邢冬红；白虹
新生小牛血清是生物制品生产中的一种重要原材料,其质量的好坏直接影响到制品的质量,尤其是活疫苗的生产.为提高疫苗的质量,我们用3种大肠杆菌宿主菌,采用增殖法对新生小牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测.现将结果报道如下.
作者：李福安；李玉凡；杨平学；潘丽静 刊期： 2006年第06期
目的 研究用毕赤酵母菌表达SARS病毒S2蛋白亚单位.方法 依据GenBank中SARS基因组序列,采用人工合成的方法合成SARS病毒刺突蛋白S3亚单位的基因(1 590 bp),再与CTL表位基因(195 bp)重组后,将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-S2,转化毕赤酵母GS115,并经MD和MM平板筛选及PCR鉴定,得到阳性重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-S2.经诱导、表达,并对表达产物进行分析、鉴定.结果 所构建的重组质粒pPIC9K-S2正确,在毕赤酵母中可高效表达,其表达产物与阳性SARS血清产生特异性反应.结论 SARS病毒刺突蛋白S2亚单位可在毕赤酵母中高效表达,产物具有良好的抗原特异性.
作者：王瑞琳；金宁一；赵博；贾雷立；金洪涛；金明兰；屈勇刚 刊期： 2006年第06期
目的 验证酶联法检测流感疫苗中卵清蛋白含量的试剂盒的质量.方法 选取卵清蛋白标准品及20批全病毒流感灭活疫苗,对北京天坛生物制品股份有限公司生产的卵清蛋白ELISA试剂盒(简称天坛试剂盒)进行验证,确定该试剂盒的佳检测区间、精密度、准确度及稳定性,并与德国Seruzym试剂盒进行比较,确定二者之间是否有相关性.结果 天坛试剂盒的佳检测区间为2.5～20 ng/ml,试验间精密度分别为0.37%～9.79%、1.25%～5.57%和0.70%～5.51%,均小于10%;试验内精密度为1.28%;配制5、10和20 ng/ml 3个浓度的标准品,由同一实验人员分别进行9次准确度验证,回收率分别为105.67%、108.61%和98.67%;37℃放置3 d与4℃保存的试剂盒检测结果之间差异无显著意义(t=2.075,P=0.051 8);与进口试剂盒检测结果之间存在正相关关系(r=0.989,t=24.56,P＜0.000 1)和直线回归关系(b=0.629,F=602.97,P＜0.000 1),直线回归方程为(y)=0.629x-13.77.结论 天坛试剂盒具有较好的精密度、准确度及稳定性;检测结果与进口试剂盒存在正相关和直线回归关系,可以用于卵清蛋白的常规检测.
作者：田博；施彤；王晋；冯素英；董小曼；张国强 刊期： 2006年第06期
目的 研究重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)凝胶对动物体内单纯疱疹病毒(HSV)感染的疗效.方法 建立HSV-1型豚鼠皮肤感染模型和HSV-2型小鼠阴道炎模型,考察rhIFNα2a凝胶抗HSV作用.将模型豚鼠与小鼠各自分为3个试验组,分别用3×105、2×105和1×105 IU/g的rhIFNα2a凝胶治疗,并设平行对照(阿昔洛韦)与空白对照(未治疗)组.评价各组的疗效.结果 与空白对照组比较,rhIFNα2a凝胶2×105和3×105 IU/g剂量组可明显减少豚鼠皮肤组织中病毒含量,降低小鼠的死亡率,延长生存期.rhIFNα2a凝胶与阿昔洛韦的疗效差异无显著意义.结论 rhIFNα2a凝胶具有抑制HSV-1致皮肤病变作用,可缩短病程,对HSV-2所致小鼠阴道炎有较好疗效.
作者：张淑子；李凡；易世红 刊期： 2006年第06期
目的 通过对乳腺癌可溶性Fas浓度与血管内皮生长因子(VEGF)及金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)表达之间关系的分析,探讨患者血清中sFas浓度改变对乳腺癌细胞生长、浸润和转移的影响.方法 通过S-P免疫组化法和ELISA法,分别检测乳腺癌细胞VEGF和TIMP-1表达及血清sFas浓度,结合VEGF、TIMP-1与乳腺癌临床病理参数,分析浸润、淋巴结转移乳腺癌中VEGF、TIMP-1表达失衡与血清sFas浓度之间的关系.结果 ①VEGF阳性表达与乳腺癌淋巴结转移呈显著相关,VEGF阳性的肿瘤有淋巴结转移率为56%,明显高于VEGF阳性的肿瘤无淋巴结转移率(7%).随着乳腺癌TNM分期和组织学分级的进展,VEGF阳性表达率逐渐增加,呈正相关.TIMP-1阳性表达与肿瘤淋巴结转移明显相关.随着TNM分期和组织学分级的进展,TIMP-1阳性表达率逐渐降低,呈负相关.②VEGF阳性表达而TIMP-1阴性表达组发生乳腺癌浸润和淋巴结转移率及血清sFas浓度高,VEGF阴性表达而TIMP-1阳性表达组发生淋巴结转移率及血清sFas浓度低,两组比较差异有极显著意义.结论 sFas与VEGF及TIMP-1表达之间存在着反馈机理以及相互激活的密切关系.sFas浓度可以间接地反映基质金属蛋白酶(MMPs)和VEGF的表达情况,sFas在乳腺癌中的浓度变化可以反映乳腺癌的生长、局部浸润和转移.
作者：王心明；陈云波；贾明库；许洪志；刘梦虹 刊期： 2006年第06期
目的 研究BCG-CpG-DNA的免疫学活性.方法 通过淋巴细胞增殖、T细胞亚群分析、细胞因子产生、对NK细胞杀伤功能影响等试验,检测BCG-CpG-DNA的免疫活性.结果 BCG-CpG-DNA能促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,并能增强ConA诱导IFN-γ产生,提高小鼠脾细胞中CD3+、CD4+、CD8+ T细胞亚群的含量,同时增强小鼠NK细胞的杀伤活性.实验组与对照组所有结果差异均有显著意义(P＜0.05).结论 BCG-CpG-DNA能活化抗原呈递细胞(APC),并具有较好的免疫活性.
作者：赵爱华；寇丽杰；乔来艳；贾淑珍；王国治 刊期： 2006年第06期
目的 研制安全有效的预防猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组鸡痘病毒活载体疫苗.方法 将PRRSV长春株的GP5和GP3基因插入到含有猪IL-18基因的鸡痘病毒转移载体pUTAL复合启动子下游,构建重组鸡痘病毒转移载体pUTAL-IL-18-GP5-GP3.将该重组质粒与鸡痘病毒(FPV)282-E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.通过3次BrdU加压筛选,经PCR、RT-PCR和IFA方法鉴定重组病毒.结果 从重组鸡痘病毒基因组和总RNA中扩增出340 bp的目的基因片段,感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应,表明目的基因在重组鸡痘病毒中得到表达.结论 已成功构建1株重组鸡痘病毒,并可正确表达PRRSV ORF5/ORF3基因.
作者：沈国顺；金宁一；秦晓光；庄天中；尹荣兰；马鸣潇 刊期： 2006年第06期
目的 建立高表达抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体的工程细胞株.方法 将构建的抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因真核表达载体转染CHO细胞,并采用DHFR/MTX基因扩增策略,经反复加压和克隆筛选,提高抗体的表达量.用ELISA、Western blot和体外中和试验分析比较抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体与鼠亲本单抗的特性.结果 获得的表达抗人TNF-α嵌合抗体的转染细胞系2F5,在静止培养4 d后工程抗体的表达量约80 mg/L.所表达的工程抗体优于鼠亲本单抗F7/2,并具有良好的特异性和中和活性,其相对亲和力约为2.1×10-10mol/L.结论 已成功建立了高表达的嵌合抗体工程细胞株,其抗体具有潜在的临床应用前景.
作者：聂艳桃；何太平；谢荣麟；葛永红；容新宗；陶昆蓉；刘宇虹；王琰；Sendi Montanie；Vladka Curin-Serbec 刊期： 2006年第06期
目的 制备纯化重组蜂毒素-基因变构IL-2(Melittin-88 ArgIL-2)嵌合蛋白,并检测其生物活性.方法 将含表达载体的大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达.表达产物经离子交换层析与亲和层析进行纯化,SDS-PAGE鉴定,MTT染色法检测嵌合蛋白对Hela细胞增殖的抑制作用.结果 所表达的可溶性蛋白,纯化后纯度达95%,蛋白浓度0.5 g/L.纯化后的嵌合蛋白在体外能抑制Hela细胞的增殖.结论 已成功地制备并纯化了重组melittin-88 ArgIL-2嵌合蛋白,该蛋白具有生物活性,为中试放大和纯化工艺研究奠定了基础.
作者：刘明军；王斌；钱冬萌；丁守怡；闫志勇；宋旭霞 刊期： 2006年第06期
目的 对乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)生产各阶段的中间品进行稳定性观察.方法 将各阶段中间品置4℃保存,于不同时间取样,进行病毒滴度、抗原含量和小鼠免疫原性检测.结果 4℃下病毒收获液14 d内滴度下降8.0%,灭活收获液的抗原含量8周内下降7.3%.浓缩原液、鱼精蛋白处理原液、蔗糖区带离心原液抗原含量在12周内分别下降了9.7%、8.3%和8.3%,加保护剂脱糖原液12周内抗原含量下降了8.4%,稀配半成品24周内抗原含量下降了2.98%,但在12周内均保持了良好的小鼠保护效力.结论 上述样品在4℃下,保存期限内均保持了良好的稳定性.
作者：李芙；王辉；张月兰；钟书声；张颖；韩霞 刊期： 2006年第06期
目的 比较3种培养方法培养脊髓灰质炎病毒过程中病毒繁殖动力学特性.方法 分别用悬浮吸附法、静止吸附法和非吸附法培养脊髓灰质炎病毒(Sabin Ⅰ、Ⅱ、中Ⅲ2型),分别在间隔12 h时取样,至细胞完全病变或96 h,用微量细胞病变法检测感染性滴度,绘制病毒一步生长曲线.结果 悬浮吸附法病毒增殖快,2:1分种率时,60 h细胞完全病变,滴度高,分别为Sabin Ⅰ型9.000 LgCCID50/ml、SabinⅡ型8.500 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型8.750 LgCCID50/ml;1:1分种率时,Sabin Ⅰ型在60 h完全病变,滴度为8.875 LgCCID50/ml,SabinⅡ型和中Ⅲ2型在70 h完全病变,滴度分别为8.000 LgCCID50/ml和8.125 LgCCID50/ml;静止吸附法1与静止吸附法2差异不明显,96 h时,仍有约10%～20%细胞未发生病变,静止吸附法1滴度为Sabin Ⅰ型7.125 LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.500 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375 LgCCID50/ml,静止吸附法2滴度为Sabin Ⅰ型7.250 LgCCID50/ml、SabinⅡ型6.875 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型7.000 LgCCID50/ml;非吸附培养法,在96 h,有20%细胞未发生病变或病变程度较轻.滴度为Sabin Ⅰ型7.250 LgCCID50/ml、SabinⅡ型5.625 LgCCID50/ml、中Ⅲ2型6.375 LgCCID50/ml.在12 h,悬浮吸附法(分种率2:1)培养三型病毒滴度已分别达到6.000、6.125和6.250 LgCCID50/ml,略高于悬浮吸附法(分种率1:1)达到的值,而静止吸附法及非吸附法培养至36 h,病毒滴度才达到相近的水平.结论 在3种培养方法中,悬浮吸附法明显优于静止吸附法和非吸附法.
作者：兰芸；胡凝珠；胡云章；瞿素；段金梅；李蓝江 刊期： 2006年第06期
目的 克隆表达结核分枝杆菌38 kD抗原基因,并以此蛋白为抗原,进行分枝杆菌的血清学诊断.方法 采用PCR自结核分枝杆菌基因组DNA中扩增38 kD抗原基因,经测序鉴定正确后,克隆于pGEX-4T-2表达载体,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,利用GSTrapFF蛋白柱纯化表达产物,经ELISA检测其抗原的灵敏度与特异性.结果 目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的28%,ELISA检测灵敏度为79.8%,特异性为99.0%.结论 重组38 kD抗原可用于结核分枝杆菌的诊断.
作者：岳乔红；苏明权；杨军兰；程晓东；段艳；郝晓柯 刊期： 2006年第06期
目的 检测重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状的稳定性.方法 将工程菌菌株连续传50代,每隔10代挑取单克隆菌落进行诱导表达,并计算质粒丢失率.提取不同代次的质粒,扫描电镜观察,检测融合蛋白表达水平,并进行工程菌的染色镜检及生化鉴定.结果 pET28a-MAGE-1/HSP70/MACE-3/BL21(DE3)融合蛋白工程菌呈典型的大肠杆菌形态,各代次菌的各项检测结果与原始菌种差异无显著意义.结论 重组工程菌pET28a-MAGE-1/HSP70/MAGE-3/BL21(DE3)生物学性状稳定,可作为生产用菌种.
作者：胡沛臻；隋延仿；李侠；张建芳；司少艳；张秀敏 刊期： 2006年第06期
目的 评价HIV抗原/抗体联合检测快速法(VIDAS HIV Duo Quick)和超敏法(VIDAS HIV Duo Ultra)试剂的特异性及敏感性.方法 用这2种试剂和HIV抗体参比试剂,分别检测287份HIV感染或疑似感染者样品、1 240份非HIV感染者血清/血浆样品,对与参比试剂检测结果不一致样品,进行抗体的确认及HIV p24抗原和RNA的检测,并比较其特异性和敏感性.用这2种试剂和HIV-1 p24抗原参比试剂,分别检测3株病毒培养上清的系列稀释样品,并比较其检测 p24抗原敏感性的差异.结果 共检测1 277份HIV抗体阴性样品和250份HIV抗体阳性样品,与参比试剂相比,快速法试剂的特异性为99.45%,敏感性为100%,而超敏法试剂的特异性为99.14%,敏感性为99.20%.两种试剂检测病毒株培养上清的敏感性均不低于HIV-1 p24抗原参比试剂,且能检出HIV感染窗口期样品.结论 这2种试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性均没有明显降低,并且能检测出HIV感染窗口期样品.
作者：许四宏；宋爱京；李秀华；李敬云；鲍作仪；貌盼勇；赵擎；胡燕；王佑春 刊期： 2006年第06期
目的 制备具有中和活性的抗狂犬病病毒(Rabies virus,RV)抗体,并建立检测RV抗原的ELISA法.方法 以RV全病毒免疫2只新西兰家兔,制备抗RV多克隆抗体.以RV全病毒免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,建立稳定分泌抗RV单克隆抗体的杂交瘤细胞株.以小鼠中和试验(MNT)检测抗体的中和活性.以ELISA双抗体夹心法和ELISA竞争法检测RV抗原.结果 2只家兔的多克隆抗体ELISA效价分别为1:6.0×103和1:1.2×104,纯化的兔抗RV IgG中和活性分别为46.3和29.2 IU/ml.获得了9株稳定分泌抗RV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,属于IgG1或IgG2b亚型,腹水的抗体ELISA效价为1:1.0×105～1:1.0×107.单克隆抗体3E5、4C2和4F8具有中和活性,Western blot分析提示,单克隆抗体4C2是针对RV糖蛋白线性表位的抗体.以单克隆抗体4C2作为捕捉抗体,兔多克隆抗体作为检测抗体,建立了ELISA双抗体夹心法,检测RV抗原.同时建立了另一种ELISA竞争法,加入固定工作浓度的单克隆抗体4C2,与RV病毒液孵育,以ELISA间接法检测RV病毒抗原.结论 所获得的狂犬病毒多克隆和单克隆抗体具有中和活性,可在ELISA中用于检测RV抗原.
作者：赵志晶；庄辉；张嘉铭；张洪；高俊芳 刊期： 2006年第06期
本文综述了树突状肿瘤疫苗的研究及应用现状,其中主要包括树突状细胞的生物学特性、体外培养、肿瘤疫苗的制备、临床应用、存在的问题及展望等.
作者：谢英林 刊期： 2006年第06期
目的 利用水痘-带状疱疹病毒(VZV)gE糖蛋白基因鉴别水痘减毒活疫苗.方法 以提取的病毒DNA为模板,PCR扩增gE糖蛋白基因.经琼脂糖凝胶电泳鉴定.结果 水痘减毒活疫苗Oka株VZV(病毒滴度≥2.0 lgPFU/ml)通过琼脂糖电泳均可见特异性的条带.使用同样的方法检测麻疹减毒活疫苗、麻疹-腮腺炎联合疫苗、风疹减毒活疫苗以及Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒(病毒滴度≥4.2 lgCCID50/ml),结果均为阴性.结论 gE糖蛋白基因可以作为VZV的特异性指标,进行病毒鉴别试验.
作者：金于兰；陈哲文；瞿爱东；杨忠东 刊期： 2006年第06期
本文对近年来倍受关注的抗激素、抗卵细胞透明带和抗精子疫苗的安全性、有效性及作用机理的研究进展作一综述.
作者：邢冬红；白虹 刊期： 2006年第06期
目的 建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值.方法 将从临床分离菌株中获得的HpaA基因在大肠杆菌中表达,用Ni2+ -NTA柱纯化表达的HpaA作为抗原,建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法,与诊断标准比较评价其应用的可行性.结果 经超声破碎后,用SDS-PAGE分析显示,HpaA蛋白主要存在于上清中,纯化抗原检测临床标本中HpaA抗体的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%.结论 以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的ELISA间接法敏感性、特异性高,为制备商品化的试剂盒奠定了基础.
作者：吴利先；王国富；白丽；王晶；潘云华；郭利军 刊期： 2006年第06期
目的 克隆人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB/AD-1片段并构建其原核表达系统.方法 用PCR法从人巨细胞病毒AD169株基因组DNA中扩增gB/AD-1片段并克隆至pGEM-T载体,酶切后,亚克隆至表达载体pET-15b,构建重组表达质粒pET-15b/gB/AD-1,并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达.表达产物经金属螯合层析一步纯化,并用Western blot鉴定.结果 gB/AD-1蛋白表达量达到35%.表达产物经纯化后,纯度大于95%.经Western blot检测,表达产物与CMV阳性人血清发生特异性反应.结论 已成功构建重组表达载体pET-15b/gB/AD-1,并在大肠杆菌中高水平表达gB/AD-1.
作者：刘兰军；何太平；杨春；雍雪飞；何敏；葛永红 刊期： 2006年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
