 Logs;不同公司生产的20 nm膜滤器过滤量及过滤效果均有明显差异,其中S公司生产的滤器效果好,可使样品中的PPV滴度下降4Logs.结论 已成功建立了PPV荧光定量PCR检测方法,为快速、准确的检测病毒去除工艺对PPV的去除效果奠定了基础.
作者:郑朝共;许锬;容新宗;黄琰 刊期: 2013年第12期
目的 原核表达、纯化猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2),并检测其生物学活性.方法 以提取的猪外周血淋巴细胞基因组RNA为模板,PCR扩增猪IL-2基因,插入原核表达载体pBV220,构建重组表达质粒pBV220/IL-2.将重组表达质粒转化感受态大肠埃希菌DH5α,经含Amp的LB平板筛选后,将重组菌于LB培养液中培养,分别于不同培养时间进行活菌计数,绘制重组菌的生长曲线;42℃诱导表达重组蛋白,经尿素纯化后,采用CTLL细胞/MTT比色法检测其生物学活性.结果 重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;重组菌的佳开始诱导时间为重组菌发酵培养10 h;重组蛋白相对分子质量约17 400,表达量占菌体总蛋白的19%,纯化后纯度达95%;重组蛋白的生物学活性可达3×105 IU/ml.结论 原核表达并纯化了具有生物学活性的重组猪IL-2蛋白,为其进一步研究和产业化生产奠定了基础.
作者:李凤华;朱战波;江国托 刊期: 2013年第12期
目的 观察武汉生物制品研究所有限责任公司(以下简称武汉公司)吸附无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,DTaP)的免疫原性和免疫持久性.方法 于2007年9月在成都地区选择670名未接种过百白破联合疫苗,无百日咳、白喉、破伤风疾病史的足月出生的健康婴儿,按2∶1比例随机接种3剂观察疫苗(武汉公司生产的DTaP)和对照疫苗(某厂家生产的DTaP),进行基础免疫,每剂间隔1个月,2009年3月进行加强免疫,接种剂量均为0.5ml/(剂·人).基础免疫接种前和全程接种后30~ 50 d、加强免疫前和加强免疫后1个月、1、2、3年分别采集静脉血,分离血清,经ELISA法测定百日咳毒素抗体(pertussis toxin antibody,PT-Ab)、丝状凝集素抗体(filamentous hemagglutinin antibody,FHA-Ab)、白喉抗体(diphtheria antibody,D-Ab)、破伤风抗体(tetanus antibody,T-Ab)GMT,若免疫前抗体为阳性,则计算4倍增长率.结果 基础免疫试验组351例、对照组193例完成了全程接种,即544例受种者符合方案要求.DTaP基础免疫后,试验组与对照组的4种抗体阳转率及抗体4倍增长率差异均无统计学意义(P>0.05);试验组FHA-Ab GMT明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).加强免疫前,试验组与对照组4种抗体阳转率差异无统计学意义(P>0.05);加强免疫后1个月,试验组FHA-Ab阳转率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);加强免疫后1、2、3年,试验组与对照组4种抗体阳转率和抗体GMT差异均无统计学意义(P>0.05);加强免疫后1年,4种抗体GMT均高于有效保护水平,加强免疫后2年,PT-Ab和FHA-Ab GMT已降至保护水平以下,加强免疫后3年,D-Ab、T-Ab GMT仍高于保护水平.结论 武汉公司生产的DTaP具有较好的免疫原性和免疫持久性.
作者:邹光荣;兰红;项美娟;杨汝沛;杨晓明;侯启明;张量智;王丽蝉;李军 刊期: 2013年第12期
目的 比较不同截留分子量超滤膜包浓缩狂犬病病毒(rabies virus,RV)的效果.方法 将RV固定毒3aG-V株按0.01 MOI比例接种至Vero细胞中,制备RV原液,分别用截留分子量100 KD和300 KD的膜包超滤浓缩60倍,B-丙内酯灭活后,验证病毒液浓缩过程膜下液的病毒灭活效果;采用Sepharose 4FF凝胶层析纯化灭活的病毒浓缩液,Lowry法测定病毒浓缩液和纯化液中的蛋白质含量;酶联免疫法测定病毒浓缩过程膜下液、浓缩液和纯化液中的RV抗原含量.结果 100 KD和300 KD的超滤膜包均能有效截流RV,3次试验膜下液RV抗原含量均为0 IU/ml,观察期内小鼠均健存.300 KD膜包超滤的浓缩液和纯化液比100 KD超滤膜包超滤的浓缩液和纯化液中杂蛋白含量低,抗原含量高.结论 截留分子量300 KD的膜包比100 KD的膜包更适用于RV的浓缩.
作者:赵永强;杨丽;白春杰;刘瑞 刊期: 2013年第12期
目的 检测牦牛肝蛋白BGP对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其体外抗癌活性.方法 用不同浓度的BGP分别作用于人肝癌HepG2细胞,作为实验组,同时设未处理细胞对照组和空白对照组,采用MTT法检测BGP(25、50和100 mg/L)作用HepG2细胞12、24、36和48 h对细胞增殖活性的影响,并于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测BGP(25、50、75、100mg/L)作用HepG2细胞24 h,对细胞周期及凋亡的影响.结果 不同浓度的BGP均可抑制HepG2细胞增殖,与未处理细胞对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),其中100mg/L BGP作用48 h,对HepG2细胞抑制率高(94.99%).各浓度BGP实验组HepG2细胞形态发生明显改变,细胞间隙加大,细胞间连接不牢固,胞内颗粒增多,呈现生长受阻状态,甚至有细胞脱落,细胞数目减少,其中100 mg/L BGP作用48 h,凋亡细胞明显增多.不同浓度BGP作用HepG2细胞24 h后,均可不同程度抑制HepG2细胞生长并诱导细胞凋亡;与未处理细胞对照组相比,S期细胞比例明显升高(除25 mg/L BGP实验组),G0/G1期和G2/M期细胞比例明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 牦牛肝蛋白BGP可抑制HepG2细胞增殖,并促进凋亡,具有明显的体外抗肝癌活性.
作者:郭洁;柳青海;李天才 刊期: 2013年第12期
目的 利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子-1(human insulin-like growth factor-1,hIGF-1),并进行纯化及鉴定.方法 根据大肠埃希菌密码子偏好性对hIGF-1天然基因序列进行同义突变,并人工合成,PCR扩增后,克隆至pET48b(+)载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的融合蛋白Trx A-hIGF-1经Ni2+亲和层析进行纯化,纯化产物经肠激酶酶切后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET48b-Trx A-hIGF-1经菌落PCR及测序证实构建正确;表达融合蛋白相对分子质量约为26 000,表达量约为菌体总蛋白的40%,主要以可溶形式存在于菌体裂解上清中,可溶性蛋白占总目的蛋白的比例不低于90%,纯化后纯度不低于90%,蛋白浓度为0.5 mg/ml;纯化的Trx A-hIGF-1融合蛋白可被肠激酶切割为相对分子质量约为8 000的hIGF-1蛋白和18 000的Trx A蛋白,hIGF-1蛋白可与兔抗hIGF-1多克隆抗体特异性结合.结论 成功表达了hIGF-1融合蛋白,为其生物学活性的研究及规模化生产奠定了基础.
作者:曹玉锋;李霄培;陈子杨;王健;常东英;贾媛;张健锋;吴菲;王伟善 刊期: 2013年第12期
目的 评价国产第四代HIV血液筛查试剂的质量.方法 利用HIV-1 p24抗原国家参考品和HIV抗体国家参考品,对2012年3月~2013年3月间7个厂家(A~G)生产的33批第四代HIV血液筛查试剂进行评价.分析A(进口)、B、C试剂对HIV-1 p24抗原弱阳性国家参考品P5检测的S/CO值的变化趋势,及其对HIV-1 p24抗原弱阳性国家参考品P5、强阳性HIV-2型抗体国家参考品18号和中等强度阳性HIV-2型抗体国家参考品19号检测的批间变异系数,计算不同试剂的低检出量理论值.结果 各试剂均符合国家参考品的要求,除A(进口)和C试剂外均有非特异阳性出现.国内、外试剂检测结果均较稳定,未见超过±3 SD的异常结果.P5、18号、19号参考品的批间变异系数均不高于25%,A(进口)试剂的批间精密性优于国产同类试剂.p24抗原参考品低检出量均值为3.2 IU/ml.82%(27/33)试剂优于HIV-1 p24抗原低检出量国家标准要求,70%(23/33)的试剂优于HIV抗体低检出量国家标准要求.结论 2012年3月~ 2013年3月期间国产第四代HIV血液筛查试剂均符合国家现行标准,但与进口试剂相比,国产第四代HIV血液筛查试剂在低检出量和批间精密性上尚有提高的空间.
作者:宋爱京;许四宏;李秀华;聂建辉;赵晨燕;刘强;黄维金;王佑春 刊期: 2013年第12期
目的 研制鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,并进行验证.方法 用纯化的鼠疫菌F1抗原作为包被抗原,HRP标记的F1抗原作为酶标抗原,建立鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA检测方法,连续制备3批诊断试剂盒,并建立内部质控品.对试剂盒进行板内板间精密性、敏感性、特异性、准确性和稳定性验证.结果 鼠疫菌F1抗原的佳包被浓度为0.6 μg/ml,HRP标记的F1抗原的佳工作浓度为1∶7000.制备的试剂盒检测精密性质控品的板内变异系数为6.5%,板间变异系数为7.1%;检测高、中、低浓度内部质控品和精密性质控品的回收率在95% ~ 112%之间;检测阳性血清和阴性血清的敏感性为100%;与正常人血清、正常兔血清、正常小鼠血清、兔抗假结核耶尔森菌血清、小鼠抗假结核耶尔森菌血清均无交叉反应;试剂盒稳定性良好,有效期至少为1年.结论 成功制备了鼠疫菌F1抗体双抗原夹心ELISA诊断试剂盒,达到了体外诊断试剂的注册要求,可用于鼠疫的临床监测、诊断及预后判断.
作者:常娅莉;席仲兴;吴智远;徐秉臣;张正雷;韩少波;热娜;雷刚;彭林锋 刊期: 2013年第12期
目的 探讨肿瘤抗原MUC1抑制骨髓来源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)产生的机制.方法 分离C57BL/6小鼠股骨骨髓细胞,分别与稳定表达含22个串联重复序列的全长人MUC1 cDNA片段的B16细胞(B16-MUC1)和空质粒对照B16细胞(B16-neo)培养上清共培养,流式细胞术分析MUC1对MDSC产生及MDSC表达MUC1蛋白的影响;瑞氏姬姆萨染色观察MUC1对骨髓细胞生长形态的影响;流式细胞术检测共培养的骨髓细胞中单核细胞和巨噬细胞标志物CD14和F4/80的表达及成熟单核-巨噬细胞标志物CD11b和CD68的表达.结果 正常C57BL/6小鼠骨髓细胞分别与B16-neo和B16-MUC1细胞培养上清共培养24和48 h后,BM+ B16-MUC1组骨髓细胞中CD11b+Gr-1+ MDSC数量较BM+ B16-neo组均明显减少(P<0.05),共培养48 h后,BM+ B16-MUC1组的CD1 1b+Gr-1+ MDSC中MUC1蛋白的表达较BM+ B16-neo组明显增多(P<0.01);BM+ B16-MUC1组骨髓细胞中单核-巨噬细胞数量增多;与BM+ B16-neo组相比,BM+ B16-MUC1组CD14+、F4/80+和CD68+细胞表达数量明显增高(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),CD1 1b+平均荧光强度明显增高(P<0.01).结论 MUC1通过诱导骨髓细胞向单核-巨噬细胞分化,从而抑制MDSC的产生.
作者:马吉春;姚冬明;杨静;陈芹;邓兆群;钱炜;钱军;陈星星;安翠 刊期: 2013年第12期
目的 探讨肺炎链球菌减毒活菌疫苗候选菌株R6的安全性及保护效果.方法 将不同剂量的R6和强毒力菌株D39分别经鼻腔感染BALB/c小鼠,通过小鼠毒力试验、定植试验和肺部组织形态观察,评价R6的安全性.将1.0×108 cfu的R6菌株与CT佐剂混合后,经黏膜免疫BALB/c小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中IgG亚型及细胞因子,通过主动、被动保护试验及免疫小鼠体内定植试验,观察R6对免疫小鼠的保护效果.结果 不同剂量的R6鼻腔攻毒后,小鼠存活率为100%,显著高于D39阳性对照组(P<0.001),心脏血和脑匀浆标本未见细菌生长,鼻腔灌洗液和肺匀浆中的菌量均显著低于D39阳性对照组(P<0.01),肺部炎症反应较轻,且较快恢复正常.R6菌株与CT佐剂混合后经黏膜免疫的小鼠可产生以IgG1和IgG2b亚型为主的高效价血清IgG,且特异性的细胞因子IL-4、IL-10和IL-17A水平明显升高;可主动保护60%的小鼠抵抗D39的感染,明显高于市售23价肺炎链球菌疫苗(44%),但免疫血清不具有被动保护作用;免疫R6的小鼠可明显减少19F菌株在其呼吸系统的定植.结论 肺炎链球菌减毒活疫苗候选菌株R6具有良好的安全性和保护效果,为该疫苗的研发提供了实验依据.
作者:王一平;徐绣宇;王虹;尹一兵;孟江萍 刊期: 2013年第12期
目的 研究不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活非脂包膜指示病毒猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)效果的影响.方法 取人凝血因子Ⅷ原液,分别加入A、B、C3种配方(氯化钠浓度为C<A<B)缓冲液,经超滤透析制备人凝血因子Ⅷ半成品后,加入>6 LgTCID50/ml的指示病毒PPV,进行冻干、干热法灭活(100℃30 min),检测残余PPV滴度;用筛选出的佳配方制备3批人凝血因子Ⅷ半成品,进行冻干和干热法灭活,检测残余PPV滴度,验证PPV灭活效果;按照《中国药典》三部(2010版)人凝血因子Ⅷ的成品检测要求对人凝血因子Ⅷ效价、外观、水分、复溶时间和复溶后外观进行检测.结果 在100℃30 min条件下,可有效灭活配方A制备的人凝血因子Ⅷ半成品中的指示病毒PPV,确定配方A为佳冻干保护剂配方;3批凝血因子Ⅷ经干热灭活后,可使残余PPV滴度下降(4.08±0.02) LgTCID50/0.1 ml,且灭活过程对人凝血因子Ⅷ的生物学活性无明显影响,步骤活性回收率为(91.1±2)%.结论 已成功研制出1种冻干保护剂配方,应用干热灭活法对人凝血因子Ⅷ制品中非脂包膜病毒PPV具有较好的灭活效果,该方法与有机溶剂/表面活性剂(solvent/detergent,S/D)法联合去除/灭活病毒,可有效提高人凝血因子Ⅷ产品的安全性.
作者:李策生;邹莉;李陶敬;胡勇;邢延涛;彭焱;周雁翔;李娟 刊期: 2013年第12期