安群星；穆士杰；张献清；陈蕤；夏爱军；张清平；陈晨；雷迎峰；黎志东；徐志凯
猪链球菌2型的毒力因子主要包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(HLY)以及多种具有毒性作用的蛋白片段.荚膜多糖是猪链球菌2型抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质,也是猪链球菌进行分型的标志.溶菌酶释放蛋白和细胞外因子多出现于高致病力的毒株中,MRP和EF阳性菌株一般具有较高的毒力.溶血素具有较强的细胞毒性作用,其对微血管内皮细胞的破坏作用有利于细菌在组织内的扩散.其他多种毒力因子虽也具有致病作用和免疫原性,但还有待于进一步研究.由于猪链球菌2型致病机理复杂,毒株表型多样,尚未发现可区分毒力株、弱毒力株和无毒力株的标志性因子.对猪链球菌2型的毒力因子进行深入研究,对于阐明猪链球菌2型的致病机理,寻找到快速有效的诊断治疗方法以及疫苗的构建都有重要意义.
作者：高尚庆；雷连成；韩文瑜 刊期： 2006年第06期
新生小牛血清是生物制品生产中的一种重要原材料,其质量的好坏直接影响到制品的质量,尤其是活疫苗的生产.为提高疫苗的质量,我们用3种大肠杆菌宿主菌,采用增殖法对新生小牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测.现将结果报道如下.
作者：李福安；李玉凡；杨平学；潘丽静 刊期： 2006年第06期
目的 建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值.方法 将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+ -NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性.结果 经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%.结论 以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础.
作者：吴利先；王国富；白丽；王晶；潘云华；郭利军 刊期： 2006年第06期
目的 用自制的快速层析介质对人血浆白蛋白进行分离纯化.方法 低温离心去掉冷沉淀后的人血浆,在不同淋洗条件下,经过两步弱阴离子交换和一步弱阳离子交换层析分离,并经凝胶过滤层析柱进一步纯化.结果 经3步层析后,所得含白蛋白组分的纯度已达到98.44%,回收率为91.40%.4步层析后,白蛋白纯度可接近于100%.结论 所采用的分离纯化方法和介质适用于人血浆白蛋白的纯化.
作者：赵彦鼎；杨博；李凯锋；陈学忠；刘萍；郭立安 刊期： 2006年第06期
目的 在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.方法 提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板,PCR扩增纤维素酶Cel6A基因,克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,用电击法将线性Cel6A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株,克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株,培养传代.选择稳定株,培养3 d后取培养液上清,用His-Bind Quick Cartridge 300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.结果 一步His-Bind Quick Cartridge 300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A,SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60 000,收率为200mg/L,用羧甲基纤维素法测活性为500 U/mg,用滤纸法测活性为1 U/mg.结论 已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.
作者：母敬郁；王曦；王峤；陈阳；王恩思 刊期： 2006年第06期
目的 建立一种半定量检测甲型肝炎病毒(HAV)RNA的RT-PCR-ELISA方法.方法 将5'端磷酸化的特异性探针包被在氨基化的微孔板上,以生物素标记的探针为引物,提取样品中的HAV RNA,反转录并扩增HAV DNA,变性后的PCR产物与探针杂交,并被捕获在微孔板上,再与酶标亲和素结合,显色测定.结果 所建立的方法结果判断客观,灵敏度比凝胶电泳法高一个数量级,分析不同时间检测结果,差异无显著意义.结论 已建立了半定量检测HAV RNA的RT-PCR-ELISA方法.
作者：吴星；毛群颖；张华远 刊期： 2006年第06期
目的 克隆表达结核分枝杆菌38 kD抗原基因,并以此蛋白为抗原,进行分枝杆菌的血清学诊断.方法 采用PCR自结核分枝杆菌基因组DNA中扩增38 kD抗原基因,经测序鉴定正确后,克隆于pGEX-4T-2表达载体,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,利用GSTrapFF蛋白柱纯化表达产物,经ELISA检测其抗原的灵敏度与特异性.结果 目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的28%,ELISA检测灵敏度为79.8%,特异性为99.0%.结论 重组38 kD抗原可用于结核分枝杆菌的诊断.
作者：岳乔红；苏明权；杨军兰；程晓东；段艳；郝晓柯 刊期： 2006年第06期
目的 建立稳定的干扰素脂质体质控体系.方法 采用电子显微镜、粒度分析仪、气相色谱仪以及酶标仪等仪器和检测手段,对干扰素脂质体的形态、粒径、包封率、有机物的残留量以及稳定性等进行分析.结果 干扰素脂质体透射电镜下观察为圆形,直径50～350 nm,粒径呈正态分布,平均粒径为200～210 nm,跨距为0.80～1.10,包封率达到90%以上.有机物残留量低于《中国药典》二部(2005版)规定的标准.在2～8℃下保存6个月,渗漏率不高于20%,而总活性基本不变.结论 该干扰素脂质体的质控体系的检测项目比较全面,检测结果稳定,可用于产品的质量控制.
作者：李云富；张水华；李久立；杨虹；易艳蓉；王妍 刊期： 2006年第06期
目的 构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并进行表达及纯化.方法 应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇,并进行定点突变.以栝楼基因组DNA为模板,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并对表达产物进行Ni-NTA层析纯化.结果 目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白.结论 已成功构建了TCS突变体基因,并获得高效表达.
作者：安群星；穆士杰；张献清；陈蕤；夏爱军；张清平；陈晨；雷迎峰；黎志东；徐志凯 刊期： 2006年第06期
目的 比较3种培养方法培养脊髓灰质炎病毒过程中病毒繁殖动力学特性.方法 分别用悬浮吸附法、静止吸附法和非吸附法培养脊髓灰质炎病毒(Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型),分别在间隔12 h时取样,至细胞完全病变或96 h,用微量细胞病变法检测感染性滴度,绘制病毒一步生长曲线.结果 悬浮吸附法病毒增殖快,2:1分种率时,60 h细胞完全病变,滴度高,分别为Sabin Ⅰ型9.000 LgCCID50/ml、SabinⅡ型8.500 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型8.750 LgCCID50/ml;1:1分种率时,Sabin Ⅰ型在60 h完全病变,滴度为8.875 LgCCID50/ml,SabinⅡ型和中Ⅲ2型在70 h完全病变,滴度分别为8.000 LgCCID50/ml和8.125 LgCCID50/ml;静止吸附法1与静止吸附法2差异不明显,96 h时,仍有约10%～20%细胞未发生病变,静止吸附法1滴度为Sabin Ⅰ型7.125 LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.500 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375 LgCCID50/ml,静止吸附法2滴度为Sabin Ⅰ型7.250 LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.875 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型7.000 LgCCID50/ml;非吸附培养法,在96 h,有20%细胞未发生病变或病变程度较轻.滴度为Sabin Ⅰ型7.250 LgCCID50/ml、SabinⅡ型5.625 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375 LgCCID50/ml.在12 h,悬浮吸附法(分种率2:1)培养三型病毒滴度已分别达到6.000、6.125和6.250 LgCCID50/ml,略高于悬浮吸附法(分种率1:1)达到的值,而静止吸附法及非吸附法培养至36 h,病毒滴度才达到相近的水平.结论 在3种培养方法中,悬浮吸附法明显优于静止吸附法和非吸附法.
作者：兰芸；胡凝珠；胡云章；瞿素；段金梅；李蓝江 刊期： 2006年第06期
目的 制备人用狂犬病毒脂质体疫苗,并考察其制剂学及毒理学性质.方法 以氢化大豆磷脂、胆固醇、十八胺为原料,采用反相蒸发法(REV)制备脂质体,加入纯化狂犬病毒抗原,以冻干重建法(DRV)制备狂犬病毒脂质体疫苗.在电镜下观察其形态,测定其包封率和体外释放率,用激光衍射粒度分析仪测定其粒径分布及平均粒径,并进行局部刺激性、过敏反应及异常毒性试验.结果 所制备的狂犬病毒脂质体疫苗形态呈圆形或椭圆形,粒径分布均匀,平均粒径为12.25 μm左右,包封率在60%以上.无刺激性,无异常毒性,过敏反应检测合格.结论 所制备的狂犬病毒脂质体疫苗性质稳定,可作进一步研究.
作者：郭秀侠；福泉；陈妍；徐军；夏滨；姜媛丽；胡晓明；于洪涛；盛军 刊期： 2006年第06期
目的 研制荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物.方法 采用液体表面膜培养方法培养荚膜组织胞浆菌,培养液经盐析和弱酸沉淀法纯化,再经透析和除菌,制成荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物原液,并进行豚鼠的皮肤反应试验和安全性检测.结果 荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物的蛋白纯度达80%以上,其1μg/ml的浓度诱导的豚鼠皮肤反应与国外同类制品等效,且具有良好的安全性.结论 荚膜组织胞浆菌素纯蛋白衍生物可作为体内诊断制品,用于检查人体荚膜组织胞浆菌的感染以及荚膜组织胞浆菌病的临床诊断.
作者：陈保文；沈小兵；苏城；王国治 刊期： 2006年第06期
目的 建立高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体的工程细胞株.方法 将构建的抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因真核表达载体转染CHO细胞,并采用DHFR/MTX基因扩增策略,经反复加压和克隆筛选,提高抗体的表达量.用ELISA、Western blot和体外中和试验分析比较抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体与鼠亲本单抗的特性.结果 获得的表达抗人TNF-α嵌合抗体的转染细胞系2F5,在静止培养4 d后工程抗体的表达量约80 mg/L.所表达的工程抗体优于鼠亲本单抗F7/2,并具有良好的特异性和中和活性,其相对亲和力约为2.1×10-10mol/L.结论 已成功建立了高表达的嵌合抗体工程细胞株,其抗体具有潜在的临床应用前景.
作者：聂艳桃；何太平；谢荣麟；葛永红；容新宗；陶昆蓉；刘宇虹；王琰；Sendi Montanie；Vladka Curin-Serbec 刊期： 2006年第06期
本文对近年来倍受关注的抗激素、抗卵细胞透明带和抗精子疫苗的安全性、有效性及作用机理的研究进展作一综述.
作者：邢冬红；白虹 刊期： 2006年第06期
目的 对我国目前生物制品生产用细胞外源因子污染情况进行检测.方法 按照《中国生物制品规程》2000版规定的细胞外源因子检测方法,对我国生物制品生产用细胞进行细菌、真菌、支原体及一般外源病毒污染检测.结果 自2003～2006年3月间共检测了用于生物制品生产用细胞库细胞79株.结果显示,被检测的79株细胞中,支原体污染细胞10株,污染阳性率为12.7%;外源病毒污染细胞5株,污染率为6.3%;这5株外源病毒污染的细胞中,2株293细胞体外接种至人二倍体细胞后,致细胞形态明显异常;2株Vero细胞接种鸡胚后,致鸡胚全部死亡;1株Vero细胞接种乳鼠及成鼠后第7天,致接种动物全部死亡,组织病理学检查结果显示,接种待检细胞组小鼠脑组织有不同程度的病变.结论 目前我国生物制品生产用细胞存在一定程度的外源因子污染.
作者：孟淑芳；李修兰；冯建平；林林；郎淑惠；王佑春；李德富 刊期： 2006年第06期
目的 克隆人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB/AD-1片段并构建其原核表达系统.方法 用PCR法从人巨细胞病毒AD169株基因组DNA中扩增gB/AD-1片段并克隆至pGEM-T载体,酶切后,亚克隆至表达载体pET-15b,构建重组表达质粒pET-15b/gB/AD-1,并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达.表达产物经金属螯合层析一步纯化,并用Western blot鉴定.结果 gB/AD-1蛋白表达量达到35%.表达产物经纯化后,纯度大于95%.经Western blot检测,表达产物与CMV阳性人血清发生特异性反应.结论 已成功构建重组表达载体pET-15b/gB/AD-1,并在大肠杆菌中高水平表达gB/AD-1.
作者：刘兰军；何太平；杨春；雍雪飞；何敏；葛永红 刊期： 2006年第06期
目的 利用水痘-带状疱疹病毒(VZV)gE糖蛋白基因鉴别水痘减毒活疫苗.方法 以提取的病毒DNA为模板,PCR扩增gE糖蛋白基因.经琼脂糖凝胶电泳鉴定.结果 水痘减毒活疫苗Oka株VZV(病毒滴度≥2.0 lgPFU/ml)通过琼脂糖电泳均可见特异性的条带.使用同样的方法检测麻疹减毒活疫苗、麻疹-腮腺炎联合疫苗、风疹减毒活疫苗以及Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒(病毒滴度≥4.2 lgCCID50/ml),结果均为阴性.结论 gE糖蛋白基因可以作为VZV的特异性指标,进行病毒鉴别试验.
作者：金于兰；陈哲文；瞿爱东；杨忠东 刊期： 2006年第06期
目的 研究重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)凝胶对动物体内单纯疱疹病毒(HSV)感染的疗效.方法 建立HSV-1型豚鼠皮肤感染模型和HSV-2型小鼠阴道炎模型,考察rhIFNα2a凝胶抗HSV作用.将模型豚鼠与小鼠各自分为3个试验组,分别用3×105、2×105和1×105 IU/g的rhIFNα2a凝胶治疗,并设平行对照(阿昔洛韦)与空白对照(未治疗)组.评价各组的疗效.结果 与空白对照组比较,rhIFNα2a凝胶2×105和3×105 IU/g剂量组可明显减少豚鼠皮肤组织中病毒含量,降低小鼠的死亡率,延长生存期.rhIFNα2a凝胶与阿昔洛韦的疗效差异无显著意义.结论 rhIFNα2a凝胶具有抑制HSV-1致皮肤病变作用,可缩短病程,对HSV-2所致小鼠阴道炎有较好疗效.
作者：张淑子；李凡；易世红 刊期： 2006年第06期
目的 验证酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量的试剂盒的质量.方法 选取卵清蛋白标准品及20批全病毒流感灭活疫苗,对北京天坛生物制品股份有限公司生产的卵清蛋白ELISA试剂盒(简称天坛试剂盒)进行验证,确定该试剂盒的佳检测区间、精密度、准确度及稳定性,并与德国Seruzym试剂盒进行比较,确定二者之间是否有相关性.结果 天坛试剂盒的佳检测区间为2.5～20 ng/ml,试验间精密度分别为0.37%～9.79%、1.25%～5.57%和0.70%～5.51%,均小于10%;试验内精密度为1.28%;配制5、10和20 ng/ml 3个浓度的标准品,由同一实验人员分别进行9次准确度验证,回收率分别为105.67%、108.61%和98.67%;37℃放置3 d与4℃保存的试剂盒检测结果之间差异无显著意义(t=2.075,P=0.051 8);与进口试剂盒检测结果之间存在正相关关系(r=0.989,t=24.56,P＜0.000 1)和直线回归关系(b=0.629,F=602.97,P＜0.000 1),直线回归方程为(y)=0.629x-13.77.结论 天坛试剂盒具有较好的精密度、准确度及稳定性;检测结果与进口试剂盒存在正相关和直线回归关系,可以用于卵清蛋白的常规检测.
作者：田博；施彤；王晋；冯素英；董小曼；张国强 刊期： 2006年第06期
目的 评价HIV抗原/抗体联合检测快速法(VIDAS HIV Duo Quick)和超敏法(VIDAS HIV Duo Ultra)试剂的特异性及敏感性.方法 用这2种试剂和HIV抗体参比试剂,分别检测287份HIV感染或疑似感染者样品、1 240份非HIV感染者血清/血浆样品,对与参比试剂检测结果不一致样品,进行抗体的确认及HIV p24抗原和RNA的检测,并比较其特异性和敏感性.用这2种试剂和HIV-1 p24抗原参比试剂,分别检测3株病毒培养上清的系列稀释样品,并比较其检测 p24抗原敏感性的差异.结果 共检测1 277份HIV抗体阴性样品和250份HIV抗体阳性样品,与参比试剂相比,快速法试剂的特异性为99.45%,敏感性为100%,而超敏法试剂的特异性为99.14%,敏感性为99.20%.两种试剂检测病毒株培养上清的敏感性均不低于HIV-1 p24抗原参比试剂,且能检出HIV感染窗口期样品.结论 这2种试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性均没有明显降低,并且能检测出HIV感染窗口期样品.
作者：许四宏；宋爱京；李秀华；李敬云；鲍作仪；貌盼勇；赵擎；胡燕；王佑春 刊期： 2006年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
