龙方懿；杨俊艳；刘智敏；贾朝莉；刘小花；董超然；王旎
目的 对我国百日咳疫苗生产用菌株主要抗原片段基因进行序列分析,为我国百日咳疫苗的研制和质量控制提供依据.方法 分别从我国百日咳杆菌疫苗生产用菌株CS株基因组DNA中扩增百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)、外膜蛋白(Pertactin,PRN)、菌毛蛋白2(Fimbriae 2,FIM2)、菌毛蛋白3(Fimbriae 3,FIM3)基因,克隆至pMD 18-T载体,测序,并与GenBank 中登录的百日咳杆菌其他菌株的PT、PRN、FIM2、FIM3基因序列进行比较,构建系统进化树.结果 百日咳杆菌CS株PT、PRN、FIM2和FIM3基因的扩增产物大小均与预期一致.CS株PT基因与国内的另一疫苗生产株18323亲缘关系近,在同一分支上,且与国际标准株Tohama在同一亚分支内；PRN、FIM2和FIM3基因与国际标准株Tohama均在同一进化分支上.结论 百日咳杆菌CS株与国际标准菌株Tohama亲缘关系较近,与临床分离的其他流行株亲缘关系较远.
作者：姜崴；竭晶；杨红育；惠琦；付博；郑晓丽 刊期： 2012年第12期
目的 观察FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应.方法 分别于16周、24周和12个月称取FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠体重；于16、24和38周处死各组小鼠,取脾脏,肉眼观察脾脏变化,并制备脾细胞悬液,进行细胞计数,同时取各组小鼠卵巢、肺及皮下等组织,观察其炎性变化.流式细胞术检测24周的FoxO3a基因敲除小鼠和对照小鼠脾细胞中T、B淋巴细胞和Mac-1+细胞数量及百分率；Real-time PCR检测脾细胞中炎性细胞因子S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平.结果 与对照小鼠相比,FoxO3a基因敲除小鼠脾脏明显肥大,且随年龄增加更加显著,卵巢、肺及皮下等组织内可见大量炎性细胞浸润,脾细胞数明显升高；基因敲除组老年小鼠的体重明显低于对照小鼠；FoxO3a基因敲除小鼠的脾细胞中T、B淋巴细胞数增加明显,但所占脾细胞的百分率无明显增加,Mac-1+细胞数和百分率均明显增加；S100A8和S100A9基因mRNA的表达水平明显高于对照小鼠.结论 FoxO3a基因缺失致小鼠脾脏进行性慢性炎性反应.
作者：邱红；陈晨；王若立；罗红；赵宝霞 刊期： 2012年第12期
目的 筛选Ⅰ型登革病毒(Dengue virus,DV)中国株D06063人胚肺二倍体细胞KMB17的适应株,经噬斑纯化后,分析其生物学特性.方法 将Ⅰ型DV中国株D06063在C6/36细胞上进行扩增,采用微量滴定法测定病毒的感染性滴度;RT-PCR法鉴定DV型别；病毒连续以4.0 MOI的量感染KMB17细胞,传代至病毒完全适应在细胞内扩增,再连续传10代,筛选出KMB17细胞适应株,并进行3轮噬斑纯化；免疫荧光法检测纯化病毒,电镜观察病毒颗粒的形态.结果 在C6/36细胞上扩增的Ⅰ型DV D06063株的滴度为6.0 lg CCID5o/ml,经RT-PCR可扩增出511 bp的DV特异基因和482 bp的Ⅰ型DV型特异性基因；病毒感染KMB17细胞后,可产生明显的细胞病变,至第10代,病毒的感染性滴度达峰值,为6.75 lg CCID50/ml;纯化的病毒经免疫荧光检测呈阳性,电镜观察显示病毒形态正常.结论 成功筛选出传代稳定性好、病毒扩增量高的Ⅰ型DVKMB17细胞适应株,纯化的病毒株保持了原始毒株的基本生物学特性.
作者：赵玉娇；潘玥；陈俊英；杨丽娟；岳耀斐；施海晶；马绍辉；孙强明 刊期： 2012年第12期
目的 观察儿童接种冻干水痘减毒活疫苗的安全性,为制定水痘疫苗接种策略提供依据.方法 按照分层随机原则及“入选和排除标准”选择天津市滨海新区年龄在1 ～ 12岁的健康儿童作为观察对象,并按照生理特点分为幼儿、学龄前儿童和学龄儿童组.采取主动和被动监测结合的方式,观察接种冻干型水痘减毒活疫苗后42 d内不良反应发生情况.结果 共有效观察7546人,失访62人,不良反应发生率为7.08％；不良反应以Ⅰ级反应为主,占81.27％;不良反应中以发热为主,占89.51％,未出现严重不良反应；幼儿、学龄前儿童和学龄儿童3个年龄组不良反应发生率分别为7.90％、6.88％和6.36％,差异无统计学意义(P＞0.05)；不良反应发病时间为接种疫苗后30 mm ～ 12 d,多数集中在接种疫苗后1～3d,占89.51％.结论 接种冻干水痘减毒活疫苗的不良反应发生率不高于国内其他研究结果,未出现严重不良反应,疫苗具有很好的安全性.
作者：李永成；高志刚；陶航；张颖；张之伦；韩永刚；董晓静；王伟；庄振荣；曲江文；骆晓艳 刊期： 2012年第12期
目的 探讨FOXC1蛋白基因RNA干扰质粒对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响.方法 采用RT-PCR及Western blot法检测SGC-7901细胞和胃黏膜上皮细胞GES-1中FOXC1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平.构建3个FOXC1基因shRNA真核表达质粒pshRNA-FOXC1a、pshRNA-FOXC 1b、pshRNA-FOXC1c,分别转染SGC-7901细胞,并设pGenesil-1空质粒转染组和未转染的细胞对照组,RT-PCR及Western blot法分别检测转染细胞中FOXC1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平；MTT法检测转染细胞的增殖活力；流式细胞术检测转染细胞的细胞周期.结果 SGC-7901细胞中FOXC1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均显著高于GES-1细胞(P＜0.05).pshRNA-FOXC1a组、pshRNA-FOXC1b组和pshRNAFOXC1c组SGC-7901细胞中FOXC1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均显著低于pGenesil-1组和SGC-7901组(P＜0.01)；细胞增殖抑制率显著高于pGensil-1组(P＜0.05).处于G1、G2期的细胞比例显著高于SGC-7901组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于SGC-7901组(P＜0.01).结论 成功构建了FOXC1蛋白基因shRNA真核表达质粒.FOXC1在胃癌细胞SGC7901中呈高表达,抑制其表达后,细胞周期被阻滞在G1～ G2期,细胞增殖受到抑制.
作者：张瑶；刘纯伦；刘代江；窦娟 刊期： 2012年第12期
目的 建立狂犬病病毒(Rabies virμs,RV)抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,以应用于疫苗生产过程中RV含量的监测.方法 将RV aGV株纯化抗原经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,制备抗RV单克隆抗体,纯化后以HRP进行标记,建立双抗体夹心ELISA检测方法.以狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品为定量标准,建立剂量-反应曲线,确定该方法的灵敏度,并对该方法的专属性、精密性及适用性进行验证.结果 制备了2株针对不同抗原位点的单克隆抗体1E9和2H1,间接ELISA法测定腹水效价为1:105～1:107,纯化后蛋白含量分别为10.285和7.64 mg/ ml.建立的ELISA法对RV抗原的低检出限为1.03 mIU/ml,标准曲线的佳线性范围为1.03 ～ 66 mIU/ml,相关系数为0.9919.该方法对检测过程中可能遇到的杂质和添加物(人血清白蛋白、牛血清、Vero细胞培养上清)的检测结果均为阴性；检测3个浓度(20、12.50和3.13 mIU/ml)狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品的试验内和试验间变异系数的平均值分别为7.78％和14.0％；用该方法检测不同毒株、不同细胞生产的狂犬病疫苗的RV抗原含量的平均值在0.67 ～4.86 IU/ml之间.结论 成功建立了RV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,可对来自不同毒株、不同细胞的狂犬病疫苗的RV抗原进行快速定量检测,为疫苗生产中的质量控制提供了简便的监测手段.
作者：崔文广；杨屹；常军亮；井伟东；张秀霞；苗丽；丁丽丽；周长军；郭秀侠 刊期： 2012年第12期
目的 构建人端粒酶蛋白催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)逆转录病毒真核表达质粒,并检测其在人乳腺癌相关的成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)中的表达及其对CAF增殖的影响.方法 扩增pIRES-EGFP-hTERT质粒,酶切回收hTERT片段,正向克隆至逆转录病毒载体pBABE-puro上,构建重组质粒pBABE-purohTERT,转染PT67细胞,进行逆转录病毒的包装.将PT67细胞上清感染原代培养的人乳腺癌CAF,荧光定量PCR和Western blot分别检测hTERT基因在人乳腺癌CAF中的转录和表达,流式细胞术检测细胞的增殖情况.结果 重组质粒pBABE-purohTERT经酶切和测序证实构建正确；与未处理的人乳腺癌CAF和感染pBABE-puro的细胞相比,感染重组质粒的人乳腺癌CAF 中hTERT基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显增强,其增殖指数也明显增加(P＜0.05).结论 成功构建了hTERT 基因逆转录病毒真核表达质粒,其能增强人乳腺癌CAF的增殖能力,为乳腺癌微环境CAF的研究提供了良好的细胞模型.
作者：彭琼乐；王黎阳；赵浏阳；孙艳；柳满然；彭惠民 刊期： 2012年第12期
随着A、C、W135、Y群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)多糖疫苗和多糖-蛋白结合疫苗的接种使用,相应菌群引起的流行性脑膜炎的发病率和死亡率均得到有效控制,而B群等其他群别引起的流行性脑膜炎发病率有所增加.因B群Nm的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)或多糖-蛋白结合物免疫原性均较低,目前采用常规方法尚未生产出有效的B群Nm疫苗.本文对B群Nm CPS疫苗、外膜囊泡(Out membrane vesicles,OMV)疫苗、脂寡糖(Lipooligosaccharide,LOS)疫苗和重组蛋白疫苗的研究进展作一综述.
作者：谭亚军 刊期： 2012年第12期
目的 筛选能增强特异性抗原早期分泌抗原靶6蛋白(Early secretory antigenic target 6,ESAT6)-培养滤出液蛋白-10(Culture filtrate protein 10,CFP-10)融合蛋白(E1C0)诱导小鼠细胞免疫应答的佐剂,建立基于细胞免疫应答的小鼠模型,以评价基于体外干扰素γ释放分析(IFNγ release assay,IGRA)结核诊断方法中特异性刺激抗原E1C0的活性.方法 建立小鼠IFNγ双抗体夹心SABC-ELISA检测系统,并验证系统的线性、灵敏度、重复性和特异性.将BALB/c小鼠随机分为7组:E1C0+单磷酸类脂A(Monophosphoryl lipid A,MPL)+双十八烷基二甲基溴化铵(Dimethyl dioctadecylammonium bromide,DDA)组、E1C0+DDA组、E1C0+MPL组、E1C0+弗氏不完全佐剂(IFA)组、E1C0组、生理盐水组和MPL+DDA联合组,每组6只,经小鼠后肢内侧皮下免疫3次,间隔2周,免疫剂量为:E1C0 100 μg/只,MPL 25 μg/只,DDA 250 μg/只,IFA 100μl/只.末次免疫4周后处死小鼠,无菌取脾,分离脾淋巴细胞,加入E1C0进行培养,MTT法检测特异性淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测培养上清中IFNγ水平.采用筛选出的佳佐剂与抗原组合免疫3批BALB/c小鼠,进行IFNγ诱生测定.结果 检测系统的线性范围为:40 ～2560 pg/ml(R＞0.98)；灵敏度为40 pg/ml;变异系数(CV)＜15％,检测大鼠、豚鼠和兔血清IFNγ均为阴性；E1C0+MPL+DDA组、E1C0+IFA组和E1C0+DDA组小鼠特异性淋巴细胞增殖刺激指数均明显高于生理盐水组(P＜0.01)；E1C0+MPL+DDA组小鼠的脾淋巴细胞经E1C0体外刺激后,产生的IFNγ水平明显高于其他组(P＜0.001)；重复试验结果显示,E1C0+MPL+DDA组3批小鼠免疫后,脾淋巴细胞诱生的IFNγ水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 E1C0与MPL和DDA联合免疫所诱导的小鼠Th1型细胞免疫应答强,成功建立了用于评价刺激抗原E1C0活性的小鼠模型.
作者：由鹏飞；叶祥忠；葛胜祥；李益民；张怡轩 刊期： 2012年第12期
目的 利用人类真核翻译延伸因子1A1 (Human eukaryotic translation elongation factor 1A1,hEEF1A1)基因座完整的上下游调控序列和人凝血因子Ⅶ(Human coagulation factorⅦ,hFⅦ)基因组序列构建hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座.方法 首先构建连入6个同源臂的pBR322作为连续3次基因抓捕的载体；然后通过Red同源重组系统,在大肠杆菌内进行缺口修复.第一步将hEEF1A1基因3'端侧翼序列亚克隆至抓捕载体上,第二步将hFⅦ完整基因组序列亚克隆至抓捕载体上,第三步将hEEF1A1基因5'端完整侧翼序列亚克隆至抓捕载体上.结果 经3次基因抓捕,3个基因片段在抓捕载体上无痕连接,形成一条长约50000 bp的hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座.经PCR、酶切及测序验证,构建的hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座中,原hEEF1A1基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hFⅦ基因组序列精确置换.结论 成功构建了hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座,为哺乳动物细胞表达大载体的制备提供了实验依据.
作者：刘蓥灿；林艳丽；吴晓洁；熊福银；周艳荣；孙晓艳；李力；陈红星 刊期： 2012年第12期
目的 观察甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、水痘带状孢疹病毒(Varicella zoster virus,vzv)分别感染与共同感染二倍体细胞2BS株时细胞超微结构的变化.方法 电镜观察HAV单独感染21、23、25 d,VZV单独感染1、3、5d及HAV感染21 d后再以VZV感染1、3、5、7d的2BS细胞的超微结构.结果 与正常对照2BS细胞相比,单独感染HAV的2BS细胞超微结构无明显变化；单独感染VZV的2BS细胞的超微结构主要出现核膜破坏；HAV与VZV共同感染的2BS细胞核内出现VZV包涵体,核膜缺失,胞浆中可见HAV与VZV形态,且细胞粗面内质网和滑面内质网膨胀,内质网小池内有致密颗粒.结论 HAV与VZV共同感染的2BS细胞的超微结构与两种病毒单独感染的细胞的超微结构存在不同的变化规律和形态特征,先感染HAV后感染VZV的2BS细胞比单独感染VZV的2BS细胞受到的破坏程度轻.
作者：蔡岩；赵晓青；何巍；姜崴；周长军；张金岩；付博；刘建华 刊期： 2012年第12期
目的 探讨低氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白在甲状腺滤泡状癌(Follicular thyroid carcinoma,FTC)组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测42份FTC组织中HIF-1α、锌指转录因子(Snail)、波形蛋白(Vimentin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)的表达；MTT法检测不同浓度CoCl2对FTC WRO细胞增殖活力的影响；RT-PCR法检测不同浓度CoCl2对WRO细胞HIF-1α基因mRNA转录水平的影响；免疫荧光法观察150 μmol/L CoCl2处理24 h的WRO细胞中HIF-1α蛋白的核定位；Western blot检测150 μmol/LCoCl2处理不同时间对WRO细胞中HIF-1α、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达的影响；Transwell小室试验检测150 μmol/LCoCl2处理24 h对WRO细胞中侵袭及迁移能力的影响.结果 在42份FTC组织中,HIF-1α、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达与多项临床指标相关,且4者表达显著相关(P＜0.05)；CoCl2可抑制WRO细胞的增殖活力；随着CoCl2浓度的增高,WRO 细胞中HIF-1α基因mRNA的转录水平先增高然后趋于平稳；150 μmol/L CoCl2处理24 h的WRO细胞内HIF-1α蛋白发生核转位；CoCl2处理的WRO细胞中随着HIF-1α蛋白表达的增多,Snail和Vimentin蛋白的表达逐渐增多,E-cadherin蛋白的表达逐渐减少(P＜0.05)；150 μmol/L CoCl2处理24 h后,侵袭、迁移细胞数目较对照组明显增加.结论 HIF-1α能够通过上调Snail与Vimentin的表达,下调E-cadherin的表达,进而促进FTC EMT的发生.
作者：龙方懿；杨俊艳；刘智敏；贾朝莉；刘小花；董超然；王旎 刊期： 2012年第12期
目的 研制铜绿假单胞菌3型0-特异性多糖(O-specific polysaccharide,O-SP)-破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)结合疫苗,并分析其免疫特性.方法 采用热酚水法提取铜绿假单胞菌国际抗原分型系统(International Antigen Typing System,IATS)3型菌株的脂多糖(Lipopolysacchride,LPS),去除类脂A后纯化O-SP,用1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化O-SP,己二酸二肼(ADH)作为连接臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下,与TT结合制备O-SP-TT结合疫苗,检测其理化性质,并分析结合疫苗的免疫原性和免疫保护性.结果 O-SP收获量相当于水解LPS量的30％,其蛋白质和核酸含量均低于1.0％,O-SP衍化度为3.83％,O-SP与Tr的结合率约为40％,多糖蛋白质比(w/w)为1:2.18.O-SP-TT结合疫苗可刺激小鼠产生高效价的IgG抗体,与O-SP组相比,差异有统计学意义(P＜0.05)；结合疫苗免疫小鼠能保护5 LD50和10 LD50活菌的攻击,小鼠免疫O-SP-TT后兔抗血清对3 LD50和5 LD50活菌攻击具有良好的保护作用.结论 制备的铜绿假单胞菌3型O-SP-TT结合疫苗具有良好的免疫原性和免疫保护性,该疫苗有望成为防治IATS 3型铜绿假单胞菌感染的有效疫苗.
作者：谢茂超；陈明拓；姜晓；杨硕；吴鸿舟；王学林；赵高梅；葛永红 刊期： 2012年第12期
目的 建立SD大鼠药物性肝硬化模型,探讨原代肝细胞移植治疗大鼠肝硬化的疗效.方法 经四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCL4)诱导大鼠肝硬化模型,将40只模型大鼠分为2组,每组20只,Ⅰ组经脾尾注射约2×107个肝细胞,Ⅱ组经脾尾注射0.4 ml Hank's液.观察每组大鼠的存活情况及肝功能变化；HE染色观察脾脏病理变化；免疫荧光观察植入的肝细胞在大鼠脾内合成白蛋白(Serum albumin level,ALB)的功能.结果 经CCL4诱导10周后,大鼠肝脏经HE染色发现假小叶形成,表明成功建立了肝硬化模型；移植术后8周,Ⅰ组大鼠存活率(75％)显著高于Ⅱ组(35％),差异有统计学意义(P＜0.01)；Ⅰ组大鼠的血清ALB水平较Ⅱ组明显升高(P＜0.05),血氨(Serum ammonia level,AMM)水平较Ⅱ组明显降低(P＜0.05)；Ⅰ组大鼠移植术后1、8周,大量肝细胞在脾脏红髓中定植下来；Ⅰ组大鼠移植术后5周,植入的肝细胞在大鼠脾内具有合成白蛋白的功能.结论 CCL4能稳定诱导肝硬化动物模型；同种异体肝细胞移植能提高肝硬化大鼠的生存率,并改善肝性脑病和低蛋白血症.
作者：杨均均；黄文祥；史芳静；冯渊 刊期： 2012年第12期
目的 原核表达新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1),并制备其多克隆抗体.方法 以临床分离的产NDM-1的臭鼻克雷伯杆菌为模板,PCR扩增NDM-1基因,克隆入pET-28a载体,构建重组原核表达质粒pET-28a-NDM-1,转化E.coli BL21 (DE3) pLyss,IPTG诱导表达重组蛋白.表达的重组蛋白经硫酸铵沉淀、离子交换层析、Ni亲和层析及分子筛层析纯化后,免疫日本大耳白兔,制备NDM-1多克隆抗体.抗体经硫酸铵沉淀和SPA-Sepharose亲和层析纯化后,Western blot鉴定其特异性.结果 重组表达质粒pET-28a-NDM-1经PCR及测序鉴定构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为28000,诱导表达的重组菌破菌上清存在较强的β-内酰胺酶活性,表明NDM-1蛋白为可溶性形式表达；终纯化获得的NDM-1蛋白纯度高于95％；制备的NDM-1多克隆抗体能与诱导表达的重组菌胞外蛋白特异性结合.结论 成功原核表达了NDM-1,并制备了其多克隆抗体,为NDM-1的快速检测提供了新的思路.
作者：赵祖国；喻云梅；刘炜；许壁榆；张腊喜；刘仿；杨银梅；王凯；周小棉；徐军发；丁元林 刊期： 2012年第12期
目的 构建GINS2基因siRNA真核表达质粒,并检测其对NB4细胞凋亡的影响.方法 人工合成针对GINS2基因的4组siRNA干扰序列和1组无同源性的序列,测序鉴定后转染低传代人早幼粒细胞系NB4细胞,经G418筛选后,通过QRT-PCR、Western blot检测重组质粒对NB4细胞中GINS2基因mRNA转录水平和蛋白表达水平的影响；流式细胞术检测NB4细胞的凋亡情况.结果 5组重组质粒经测序证明构建正确,4组干扰质粒转染NB4细胞后,细胞中GINS2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均有所降低,其中干扰组1基因干扰率达50％,蛋白相对表达量为56％；干扰组1细胞凋亡率为32.54％,较正常对照组和NC组明显上升(P＜0.01).结论 成功构建了GINS2基因siRNA真核表达质粒,抑制GINS2基因的表达可促进NB4细胞的凋亡,为进一步研究GINS2基因在白血病中的作用奠定了基础.
作者：高艳军；刘北忠；钟梁；初晨；吴秀娟；黎亮；张曦；高远梅；胡秀秀 刊期： 2012年第12期
目的 构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选.方法 以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,克隆入噬菌粒pS100,电转化E.coli TG1,建立scFv初级抗体库,并进行基因序列分析及鉴定.以灭活的狂犬病病毒为抗原,进行3轮scFv噬菌体抗体库的富集筛选,随机挑取单克隆,制备噬菌体抗体颗粒,并进行ELISA分析,阳性克隆进行序列分析,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent facus inhibition test,RFFIT)检测噬菌体抗体颗粒的中和活性.结果 获得了库容为1.7×108的人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,该抗体库具有较好的序列正确率和多样性,经3轮筛选后,ELISA分析显示,共获得24个序列各不相同的针对狂犬病病毒的阳性克隆,对其中7个克隆的噬菌体抗体颗粒进行RFFIT检测,均具有中和活性.结论 已成功构建了人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,并建立了筛选方法.
作者：毕司英；毛晓燕；陈继军；秦海艳 刊期： 2012年第12期
目的 分析平顶山市2010年麻疹疫苗强化免疫活动的有关数据及经验,为加速控制和消除麻疹提供依据.方法 对收集的平顶山市2010年麻疹疫苗强化免疫数据和现场评估资料进行流行病学分析.结果 2010年全市共摸底麻疹疫苗强化免疫1043294人,接种1016848人,接种率为97.47％;强化免疫期间,全市共报告麻疹疫苗相关疑似预防接种异常反应(Adverse effects following immunization,AEFI)20例,发生率1.97/10万,其中严重AEFI 2例,发生率为0.19/10万；共调查了747790名强化免疫目标儿童的免疫史,其中0剂次占1.01％,免疫史不详占3.81％；采取抽样调查方法对强化免疫活动进行了快速评估,全市共调查应种10455人,实种10146人,接种率为97.04％.结论 我市首次实施的麻疹疫苗强化免疫活动迅速降低了目标人群的麻疹发病率,形成了有效的免疫屏障,为全市消除麻疹奠定了基础,同时也促进了全市免疫规划工作的规范开展.
作者：张俊杰；杨恒丹；崔振铎；王晓明；魏海涛；杨秋锋；赵克娜 刊期： 2012年第12期
目的 原核表达并纯化单增李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO).方法 PCR扩增LLO hly基因,并插入pET-32a载体,构建重组表达质粒pET-hly,转化入大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,切胶纯化重组蛋白,并进行Western blot分析.结果 克隆的hly基因长1515 bp,与GenBank中登录的hly基因的核苷酸序列同源性为99％；重组表达质粒pET-hly经酶切鉴定构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为55000,表达量占细菌总蛋白的45.2％；纯化的重组蛋白可与单增李斯特菌阳性血清反应.结论 已成功原核表达并纯化了LLO,为下一步诊断试剂盒的研制奠定了基础.
作者：曲祖乙；杨松 刊期： 2012年第12期
目的 构建肠道病毒71型(Entervirus71,EV71)3C基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达并纯化.方法 以病毒的反转录产物为模板,PCR扩增EV71 3C基因,克隆至pGEx-4T-1载体中,构建重组表达质粒pGEx-3C,转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,IPTG诱导表达.表达的重组融合蛋白GSR-3C经GST-Agarose亲和层析和分子筛层析纯化后,Western blot检测其反应原性.结果 重组表达质粒pGEx-3C经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组融合蛋白相对分子质量约46000,表达量约占菌体总蛋白的50％,主要以可溶性形式表达；纯化后的重组融合蛋白纯度大于90％,可与小鼠抗EV71单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了重组表达质粒pGEx-3C,在大肠杆菌中高效分泌表达并纯化了重组GST-3C融合蛋白,为EV713C蛋白酶结构与功能的研究及3C靶向药物和疫苗的研究奠定了基础.
作者：江月；丛浩龙；李梨 刊期： 2012年第12期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
