田博；丁志芬
目的减轻短棒状杆菌全菌体制剂接种后的局部疼痛等副作用.方法采用超声破碎、蛋白水解及脱脂的方法提取了细胞壁,通过脾激活试验及抑瘤试验,检测纯化的短棒状杆菌细胞壁活性对家兔股四头肌的局部刺激作用及热原反应.结果纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.8,能抑制艾氏腹水瘤的生长,生存率达到80%;家兔股四头肌肌肉注射后未见局部充血坏死;家兔热原试验未见明显发热.结论纯化的短棒状杆菌细胞壁不仅保留了全菌体制剂所具有的活性,而且明显减轻了局部的刺激作用.
作者：王宇宏；高航；倪维华；霍得胜；台桂香 刊期： 2005年第05期
目的获得抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区VH的准确基因.方法结合生物信息学同源比较分析,利用高兼并的FR1 5'端处引物扩增的单抗CAb-1的VH基因,并与数据库中序列比对,在同源性高的抗体序列的信号肽处二次设计引物,用RT-PCR法获得抗体基因VH的准确序列.结果选定了与已知抗体VH高度同源的序列进行引物设计.凝胶电泳可见预期大小DNA条带.经测序表明,配对于信号肽处的扩增产物不仅与配对于抗体可变区FR1的结果一致,而且也纠正了配对于CAb-1的VH的FR1的兼并引物所引入的氨基酸突变.结论所优化设计的引物能够扩增完整的抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区基因,为小分子工程抗体改造奠定了基础.
作者：杨向民；姚西英；邢金良；张思河；冯媛；陈志南 刊期： 2005年第05期
目的建立固相提取法,检测人血浆中的亚甲蓝,并验证此方法的稳定性和精确性.方法根据Waters OasisHLB固相提取小柱的技术参数,针对血浆样品建立小柱的活化、清洗和样品洗脱条件,并以此方法进行固相提取小柱提取亚甲蓝的回收率及血浆中亚甲蓝的添加量和残留量测定.结果当血浆中亚甲蓝浓度大于0.05 μmol/L时,固相提取小柱对亚甲蓝的回收率大于94%,偏差小于5.0%.当血浆中亚甲蓝浓度为1、2、3、4和5μmol/L时,测定值与加入值呈线性相关,r=0.99;当血浆中亚甲蓝浓度为0.4、0.2、0.1、0.05和0.01μmol/L时,测定值与加入值也呈线性相关,r=0.99.结论此方法简便、稳定,灵敏度和精确度高.适用于检测血浆中的亚甲蓝.
作者：谢如锋；汤伟龙；黄宇闻 刊期： 2005年第05期
目的观察Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热病毒在Vero细胞中的增殖动态.方法将Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒分别感染Vero细胞,并同时采用免疫荧光法检测病毒滴度.结果Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒感染Vero细胞后9～16 d内病毒滴度均大于6.0 LgCCID50/ml;用两种不同方法,在感染10～30d中,每隔3 d收获一次病毒液,感染后第13天和第16天收获的病毒液病毒滴度均大于7.0 LgCCID50/ml.结论Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒能够在Vero细胞中增殖并达到高滴度,感染后10～25d病毒毒力保持稳定.
作者：回良杰；陈小芳；高明；单慧；张映；陶臻臻；张建斌 刊期： 2005年第05期
目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达.方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验.在40L发酵罐中进行验证.结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5 mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用.在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用.结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源.
作者：郝淑美；王宣军；张秀霞；方勇；关晓峰；盛军 刊期： 2005年第05期
目的探讨含汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答.方法重组质粒pVAX/G2转染cos-7细胞,用间接免疫荧光法(IFA)检测瞬时表达产物.经碱裂解法提取质粒pVAX/G2,Sepharose CL-4B柱层析纯化后,免疫BALB/c小鼠(SPF),并采用含有人IL-2基因的重组质粒pVAX/IL-2及重组人IL-2蛋白作为DNA疫苗的佐剂,检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答.结果重组质粒pVAX/G2能够在真核细胞中表达.免疫小鼠血清中能够检测到抗汉坦病毒中和抗体、酶标抗体和荧光抗体.淋转刺激指数和脾淋巴细胞上清液中IL-2活性,与空载体pVAX1阴性对照比较差异有显著意义.质粒佐剂pVAX/IL-2能显著提高DNA疫苗的细胞免疫水平.结论含汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生一定强度的体液免疫和细胞免疫应答.
作者：张连忠；赵大鹏；张龙梅；岳立广；赵立红；惠连；孔双泉；王伟；韩亮 刊期： 2005年第05期
医学伦理学原则的应用已成为新疫苗审批的基本要求.疫苗临床研究中必须体现尊重、受益、公正等原则.实践中暴露的伦理学问题主要表现在研究对象选择、临床反应观察、研究结果告知、副反应处理等环节.成立伦理委员会,认证研究者资格,开展宣传教育,签署知情同意书及处理不良事件等措施,可保障疫苗临床研究中伦理学原则的体现.
作者：祖荣强；朱凤才；王敏文 刊期： 2005年第05期
目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度.方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交NIBSC进行总结.结果本实验室对各样本测定的结果与各实验室测定结果均值总体上是一致的,变异系数基本在5%以下.结论本实验室目前采用的病毒滴度测定方法及试剂的敏感性、标准化程度均与国际一致.
作者：周铁群；王剑锋；英志芳 刊期： 2005年第05期
选择素是一类重要的粘附分子,主要介导白细胞与血管内皮细胞的起始粘附.选择素家族包括3个成员(Lselectin、P-selectin和E-selectin),分别表达于白细胞、血小板和血管内皮细胞的表面.选择素所识别和作用的配体是一些糖类化合物.唾液酸化、岩藻糖基化和硫酸化等化学修饰对于配体的功能十分重要.选择素与其配体的相互作用在使白细胞被捕捉的同时,可以转导胞外信号,使白细胞进一步活化并稳定粘附.白细胞粘附与人体的多种生理和病理过程密切相关.
作者：曾宪录；巴雪青；魏民；高艳光；李娜 刊期： 2005年第05期
本文结合目前我国临床安全输血和新生儿溶血病诊断、预防以及人群血型普查等工作的需要,对临床常规应用的单克隆抗-D人血型定型试剂(单克隆抗体)的质量要求和应用要点提出了具体的意见.
作者：李勇；陈维佳 刊期： 2005年第05期
目的构建羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达.方法用PCR方法,从含乙肝病毒全长基因的质粒中扩增出S和pre-S2(Met1-Gly26)2个基因片段,并将S2融合于S基因的3'端,构建SS2嵌合基因.将上述片段克隆到pBluescriptⅡSK(+)载体中,测序后亚克隆到毕赤酵母表达载体pAO815,构建重组表达质粒.用电转化法将重组质粒导入Pichia GS115细胞,构建重组表达菌株GS115-SS2.重组菌株经甲醇诱导后制备抗原初提液,进行ELISA和Western blot分析.结果表达产物经ELISA检测具有S和前S2抗原性.Western blot分析表明,该融合抗原既能与S抗体结合,也能与前S2抗体结合,其相对分子质量约为27000,与理论值相符.抗原初提物的反向血凝(RPHA)效价达1:1 024,约相当于16μg/ml.结论已成功构建羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因,并在毕赤酵母中得到有效表达.
作者：谭昌耀；蒋丽明；葛永红；袁进；金瓯 刊期： 2005年第05期
目的构建C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,并鉴定其表达产物的免疫反应性.方法首先合成C型口蹄疫病毒C-S8C1株VP1基因的3个抗原表位,并克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点酶切后连接,构建出C型VP1双拷贝基因片段(VP1C).将VP1C基因连接到原核表达载体pET-CKS上,构建重组质粒pETCKS-VP1C,转入BL21菌中进行原核表达.采用SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物,并利用包涵体洗涤法对表达产物进行初步纯化.结果VP1C基因在大肠杆菌中获得表达,产量占沉淀蛋白的45%,且表达产物可以被C型口蹄疫病毒标准血清所识别.VP1C重组蛋白纯度达84.1%.结论已成功构建了C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,所表达的VP1C有良好的免疫反应性,可以作为检测C型口蹄疫病毒的候选基因.
作者：郑敏；金宁一；鲁会军；韩松；李昌；金扩世 刊期： 2005年第05期
目的优化rhsTRAIL毕氏酵母工程菌在5 L发酵罐中的发酵表达工艺参数.方法研究培养基种类、细胞密度、甘油含量、pH值、甲醇浓度、甲醇流加速率及诱导时间等参数对工程菌生长及目的蛋白表达的影响,并用电镜观察其诱导肿瘤细胞凋亡特征.结果在无机盐培养基中,按10%接种A600=8～12的种菌后,24h酵母菌增殖至A600=76;甘油含量为1%时,菌体生长速度快(A600=160);培养基pH值5.0,甲醇终浓度为1%时,诱导96h表达量高达到120 mg/L,并具有诱导肿瘤细胞凋亡特征.结论rhsTRAIL毕氏酵母的发酵工艺参数为:无机盐培养基,pH值5.0,接种10%A60o=8～12的种菌,甘油含量1%,甲醇终浓度1%,诱导96h.
作者：付泳航；李茹冰；佟明华；李继东；孔祥平 刊期： 2005年第05期
迄今,核酸疫苗免疫诱导效力偏低,是限制其实际应用的原因之一.尽管目前发展了许多策略,在不同程度上提高了核酸疫苗的免疫效力,但仍然未达到可供实用化的理想效果.而且,质粒载体长期在宿主细胞中存留,存在着可能与宿主细胞染色体DNA随机整合和细胞转化的潜在危险[1].此外,外源基因在体内长期高水平表达,可能会刺激机体产生抗DNA抗体,导致自身免疫病或免疫耐受等问题[2].所以,提高核酸疫苗在机体内的表达水平,加强其免疫效力,同时又能保证核酸疫苗的安全性,已成为核酸疫苗研究中的关键问题.
作者：李卫华；赵连三 刊期： 2005年第05期
由北京科兴生物制品有限公司研制的SARS灭活疫苗已于2004年12月在中日友好医院完成随机、双盲对照的Ⅰ期临床研究,取得了较好的预期结果.
作者：王军志；董关木 刊期： 2005年第05期
作者： 刊期： 2005年第05期
目的对丙型肝炎抗体的酶联免疫试剂和化学发光试剂进行临床考核和比较.方法用国外进口注册的抗HCV酶联免疫试剂和化学发光试剂检测丙型肝炎试剂国家参考品和283份可疑丙肝感染者血样,对不一致样品再用HCV RI-BA和HCV RNA PCR试剂进行确证.结果两种试剂均可达到国家标准,酶联免疫试剂特异性较好,化学发光试剂灵敏度较高.结论两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测.
作者：谷金莲；祁自柏；王尊文；于洋；杨振；张华远；李河民 刊期： 2005年第05期
目前DNA的回收方法主要有柱回收法、玻璃奶回收法等,这些方法回收效率较低,难以保证DNA的回收率及纯度.我们介绍一种简单经济适用,而且回收率较高的方法,并与传统的回收方法进行了比较.
作者：王长松；刘友生；李红；陈燕平 刊期： 2005年第05期
目的构建狂犬病毒糖蛋白基因DNA疫苗,并检测其免疫小鼠的免疫应答.方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入VR1055载体中,构建重组质粒VR1055-CTN,经碱裂解法提取质粒,并经Sepharose4FF柱层析纯化后免疫NIH小鼠,用ELISA法检测体液抗体,用MTT法检细胞免疫,并进行常规效力试验.结果VR1055-CTNDNA疫苗具有较好的诱导狂犬病毒抗体的能力,在诱导细胞免疫中,刺激脾淋巴细胞转化指数和小鼠血清中的IL-2活性均高于空白载体对照,差异有显著意义(P=0.000).效力试验的小鼠存活率分别为73%和25%.结论该疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫,并具有较好的免疫保护效果.
作者：代长海；李宇辉；袁彦宝；郭岩；周明岩；张莹；胡晓明；王进；于洪涛 刊期： 2005年第05期
目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达.方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量.结果构建的嵌合抗体基因在CHO细胞中的初始表达量为0.71μg/ml,亚克隆后表达量达0.95μg/ml.结论已成功构建抗人TNF-α嵌合抗体基因,并在CHO细胞中得到了高效表达.
作者：何太平；聂艳桃；葛永红；谢荣麟；袁涛；王琰；Vesna Galvani；Vladka Curin Serbec 刊期： 2005年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
