徐超；魏庆宽；李瑾；肖婷；尹昆；孔祥礼；王用斌；崔勇；孙慧
目的 分析2015年3-7月份河南省登封市分离自临床诊断为副伤寒聚集性病例的甲型副伤寒(S.Paratyphi A)沙门菌病原学特征及分子流行病学关联.方法 采集副伤寒病例患者的静脉血8～10 mL,双相血培养瓶37℃培养4～7d,沙门菌科玛嘉选择性培养基分离培养,系统生化鉴定,丹麦SSI分型血清进行沙门菌O抗原及H1/2相鞭毛诱导血清凝集试验.根据PulseNet China病原体分子分型网络实验室公布的沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)操作指南与美国临床实验室标准化协会(CLSI)沙门菌K-B法药敏测试方案对其进行XbaI/ BlnI双酶切PFGE分子分型与聚类分析及8类13种抗生素药敏测试.结果 从29例病人血培养物中共分离到26株甲型副伤寒沙门菌,其经XbaI与BlnI限制性双酶切和PFGE电泳后带型完全一致(PTYA1);药敏测试结果显示24株甲型副伤寒沙门菌耐药表型一致.结论 病原学诊断及PFGE分子分型结果证实了26例甲型副伤寒沙门菌感染病例间可能存在高度的聚集性与分子流行病学关联,为进一步的追踪溯源和调查取证提供了技术支撑.
作者：赵嘉咏；张白帆；穆玉姣；苏佳；黄学勇；夏胜利；谢志强；许汴利 刊期： 2016年第12期
目的 对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET 24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达.亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析.结果 从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542 bp和5 464 bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达.重组蛋白的相对分子量约50 kDa.酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是佳金属螯合离子,反应佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52 μmol/L.结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标.
作者：章莹；宗红英；何立；蔡国斌 刊期： 2016年第12期
间日疟原虫在世界范围分布广泛,易复发,较恶性疟更难控制和消除.此外,间日疟复发也是疟疾传播的重要途径,复发的相关因素较为复杂,针对复发有多种治疗方案.本文就间日疟复发的机制,相关因素及复发的治疗研究进展作一综述.
作者：邓爽；邹俊；李鸾娇；阮永华；杨照青 刊期： 2016年第12期
目的 调查福州市鼓楼区A小区登革热暴发疫情发生的流行强度及可能传播方式,为进一步开展登革热防控提供科学依据.方法 采用现场流行病学调查的方法调查每一例病例;制定病例定义开展病例搜索,采集病人的血清检测登革病毒抗原、核酸或抗体;监测小区及周边白纹伊蚊的布雷图指数.结果 此次疫情为一起Ⅰ型登革热病毒引起的暴发疫情,共计发现20例病例,罹患率为0.32％,疫情持续时间17d.结论 此次疫情为福州市鼓楼区首起登革热暴发疫情,疫情防控措施得力,未发生续发病例和疫情蔓延.
作者：随海田；马小军；杨益昌；陈敏红；黄春文；汪攀；马会来；张彦平；吴生根 刊期： 2016年第12期
目的 评价旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原诊断早期旋毛虫病的价值.方法 应用旋毛虫肌幼虫ES抗原Western blot对旋毛虫感染后6～11 d的小鼠血清及19 d的早期旋毛虫病人血清进行检测,并与感染后35d的晚期旋毛虫病人和其他寄生虫病人血清的检测结果进行比较.结果 Western blot分析显示,肌幼虫ES蛋白中的2条蛋白带(41.5、55 kDa)可被旋毛虫感染后7～11 d的小鼠血清识别,6条蛋白带(41.5、44.1、45、55、61和65.2 kDa)能被早期和晚期旋毛虫病人血清识别,阳性反应率均为100％(15/15);这6条蛋白带与裂头蚴病人和健康人血清无交叉反应,但与其他寄生虫病(血吸虫病、并殖吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴病及囊尾蚴病)患者血清具有明显的交叉反应(19.12％～38.23％).结论 旋毛虫肌幼虫ES抗原中的41.5 kDa～65.2 kDa蛋白带可与旋毛虫感染早期血清反应,但与其他蠕虫病患者有明显的交叉反应.
作者：文慧；胡晨曦；王李昂；王涵；刘春颖；宋艳艳；刘若丹；姜鹏；王中全 刊期： 2016年第12期
目的 建立一种猪链球菌2型的快速检测方法.方法 以猪链球菌2型cps2J基因序列为检测靶标设计6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,其中2条促环引物分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),用横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物,建立猪链球菌2型LAMP-LFD检测方法.结果 所建立的检测方法能够特异性的检测出猪链球菌2型,与试验对照菌株不存在交叉反应,其低检测限为76 cfu/mL,在对100份样品的检测中,LAMP LFD方法检测出14份阳性样品,培养法检测出12份阳性样品,LAMP-LFD方法检测阳性率略高于病原培养法,两者间的P＞0.05无统计学差异.结论 所建立LAMP-LFD检测方法具有特异性好、敏感性高、操作简单、快速等特点,适合于动物食品中猪链球菌2型的检测.
作者：张莉；王利丽；魏财文；杨春蕾；路超；池晶晶；鄢明华 刊期： 2016年第12期
目的 探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因分布及分子分型特征.方法 收集38株临床分离的肺炎克雷伯菌,采用肉汤稀释法药敏实验、改良Hodge试验、PCR电泳、脉冲场凝胶电泳分型及多位点序列分型测定其耐药性、耐药基因型及分子型别.结果 对碳青霉烯类药物亚胺培南、美罗培南、厄他培南耐药率分别为18.42％(7/38)、28.95％ (11/38)、34.21％(13/38),其中有7株(18.42％)同时耐3种药物.对阿米卡星、左氧氟沙星、四环素、呋喃妥因、甲氨苄啶/磺胺甲恶唑、庆大霉素耐药率为23.68％～44.74％,阿莫西林/克拉维酸、头孢唑啉、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、氨曲南、环丙沙星耐药率均大于52.63％,氨苄西林、哌拉西林耐药率100％.有11株肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型检测为阳性,占28.95％(11/38),其中5株携带blaKPc基因,均为KPC-2型;4株携带blaNDM基因,均为NDM-1型.9株携带blaKPC或blaNDM耐药基因的菌株同源性分析显示有8种不同PFGE带型,5种MLST型别(ST型).5种ST型为ST 11、ST15、ST395、ST1031、ST1412,其中以ST 11为主.结论 肺炎克雷伯菌耐药及多重耐药现象严重,肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的主要的原因是携带KPC-2或者NDM-1基因,菌株基因型多态性大,提示病例之间不存在关联性.
作者：杨梦；王鹏；徐晓倩；熊长辉；刘晓青；袁辉；潘欢弘 刊期： 2016年第12期
目的 探索恶臭假单胞菌在幽门螺杆菌感染相关胃肠疾病中的意义.方法 采集14C尿素呼气试验阳性患者病变胃黏膜354例,进行细菌的分离培养.根据菌落形态、革兰染色、尿素酶试验及幽门螺杆菌特异性16S rRNA基因片段的PCR进行幽门螺杆菌的鉴定,同时提取胃黏膜组织DNA,通过幽门螺杆菌特异性PCR进行快速诊断.将非幽门螺杆菌转种于营养琼脂培养基,进行快速尿素酶试验.尿素酶阳性的非幽门螺杆菌染色体DNA利用细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增、测序及序列比对.使用全自动细菌鉴定仪对经测序比对为恶臭假单胞菌的菌株进行鉴定.采用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验.结果 从354例样本中分离出革兰阴性、尿素酶阳性的恶臭假单胞菌10株,经16S rRNA基因测序和序列比对,与GenBank中恶臭假单胞菌的相似性≥98％.10株恶臭假单胞菌的胃黏膜标本中,6例标本幽门螺杆菌特异性PCR为阳性,4例为阴性.传代存活的7株恶臭假单胞菌的K-B法药物敏感试验显示对左氧氟沙星均敏感,1株对四环素敏感,5株对阿莫西林耐药,6株对克拉霉素耐药,7株对甲硝唑、氨苄青霉素均耐药.7株菌经全自动细菌生化鉴定仪鉴定结果均为恶臭假单胞菌.结论 病变胃黏膜中分离出尿素酶阳性且对治疗幽门螺杆菌感染的多种抗生素耐药;可能造成临床上14 C-尿素呼气试验假阳性,并继发感染影响胃肠疾病的进展.
作者：印琳；刘芳；郭长城；王琼；杨杰；潘科；潘晨；熊妍；陈颖婷 刊期： 2016年第12期
目的 应用多维液相色谱质谱组合体系为基础的蛋白质组学方法对福氏痢疾杆菌基因组注释进行完善.方法 痢疾杆菌福氏2a型301株(Sf2a301)的全菌蛋白经胰酶消化,二维液相色谱分离后进行MALDI-TOF/TOF和ESI MS/MS组合鉴定,质谱数据分别应用MASCOT和SEQUEST软件检索基于Sf2a301全基因组构建的6个读码框数据库,完成对原基因组注释的验证和补充.结果 研究表明多维液相色谱质谱组合体系能够增加鉴定蛋白的覆盖率,共鉴定Sf2a301的1231个蛋白编码基因产物,涵盖了COGs数据库22个功能分类组中的20个,包含306个功能未知的假定蛋白.发现了9个未注释的基因,得到RT-PCR和Northern blot的进一步验证.新基因大多数是重叠基因,包含3个嵌套基因.结论 多维液相色谱质谱组合体系相对于单一的串联质谱技术能够更加有效验证、补充痢疾杆菌的基因组注释,更新后的基因组注释库为今后开展痢疾杆菌功能研究提供更多的靶点.
作者：赵丽娜；李巍伟；贺宝玲；胡芬；王洋；余源；高爽 刊期： 2016年第12期
目的 探讨温泉水环境中嗜肺军团菌的污染状况和分布规律,了解其主要血清型别及基因型别.方法 采取随机抽样方法采集温泉场所蓄水池、温泉池、客房淋浴水等,浓缩后用细菌培养法分离得到可疑菌株,用血清学与荧光定量PCR技术进行嗜肺军团菌的鉴定.对分离的菌株用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型方法(SBT)进行基因分型.结果 65份温泉水中35份检出嗜肺军团菌,检出率为53.85％.嗜肺军团菌计数范围在20 CFU/100 mL-16 000 CFU/100 mL之间.血清分型以LP1、LP3为主.分离的嗜肺军团菌菌株均携带dot基因.对40株嗜肺军团菌菌株进行了PFGE聚类分析,得到10种不同的带型.40株菌株13种ST型可以被分为3个克隆群和1个单态群.结论 本地区温泉水嗜肺军团菌污染程度较高,分子分型结果表明这些菌株具有遗传多样性.
作者：章乐怡；李毅；上官智慧；吴跃进；谢爱蓉；王良怀；陈文斌 刊期： 2016年第12期
目的 建立快速准确检测致病性嗜水气单胞菌的双重荧光定量PCR方法.方法 针对嗜水气单胞菌的16SrDNA和气溶素基因aerA的序列设计特异性引物及TaqMan探针,优化双重荧光定量PCR反应条件,并结合常规PCR方法及分离培养鉴定对临床样品进行检测和对比验证.结果 荧光定量PCR反应体系对质粒标准品的敏感性为10拷贝/反应,是常规PCR检测方法的100倍;该方法检测12种其他种属细菌时未出现假阳性;对实际样品的检测结果其敏感性同样高于普通PCR,定量检测目的基因的拷贝数与样品中目的菌的分离率成正比.结论 本方法敏感性高,特异性好,可用于致病性嗜水气单胞菌感染的诊断、疾病防控及流行病学研究.
作者：高智玲；纪雪；郭学军；陈萍；刘彦晶；刘军；祝令伟；周伟；冯书章 刊期： 2016年第12期
随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的感染率不断增加,并成为全球院内感染的首要致病菌.因其高感染率、高致死率以及多重耐药株的出现,使临床治疗面临极大的挑战.本文将从药物治疗、噬菌体疗法和免疫防治等方法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的治疗进行综述,以期对该病原菌临床治疗提供一定的参考.
作者：杨守深；王晶；范克伟；杨小燕 刊期： 2016年第12期
目的 了解目前山东省输入性恶性疟原虫抗药性基因Pfcrt和Pfmdr1的单倍型,分析突变基因型及其分布情况.方法 根据恶性疟原虫Pfcrt和Pfmdr1基因序列设计套式PCR引物,对采自全省非洲务工返乡的输入性恶性疟感染者血样扩增,并对其产物进行基因测序和序列对比分析.结果 68例样本P fcrt基因第72～76位点和Pfmdr1基因第86、1 042和1 246位点目的片段全部成功扩增和测序.P fcrt基因中69.12％为野生单倍型CVMNK,30.88％为突变单倍型,突变型包括CVIET、CVIDT及混合型,其中CVIET数量多.Pfmdr1基因中69.12％为野生单倍型NND,30.88％为突变单倍型,即YND及混合基因型.6个非洲输入来源国样本中,除几内亚Pfcrt基因全部为野生型外,其它国家Pfcrt和Pfm-dr1基因均有突变型存在.5例样本Pfcrt和Pfmdr1基因共同表现为突变单倍型.结论 山东省输入性恶性疟Pfcrt和P fmdr1基因突变单倍型具有多样化特征.Pfcrt和Pfmdr1突变型比例均低于野生型,提示目前该省流行的输入性恶性疟未出现严重的氯喹耐药性.
作者：徐超；魏庆宽；李瑾；肖婷；尹昆；孔祥礼；王用斌；崔勇；孙慧 刊期： 2016年第12期
目的 为探讨非编码小RNA BSR1526在布鲁氏菌胞内生存中的作用,构建BSR1526突变株与过表达株并分析它们在模拟胞内环境和小鼠体内的存活能力.方法 首先采用Northern blot和RT-PCR验证布鲁氏菌16M在体外刺激条件中BSR1526的转录;然后采用融合PCR构建BSR1526缺失株;将BSR1526插入到质粒pBBR1-MCS4中,电转入16M中构建过表达株16M-BSR1526;后分析BSR1526缺失株和过表达株在模拟胞内环境以及小鼠体内的存活力.结果 BSR1526在布鲁氏菌16M中存在转录,且在不同刺激条件下转录水平不同.BSR1526缺失或过表达影响了布鲁氏菌16M在体外的生长能力,缺失后在热应激、氧化压力及酸性环境下的生存能力下降,在小鼠脾脏内的细菌数量显著下降,表明BSR1526影响了布鲁氏菌的毒力.结论 非编码小RNA BSR1526影响着布鲁氏菌16M在胞内生存能力,缺失BSR1526后布鲁氏菌16M抵抗外界不良环境的能力下降,同时在小鼠体内的毒力下降.
作者：徐晓阳；欧红萍；彭广能；雷霜霜；田一男；曹雪峰；王玉飞；严光文；钟志军 刊期： 2016年第12期
目的 开展SmCaMK Ⅰ(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅰ)的潜在生物学特征分析和功能研究.方法 利用相关网站和软件对SmCaMK Ⅰ的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测.此外,SmCaMK Ⅰ进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析.结果 SmCaMK Ⅰ是一个全长基因,由1 068 bp组成,编码355个氨基酸.SmCaMK Ⅰ与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK Ⅰ保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89％和88％,与人的CaMK Ⅰ氨基酸序列一致性仅仅只有44 ％.分子进化树分析中SmCaMK Ⅰ与绦虫属的亲缘关系近,与其他物种亲缘性较远.与人类CaMK Ⅰ相比,淋巴细胞表位具有统计学差异.SmCaMK Ⅰ能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表.结论 SmCaMK Ⅰ是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白.
作者：李奕基；陈新新；符瑞佳；陈小静；吕刚；梁培 刊期： 2016年第12期
目的 建立针对非结核分枝杆菌中瘰疬分枝杆菌菌株的real-time PCR检测方法.方法 在我们的研究中,根据瘰疬分枝杆菌的SodA基因设计MGB探针和特定的引物,并用来检测模拟样品中的瘰疬分枝杆菌.结果 该方法低瘰疬分枝杆菌DNA检测浓度是101拷贝数,标准曲线显示阈值周期和SodA基因片段拷贝数之间的相关系数是0.973,斜率为-3.249,表现出良好的线性关系.此外,模拟样品低检测浓度是每毫升101个细菌,此外,其他9株菌为阴性结果,验证了良好的特异性.结论 该方法对于检测瘰疬分枝杆菌模拟标本显示很高的敏感性和特异性,可用于瘰疬分枝杆菌菌株的生态和流行病学监测.
作者：纪凌云；蒋毅；刘海灿；万康林 刊期： 2016年第12期
目的 探讨涂阳肺结核患者接受抗结核药物治疗的不良反应发生情况及其影响因素,为制定结核病防治策略提供参考.方法 选择2008-2010年我国8个省(市、自治区)结核病定点医疗机构治疗诊治的涂阳肺结核患者共2 142例,根据是否发生不良反应将其分为两组,运用卡方检验单因素及logistic多因素回归对不良反应发生的危险因素进行分析.结果 2 142例涂阳肺结核患者中536例患者出现不良反应,不良反应发生率为25.0％.经单因素分析结果表明年龄(X2=23.815,P＜0.001)、吸烟情况(x2=12.040,P=0.024)及结果差异均有统计学意义.多因素非条件logistic回归结果显示,45～64岁和≥65岁年龄组及吸烟是不良反应发生的独立危险因素,OR(95％CI)值分别为1.524(1.159～2.422)和1.756(1.200～2.570)及1.620(1.194～2.198).结论 涂阳肺结核患者中吸烟及中老年人是发生不良反应的危险因素,在患者诊治过程中,应及时对这类高危人群进行监测和主动干预,对发现和降低不良反应的发生率有着重要意义.
作者：马艳；谢忠尧；张丽娜；杜建；刘宇红；李亮 刊期： 2016年第12期
中国人兽共患病学报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国微生物学会
