龙方懿；杨俊艳；刘智敏；贾朝莉；刘小花；董超然；王旎
目的 筛选能增强特异性抗原早期分泌抗原靶6蛋白(Early secretory antigenic target 6,ESAT6)-培养滤出液蛋白-10(Culture filtrate protein 10,CFP-10)融合蛋白(E1C0)诱导小鼠细胞免疫应答的佐剂,建立基于细胞免疫应答的小鼠模型,以评价基于体外干扰素γ释放分析(IFNγ release assay,IGRA)结核诊断方法中特异性刺激抗原E1C0的活性.方法 建立小鼠IFNγ双抗体夹心SABC-ELISA检测系统,并验证系统的线性、灵敏度、重复性和特异性.将BALB/c小鼠随机分为7组:E1C0+单磷酸类脂A(Monophosphoryl lipid A,MPL)+双十八烷基二甲基溴化铵(Dimethyl dioctadecylammonium bromide,DDA)组、E1C0+DDA组、E1C0+MPL组、E1C0+弗氏不完全佐剂(IFA)组、E1C0组、生理盐水组和MPL+DDA联合组,每组6只,经小鼠后肢内侧皮下免疫3次,间隔2周,免疫剂量为:E1C0 100 μg/只,MPL 25 μg/只,DDA 250 μg/只,IFA 100μl/只.末次免疫4周后处死小鼠,无菌取脾,分离脾淋巴细胞,加入E1C0进行培养,MTT法检测特异性淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测培养上清中IFNγ水平.采用筛选出的佳佐剂与抗原组合免疫3批BALB/c小鼠,进行IFNγ诱生测定.结果 检测系统的线性范围为:40 ～2560 pg/ml(R＞0.98)；灵敏度为40 pg/ml;变异系数(CV)＜15％,检测大鼠、豚鼠和兔血清IFNγ均为阴性；E1C0+MPL+DDA组、E1C0+IFA组和E1C0+DDA组小鼠特异性淋巴细胞增殖刺激指数均明显高于生理盐水组(P＜0.01)；E1C0+MPL+DDA组小鼠的脾淋巴细胞经E1C0体外刺激后,产生的IFNγ水平明显高于其他组(P＜0.001)；重复试验结果显示,E1C0+MPL+DDA组3批小鼠免疫后,脾淋巴细胞诱生的IFNγ水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 E1C0与MPL和DDA联合免疫所诱导的小鼠Th1型细胞免疫应答强,成功建立了用于评价刺激抗原E1C0活性的小鼠模型.
作者：由鹏飞；叶祥忠；葛胜祥；李益民；张怡轩 刊期： 2012年第12期
目的 构建人端粒酶蛋白催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)逆转录病毒真核表达质粒,并检测其在人乳腺癌相关的成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)中的表达及其对CAF增殖的影响.方法 扩增pIRES-EGFP-hTERT质粒,酶切回收hTERT片段,正向克隆至逆转录病毒载体pBABE-puro上,构建重组质粒pBABE-purohTERT,转染PT67细胞,进行逆转录病毒的包装.将PT67细胞上清感染原代培养的人乳腺癌CAF,荧光定量PCR和Western blot分别检测hTERT基因在人乳腺癌CAF中的转录和表达,流式细胞术检测细胞的增殖情况.结果 重组质粒pBABE-purohTERT经酶切和测序证实构建正确；与未处理的人乳腺癌CAF和感染pBABE-puro的细胞相比,感染重组质粒的人乳腺癌CAF 中hTERT基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显增强,其增殖指数也明显增加(P＜0.05).结论 成功构建了hTERT 基因逆转录病毒真核表达质粒,其能增强人乳腺癌CAF的增殖能力,为乳腺癌微环境CAF的研究提供了良好的细胞模型.
作者：彭琼乐；王黎阳；赵浏阳；孙艳；柳满然；彭惠民 刊期： 2012年第12期
目的 对2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B组1型病毒(Coxsackievirus B1,CVB1)分离株MSH-KM9-09进行鉴定,并分析其VP1基因的序列特征.方法 采用RD细胞和Hep-2细胞对22份疑似无菌性脑膜炎患者脑脊液标本进行病毒分离,采用微量中和试验,经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对分离株进行鉴定,RT-PCR法扩增病毒全长VP1基因,进行序列测定,并采用Mega 4.1等软件进行分析.结果 所分离的毒株经微量中和试验定型为CVB1亚型,编号为MSH-KM9-09.经RT-PCR扩增获得834 bp的VP1基因,与国内CVB1分离株核苷酸和氨基酸序列的同源性分别在86.1％和97.8％以上,与国外CVB1分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为80.2％ ～ 83.2％和94.3％～96.0％；在系统进化树上,MSH-KM9-09株与国内分离株属于同一个分支,而国外分离株分属其他两个不同的分支.结论 MSH-KM9-09分离株为肠道病毒CVB1.
作者：刘建生；潘玥；吉玛；马忠飞；叶君；马绍辉 刊期： 2012年第12期
目的 分析平顶山市2010年麻疹疫苗强化免疫活动的有关数据及经验,为加速控制和消除麻疹提供依据.方法 对收集的平顶山市2010年麻疹疫苗强化免疫数据和现场评估资料进行流行病学分析.结果 2010年全市共摸底麻疹疫苗强化免疫1043294人,接种1016848人,接种率为97.47％;强化免疫期间,全市共报告麻疹疫苗相关疑似预防接种异常反应(Adverse effects following immunization,AEFI)20例,发生率1.97/10万,其中严重AEFI 2例,发生率为0.19/10万；共调查了747790名强化免疫目标儿童的免疫史,其中0剂次占1.01％,免疫史不详占3.81％；采取抽样调查方法对强化免疫活动进行了快速评估,全市共调查应种10455人,实种10146人,接种率为97.04％.结论 我市首次实施的麻疹疫苗强化免疫活动迅速降低了目标人群的麻疹发病率,形成了有效的免疫屏障,为全市消除麻疹奠定了基础,同时也促进了全市免疫规划工作的规范开展.
作者：张俊杰；杨恒丹；崔振铎；王晓明；魏海涛；杨秋锋；赵克娜 刊期： 2012年第12期
目的 建立儿童呼吸道5种易感病原菌多重PCR(Multiplex PCR,mPCR)检测方法,并应用该方法分析北京地区儿童呼吸道易感病原菌菌群分布情况.方法 分别设计针对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)自溶素基因(ply)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,KP)16S核糖体RNA基因(16S rRNA)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)热核酸酶基因(nuc)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)特异性保守基因(SeS)、流感嗜血杆菌(Hacmophilus influenzae,HI)16S rRNA基因的特异性引物,建立mPCR检测方法；验证该方法的特异性及敏感性；并采用该方法对北京地区128例呼吸道感染患儿和80名健康儿童咽拭子或痰标本进行检测,并与传统培养法检测结果进行比对.结果 mPCR法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板同时进行PCR扩增；该方法检测5种病原菌之间及与呼吸道其他易感病原之间无交叉反应,敏感性可达5×10-10 μg/μl;mPCR法检测128例呼吸道感染患儿的菌群分布情况为:HI 24.22％、SP 15.63％、KP 4.69％,SA 2.34％,未检出SE,与培养法相比,两种检测方法的总符合率为78.91％;感染患儿与健康儿童相比,HI和SP的感染率差异有统计学意义(P＜O.01).结论 建立了从呼吸道标本中直接检测多病原儿童易感病原菌的mPCR检测方法,该方法特异性强、敏感性高,为临床正确诊断和治疗细菌感染性疾病提供了参考.
作者：冯燕玲；薛冠华；徐文健；王晓燕；王洛平；金春华；孙红妹 刊期： 2012年第12期
目的 在杆状病毒系统中表达人源溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,为其临床应用和大规模生产奠定基础.方法 将人工合成的含信号肽和不含信号肽的溶菌酶基因克隆至重组杆状病毒表达系统的载体中,构建重组穿梭质粒,转染sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达,溶菌试验验证表达产物的溶菌酶活性.结果 重组克隆质粒PFastBac HTA-signal-lysozyme和PFastBac HTA-lysozyme的PCR产物分别可见444和393 bp的目的基因条带,测序结果证实重组克隆质粒构建正确.PCR结果显示Lysozyme-1、Lysozyme-2、slysozyme-1、slysozyme-2、slysozyme-3、slysozyme-4号重组穿梭质粒可扩增出目的条带.sf9-PHLY和sf9-PHSLY的表达产物经12％ SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约17500和19300的特异蛋白条带；表达的两种重组蛋白均可与鼠抗6×His单抗特异性结合；表达产物具有溶菌酶活性.结论 成功在杆状病毒表达系统中表达了hLY基因,为其临床应用和大规模生产奠定了基础.
作者：陈锐；孙晓宇；万一；门欣；路鹏鹏；李玥；沈卫荣 刊期： 2012年第12期
目的 比较3种细胞两种培养基制备的麻疹血凝素的效价.方法 分别采用含10％新生牛血清的MEM培养基和含0.2％水解乳蛋白的199培养基培养原代人羊膜细胞、传代人羊膜细胞(FL)和Vero细胞,以0.01 MOI麻疹病毒L4株感染细胞,收获原制血凝素,采用Tween-80/乙醚处理,经血凝试验监测血凝素佳收获时间,并测定原制血凝素和血凝素效价.结果 采用MEM培养基培养的FL和Vero细胞在感染麻疹病毒后10～11d,血凝素效价高,均可达1:16,原代人羊膜细胞在感染麻疹病毒后14 ～ 15 d,血凝素效价高,可达1:128;采用199培养基培养的FL和Vero细胞所制备的麻疹原制血凝素和血凝素效价均大于1:32,高于MEM培养基组(1:16),而原代人羊膜细胞所制备的麻疹原制血凝素和血凝素效价均为1:128.结论 3种细胞两种培养基均可用于制备麻疹血凝素.
作者：李海燕；闫磊；赫宝双；金向男；彭岩松；崔国庆；王玮 刊期： 2012年第12期
目的 分析DV50纳米过滤去除静注入免疫球蛋白(Human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)病毒时流速的影响因素.方法 分别采用浊度仪、密度仪检测IVIG原液的浊度及浓度,随机选取5批浓度相近、浊度不同的IVIG原液及5批浊度相近、浓度不同的IVIG原液,分别经同一批号纳米滤芯过滤,计算平均流速；随机选取5批浊度、浓度相近的IVIG 原液,经不同批号的纳米滤芯过滤,计算平均流速.结果 随着制品浊度的升高,平均流速逐渐降低；制品浓度与平均流速不呈线性对应关系；不同批号的纳米滤芯,纳米平均流速相差较大.结论 制品浊度对流速具有一定的影响,浓度对流速基本无影响,纳米滤芯对流速的影响大.本实验为实际生产中控制纳米过滤去除病毒时的流速及改进生产工艺提供了参考.
作者：郑丰平；王炳；郑琪；吕家成 刊期： 2012年第12期
目的 筛选Ⅰ型登革病毒(Dengue virus,DV)中国株D06063人胚肺二倍体细胞KMB17的适应株,经噬斑纯化后,分析其生物学特性.方法 将Ⅰ型DV中国株D06063在C6/36细胞上进行扩增,采用微量滴定法测定病毒的感染性滴度;RT-PCR法鉴定DV型别；病毒连续以4.0 MOI的量感染KMB17细胞,传代至病毒完全适应在细胞内扩增,再连续传10代,筛选出KMB17细胞适应株,并进行3轮噬斑纯化；免疫荧光法检测纯化病毒,电镜观察病毒颗粒的形态.结果 在C6/36细胞上扩增的Ⅰ型DV D06063株的滴度为6.0 lg CCID5o/ml,经RT-PCR可扩增出511 bp的DV特异基因和482 bp的Ⅰ型DV型特异性基因；病毒感染KMB17细胞后,可产生明显的细胞病变,至第10代,病毒的感染性滴度达峰值,为6.75 lg CCID50/ml;纯化的病毒经免疫荧光检测呈阳性,电镜观察显示病毒形态正常.结论 成功筛选出传代稳定性好、病毒扩增量高的Ⅰ型DVKMB17细胞适应株,纯化的病毒株保持了原始毒株的基本生物学特性.
作者：赵玉娇；潘玥；陈俊英；杨丽娟；岳耀斐；施海晶；马绍辉；孙强明 刊期： 2012年第12期
目的 利用人类真核翻译延伸因子1A1 (Human eukaryotic translation elongation factor 1A1,hEEF1A1)基因座完整的上下游调控序列和人凝血因子Ⅶ(Human coagulation factorⅦ,hFⅦ)基因组序列构建hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座.方法 首先构建连入6个同源臂的pBR322作为连续3次基因抓捕的载体；然后通过Red同源重组系统,在大肠杆菌内进行缺口修复.第一步将hEEF1A1基因3'端侧翼序列亚克隆至抓捕载体上,第二步将hFⅦ完整基因组序列亚克隆至抓捕载体上,第三步将hEEF1A1基因5'端完整侧翼序列亚克隆至抓捕载体上.结果 经3次基因抓捕,3个基因片段在抓捕载体上无痕连接,形成一条长约50000 bp的hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座.经PCR、酶切及测序验证,构建的hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座中,原hEEF1A1基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hFⅦ基因组序列精确置换.结论 成功构建了hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座,为哺乳动物细胞表达大载体的制备提供了实验依据.
作者：刘蓥灿；林艳丽；吴晓洁；熊福银；周艳荣；孙晓艳；李力；陈红星 刊期： 2012年第12期
目的 构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选.方法 以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,克隆入噬菌粒pS100,电转化E.coli TG1,建立scFv初级抗体库,并进行基因序列分析及鉴定.以灭活的狂犬病病毒为抗原,进行3轮scFv噬菌体抗体库的富集筛选,随机挑取单克隆,制备噬菌体抗体颗粒,并进行ELISA分析,阳性克隆进行序列分析,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent facus inhibition test,RFFIT)检测噬菌体抗体颗粒的中和活性.结果 获得了库容为1.7×108的人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,该抗体库具有较好的序列正确率和多样性,经3轮筛选后,ELISA分析显示,共获得24个序列各不相同的针对狂犬病病毒的阳性克隆,对其中7个克隆的噬菌体抗体颗粒进行RFFIT检测,均具有中和活性.结论 已成功构建了人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,并建立了筛选方法.
作者：毕司英；毛晓燕；陈继军；秦海艳 刊期： 2012年第12期
目的 建立检测疫苗中Triton X-100残留量的比浊法,并进行方法学验证.方法 将TritonX-100与5％苯酚溶液充分混匀后,室温静置15 min,采用比浊法测定340 nm处吸光度值,与经同样处理的标准品绘制的标准曲线比较,计算样品中残留TritonX-100的浓度.由4名试验人员连续3d测定12次,评价不同试验人员建立标准曲线的成功率；由同一试验人员在同一试验内和不同时间内及由4名试验人员在不同时间内分别测定低(15μg/ml)、中(25 μg/ml)、高(45μg/m1)3个不同浓度的TritonX-100的浓度,验证该方法的精密度和准确度；并检测BSA对试验准确度和精密度的影响.结果 4名试验人员连续3d的12次检测结果均满足标准曲线的成立条件,成功率为100％；同一试验人员在同一试验内对低、中、高3个不同浓度的TritonX-100溶液重复测定10次,变异系数分别为分别为5.33％、1.19％和1.39％,回收率分别为99.33％、105.60％和110.67％；同一试验人员在不同时间内连续测定3次,变异系数分别为4.94％、7.49％和3.46％,回收率分别为87.75％、93.85％和95.51％,4名试验人员在不同时间内连续测定3次,变异系数在1.73％ ～ 12.17％之间,回收率在89.55％～99.26％之间,灵敏度为10 μg/ml,具有良好的精密度和准确度；BSA对试验准确度和精密度无显著影响.结论 该方法快捷、简便,可灵敏、准确地定量检测TritonX-100的含量,可用于疫苗样品中残留TritonX-100的质量控制.
作者：陈平；罗珊；钟静；刘杰；孙艳；何敏；范凤鸣；曾献武 刊期： 2012年第12期
目的 观察FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应.方法 分别于16周、24周和12个月称取FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠体重；于16、24和38周处死各组小鼠,取脾脏,肉眼观察脾脏变化,并制备脾细胞悬液,进行细胞计数,同时取各组小鼠卵巢、肺及皮下等组织,观察其炎性变化.流式细胞术检测24周的FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠脾细胞中T、B淋巴细胞和Mac-1+细胞数量及百分率；Real-time PCR检测脾细胞中炎性细胞因子S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平.结果 与对照小鼠相比,FoxO3a基因敲除小鼠脾脏明显肥大,且随年龄增加更加显著,卵巢、肺及皮下等组织内可见大量炎性细胞浸润,脾细胞数明显升高；基因敲除组老年小鼠的体重明显低于对照小鼠；FoxO3a基因敲除小鼠的脾细胞中T、B淋巴细胞数增加明显,但所占脾细胞的百分率无明显增加,Mac-1+细胞数和百分率均明显增加；S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平明显高于对照小鼠.结论 FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应.
作者：邱红；陈晨；王若立；罗红；赵宝霞 刊期： 2012年第12期
目的 分离结肠癌细胞株的exosomes,并分析其在致敏抗原呈递细胞及激活相关效应细胞过程中的作用.方法 差速离心法分离体外培养的正常exosomes和经热休克处理的sw1116细胞(Heat shocked sw1116,HS-sw1116)分泌的exosomes (Heat shocked exosomes,HS-Exo),并在电子显微镜下观察exosomes和HS-Exo的形态结构；SDS-PAGE初步分析exosomes和HS-Exo的蛋白组分,CCK-8法检测其促外周血单个核细胞(Peripheral blood monouclear cells,PBMCs)增殖的能力.结果 电子显微镜观察,exosomes和HS-Exo的形态学结构无明显差异,其平均直径约为150 nm；exosomes和HS-Exo的蛋白条带分布情况基本相同,在高相对分子质量区域蛋白分布较多；exosomes比sw1116细胞更易引起PBMCs的增殖反应,HS-sw1116细胞和HS-Exo促PBMCs增殖的作用比sw1116细胞和exosomes更明显(P＜0.05).结论 结肠癌sw1116细胞株可分泌exosomes,其比肿瘤细胞更易引起PBMCs的增殖,热休克处理可进一步增强细胞和exosomes的促PBMCs增殖的能力,exosomes在结肠癌免疫治疗方面具有重要的应用价值.
作者：冯业童；刘朋飞；吴昊昱；刘迪；董超；吴璇；周余来；孙波 刊期： 2012年第12期
目的 评价不同佐剂流感疫苗的小鼠免疫效果.方法 培养并纯化流感病毒鼠肺适应株PR/8/34,制备流感病毒裂解液.将BALB/c小鼠随机分为5组:流感病毒PR/8/34裂解液(HA)组、HA+大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位(Heatlabile exterotoxin B subunit,LTB)组、HA+弗氏不完全佐剂(FIA)组、HA+Al(OH)3组和生理盐水对照组,HA+LTB组采用滴鼻黏膜免疫,免疫剂量为50 μl/只,其余各组均采用肌肉注射,免疫剂量为100 μl/只,共免疫2次,间隔2周.于初次免疫后28 d,经小鼠眼内眦采血,分离血清,检测各组小鼠血清IgG抗体效价、血凝抑制效价及攻毒后保护力及鼠肺病毒RNA载量,评价不同佐剂对流感疫苗的免疫增强作用.结果 各佐剂组小鼠血清IgG抗体水平及血凝抑制效价均显著高于HA组,且差异均有统计学意义(P均＜0.01)；HA+FIA组小鼠血清IgG抗体水平及血凝抑制效价均显著高于HA+LTB组和HA+Al(OH)3组(P均＜0.01)；HA+LTB组与HA+Al(OH)3组抗体效价差异无统计学意义(P＞0.05).各佐剂组和HA组小鼠攻毒后均存活,HA+FIA组鼠肺病毒RNA载量低,HA+LTB组与HA+Al(OH)3组相当.结论 不同佐剂对流感疫苗均有一定的免疫增强作用,其中LTB滴鼻免疫和Al(OH)3肌肉注射对流感疫苗的免疫增强作用相当.
作者：单璞；徐立猛；李计来；李媛媛；凌媛；马志新；徐静 刊期： 2012年第12期
目的 优化重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌的发酵工艺,为其规模化生产奠定基础.方法 以目的蛋白的表达量及菌体浓度作为综合评价指标,对重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌的摇瓶发酵温度、初始pH值、溶解氧、IPTG浓度及诱导时间进行优化;以摇瓶发酵结果为基础,进一步对发酵罐培养工艺中诱导时机、诱导时间及补料培养基配方进行优化；以确定的罐发酵工艺条件连续发酵5批,验证该发酵工艺.结果 适摇瓶发酵工艺条件为:发酵温度为37℃,初始pH值为7.0,高溶氧,IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为4h；适罐发酵工艺条件为:菌体A600值约为40时开始诱导,诱导时间为4h,补料培养基配方为葡萄糖25％,MgSO4·7H2O 0.5％.按照确定的工艺连续发酵5批,终菌体A600均达50.0以上,目的蛋白的表达量均高于15％.结论 优化的重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌的发酵工艺稳定性良好,已达到中试生产规模的要求.
作者：徐军；曹玉锋；时成波；李铮 刊期： 2012年第12期
目的 探讨FOXC1蛋白基因RNA干扰质粒对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响.方法 采用RT-PCR及Western blot法检测SGC-7901细胞和胃黏膜上皮细胞GES-1中FOXC1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.构建3个FOXC1基因shRNA真核表达质粒pshRNA-FOXC1a、pshRNA-FOXC 1b、pshRNA-FOXC1c,分别转染SGC-7901细胞,并设pGenesil-1空质粒转染组和未转染的细胞对照组,RT-PCR及Western blot法分别检测转染细胞中FOXC1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；MTT法检测转染细胞的增殖活力；流式细胞术检测转染细胞的细胞周期.结果 SGC-7901细胞中FOXC1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均显著高于GES-1细胞(P＜0.05).pshRNA-FOXC1a组、pshRNA-FOXC1b组和pshRNAFOXC1c组SGC-7901细胞中FOXC1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均显著低于pGenesil-1组和SGC-7901组(P＜0.01)；细胞增殖抑制率显著高于pGensil-1组(P＜0.05).处于G1、G2期的细胞比例显著高于SGC-7901组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于SGC-7901组(P＜0.01).结论 成功构建了FOXC1蛋白基因shRNA真核表达质粒.FOXC1在胃癌细胞SGC7901中呈高表达,抑制其表达后,细胞周期被阻滞在G1～ G2期,细胞增殖受到抑制.
作者：张瑶；刘纯伦；刘代江；窦娟 刊期： 2012年第12期
目的 探讨分别阻断和联合阻断血管内皮生长因子受体3(Vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR3)及神经纤毛蛋白2(Neuropilin 2,NRP2)基因的表达对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响.方法 将SGC-7901细胞株分为3大组,VEGFR3阻断组、NRP2阻断组和VEGFR3+NRP2阻断组,各大组中又包含空白对照组、脂质体转染组、无义链转染组(NSODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组).转染后的各组SGC-7901细胞株经RT-PCR法检测VEGFR3-mRNA及NRP2-mRNA的转录水平.分别采用MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况.结果 反义链转染组VEGFR3-mRNA和NRP2-mRNA的转录水平明显低于其各自的空白对照组、脂质体转染组和NSOND组,表明该组成功阻断基因VEGFR3和NRP2的表达.各组细胞的增殖和凋亡情况差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量和时间依赖性.在相同条件下,单独转染VEGFR3-ASODN组对胃癌细胞增殖的抑制及促凋亡作用优于单独转染NRP2-ASODN组,而联合转染组对细胞增殖的抑制及促凋亡作用明显.结论 阻断VEGFR3基因的表达对细胞增殖凋亡的影响大于阻断NRP2基因,联合阻断两个基因的表达,对细胞增殖和凋亡的影响明显大于单独阻断组.
作者：王璐璐；吴小翎；刘波；连海峰；李本杰 刊期： 2012年第12期
目的 对我国百日咳疫苗生产用菌株主要抗原片段基因进行序列分析,为我国百日咳疫苗的研制和质量控制提供依据.方法 分别从我国百日咳杆菌疫苗生产用菌株CS株基因组DNA中扩增百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)、外膜蛋白(Pertactin,PRN)、菌毛蛋白2(Fimbriae 2,FIM2)、菌毛蛋白3(Fimbriae 3,FIM3)基因,克隆至pMD 18-T载体,测序,并与GenBank 中登录的百日咳杆菌其他菌株的PT、PRN、FIM2、FIM3基因序列进行比较,构建系统进化树.结果 百日咳杆菌CS株PT、PRN、FIM2和FIM3基因的扩增产物大小均与预期一致.CS株PT基因与国内的另一疫苗生产株18323亲缘关系近,在同一分支上,且与国际标准株Tohama在同一亚分支内；PRN、FIM2和FIM3基因与国际标准株Tohama均在同一进化分支上.结论 百日咳杆菌CS株与国际标准菌株Tohama亲缘关系较近,与临床分离的其他流行株亲缘关系较远.
作者：姜崴；竭晶；杨红育；惠琦；付博；郑晓丽 刊期： 2012年第12期
目的 探讨福辛普利对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织ACE 和ACE2基因mRNA转录水平的影响,为阐明NASH的发病机制及探索新的治疗策略提供实验依据.方法 将40只雄性SD大鼠用普通饲料喂养1周后,随机分为4组:正常对照组(NC组,普通饲料+生理盐水1 ml灌胃)、高脂组(HC组,高脂饲料+生理盐水1 ml灌胃)、药物对照组[NF组,正常饲料+福辛普利3.6 mg/(kg·d)灌胃]和药物干预组[HF组,高脂饲料+福辛普利3.6 mg/(kg·d)灌胃],每组10只.给药24周后,分析各组大鼠肝组织病理学变化,检测各组大鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、甘油三酯(Triglyeerides,TG)、低密度脂蛋白(Lowdensity lipoprotein,LDL)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)、血管紧张素转换酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)、ACE2、血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)和Ang-(1-7)的水平；RT-PCR检测各组大鼠肝组织ACE和ACE2基因mRNA的转录水平；Western blot检测各组大鼠肝组织Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)的表达水平.结果 给药24周后,HF组非酒精脂肪性肝病活动度评分和肝纤维化程度与HC组相比,均明显下降(P＜0.001);HF组血清中ALT、ALP、TG、LDL、TGF-β、ACE和Ang Ⅱ的水平均明显低于HC组(P＜0.05),而ACE2和Ang-(1-7)的水平均明显高于HC组(P＜0.05)；福辛普利可显著降低肝组织ACE基因mRNA的转录水平(P＜0.001)和Collagen Ⅰ蛋白的表达水平(P＜0.01),升高ACE2基因mRNA的转录水平(P＜0.01).结论 福辛普利可能通过下调ACE和上调ACE2的生成和表达,从而降低AngⅡ和升高Ang-(1-7)的生成,具有改善NASH和抗肝纤维化作用.本实验为阐明NASH的发病机制及探索新的治疗策略提供了实验依据.
作者：刘波；吴小翎；张霞；张伟；吴蓉；肖晓秋；张凤；周华梅；王璐璐 刊期： 2012年第12期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
