衡燮；高娜；伍胤杰；林小瑞；周武刚；王微；唐聪；姜述德；杨净思；孙明波
目的 观察还原型谷胱甘肽(GSH)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌线粒体功能的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(C组)和糖尿病组,糖尿病组腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型.将建模成功的大鼠随机分为糖尿病心肌病模型组(DCM组)和GSH干预组(DCM+GSH组),DCM+GSH组腹腔注射GSH,C组和DCM组腹腔注射生理盐水.8周后,检测各组大鼠血清及心肌组织匀浆中的抗氧化指标、Ca~(2+)诱导的线粒体肿胀度的变化及心肌线粒体的膜电位.结果 DCM+GSH组大鼠心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶活性较DCM组显著升高,血清中SOD活性较DCM组有升高趋势,但差异无统计学意义;DCM+GSH组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量较DCM组显著下降,心肌组织匀浆中MDA含量较DCM组有下降趋势,但差异无统计学意义;DCM+GSH组大鼠心肌线粒体对高钙诱导的肿胀的敏感性较DCM组有所恢复,但仍未恢复到正常水平;DCM+GSH组大鼠心肌线粒体膜电位较DCM组显著上升.结论 GSH对STZ诱导的DCM大鼠的心脏有一定的保护作用,其可能的机制为增强心肌抗氧化能力及改善心肌组织中线粒体的功能.
作者：张赢予；方眷钱；陈赟；苏兆亮；张国辉；高静 刊期： 2010年第04期
目的 以艾滋病病毒(HIV)为研究对象,建立感染性疾病RNA病毒性病原体的生物信息学检测方法.方法 应用DNase-非序列依赖的单引物扩增技术,将艾滋病患者血清过滤后,经DNase处理去除血清中的内源DNA,提取血清病毒RNA,反转录合成病毒RNA的双链cDNA,Taq I酶切双链cDNA,加接头分子,并以接头分子为引物非特异扩增病原基闪;PCR产物克隆后,酶切鉴定并测序,经GenBank BLAST软件进行序列分析.结果 非序列依赖的单引物扩增HIV患者血清中外源基因得到多个DNA片段;重组克隆质粒经EcoR I和Hind Ⅲ双酶切,可见插入片段存在;将所有PCR产物测序,序列与已知病原基因序列一致.结论 应用DNase处理及非序列依赖的单引物扩增方法可以检测RNA病毒性病原体.
作者：于庭；包洪；刘爱忠；于艳辉；滕春燕 刊期： 2010年第04期
目的 利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)安徽分离株制备油乳剂灭活疫苗,并进行免疫试验.方法 PRRSV经Marc-145细胞传代增殖,制备油乳剂灭活疫苗;物理性状、无菌试验及安全性试验合格后,经肌肉注射免疫健康仔猪,并进行攻毒;分别检测免疫仔猪的血清抗体水平及保护力,并进行免疫程序及与市售疫苗的免疫效果的比较试验.结果 制备的灭活疫苗的适宜免疫剂量为2 ml/头,免疫后14 d血清抗体水平可达高峰;使用同一病毒攻毒,保护率为80%(4/5).采用灭活疫苗2次免疫及灭活疫苗与弱毒疫苗交替2次免疫,免疫效果均较好.制备的灭活疫苗免疫效果与1号市售灭活疫苗相比,差异无统计学意义,且优于2号市售灭活疫苗.结论 已成功制备了PRRSV安徽分离株油乳剂灭活疫苗,该疫苗安全可靠,免疫效果好,适于推广使用.
作者：王星晨；李郁；王桂军；孙裴；魏建忠；杨德康；张玮 刊期： 2010年第04期
目的 观察注射用母牛分枝杆菌(微卡)对结核菌感染小鼠细胞免疫功能的影响,并探讨其作用机制.方法 C57小鼠经尾静脉注射结核分枝杆菌H37Rv,建立结核菌感染小鼠模型.将模型小鼠随机分为模型组、微卡高、中、低3个剂量组和异烟肼组,同时设正常对照组.感染8周后处死小鼠,取肺、脾、肝,计算重量指数和病变总指数,测定肺脏活菌数量,并观察主要脏器的病理变化;流式细胞术测定小鼠脾脏中CD3~+T、CD4~+T、NK1.1~+T、NK、γδT细胞的比例以及CD4~+T细胞胞内IFNγ和IL-4的表达.结果 微卡各剂组能明显减轻感染小鼠的发病状况,其中微卡中剂量组的各脏器病变总指数、脾脏和肺脏重毋指数、肺脏结核菌活菌数均显著低于模型组;微卡各剂量组小鼠的肺部病变主要以增殖性结节为主,而模型组则以坏死性结节和增殖性结节为主;微卡各剂量组小鼠的CD3~+T、CD4~+T细胞比例均明显升高,CD4~+IFNγ~+辅助性T细胞比例与模型组比较,差异无统计学意义;微卡低、中剂量组CD4~+IL-4~+辅助性T细胞比例明显降低,同时能显著提高小鼠天然免疫系统γδT和NK细胞的比例.结论 微卡可提高结核菌感染小鼠天然和获得性细胞免疫水平,对结核菌感染小鼠具有较好的免疫干预作用.
作者：陶立峰；蒲江；宛荣生；王德海；李静；沈煜；张鑫 刊期： 2010年第04期
狂犬病病毒抗原含量是狂犬病疫苗的主要质量指标之一,快速、准确、有效的狂犬病疫苗抗原含量检测方法可以提高工作效率.本文对几种狂犬病疫苗有效抗原含量的检测方法作一综述,并进行了综合评价.
作者：刘金花 刊期： 2010年第04期
目的 建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)纯化工艺.方法 采用Sepharose CL-6B凝胶过滤和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析两步纯化法纯化脊髓灰质炎病毒,进行各项检定后再经除菌过滤和灭活.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒纯化后的蛋白去除率均不低于98.81%,病毒滴度分别为8.75、8.50和8.63 IgCCID_(50)/ml,DNA残留量均＜100 pg/ml.除菌过滤和灭活后,D抗原含量略有下降.结论 已建立了Sabin株IPV的纯化工艺,纯化后制备出了高纯度的Sabin株IPV.
作者：衡燮；高娜；伍胤杰；林小瑞；周武刚；王微；唐聪；姜述德；杨净思；孙明波 刊期： 2010年第04期
目的 分析聚乙二醇(相对分子质量40 000)化促红细胞生成素(PEG-EPO)在猕猴体内的药代动力学特征.方法 建立检测PEG-EPO的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证.用1、3和9 mg/kg 3个剂量的PEG-EPO经静脉注射猕猴,给药后各时间点检测猕猴体内的血药浓度,用DAS软件获取各剂量组药代动力学参数.结果 PEG-EPO在猕猴体内的代谢过程符合二室开放模型,1、3和9 mg/kg 3个剂量的PEG-EPO的消除半衰期(t_(1/2β))分别为(51.893 00±5.395 58)、(42.485 50±3.016 06)和(56.461 30±6.819 32)h;AUC_(0～144)分别为(109.32±9.82)、(236.23±36.16)和(722.55±84.31)mg/L·h.结论 相对分子质量为40 000的PEG修饰的EPO能显著延长其在猕猴体内的半衰期.
作者：郑崛村；沈富兵；邓念华；孟延发 刊期： 2010年第04期
目的 探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;Annexin V染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspasel、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化.结果 Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100 MOI,作用时间为48 h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%～35.04%);Annexin V染色结果显示,Ad-HN感染48 h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性.结论 Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应.
作者：温中梅；李霄；刘妍；高鹏；阚式绂；王卓越；王宇航；彭丽萍；金宁一 刊期： 2010年第04期
目的 应用30 L填充床生物反应器培养重组CHO细胞生产重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA).方法 将表达rht-PA的CHO细胞株用含10%胎牛血清的IMDM复苏并放大培养,接种至30 L生物反应器中,并采用Biocommand Plus 软件系统实时监控.先用含血清的培养基生长培养,再更换为无血清培养基进行表达培养.在整个培养过程中,采用灌流培养方式,每日采样测定培养上清中葡萄糖浓度,隔日测定rht-PA的表达水平及生物学活性.采用Lysine-Sepharose 4B和Zn~(2+)-Sepharose 4B两步亲和层析法纯化rht-PA,并检测纯化产物的比活、产率及纯度.结果 整个培养过程持续51 d,包括生长培养6 d,表达培养45 d,平均日灌流量为46.7 L,高达60 L,共收获表达培养液约2 100 L;rht-PA的平均表达水平为15.15 mg/L,高可达19.25 mg/L,生物学活性平均约为8 000 IU/ml;表达培养至第13天时,葡萄糖消耗量达高水平(15.97 g/L·d);纯化的rht-PA比活达6×10~5 IU/mg,产率为63%,纯度达99%以上.结论 应用30 L填充床生物反应器可实现重组CHO细胞的长时间连续培养及产物rht-PA的高效表达.
作者：梅建国；沈志强；庄金秋 刊期： 2010年第04期
目的 提取羊布鲁菌标准强毒株16 m膜蛋白,分析其反应原性,并建立血清抗体间接ELISA检测方法.方法 利用碳酸盐方法提取羊布鲁菌标准强毒株16 m膜蛋白,12%SDS-PAGE分析其相对分子质量范嗣;用自然感染羊布鲁菌的阳性血清进行Western blot分析,初步确定膜蛋白组分中能够发生免疫反应的条带;用方阵滴定法确定抗原和抗体的佳稀释度,建立间接ELISA检测方法,并进行特异性和精密性验证;检测免疫豚鼠的血清抗体效价;对临床上采集的羊血清样品进行检测,并与虎红平板凝集试验结果进行比较.结果 分离的羊布鲁菌膜蛋白浓度为9.4 μg/μl;SDS-PAGE分析显示,羊布鲁菌膜蛋白的相对分子质量主要集中在17 000～80 000之间;Western blot分析显示多条特异性反应条带.膜蛋白抗原的佳稀释度为1:1 280,抗体佳稀释度为1:10.所建立的ELISA方法特异性和精密性良好.ELISA检测豚鼠血清效价为1:64 000.检测临床510份羊血清样品,阳性率为86.3%,高于虎红平板凝集试验检出的阳性率(41.2%).结论 已成功提取了羊布鲁菌膜蛋白,其具有良好的反应原性,并建立了血清抗体间接ELISA检测方法.
作者：杨艳玲；唐婕；白光彦；盛雪玲；王成福；王兴龙 刊期： 2010年第04期
鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)及草鱼性腺细胞(CO)可用于鱼类疱疹病毒、草鱼出血病病毒、鲤春病毒血症病毒等常见鱼类病毒的分离培养.探讨EPC及CO细胞的适宜冻存条件,可减少由于细胞在体外传代次数增加和外界环境的改变而引起的细胞生物学特性变化,从而提高上述病毒的分离效率.比较两种细胞的冻存效果,也可以从侧面了解两种细胞在培养特性上的差异.为此,本文进行了不同血清浓度和冻存方法对细胞贴壁率的影响试验,现报道如下.
作者：朱霞；迟源；王好；周井祥 刊期： 2010年第04期
目的 建立中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法.方法 参照已发表的中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)基因序列,针对其结构蛋白基因设计1对特异性引物,提取感染CSBV的囊状幼虫RNA,反转录为cDNA,以其为模板,进行PCR扩增,对检测方法进行优化,验证该方法的特异性及敏感性,并对31份临床样品进行检测.结果 所建立的CSBV RT-PCR检测方法特异性和敏感性良好,以含CSBV结构蛋白基因的重组质粒为模板,低可检出10 pg DNA.临床症状诊断和电镜观察均为阴性的22份样品经RT-PCR检测,有2份扩增出目的条带.结论 已建立了中蜂囊状幼虫病毒RT-PCR检测方法,为CSBV检测、流行病学调查及动物模型的建立奠定了基础.
作者：马呜潇；李明；袁春颖；李鹏飞；张轶博；苏玉虹；曲祖乙 刊期： 2010年第04期
目的 探讨共表达蛋白二硫键异构酶(PDI)对干扰素β与人血清白蛋白(IFNβ-HAS)融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响.方法 根据GenBank公布的毕赤酵母PDI序列设计引物,利用PCR方法从毕赤酵母基因组中扩增目的基因片段,插入表达载体pPICZαA,并整合入融合蛋白(IFNβ-HAS)基因工程菌中,筛选共表达PDI的重组酵母菌,甲醇诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA法检测IFNβ-HAS的表达量.结果 经PCR鉴定,重组表达质粒pPICZαA-PDI已转入毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HAS中.经SDS-PAGE分析,PDI在菌体内大量表达,原始菌株和共表达菌株均明显表达融合蛋白IFNβ-HAS,共表达PDI菌株表达量提高了60%,ELISA法测定达(22.49±3.52)mg/L.结论 共表达PDI能促进外源蛋白的分泌表达,为进一步研究在毕赤酵母中过量表达分子伴侣对其分泌外源蛋白的影响奠定了基础.
作者：屈琳；雷楗勇；张琦；丁月娣；马晓峰；陈蕴；金坚 刊期： 2010年第04期
目的 观察我国治疗用卡介苗(CT-BCG)预防浅表性膀胱癌术后复发情况及其不良反应.方法 对117例浅表性膀胱癌患者术后给予CT-BCG治疗,另对53例患者采用丝裂霉素C(MI-C)治疗,作为对照.CT-BCG组每次用药120 mg,MI-C组40 mg.用导管灌注膀胱,2 h后自行排出.术后2或3周开始,不同时间用药1次,直至1年.观察两组的复发情况及不良反应发生率.结果 CT-BCG组复发率为18.8%,MI-C组为13.2%,二者差异无统计学意义;不良反应主要为膀胱炎症状(尿痛、尿频、血尿等)及低热,MI-C组无低热患者,且膀胱炎症状也较CT-BCG组轻.结论 CT-BCG预防浅表性膀胱癌术后复发药效良好,无严蕈不良反应发生.
作者：黄建；王国治；许纯兰；金杰 刊期： 2010年第04期
Exosomes是由细胞多囊体形成的一种膜性小囊泡,其来源十分广泛.Exosomes的功能初被认为仅仅是降解内吞物质,但经多年来的研究发现,exosomes的特异功能与其来源细胞密切相关.其携带多种独特的蛋白,如黏附蛋白、热休克蛋白等,它们在信号传导中起重要作用.由于exosomes能够传递抗原给T细胞,使其在免疫系统中也具有重要作用,可作为一种免疫治疗的新手段,应用于肿瘤治疗和免疫耐受等方面.本文主要对exosomes诱导抗肿瘤免疫应答和免疫抑制两方面的功能机制作一综述.
作者：朱磊；李响；刘朋飞 刊期： 2010年第04期
目的 分析高血脂、高血糖及高血糖合并高血脂患者血清ANGPTL3含量与人类脂代谢、糖代谢紊乱的相关性.方法 根据体检结果将观察对象分为健康对照(C)组、高血脂(HL)组、高血糖(HG)组和高血糖合并高血脂(HG-HL)组,采用双抗体夹心ELISA法检测各组血清ANGPTL3含量.结果 HL、HG及HG-HL组患者血清ANGFTL3含量明显高于C组,且差异有统计学意义;仅HG组女性血清ANGPTL3含量显著高于男性,其余各组男性与女性血清ANGPTL3含量差异无统计学意义.结论 高血脂、高血糖及高血糖合并高血脂人群血清ANGPTL3水平高于正常人,ANGPTL3可能在人类糖和脂类代谢紊乱的发病过程中发挥重要作用.
作者：肖亚雄；王继红；孔渝菡 刊期： 2010年第04期
目的 探讨氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞的抑制作用及其机制.方法 采用MTT法检测氨氯地平对小鼠肝癌H_(22)细胞增殖的影响.建立肝癌H_(22)荷瘤小鼠模型,观察氨氯地平对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织的病理改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平.结果 氨氯地平作用48 h可显著抑制小鼠肝癌H22细胞增殖,且呈剂量依赖性,其半数抑制浓度为5.6×10~(-3) mg/ml.体内试验显示,氨氯地平(3和10 mg/kg·d)灌胃给药10 d能显著抑制H_(22)荷瘤小鼠肿瘤生长;HE染色可见,氨氯地平给药组小鼠肿瘤细胞核染色变浅,细胞排列紧密;免疫组化显示,氨氯地平给药组小鼠肿瘤组织内bcl-2蛋白表达下调,而bax蛋白表达上调.结论 氨氯地平具有明显的抑瘤作用,其抑瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡相关.
作者：李卫平；黄文静；孙洋；孙文娟 刊期： 2010年第04期
目的 原核表达并纯化小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区(sIL-13Rα2).方法 将sIL-13Rα2基因克隆入原核表达载体pROEX HTa,构建重组表达质粒pROEX HTa/sIL-13Rα2,经双酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.薄层扫描分析目的蛋白的表达量,并对其进行表达形式分析及Western blot鉴定.镍柱亲和层析纯化目的蛋白.结果 重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确.表达的sIL-13Rα2蛋白相对分子质量约为36 200;诱导6 h,重组蛋白的表达量高,约占菌体总蛋白的45%;重组蛋白以包涵体形式存在,可与大鼠抗小鼠sIL-13Rv2单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度大于95%.结论 已成功表达并纯化了sIL-13Rα2,为进一步探讨其治疗支气管哮喘奠定了基础.
作者：王丽丽；魏亚强；蔡累；宋爱玲；王伟华；张英起；李志奎 刊期： 2010年第04期
目的 分析猪瘟疫苗免疫反应低下猪CD3~+CD4~+和CD4~+CD25~+巴细胞亚群的分布.方法 将接种过猪瘟疫苗的种母猪经ELISA和血清中和试验检测筛选出猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪.从中挑选出15头作为研究对象,以15头抗体阳性猪作为对照.采集猪的抗凝血,分离外周血淋巴细胞(PBL),流式细胞术检测30头猪PBL中CD3~+CD4~+和CD4~+CD25~+淋巴细胞亚群的分布.结果 CSFV抗体阴性猪PBL中CD3~+CD4~+细胞的比例(24.09%±1.29%)明显低于CSFV抗体阳性猪(37.49%±1.60%):CSFV抗体阴性猪PBL中CD4~+CD25~+细胞的比例(2.34%±0.20%)明显高于CSFV抗体阳性猪(1.64%±0.13%).结论 PBL中CD3~+CD4~+淋巴细胞亚群的减少及CD4~+CD25~+淋巴细胞亚群的增加,可能是导致猪瘟疫苗免疫反应低下的重要原因.
作者：王惟；杨知；付明山；郑海英；李芳萍；涂长春 刊期： 2010年第04期
目的 研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 将不同浓度的硫代磷酸化修饰的MMP-2 ASODN转染人人中低分化胃腺癌SGC7901细胞株,RT-PCR法检测细胞MMP-2基因mRNA的转录水平;Transwell试验检测细胞体外迁移和侵袭能力变化;MTT法检测细胞的增殖活性.结果 转染MMP-2ASODN后,SGC7901细胞中MMP-2基因mRNA的转录水平显著降低,细胞的体外迁移和侵袭能力受到抑制,且抑制作用随ASODN浓度的增加而增强;而细胞的增殖活性无明显变化.结论 MMP-2 ASODN可抑制胃腺癌SGC7901细胞MMP-2基因mRNA的转录水平及细胞的体外迁移和侵袭能力,但与胃癌细胞的增殖活性无明显相关性.
作者：刘倩；吴小翎；罗红春；连海峰 刊期： 2010年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
