代长海；李宇辉；袁彦宝；郭岩；周明岩；张莹；胡晓明；王进；于洪涛
目的利用杆状病毒表达系统进行人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R基因在Sf9昆虫细胞中的表达.方法以pMD18-T-MC1R为模板,利用PCR方法扩增人MC1R基因,将MC1R基因连接到pfastBac1质粒上,与穿梭载体DH10Bac转座,获得Bacmid-MC1R质粒后,通过脂质体介导,转染Sf9细胞,使其表达重组杆状病毒,经SDS-PAGE检测表达产物,放射受体分析法检测目的蛋白MC1R活性.结果Bacmid-MC1R质粒转染Sf9细胞后的SDS-PAGE图谱,在相对分子质量为35 000处有一条新生蛋白带.放射受体分析结果显示表达的蛋白与标记配体特异亲和,具有生物学活性.结论MC1R基因成功在真核细胞中得到表达.
作者：李铁征；李小兵；齐翀；祝令伟；朱平 刊期： 2005年第05期
目的研究自行克隆的1.5kbhLYZ双链cDNA的表达特性.方法将此cDNA亚克隆人真核表达载体pcDNA3及乳腺特异表达载体p205C3,重组载体pcDNA3LYZ转染COS-1细胞,用间接免疫荧光法检测转染细胞中hLYZ cDNA的表达;重组载体p205C3LYZ注射哺乳期小鼠,用微球菌溶解试验和斑点杂交试验检测hLYZ cDNA在小鼠体内的表达.结果hLYZ cDNA在转染的COS-1细胞中得到了正确表达;小鼠体内表达并分泌到乳汁中的hLYZ达87μg/ml,且目的基因的表达具有较好的组织特异性.结论hLYZ cDNA可在COS-1细胞中有效表达,基因构件p205C3LYZ可以用于动物乳腺生物反应器研制.
作者：李国才；张泉；黄永生；薛方明；陈兵；孙怀昌；李厚达 刊期： 2005年第05期
目的观察甲肝-麻疹二联疫苗的稳定性.方法取5批甲肝-麻疹二联疫苗于2～8℃、室温(22℃±2℃)及37℃放置不同时间后,分别进行甲肝病毒和麻疹病毒滴度测定.结果该二联疫苗于2～8℃放置22个月、室温放置4个月及37℃放置7 d,疫苗中两种病毒滴度基本保持不变.结论甲肝-麻疹二联疫苗具有与其相应单价疫苗同样良好的稳定性.
作者：刘令九；谢宝生；李淑焱；王玮；王拥军；王晓萍；刘景晔 刊期： 2005年第05期
由北京科兴生物制品有限公司研制的SARS灭活疫苗已于2004年12月在中日友好医院完成随机、双盲对照的Ⅰ期临床研究,取得了较好的预期结果.
作者：王军志；董关木 刊期： 2005年第05期
目的研究适合SARS病毒灭活疫苗的生产工艺及其质量控制.方法连续制备3批疫苗,按拟定规程进行疫苗原液和疫苗各项指标检测.结果各项检测指标均符合拟定规程规定.结论我所生产的SARS灭活疫苗工艺稳定,质量可控.
作者：李萍萍；杨晓明；方志正；张爱华；刘俊生；孙文；易玲；夏智；吴杰；郑新雄；鲁建忠 刊期： 2005年第05期
作者： 刊期： 2005年第05期
目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-PCR一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型.方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIV RT-PCR一步法.根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解位点两侧,应用RT-PCR一步法检测AIV H5和H9亚型,并验证所建立方法的敏感性;通过检测NDV、IBV和IBDV等RNA病毒及计算机软件模拟检测,验证其特异性.结果所建立AIV系列RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便和快速的特点.结论该方法可用于AIV的检测,H5、H9亚型的鉴定及致病性分析.
作者：马鸣潇；金宁一；王振国；朱光泽；费东亮；郑敏；尹革芬；葛淑敏；金扩世；夏志平；金明兰 刊期： 2005年第05期
目的获得抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区VH的准确基因.方法结合生物信息学同源比较分析,利用高兼并的FR1 5'端处引物扩增的单抗CAb-1的VH基因,并与数据库中序列比对,在同源性高的抗体序列的信号肽处二次设计引物,用RT-PCR法获得抗体基因VH的准确序列.结果选定了与已知抗体VH高度同源的序列进行引物设计.凝胶电泳可见预期大小DNA条带.经测序表明,配对于信号肽处的扩增产物不仅与配对于抗体可变区FR1的结果一致,而且也纠正了配对于CAb-1的VH的FR1的兼并引物所引入的氨基酸突变.结论所优化设计的引物能够扩增完整的抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区基因,为小分子工程抗体改造奠定了基础.
作者：杨向民；姚西英；邢金良；张思河；冯媛；陈志南 刊期： 2005年第05期
目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度.方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交NIBSC进行总结.结果本实验室对各样本测定的结果与各实验室测定结果均值总体上是一致的,变异系数基本在5%以下.结论本实验室目前采用的病毒滴度测定方法及试剂的敏感性、标准化程度均与国际一致.
作者：周铁群；王剑锋；英志芳 刊期： 2005年第05期
目的观察Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热病毒在Vero细胞中的增殖动态.方法将Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒分别感染Vero细胞,并同时采用免疫荧光法检测病毒滴度.结果Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒感染Vero细胞后9～16 d内病毒滴度均大于6.0 LgCCID50/ml;用两种不同方法,在感染10～30d中,每隔3 d收获一次病毒液,感染后第13天和第16天收获的病毒液病毒滴度均大于7.0 LgCCID50/ml.结论Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒能够在Vero细胞中增殖并达到高滴度,感染后10～25d病毒毒力保持稳定.
作者：回良杰；陈小芳；高明；单慧；张映；陶臻臻；张建斌 刊期： 2005年第05期
选择素是一类重要的粘附分子,主要介导白细胞与血管内皮细胞的起始粘附.选择素家族包括3个成员(Lselectin、P-selectin和E-selectin),分别表达于白细胞、血小板和血管内皮细胞的表面.选择素所识别和作用的配体是一些糖类化合物.唾液酸化、岩藻糖基化和硫酸化等化学修饰对于配体的功能十分重要.选择素与其配体的相互作用在使白细胞被捕捉的同时,可以转导胞外信号,使白细胞进一步活化并稳定粘附.白细胞粘附与人体的多种生理和病理过程密切相关.
作者：曾宪录；巴雪青；魏民；高艳光；李娜 刊期： 2005年第05期
目的构建狂犬病毒糖蛋白基因DNA疫苗,并检测其免疫小鼠的免疫应答.方法用RT-PCR法扩增和分离CTN株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入VR1055载体中,构建重组质粒VR1055-CTN,经碱裂解法提取质粒,并经Sepharose4FF柱层析纯化后免疫NIH小鼠,用ELISA法检测体液抗体,用MTT法检细胞免疫,并进行常规效力试验.结果VR1055-CTNDNA疫苗具有较好的诱导狂犬病毒抗体的能力,在诱导细胞免疫中,刺激脾淋巴细胞转化指数和小鼠血清中的IL-2活性均高于空白载体对照,差异有显著意义(P=0.000).效力试验的小鼠存活率分别为73%和25%.结论该疫苗既能诱导体液免疫,又能诱导细胞免疫,并具有较好的免疫保护效果.
作者：代长海；李宇辉；袁彦宝；郭岩；周明岩；张莹；胡晓明；王进；于洪涛 刊期： 2005年第05期
目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化.方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein A Sepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCP IgG,通过SDS-PAGE和Western blot分析Vero细胞乙型脑炎疫苗及Vero细胞SARS疫苗各中间产品的蛋白、HCP及病毒抗原成分的含量变化.结果Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗中间产品中均存在一定量HCP,不同的纯化工艺均可以去除大部分HCP,随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP.结论Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗均存在一定量HCP.
作者：田博；丁志芬 刊期： 2005年第05期
作者： 刊期： 2005年第05期
目的构建羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达.方法用PCR方法,从含乙肝病毒全长基因的质粒中扩增出S和pre-S2(Met1-Gly26)2个基因片段,并将S2融合于S基因的3'端,构建SS2嵌合基因.将上述片段克隆到pBluescriptⅡSK(+)载体中,测序后亚克隆到毕赤酵母表达载体pAO815,构建重组表达质粒.用电转化法将重组质粒导入Pichia GS115细胞,构建重组表达菌株GS115-SS2.重组菌株经甲醇诱导后制备抗原初提液,进行ELISA和Western blot分析.结果表达产物经ELISA检测具有S和前S2抗原性.Western blot分析表明,该融合抗原既能与S抗体结合,也能与前S2抗体结合,其相对分子质量约为27000,与理论值相符.抗原初提物的反向血凝(RPHA)效价达1:1 024,约相当于16μg/ml.结论已成功构建羧端含前S2抗原决定簇的乙肝表面抗原嵌合基因,并在毕赤酵母中得到有效表达.
作者：谭昌耀；蒋丽明；葛永红；袁进；金瓯 刊期： 2005年第05期
目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达.方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验.在40L发酵罐中进行验证.结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5 mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用.在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用.结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源.
作者：郝淑美；王宣军；张秀霞；方勇；关晓峰；盛军 刊期： 2005年第05期
目的研制表达幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌重组疫苗,并观察其生物学效应.方法以幽门螺杆菌标准株--悉尼株(SS1)的基因组DNA为模板,构建Hp尿素酶B亚单位减毒鼠伤寒杆菌重组疫苗SL3261/pTC01-UreB.经口服免疫BALB/c小鼠后,检测肠液中抗UreB的特异性IgA抗体和血清中IgG抗体,同时观察小鼠体重、胃黏膜炎症程度等一般情况.结果构建Hp-UreB的SL3261/pTC01-UreB菌株,连续传80代可稳定表达Hp-UreB,菌落提取质粒后酶切及PCR鉴定均与pTC01-UreB符合;SDS-PAGE和Western blot显示pTC01-UreB转化SL3261可表达与Hp-UreB亚单位相符的相对分子质量约61 000蛋白,该蛋白能与抗Hp兔血清反应;SL3261/pTC01-UreB口服免疫BALB/c小鼠的肠液中抗UreB的特异性IgA抗体和血清中IgG抗体明显增高,而小鼠体重和胃粘膜炎症指数与对照组差异无显著意义.结论Hp-UreB的减毒鼠伤寒杆菌重组疫苗SL3261/pTC01-UreB口服免疫小鼠可诱导特异性免疫应答.
作者：杨兴龙；何跃忠；张敬东；钟东；刘宇虎 刊期： 2005年第05期
医学伦理学原则的应用已成为新疫苗审批的基本要求.疫苗临床研究中必须体现尊重、受益、公正等原则.实践中暴露的伦理学问题主要表现在研究对象选择、临床反应观察、研究结果告知、副反应处理等环节.成立伦理委员会,认证研究者资格,开展宣传教育,签署知情同意书及处理不良事件等措施,可保障疫苗临床研究中伦理学原则的体现.
作者：祖荣强；朱凤才；王敏文 刊期： 2005年第05期
本文结合目前我国临床安全输血和新生儿溶血病诊断、预防以及人群血型普查等工作的需要,对临床常规应用的单克隆抗-D人血型定型试剂(单克隆抗体)的质量要求和应用要点提出了具体的意见.
作者：李勇；陈维佳 刊期： 2005年第05期
目的建立固相提取法,检测人血浆中的亚甲蓝,并验证此方法的稳定性和精确性.方法根据Waters OasisHLB固相提取小柱的技术参数,针对血浆样品建立小柱的活化、清洗和样品洗脱条件,并以此方法进行固相提取小柱提取亚甲蓝的回收率及血浆中亚甲蓝的添加量和残留量测定.结果当血浆中亚甲蓝浓度大于0.05 μmol/L时,固相提取小柱对亚甲蓝的回收率大于94%,偏差小于5.0%.当血浆中亚甲蓝浓度为1、2、3、4和5μmol/L时,测定值与加入值呈线性相关,r=0.99;当血浆中亚甲蓝浓度为0.4、0.2、0.1、0.05和0.01μmol/L时,测定值与加入值也呈线性相关,r=0.99.结论此方法简便、稳定,灵敏度和精确度高.适用于检测血浆中的亚甲蓝.
作者：谢如锋；汤伟龙；黄宇闻 刊期： 2005年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
