肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应和增殖动态

肾综合征出血热灭活疫苗的纯化

目的为提高肾综合征出血热(HFPS)疫苗的免疫效果和减少副反应.方法用ELISA检测HFBS病毒抗原的方法,比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果;比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果.结果用孔径30万相对分子质量滤膜浓缩时,过滤液中仍有部分病毒抗原检出,经10万相对分子质量滤膜过滤后,过滤液中检测不到病毒抗原;用Sepharose 4FF凝胶柱层析浓缩时,经波长280nm检测到3个吸收峰,其中仅在第1峰中检测到病毒抗原,收集第1峰,几乎回收全部病毒抗原,去除杂蛋白约90%左右.结论本纯化方法适合于HFBS疫苗的规模化生产.

作者：朱智勇；翁景清；李岩金；陆群英；李敏红；姚苹苹 刊期： 2000年第01期

应用ELISA测定重组细胞因子中残余大肠杆菌菌体蛋白含量

目的建立灵敏度高,重复性好的残余宿主菌E.coli菌体蛋白含量的测定方法.方法电泳显示5株大肠杆菌DH52、JM103、JM105、N8430和HB101的蛋白质组分各不相同,但均可被免疫印迹显色,说明免抗E.coli.K12,C600抗体包括了其主要菌体蛋白的抗体,因此,用ELISA检测相应的菌体蛋白含量.结果优化后的ELISA对DHa、JM103、JM105和HB101检测灵敏度均达到10ng/ml.用混合菌体蛋白作为E.coli菌体蛋白通用标准,其灵敏度达到7.8ng/ml,含量在7.8～250ng/ml范围内,一次方程(y＝a+bx)线性良好(r>0.990);在7.8～1 000ng/ml范围内,二次方程(y＝a+bx+c2)线性良好(r>0.990).变异系数小于14%(n=4).应用该法对国内外重组产品进行测定,发现不同厂家不同产品其菌体蛋白含量各不相同.8种细胞因子共57批,菌体蛋白含量大于1%的3批,占5.3%;大于0.1%的9批,占15.8%;大于0.01%的28批占49.1%.说明还有不少厂家其重组产品纯化工艺有待进一步提高.结论本方法灵敏度高,重复性好,可用于重组产品中大肠杆菌残余菌体蛋白的测定.

作者：饶春明；王军志；高凯；郭莹 刊期： 2000年第01期

应用比色法测定静脉注射用人血球蛋白中麦芽糖含量

目的建立一种操作简便、快速的检测静脉注射用人血球蛋白中麦芽糖含量的方法.方法应用比色法,用不同含量的麦芽糖与费林试剂混合建立标准曲线,以标准曲线计算样品中麦芽糖的含量.结果该方法优于常规色谱法,既可省去较昂贵的设备,且提高了准确性和精密性,回收率在99.70%～100.00%之间.结论可作为血液制品的常规检测方法.

作者：黄文武；邵秋霞；马岚 刊期： 2000年第01期

国产HIV抗体诊断试剂的质量评价

目的评价国产HIV抗体诊断试剂的质量.方法用4 400 份义务献血员的血样,评价国内9个厂家的HIV抗体诊断试剂的特异性;HIV抗体阳性样品3 368份,评价试剂的灵敏度;测定各试剂结果的真实性及相关质量指标.结果国产HIV抗体诊断试剂的特异性、阳性预示值基本在99%以上,但灵敏度仍存在一定差距.结论通过对国内主要生产厂家生产的试剂质量的评价,了解制品质量,有益于进一步提高国产试剂的质量.

作者：尹红章；王兵；宋爱京；陆明；李秀华；孟淑芳；李德富 刊期： 2000年第01期

重组人干扰素α2a栓剂对慢性盆腔结缔组织炎的疗效

目的应用重组人干扰素α2a栓剂对慢性盆腔结缔组织炎患者进行疗效观察.方法用5×105IUα2a干扰素栓剂,经宫颈局部用药,治疗合并慢性宫颈炎的慢性盆腔结缔组织炎83例,并对部分病例进行了治疗前后宫颈分泌物的HPV-DNA,HCMV-EA检测.结果慢性盆腔结缔组织炎痊愈率、显效率、总显效率、有效率、总有效率依次为59.7%、25.4%、85.1%、9.0%和94.1%,显著优于洗必泰栓的疗效;慢性盆腔结缔组织炎疗效与慢性宫颈炎疗效密切相关,与HPV-DNA、HCMV-DNA阴转密切相关.结论重组人干扰素α2a栓剂经宫颈局部用药,对慢性盆腔结缔组织炎的疗效随着宫颈局部HCMV、HPV感染的有效控制而获得较满意的结果.

作者：陈维佳；隋宝真；郑辉；王冬倩；张岩；马晓艳 刊期： 2000年第01期

从包涵体中高效纯化HBx-蛋白

作者：颜华；方志正；Clarus H.Schroeder 刊期： 2000年第01期

应用pQE30系统表达和纯化乙型肝炎病毒核心抗原

目的建立高效、快速、简便的表达和纯化HBcAg系统,为进一步研究HBcAg在乙型肝炎发病机理中的作用及HBV C基因变异产生HBcAg特征.方法应用pQE30系统在原核细胞表达和纯化HBcAg.结果目的蛋白表达量占细菌总蛋白的26.2%;500ml诱导表达的菌液可得平均5mg的HBcAg;纯化的HBcAg纯度可达到91.0%;免疫印迹分析,表达的HBcAg具有多克隆抗-HBc结合活性.结论建立了一套高效、快速表达和纯化HBc Ag系统.

作者：周福元；隋礼丽；潘文胜；骆抗先；王海涛 刊期： 2000年第01期

抗真菌蛋白质的分离纯化

目的试图从霉菌培养液中分离纯化抗真菌活性蛋白质.方法用离子交换层析法分离,用反向高效液相色谱法进一步纯化,经N-三(羟甲基)甲基甘氨酸凝胶电泳分析确定其相对分子质量.结果从黑曲霉菌培养上清液中分离出一种具有抗真菌活性的蛋白质(AFP).纯化后得到高活性的精制AFP.相对分子质量约为9 000,经MTT法检测5种真菌具有明显抗真菌活性.结论本研究为抗菌药物及防腐剂的开发提供了依据.

作者：金哲洙；蔡英姬；金京玲；金河奎；韩今子；崔华；李东建；任东鲜 刊期： 2000年第01期

反义c-myc基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞C6生长的影响

目的探讨反义c-myc基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞C6增殖及凋亡的作用.方法将可在真核细胞表达大鼠反义c-myc基因的质粒pCEP4ASCMR以脂质体FuGENE6为介导,转染到大鼠脑恶性胶质瘤细胞C6株中,经MTF检测,软琼脂集落生长,吖啶橙染色,琼脂糖电泳等方法分析实验结果.结果反义c-myc基因质粒DNA具有抑制瘤细胞增殖的作用,并能引起瘤细胞凋亡;脂质体FuGENE6有助于提高质粒DNA的转染效率.结论反义c-mvc基因质粒可抑制c-myc基因的过度表达,促使肿瘤细胞凋亡,达到治疗脑神经胶质细胞瘤的目的.

作者：朱俊铭；全家妩；陈伟 刊期： 2000年第01期

神经节苷脂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨神经节苷脂对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用Pulsinelli的四血管闭塞法制作大鼠急性脑缺血/再灌注模型,利用高压液相色谱法观察脑缺血/再灌注期间谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的变化,通过图象分析仪测定神经元的面数密度及神经节苷脂对以上指标的影响.结果缺血后谷氨酸和γ-氨基丁酸含量明显升高,再灌注后降低,神经节苷脂可降低谷氨酸含量,与盐水对照组相比差异显著(P<0.01),同时增加神经元面数密度.结论神经节苷脂通过抑制谷氨酸释放,可减轻脑缺血再灌注期间脑组织损伤.

作者：刘松岩；于挺敏；赵力；刘淑玲；李秀芝；迟春萍；王妍 刊期： 2000年第01期

应用血型微板自动化鉴定血型的主要技术参数

微板法全自动血型检测系统是近期发展起来的新方法,由于许多技术参数尚无统一标准,使其推广受到一定限制.为探求该法各项技术参数的佳值,以ATplus2自动加样AnthosTs孵育震荡.

作者：陈晓建；张春来；刘顺；温鑫；王金德；左英锋 刊期： 2000年第01期

腮腺炎疫苗与白喉、破伤风类毒素同时或分别接种的免疫应答

目的了解腮腺炎疫苗与吸附精制白喉、破伤风二联类毒素(DT)能否同时接种,为制定免疫方案提供依据.方法用冻干流行性腮腺炎减毒活疫苗和吸附精制白、破二联类毒素同时和分别接种8～14岁的寄宿学生,观察其免疫应答.结果两苗同时接种与分别接种临床反应及免疫应答差异均无显著意义.结论两苗是可以同时接种的.

作者：徐福根；孟冬梅；许二萍；陈康凯；黄诚孝；姚怀芳 刊期： 2000年第01期

保存条件和时间对狂犬病毒毒力的影响

在狂犬病疫苗生产过程中,制备出来的疫苗原液一般不能及时检定或分装,需要保存一定时间.为了解保存时间对原液毒力的影响,我们取沈阳安迪生物高科技公司同期生产的狂犬病疫苗原液6批,分装于无菌的青霉素瓶中,分别放-2℃及4℃冰箱中保存,于不同时间取出,按<中国生物制品规程>方法进行毒力测定,结果疫苗原液在-20℃冰箱中保存1周毒力未见改变,保存3、6、10个月毒力下降0.08、0.5和0.89LogLD50/0.03ml.原液在4℃冰箱保存2天毒力未见下降,保存5天和10天毒力分别下降0.68和0.44LogLD50/O.03ml.原液经冻融2次毒力没有下降.冻融4次和6次毒力分别下降0.08和0.12LogLD50/0.03ml.

作者：蒋茨蕾；李慧君；潘丽静 刊期： 2000年第01期

生物技术专利知识问答

编者按:为满足广大读者了解有关生物技术专利知识的需要,本刊特邀原国家知识产权局专利局高级审查员马昭若教授以问题解答形式做此专题讲座.欢迎诸位就您所关心的问题继续来电来函咨询.

作者：马昭若 刊期： 2000年第01期

应用紫外分光法测定IgG含量

目的为建立一种更为简便、规范、准确的测定IgG含量的方法.方法采用紫外分光光度仪测定抗原抗体反应的光吸收值(A值),利用直线回归方法,根据样品的A值从标准曲线上计算出样品的IgG含量.结果该法重复性好,准确性高,省时简便.结论此法可作为实验室和临床检验的一种常规方法.

作者：王箐舟；程雅琴 刊期： 2000年第01期

应用血细胞分离机采集单个供者双份血小板

CS-3000Plus血细胞分离机由美国百特公司生产.机采血小板所用的耗材都依赖进口,且价格昂贵.单个供者献双份血小板既节约了耗材.又nJ以减少供者,同时也为临床快速提供机采血小板争取了时间,笔者对59例单个供者(手指末梢血手工计数血小板≥200×109/L),进行双份血小板的采集.现将献血员的筛选、血小板采集及单采后献血员血细胞的变化情况报告如下.

作者：赵宏祥 刊期： 2000年第01期

重组传染性法氏囊病病毒VP2/VP243基因表达及保护性和免疫原性

目的在重组鸡痘病毒中表达传染性法氏囊病毒VP2/VP243基因,并研究表达产物的保护性和免疫原性.方法以FPV282E4株TK基因为侧翼,分别将鸡法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)VP2和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质粒,命名为pUTALacVP和pUTALacVPO.用这2个质粒转染CEF细胞,用X-gal染色法筛选出2株重组病毒vUTAlacVP2和vUTALacVPO.用这2株病毒免疫1周龄SPF鸡,以常规疫苗为对照.结果 ELISA、SDS-PAGE和Western blot表明表达产物可与IBDV特异性多克隆抗体反应,并诱导鸡保护性抗体.在使用vvIBDV攻击前,对照组抗体水平显著高于实验组.但攻击5d后,实验组抗体水平明显升高.结论 vUTALacVP2和VPO在CEF细胞中实现了高效表达,但重组疫苗的保护率低于常规疫苗.

作者：金宁一；刘毅；郭志儒；方厚华；古长庆；罗坤；李萍；殷震；王虹 刊期： 2000年第01期

甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性和免疫原性

目的观察本实验室研制的甲型肝炎灭活疫苗的安全性和免疫原性.方法甲型肝炎病毒吕-8株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)中增殖,收获的病毒液用福尔马林灭活制成实验性疫苗,接种普通狨猴.结果有特异性抗HAV产生,无血清酶活性升高和肝组织病理学改变.接种疫苗的狨猴均能抵抗甲肝病毒强毒株的攻击,而对照组均出现酶活性升高和肝组织病理学改变.结论该疫苗具有良好的免疫原性和可靠的安全性.

作者：黄小琴；陈统球；谭顺革；金炜翔；阳选祥；钟光六；邵聪文 刊期： 2000年第01期

花生四烯酸的研究概况及应用前景

多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)是指含两个以上双键的一类长链脂肪酸.在微生物体内,PUFAs的合成通常是以单不饱和脂肪酸、油酸为底物,合成途径中,有两个主要的反应,即碳链的增长和去饱和作用.

作者：袁成凌；姚建铭；王文生；余增亮 刊期： 2000年第01期

不同氢氧化铝含量的吸附白破二联疫苗的吸附度及免疫效果

按<中国生物制品规程>,应用精白类、精破类和Al(OH)3胶体溶液各3批,分别配制成不同Al(OH)3含量(1、2和3mg/ml)的吸附白破二联各3批{每批分别含精白类40Lf/ml,精破类20Lf/ml),并分别进行吸附度测定和免疫力试验.结果不同Al(OH)3含量的二联吸附度均为100%,免疫效果,白喉的活存率分别为80%、93%和80%(均为3批平均值);破伤风的抗毒素单位分别为2.7、3.1和2.7IU/ml(均为3批平均值).表明吸附精制白破二联疫苗中Al(OH)3含量在一定范围内,免疫动物的效果差异无显著意义.因此,适当减少白破二联疫苗中的Al(OH)3含量是可行的.

作者：代淑艳；沈红杰；郑晓丽 刊期： 2000年第01期