李萍萍；杨晓明；方志正；张爱华；刘俊生；孙文；易玲；夏智；吴杰；郑新雄；鲁建忠
作者： 刊期： 2005年第05期
目的减轻短棒状杆菌全菌体制剂接种后的局部疼痛等副作用.方法采用超声破碎、蛋白水解及脱脂的方法提取了细胞壁,通过脾激活试验及抑瘤试验,检测纯化的短棒状杆菌细胞壁活性对家兔股四头肌的局部刺激作用及热原反应.结果纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.8,能抑制艾氏腹水瘤的生长,生存率达到80%;家兔股四头肌肌肉注射后未见局部充血坏死;家兔热原试验未见明显发热.结论纯化的短棒状杆菌细胞壁不仅保留了全菌体制剂所具有的活性,而且明显减轻了局部的刺激作用.
作者：王宇宏；高航；倪维华；霍得胜；台桂香 刊期： 2005年第05期
目的应用冷原子吸收法检测硫柳汞含量.方法将硫柳汞消化还原成汞蒸汽,经测汞仪检测.结果用该方法制备标准曲线具有很好的相关性,相关系数r(n=10)为0.999 7±0.000 2.样品重复检测10次,平均变异系数为1.03%,回收率为96.0%.与双硫腙滴定法检测结果进行比较,差异无显著意义.结论此法可作为硫柳汞含量检测的常规方法.
作者：金于兰；陈哲文；马福容；冷继平；魏葆华 刊期： 2005年第05期
目的探讨含汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答.方法重组质粒pVAX/G2转染cos-7细胞,用间接免疫荧光法(IFA)检测瞬时表达产物.经碱裂解法提取质粒pVAX/G2,Sepharose CL-4B柱层析纯化后,免疫BALB/c小鼠(SPF),并采用含有人IL-2基因的重组质粒pVAX/IL-2及重组人IL-2蛋白作为DNA疫苗的佐剂,检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答.结果重组质粒pVAX/G2能够在真核细胞中表达.免疫小鼠血清中能够检测到抗汉坦病毒中和抗体、酶标抗体和荧光抗体.淋转刺激指数和脾淋巴细胞上清液中IL-2活性,与空载体pVAX1阴性对照比较差异有显著意义.质粒佐剂pVAX/IL-2能显著提高DNA疫苗的细胞免疫水平.结论含汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生一定强度的体液免疫和细胞免疫应答.
作者：张连忠；赵大鹏；张龙梅；岳立广；赵立红；惠连；孔双泉；王伟；韩亮 刊期： 2005年第05期
选择素是一类重要的粘附分子,主要介导白细胞与血管内皮细胞的起始粘附.选择素家族包括3个成员(Lselectin、P-selectin和E-selectin),分别表达于白细胞、血小板和血管内皮细胞的表面.选择素所识别和作用的配体是一些糖类化合物.唾液酸化、岩藻糖基化和硫酸化等化学修饰对于配体的功能十分重要.选择素与其配体的相互作用在使白细胞被捕捉的同时,可以转导胞外信号,使白细胞进一步活化并稳定粘附.白细胞粘附与人体的多种生理和病理过程密切相关.
作者：曾宪录；巴雪青；魏民；高艳光；李娜 刊期： 2005年第05期
目的了解Vero细胞疫苗中间产品中宿主细胞蛋白(Host cell protein,HCP)的含量变化.方法模拟Vero细胞疫苗生产工艺流程,制备Vero细胞HCP,免疫家兔制备Vero细胞HCP免疫血清,经Protein A Sepharose CL-4B亲和层析,制备纯化的抗Vero细胞HCP IgG,通过SDS-PAGE和Western blot分析Vero细胞乙型脑炎疫苗及Vero细胞SARS疫苗各中间产品的蛋白、HCP及病毒抗原成分的含量变化.结果Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗中间产品中均存在一定量HCP,不同的纯化工艺均可以去除大部分HCP,随着生产工艺的进行,疫苗中间产品中HCP的含量逐渐降低,病毒成分的纯度逐渐增高,但纯化后产品中仍存在少量HCP.结论Vero细胞乙型脑炎疫苗和Vero细胞SARS疫苗均存在一定量HCP.
作者：田博；丁志芬 刊期： 2005年第05期
目的优化rhsTRAIL毕氏酵母工程菌在5 L发酵罐中的发酵表达工艺参数.方法研究培养基种类、细胞密度、甘油含量、pH值、甲醇浓度、甲醇流加速率及诱导时间等参数对工程菌生长及目的蛋白表达的影响,并用电镜观察其诱导肿瘤细胞凋亡特征.结果在无机盐培养基中,按10%接种A600=8～12的种菌后,24h酵母菌增殖至A600=76;甘油含量为1%时,菌体生长速度快(A600=160);培养基pH值5.0,甲醇终浓度为1%时,诱导96h表达量高达到120 mg/L,并具有诱导肿瘤细胞凋亡特征.结论rhsTRAIL毕氏酵母的发酵工艺参数为:无机盐培养基,pH值5.0,接种10%A60o=8～12的种菌,甘油含量1%,甲醇终浓度1%,诱导96h.
作者：付泳航；李茹冰；佟明华；李继东；孔祥平 刊期： 2005年第05期
由北京科兴生物制品有限公司研制的SARS灭活疫苗已于2004年12月在中日友好医院完成随机、双盲对照的Ⅰ期临床研究,取得了较好的预期结果.
作者：王军志；董关木 刊期： 2005年第05期
目的通过体内效力实验,优化甲肝灭活疫苗抗原适免疫剂量.方法用1.0 mg/ml Al(OH)3将不同梯度剂量的实验苗及参比苗4倍递增系列稀释,经腹腔免疫小白鼠,4周后采血,检测各免疫组小鼠血清甲肝抗体阳转率,用ReedMuench法计算半数有效稀释倍数,比较抗原免疫剂量与半数有效稀释倍数之间的剂量-效应关系.结果甲肝灭活疫苗实验苗抗原免疫剂量与半数有效稀释倍数之间存在着良好的剂量-效应关系.结论半数有效稀释倍数可用于不同品牌甲型肝炎灭活疫苗效力的评价及适抗原免疫剂量的优化.
作者：刘建生；邵聪文；孟明耀；马进；白巍；侯宗柳；陈统球 刊期： 2005年第05期
目的观察甲肝-麻疹二联疫苗的稳定性.方法取5批甲肝-麻疹二联疫苗于2～8℃、室温(22℃±2℃)及37℃放置不同时间后,分别进行甲肝病毒和麻疹病毒滴度测定.结果该二联疫苗于2～8℃放置22个月、室温放置4个月及37℃放置7 d,疫苗中两种病毒滴度基本保持不变.结论甲肝-麻疹二联疫苗具有与其相应单价疫苗同样良好的稳定性.
作者：刘令九；谢宝生；李淑焱；王玮；王拥军；王晓萍；刘景晔 刊期： 2005年第05期
目的利用杆状病毒表达系统进行人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R基因在Sf9昆虫细胞中的表达.方法以pMD18-T-MC1R为模板,利用PCR方法扩增人MC1R基因,将MC1R基因连接到pfastBac1质粒上,与穿梭载体DH10Bac转座,获得Bacmid-MC1R质粒后,通过脂质体介导,转染Sf9细胞,使其表达重组杆状病毒,经SDS-PAGE检测表达产物,放射受体分析法检测目的蛋白MC1R活性.结果Bacmid-MC1R质粒转染Sf9细胞后的SDS-PAGE图谱,在相对分子质量为35 000处有一条新生蛋白带.放射受体分析结果显示表达的蛋白与标记配体特异亲和,具有生物学活性.结论MC1R基因成功在真核细胞中得到表达.
作者：李铁征；李小兵；齐翀；祝令伟；朱平 刊期： 2005年第05期
作者： 刊期： 2005年第05期
目的建立固相提取法,检测人血浆中的亚甲蓝,并验证此方法的稳定性和精确性.方法根据Waters OasisHLB固相提取小柱的技术参数,针对血浆样品建立小柱的活化、清洗和样品洗脱条件,并以此方法进行固相提取小柱提取亚甲蓝的回收率及血浆中亚甲蓝的添加量和残留量测定.结果当血浆中亚甲蓝浓度大于0.05 μmol/L时,固相提取小柱对亚甲蓝的回收率大于94%,偏差小于5.0%.当血浆中亚甲蓝浓度为1、2、3、4和5μmol/L时,测定值与加入值呈线性相关,r=0.99;当血浆中亚甲蓝浓度为0.4、0.2、0.1、0.05和0.01μmol/L时,测定值与加入值也呈线性相关,r=0.99.结论此方法简便、稳定,灵敏度和精确度高.适用于检测血浆中的亚甲蓝.
作者：谢如锋；汤伟龙；黄宇闻 刊期： 2005年第05期
目的研制表达幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌重组疫苗,并观察其生物学效应.方法以幽门螺杆菌标准株--悉尼株(SS1)的基因组DNA为模板,构建Hp尿素酶B亚单位减毒鼠伤寒杆菌重组疫苗SL3261/pTC01-UreB.经口服免疫BALB/c小鼠后,检测肠液中抗UreB的特异性IgA抗体和血清中IgG抗体,同时观察小鼠体重、胃黏膜炎症程度等一般情况.结果构建Hp-UreB的SL3261/pTC01-UreB菌株,连续传80代可稳定表达Hp-UreB,菌落提取质粒后酶切及PCR鉴定均与pTC01-UreB符合;SDS-PAGE和Western blot显示pTC01-UreB转化SL3261可表达与Hp-UreB亚单位相符的相对分子质量约61 000蛋白,该蛋白能与抗Hp兔血清反应;SL3261/pTC01-UreB口服免疫BALB/c小鼠的肠液中抗UreB的特异性IgA抗体和血清中IgG抗体明显增高,而小鼠体重和胃粘膜炎症指数与对照组差异无显著意义.结论Hp-UreB的减毒鼠伤寒杆菌重组疫苗SL3261/pTC01-UreB口服免疫小鼠可诱导特异性免疫应答.
作者：杨兴龙；何跃忠；张敬东；钟东；刘宇虎 刊期： 2005年第05期
目的观察Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热病毒在Vero细胞中的增殖动态.方法将Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒分别感染Vero细胞,并同时采用免疫荧光法检测病毒滴度.结果Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒感染Vero细胞后9～16 d内病毒滴度均大于6.0 LgCCID50/ml;用两种不同方法,在感染10～30d中,每隔3 d收获一次病毒液,感染后第13天和第16天收获的病毒液病毒滴度均大于7.0 LgCCID50/ml.结论Ⅰ型和Ⅱ型出血热病毒能够在Vero细胞中增殖并达到高滴度,感染后10～25d病毒毒力保持稳定.
作者：回良杰；陈小芳；高明；单慧；张映；陶臻臻；张建斌 刊期： 2005年第05期
目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达.方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验.在40L发酵罐中进行验证.结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5 mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用.在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用.结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源.
作者：郝淑美；王宣军；张秀霞；方勇；关晓峰；盛军 刊期： 2005年第05期
目的构建C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,并鉴定其表达产物的免疫反应性.方法首先合成C型口蹄疫病毒C-S8C1株VP1基因的3个抗原表位,并克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点酶切后连接,构建出C型VP1双拷贝基因片段(VP1C).将VP1C基因连接到原核表达载体pET-CKS上,构建重组质粒pETCKS-VP1C,转入BL21菌中进行原核表达.采用SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物,并利用包涵体洗涤法对表达产物进行初步纯化.结果VP1C基因在大肠杆菌中获得表达,产量占沉淀蛋白的45%,且表达产物可以被C型口蹄疫病毒标准血清所识别.VP1C重组蛋白纯度达84.1%.结论已成功构建了C型口蹄疫病毒VP1基因原核表达系统,所表达的VP1C有良好的免疫反应性,可以作为检测C型口蹄疫病毒的候选基因.
作者：郑敏；金宁一；鲁会军；韩松；李昌；金扩世 刊期： 2005年第05期
目的构建抗人TNF-α人-鼠嵌合抗体基因,并在CHO细胞中表达.方法采用RT-PCR及RACE技术从鼠杂交瘤细胞克隆免疫球蛋白可变区基因,与人免疫球蛋白恒区基因拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因,转染CHO细胞并测定其表达量.结果构建的嵌合抗体基因在CHO细胞中的初始表达量为0.71μg/ml,亚克隆后表达量达0.95μg/ml.结论已成功构建抗人TNF-α嵌合抗体基因,并在CHO细胞中得到了高效表达.
作者：何太平；聂艳桃；葛永红；谢荣麟；袁涛；王琰；Vesna Galvani；Vladka Curin Serbec 刊期： 2005年第05期
目前DNA的回收方法主要有柱回收法、玻璃奶回收法等,这些方法回收效率较低,难以保证DNA的回收率及纯度.我们介绍一种简单经济适用,而且回收率较高的方法,并与传统的回收方法进行了比较.
作者：王长松；刘友生；李红；陈燕平 刊期： 2005年第05期
目的克隆Leptin基因,构建其重组表达菌株,并对表达产物进行免疫学鉴定.方法利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中扩增出人瘦素前体(pre-Leptin)的cDNA片段和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,并插入pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达重组人瘦素(rh-Leptin)的菌株.结果DNA序列分析显示获得的pre-Leptin和成熟基因片段的序列与预计序列一致,菌株诱导后经SDS-PAGE检测,rh-Leptin表达量达菌体总蛋白的40%以上.Western blot分析显示重组Leptin具有免疫学活性.结论已获得高效表达Leptin的重组菌株.
作者：曹剑峰；王革非；文力；李均；吴海祥；李清雄；王贞慧 刊期： 2005年第05期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
