作者： 刊期： 2005年第05期
目的观察甲肝-麻疹二联疫苗的稳定性.方法取5批甲肝-麻疹二联疫苗于2～8℃、室温(22℃±2℃)及37℃放置不同时间后,分别进行甲肝病毒和麻疹病毒滴度测定.结果该二联疫苗于2～8℃放置22个月、室温放置4个月及37℃放置7 d,疫苗中两种病毒滴度基本保持不变.结论甲肝-麻疹二联疫苗具有与其相应单价疫苗同样良好的稳定性.
作者：刘令九；谢宝生；李淑焱；王玮；王拥军；王晓萍；刘景晔 刊期： 2005年第05期
目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-PCR一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型.方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIV RT-PCR一步法.根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解位点两侧,应用RT-PCR一步法检测AIV H5和H9亚型,并验证所建立方法的敏感性;通过检测NDV、IBV和IBDV等RNA病毒及计算机软件模拟检测,验证其特异性.结果所建立AIV系列RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便和快速的特点.结论该方法可用于AIV的检测,H5、H9亚型的鉴定及致病性分析.
作者：马鸣潇；金宁一；王振国；朱光泽；费东亮；郑敏；尹革芬；葛淑敏；金扩世；夏志平；金明兰 刊期： 2005年第05期
目前DNA的回收方法主要有柱回收法、玻璃奶回收法等,这些方法回收效率较低,难以保证DNA的回收率及纯度.我们介绍一种简单经济适用,而且回收率较高的方法,并与传统的回收方法进行了比较.
作者：王长松；刘友生；李红；陈燕平 刊期： 2005年第05期
目的减轻短棒状杆菌全菌体制剂接种后的局部疼痛等副作用.方法采用超声破碎、蛋白水解及脱脂的方法提取了细胞壁,通过脾激活试验及抑瘤试验,检测纯化的短棒状杆菌细胞壁活性对家兔股四头肌的局部刺激作用及热原反应.结果纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.8,能抑制艾氏腹水瘤的生长,生存率达到80%;家兔股四头肌肌肉注射后未见局部充血坏死;家兔热原试验未见明显发热.结论纯化的短棒状杆菌细胞壁不仅保留了全菌体制剂所具有的活性,而且明显减轻了局部的刺激作用.
作者：王宇宏；高航；倪维华；霍得胜；台桂香 刊期： 2005年第05期
目的对丙型肝炎抗体的酶联免疫试剂和化学发光试剂进行临床考核和比较.方法用国外进口注册的抗HCV酶联免疫试剂和化学发光试剂检测丙型肝炎试剂国家参考品和283份可疑丙肝感染者血样,对不一致样品再用HCV RI-BA和HCV RNA PCR试剂进行确证.结果两种试剂均可达到国家标准,酶联免疫试剂特异性较好,化学发光试剂灵敏度较高.结论两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测.
作者：谷金莲；祁自柏；王尊文；于洋；杨振；张华远；李河民 刊期： 2005年第05期
目的获得抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区VH的准确基因.方法结合生物信息学同源比较分析,利用高兼并的FR1 5'端处引物扩增的单抗CAb-1的VH基因,并与数据库中序列比对,在同源性高的抗体序列的信号肽处二次设计引物,用RT-PCR法获得抗体基因VH的准确序列.结果选定了与已知抗体VH高度同源的序列进行引物设计.凝胶电泳可见预期大小DNA条带.经测序表明,配对于信号肽处的扩增产物不仅与配对于抗体可变区FR1的结果一致,而且也纠正了配对于CAb-1的VH的FR1的兼并引物所引入的氨基酸突变.结论所优化设计的引物能够扩增完整的抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区基因,为小分子工程抗体改造奠定了基础.
作者：杨向民；姚西英；邢金良；张思河；冯媛；陈志南 刊期： 2005年第05期
目的分析刃天青在硫乙醇酸盐培养基中的作用.方法按2000版<中国生物制品规程>中培养基灵敏度的测定方法,将0.1%刃天青以不同量加入硫乙醇酸盐培养基中,用厌氧菌株生孢子梭状芽胞杆菌、需氧菌株短芽胞杆菌及乙型溶血性链球菌分别进行不同含量刃天青、煮沸驱氧与未驱氧的灵敏度比较.结果不同刃天青含量与未加刃天青、煮沸驱氧与未驱氧的硫乙醇酸盐培养基的灵敏度无明显差异.结论用以上3个标准菌株检测不同刃天青含量的硫乙醇酸盐培养基的灵敏度,其指示剂的作用不明显.
作者：代淑艳；王殿钧；解华；宋伟平；贾滨；姜远航；张洪超 刊期： 2005年第05期
目的克隆Leptin基因,构建其重组表达菌株,并对表达产物进行免疫学鉴定.方法利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中扩增出人瘦素前体(pre-Leptin)的cDNA片段和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,并插入pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达重组人瘦素(rh-Leptin)的菌株.结果DNA序列分析显示获得的pre-Leptin和成熟基因片段的序列与预计序列一致,菌株诱导后经SDS-PAGE检测,rh-Leptin表达量达菌体总蛋白的40%以上.Western blot分析显示重组Leptin具有免疫学活性.结论已获得高效表达Leptin的重组菌株.
作者：曹剑峰；王革非；文力；李均；吴海祥；李清雄；王贞慧 刊期： 2005年第05期
作者： 刊期： 2005年第05期
目的探讨含汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答.方法重组质粒pVAX/G2转染cos-7细胞,用间接免疫荧光法(IFA)检测瞬时表达产物.经碱裂解法提取质粒pVAX/G2,Sepharose CL-4B柱层析纯化后,免疫BALB/c小鼠(SPF),并采用含有人IL-2基因的重组质粒pVAX/IL-2及重组人IL-2蛋白作为DNA疫苗的佐剂,检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答.结果重组质粒pVAX/G2能够在真核细胞中表达.免疫小鼠血清中能够检测到抗汉坦病毒中和抗体、酶标抗体和荧光抗体.淋转刺激指数和脾淋巴细胞上清液中IL-2活性,与空载体pVAX1阴性对照比较差异有显著意义.质粒佐剂pVAX/IL-2能显著提高DNA疫苗的细胞免疫水平.结论含汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生一定强度的体液免疫和细胞免疫应答.
作者：张连忠；赵大鹏；张龙梅；岳立广；赵立红；惠连；孔双泉；王伟；韩亮 刊期： 2005年第05期
目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达.方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量.结果构建的嵌合抗体基因在CHO细胞中的初始表达量为0.71μg/ml,亚克隆后表达量达0.95μg/ml.结论已成功构建抗人TNF-α嵌合抗体基因,并在CHO细胞中得到了高效表达.
作者：何太平；聂艳桃；葛永红；谢荣麟；袁涛；王琰；Vesna Galvani；Vladka Curin Serbec 刊期： 2005年第05期
目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度.方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交NIBSC进行总结.结果本实验室对各样本测定的结果与各实验室测定结果均值总体上是一致的,变异系数基本在5%以下.结论本实验室目前采用的病毒滴度测定方法及试剂的敏感性、标准化程度均与国际一致.
作者：周铁群；王剑锋；英志芳 刊期： 2005年第05期
目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化.方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein A Sepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCP IgG,通过SDS-PAGE和Western blot分析Vero细胞乙型脑炎疫苗及Vero细胞SARS疫苗各中间产品的蛋白、HCP及病毒抗原成分的含量变化.结果Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗中间产品中均存在一定量HCP,不同的纯化工艺均可以去除大部分HCP,随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP.结论Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗均存在一定量HCP.
作者：田博；丁志芬 刊期： 2005年第05期
目的观察Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热病毒在Vero细胞中的增殖动态.方法将Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒分别感染Vero细胞,并同时采用免疫荧光法检测病毒滴度.结果Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒感染Vero细胞后9～16 d内病毒滴度均大于6.0 LgCCID50/ml;用两种不同方法,在感染10～30d中,每隔3 d收获一次病毒液,感染后第13天和第16天收获的病毒液病毒滴度均大于7.0 LgCCID50/ml.结论Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒能够在Vero细胞中增殖并达到高滴度,感染后10～25d病毒毒力保持稳定.
作者：回良杰；陈小芳；高明；单慧；张映；陶臻臻；张建斌 刊期： 2005年第05期
目的构建C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,并鉴定其表达产物的免疫反应性.方法首先合成C型口蹄疫病毒C-S8C1株VP1基因的3个抗原表位,并克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点酶切后连接,构建出C型VP1双拷贝基因片段(VP1C).将VP1C基因连接到原核表达载体pET-CKS上,构建重组质粒pETCKS-VP1C,转入BL21菌中进行原核表达.采用SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物,并利用包涵体洗涤法对表达产物进行初步纯化.结果VP1C基因在大肠杆菌中获得表达,产量占沉淀蛋白的45%,且表达产物可以被C型口蹄疫病毒标准血清所识别.VP1C重组蛋白纯度达84.1%.结论已成功构建了C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,所表达的VP1C有良好的免疫反应性,可以作为检测C型口蹄疫病毒的候选基因.
作者：郑敏；金宁一；鲁会军；韩松；李昌；金扩世 刊期： 2005年第05期
目的构建狂犬病毒糖蛋白基因DNA疫苗,并检测其免疫小鼠的免疫应答.方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入VR1055载体中,构建重组质粒VR1055-CTN,经碱裂解法提取质粒,并经Sepharose4FF柱层析纯化后免疫NIH小鼠,用ELISA法检测体液抗体,用MTT法检细胞免疫,并进行常规效力试验.结果VR1055-CTNDNA疫苗具有较好的诱导狂犬病毒抗体的能力,在诱导细胞免疫中,刺激脾淋巴细胞转化指数和小鼠血清中的IL-2活性均高于空白载体对照,差异有显著意义(P=0.000).效力试验的小鼠存活率分别为73%和25%.结论该疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫,并具有较好的免疫保护效果.
作者：代长海；李宇辉；袁彦宝；郭岩；周明岩；张莹；胡晓明；王进；于洪涛 刊期： 2005年第05期
选择素是一类重要的粘附分子,主要介导白细胞与血管内皮细胞的起始粘附.选择素家族包括3个成员(Lselectin、P-selectin和E-selectin),分别表达于白细胞、血小板和血管内皮细胞的表面.选择素所识别和作用的配体是一些糖类化合物.唾液酸化、岩藻糖基化和硫酸化等化学修饰对于配体的功能十分重要.选择素与其配体的相互作用在使白细胞被捕捉的同时,可以转导胞外信号,使白细胞进一步活化并稳定粘附.白细胞粘附与人体的多种生理和病理过程密切相关.
作者：曾宪录；巴雪青；魏民；高艳光；李娜 刊期： 2005年第05期
医学伦理学原则的应用已成为新疫苗审批的基本要求.疫苗临床研究中必须体现尊重、受益、公正等原则.实践中暴露的伦理学问题主要表现在研究对象选择、临床反应观察、研究结果告知、副反应处理等环节.成立伦理委员会,认证研究者资格,开展宣传教育,签署知情同意书及处理不良事件等措施,可保障疫苗临床研究中伦理学原则的体现.
作者：祖荣强；朱凤才；王敏文 刊期： 2005年第05期
由北京科兴生物制品有限公司研制的SARS灭活疫苗已于2004年12月在中日友好医院完成随机、双盲对照的Ⅰ期临床研究,取得了较好的预期结果.
作者：王军志；董关木 刊期： 2005年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
