学术投稿

肾综合征出血热病毒SEO亚型Gou3株S全基因分析的确证

姚智慧;董关木;俞永新;刘文雪

关键词:肾综合征出血热病毒, Gou3株, S片段, 序列测定, 种系发生树
摘要:目的为进一步了解Gou3株的分子基础,分析S片段全基因序列,以确证该株为SEO亚型毒株.方法从感染的Vero细胞提取总RNA,RT-PCR产物纯化后克隆于T载体测序.结果 Gou3株S片段的全基因序列共1 732个核苷酸,大读码框架从其43到1 332,共编码429个氨基酸.序列同源比较分析表明,Gou3株与HTN型76-118株同源性为 67.7%,与SEO型为88.1%~88.3%,与3株SEO型毒株S片段相差高达11.7%~11.9%.其氨基酸序列与76-118同源性为82.6%,与SEO型为97.4%~98.4%.并绘出了种系发生树.结论 Gou3株S片段全基因的序列分析,确证了Gou3株为新发现的SEO型病毒的亚型毒株.GenBank注册号为 AF288651.
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  • 艾滋病合并弓形虫感染

    目的探讨弓形虫病并发于艾滋病时的临床病理学特征.方法回顾性研究17例艾滋病合并弓形虫病的常规尸检材料,总结其临床表现与病变特点.结果 17例患者均有神经系统受累的病理改变与相应临床症状,多数有呼吸系统症状但仅4例查见弓形虫,8例心肌有弓形虫感染但无明显临床表现,8例为播散性感染,5例合并巨细胞病毒感染,10例血清弓形虫抗体效价升高,17例均在尸检组织中查到弓形虫,9例死于脑或肺弓形虫病.结论弓形虫病与艾滋病有密切关系,并有一些重要的临床病理学特征,如潜在感染的复活,播散性感染,显著的脑部病变,合并其他机会性感染,血清抗体效价低下等.

    作者:刘德纯;林清森 刊期: 2001年第06期

  • 查菲埃立克体28kD表面抗原基因的克隆与表达

    目的克隆和高效表达查菲埃立克体(Ehrlichia chaffeensis)28kD表面抗原基因.方法依据已知的查菲埃立克体28kD表面抗原基因设计引物,用PCR从查菲埃立克体基因组中克隆该基因片段(531bp),再将该基因片段定向插入表达载体(PinPointTMXa-3)中,然后将该重组质粒转化E.coli JM109细胞.结果经SDS-PAGE分析,转化子所产生的融合蛋白分子量为32kD,与预期的结果相一致;在37℃用0.1Mm IPTG诱导转化子12h,融合蛋白量达到细菌总蛋白量的35.8%.结论查菲埃立克体28~kD表面抗原基因在E.coli JM109细胞内得到高效率表达,从而为该抗原的大量制备奠定了基础.

    作者:方玉强;温博海;蹇锐;李涛 刊期: 2001年第06期

  • 生物恐怖主义的威胁及防御策略

    近期美国遭遇炭疽袭,引发恐慌,恐怖组织欲利用生物武器,由来已久.

    作者:杨婷婷;施强 刊期: 2001年第06期

  • 重庆地区肺炎衣原体感染株的部分基因分析

    目的用两对引物对临床标本中肺炎衣原体进行检测,对阳性PCR产物部分序列进行测定和同源性分析,探讨肺炎衣原体的基因分型.方法用根据肺炎衣原体16s rRNA及种特异性53kDa蛋白抗原基因序列设计的两对引物Cpnl~Cpn2,53A~53B对1994年5月~1999年3月间采集的有呼吸道疾患病人的鼻咽拭子标本182份进行PCR检测,从阳性标本中随意挑取136和144号标本,纯化PCR产物,进行核苷酸测序,并将测序结果与已报道的肺炎衣原体分离株进行同源性比较分析.结果标准AR-39株及21例标本均扩增得到约460nts的16s rRNA基因片段,25例标本扩增得约830nts的53kDa蛋白基因核酸片段.对136、144号标本的PCR产物测序结果显示,244nts的16s rRNA基因序列完全相同,且与标准肺炎衣原体AR-39、TW183、IOL207及CWL029的对应序列100%同源,而与马肺炎衣原体分离株N16相比较有3处突变,与非洲热带蟾蜍分离株CPXT1比较有3处突变,与小鼠肺炎衣原体分离株J138相比有一处不同,表明人的肺炎衣原体株16r RNA基因较为保守,与动物分离株有差异;标本145nts的53kDa蛋白基因也100%同源,该序列与从人体分离的AR-39株以及从小鼠分离的J138株序列完全一致,表明肺炎衣原体53kDa蛋白抗原是高度保守的种特异性抗原.结论衣原体的基因型分析有助于研究其流行规律,更好地进行疾病监控,但肺炎衣原体的进一步分型研究尚有赖于发掘其它可用作分型的基因及对更多的分离株进行分析.

    作者:饶贤才;胡福泉;俞树荣 刊期: 2001年第06期

  • 肾综合征出血热病毒SEO亚型Gou3株S全基因分析的确证

    目的为进一步了解Gou3株的分子基础,分析S片段全基因序列,以确证该株为SEO亚型毒株.方法从感染的Vero细胞提取总RNA,RT-PCR产物纯化后克隆于T载体测序.结果 Gou3株S片段的全基因序列共1 732个核苷酸,大读码框架从其43到1 332,共编码429个氨基酸.序列同源比较分析表明,Gou3株与HTN型76-118株同源性为 67.7%,与SEO型为88.1%~88.3%,与3株SEO型毒株S片段相差高达11.7%~11.9%.其氨基酸序列与76-118同源性为82.6%,与SEO型为97.4%~98.4%.并绘出了种系发生树.结论 Gou3株S片段全基因的序列分析,确证了Gou3株为新发现的SEO型病毒的亚型毒株.GenBank注册号为 AF288651.

    作者:姚智慧;董关木;俞永新;刘文雪 刊期: 2001年第06期

  • 新发现致病性产H2S李斯特氏菌生物学特性研究

    目的对在畜间疫病流行区,新发现致病性产H2S李斯特氏菌进行生物学特性研究,以确定其在微生物学中地位,为其命名提供依据.方法从形态染色、培养特性、生化反应、抗原性方面鉴定,并利用分子生物学技术作DNA G+C mol%含量测定,PCR、16SrRNA序列检测同源性.结果通过表型生物学特性鉴定,产H2S李斯特氏菌与已知7型李斯特菌不同,其G+C mol%为30.5%、16SrRNA序列分析同源性与无害李斯特菌(L.im)为71.0%,灰色李斯特菌(L.g)为37.8%,西氏李斯特菌(L.s)28.4%.结论经系统发育树分析,证实产H2S李斯特氏菌为李斯特氏菌属,国际上首次报告的新种.

    作者:郭仰霖;王培玉;谢登煌;曾凡伟;郭大为;张远富;温远元;阙庆华;邓富玉;李玉珍 刊期: 2001年第06期

  • 加强疯牛病监测

    疯牛病(Mad cow disease)是个俗名,科学名称是牛海绵状脑病(Bovine spongiform encephalopathy),此传染病的病原是一种蛋白质,称为朊粒(prion),许多人称朊粒是朊病毒,因为过去认为是病毒,但又不能证明是那种的DNA或RNA病毒,故列为未分类病毒项下.现已明确,它是一种致病的能传染的蛋白质,不是病毒.朊粒有两种,正常动物的朊粒(PrPc或PrP-sen)及致病性朊粒(PrPsc或PrP-res),引起疯牛病的朊粒称PrPBSE.

    作者:廖延雄 刊期: 2001年第06期

  • 福氏2a志贺菌痢暴发的RAPD分析

    目的探讨江门一起菌痢暴发的特异传染源.方法对8株福氏2a志贺菌进行RAPD分析.结果此次菌痢暴发期间分离的8株福氏2a志贺菌具有两种不同的RAPD特征(RTⅠ、RTⅡ型),其中2株病例密切接触者分离株J98101 (RTⅡ型)和J9826(RTⅠ型)分属不同克隆.结论本次暴发偶合有部分散发病例.相对于质粒分析而言,RAPD分析具有更高的分辨率,它提供的遗传学信息更为丰富、直接、精细.

    作者:郝加虎;叶冬青;王红;钟文龙;夏桂枝;吴爱军;俞守义 刊期: 2001年第06期

  • 约氏疟原虫自然传播阻断的发生与原虫血症相关性的研究

    目的探讨约氏疟原虫感染早期自然传播阻断的发生机制.方法观察小鼠红内期原虫血症水平、蚊体内有性阶段的虫体发育状况以及PRBC提取物对脾细胞产生NO的诱导作用.结果当红细胞感染率达到15%~20%这一阈值时,配子体对蚊的感染力明显减弱或丧失;PRBC提取物能够诱导脾细胞合成NO,其诱导能力具有剂量依赖性.结论疟原虫自然传播阻断的发生取决于红细胞感染率的高低和中间宿主体内免疫细胞活化后产生的NO水平.

    作者:曹雅明;刘英杰;安春丽;闫建中 刊期: 2001年第06期

  • 以pcD-IL-2为基因佐剂的含日本血吸虫SjFABPc基因真核表达重组质粒裸DNA免疫小鼠的研究

    目的在小鼠模型中评价含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白分子基因的真核表达质粒pcD-SjFABPc与含IL-2基因佐剂的质粒构建体pCD-IL-2经肌注、皮内途径导入机体后所诱生的免疫反应.方法碱裂解法大量制备重组质粒pcD-SjFABPc、 pCD-IL-2重组质粒及空质粒pcDNA3,经肌肉及皮内注射免疫BALB/c小鼠,每只鼠注射100μg,两周后同量加强免疫一次.分别于末次免疫后的第20d、50d及65d用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖与NK细胞活性,并用双夹心ELISA测定血清细胞因子IL-2、IFN-γ及IL-10含量;ELISA法测定免疫鼠血清IgG抗体.结果 NK细胞杀伤活性及脾淋巴细胞增殖测定,加佐剂组(pcD-SjFABPc联合 pCD-IL-2组)较不加佐剂组(pcD-SjFABPc组)NK细胞杀伤及脾淋巴细胞增殖活性皆增加(P<0.05).两途径三次检测IL-2及IFN-γ值均明显高于NS对照组和空质粒组,且加佐剂组的明显高于不加佐剂组的(P<0.05);不同途径各组IL-10值与NS及空质粒对照组的比较则无显著性差别(P>0.05).注射质粒后20d和50d,未测出抗体;免疫后65d检测,pcD-SjFABPc和pcD-SjFABPc联合pcD-IL-2免疫组的OD值明显高于对照组(P<0.01),而该两组OD490值之间无显著性差异(P>0.05).结论基因佐剂pcD-IL-2具有协同pcD-SjFABPc增强免疫鼠细胞免疫应答的作用,并可刺激IL-2、 IFN-γ细胞因子的产生,而特异的IgG抗体的产生则不依赖基因佐剂的作用.

    作者:冯新港;余新炳;吴忠道;周俊梅 刊期: 2001年第06期

  • 流行性乙型脑炎病毒NS5蛋白的表达

    目的在大肠杆菌中表达并纯化流行性乙型脑炎病毒NS5蛋白,为进一步研究乙脑病毒NS5蛋白的结构与功能奠定基础.方法根据乙脑病毒NS5蛋白的基因序列,设计两对PCR引物,采用RT-PCR法分别扩增乙脑病毒JaOH0566株部分及全长NS5基因.将扩增产物分别克隆到表达载体pQE30.筛选重组质粒,转化大肠杆菌表达重组蛋白.重组蛋白经金属柱亲和层析纯化.结果与结论获得了含部分及全长乙脑病毒NS5基因的重组质粒,重组质粒经限制性酶双酶切、DNA序列分析及PCR扩增筛选证实.在大肠杆菌中表达出了带6个组氨酸头的部分及全长的重组乙脑病毒NS5蛋白.经SDS-PAGE及Western-blot分析证实表达蛋白确实是重组乙脑病毒NS5蛋白.

    作者:余福勋;何家荣;长谷部太;五十岚章 刊期: 2001年第06期

  • 双歧层次分析法快速鉴定酵母菌的实验研究

    目的建立酵母菌快速鉴定新方法.方法依据双歧鉴定法和层次分析原理建立了双歧层次分析法(DHPA),用DHPA法及API 20C AUX试条鉴定酵母菌.结果 DHPA法和API法对酵母菌43个KIU鉴定的正确性均为100%.DHPA法与API法对酵母菌2 238个试验代码分析的总符合率为77.3%,对256株临床酵母菌的鉴定符合率为81.3%.在48株两种方法鉴定不符合的菌株中,有8株为API法缺码,占鉴定不符合菌株的16.7%,而DHPA法则无缺码现象.结论 DHPA法解决了API法存在的的缺码或不能鉴定问题,是酵母菌准确、快速、简便、经济和实用的鉴定方法.

    作者:何林;李芳芳;吴劲松;卢月梅;梁训宏;杨发达 刊期: 2001年第06期

  • 弓形虫急性感染小鼠睾丸的病理学及发病机理的研究揪

    目的观察弓形虫急性感染小鼠睾丸的病理学变化及探讨其发病机理.方法将弓形虫急性感染和正常对照NIH小鼠睾丸做印片及切片,观察生精细胞的病理变化及弓形虫侵入细胞的情况;应用免疫组化S-P法进行弓形虫抗原及bcl-2、c-myc、P53、bax的检测.结果弓形虫急性感染组小鼠睾丸印片中见生精细胞胞质及核内弓形虫速殖子;睾丸切片病理变化为生精停滞,精原细胞胞质空泡性变.免疫组化染色显示弓形虫;bcl-2及c-myc在感染组和正常组间的表达无统计学意义(P>0.05);P53及bax在两组间均未表达.结论弓形虫急性感染小鼠睾丸生精停滞等病理变化可能是弓形虫及其分泌的毒素直接损害、干扰生精细胞生成及分裂发生障碍和死亡的结果,与凋亡基因无明显关系.

    作者:卢慎 刊期: 2001年第06期

  • 安宫牛黄丸治疗肺出血型钩端螺旋体病20例

    自1999年2月至2000年8月,对20例肺出血型钩端螺旋体病患者给予安宫牛黄丸治疗,止血效果确切,现报告如下.

    作者:毛长庚 刊期: 2001年第06期

  • 老年人沙门菌肠炎32例临床分析

    伤寒、副伤寒以外的沙门菌感染在老年人中少见.为了解老年人沙门菌肠炎的临床特点,将我院1990年以来收治的患者进行临床小结.

    作者:王晓峰;张文瑾;李景云 刊期: 2001年第06期

  • 国内外10种弓形虫抗体诊断试剂盒的质量比较

    弓形虫病是一种人兽共患的寄生性原虫病.人类感染弓形虫后常常无明显临床症状,多呈隐性感染状态.当机体免疫功能低下或有免疫缺陷时可引起急性发作.弓形虫与优生优育有着密切的关系,当孕妇感染弓形虫后,无论有无临床症状,都会直接影响胎儿的发育,可导致孕妇异常妊娠,流产、早产、胎儿畸型与死亡[1].因此,弓形虫病在临床上越来越受到重视,弓形虫病的免疫诊断试剂盒也就应运而生.然而,目前市场上弓形虫病的各种诊断试剂盒质量参差不齐,既无统一标准,又在无序生产与使用,给弓形虫病的诊断与防治造成严重危害[2].为了解国内外弓形虫病诊断试剂盒质量及其质量标准.我们抽查国内外6个厂商生产的10种弓形虫IgG抗体和IgM抗体诊断试剂盒,采用弓形虫国际标准血清进行质量比较.

    作者:辛晓芳;秦进才;薄淑英 刊期: 2001年第06期

  • 囊虫IgG胶体金诊断试剂盒(层析法)的研制和考核

    目的在国内外率先开发成功用于囊虫病诊断的IgG金标层析法(一步法)诊断试剂盒.方法采用独特制备猪囊尾蚴囊液抗原的方法;先进制备胶金试剂盒工艺并以比利时提供的囊虫IgG试剂盒(ELISA)做参照.结果产品经中国药品生物制品检定所检定合格.对试剂盒的特异性、敏感性进行了临床考核.其敏感性为93.23%,特异性为97.37%,该试剂盒检测包虫血清的交叉反应率为45.00%,与血吸虫、肝吸虫、肺吸虫等寄生虫病人血清无交叉反应.结论该试剂盒敏感性、特异性良好,操作简单、快速,结果判读容易,特别适用于基层和现场应用.

    作者:袁建华;甘绍伯;陈志勇;吴赵永;叶江南 刊期: 2001年第06期

  • 偶然分枝杆菌形态变化的超微结构的研究揪

    目的探讨偶然分枝杆菌超微结构变化与功能关系.方法取在血平板上培养1~6天的临床分离株培养物,并以标准株作对照,用电镜观察其超薄切片.结果随着培养时间的延长,菌体形态从长杆状向短杆状至球状变化;同时菌体拟核区由细长逐渐增粗至模糊不清,二分裂也随之变为不可见;胞质中脂质小空泡从多见至少见;菌体末端的成堆糖元颗粒由可见变至未见,而异染颗粒从无变至1~3个.结论菌体形态结构变化与培养基微生态环境的改变相关.

    作者:庄宝玲;陈文列;林光宇;钟秀容 刊期: 2001年第06期

  • 齿龈内阿米巴的检出率及培养成活率与口腔共生菌的关系研究

    齿龈内阿米巴(Entamoeba gingivalis,E.g)寄生于人及多种哺乳动物口腔龈沟、牙垢的一种原虫,它是牙周病病原体之一,提高它在口腔的检出率对疾病防治和获取虫体提供研究有一定意义;为了研究需要,培养大量的虫体能否成功与培养基的种类、pH、培养温度有关外,亦与细菌有关.我们经多年培养发现,在改良的LES培养基液面若有一层菌膜形成,就可能有E.g生长,否则就少虫或无虫生长,哪些细菌能促进E.g生长、繁殖?国内未见报道,国外仅Gannon等报道小肠结肠炎耶尔森氏菌有促进E.g生长作用,为此,进行E.g培养成功率与口腔共生菌的关系研究.

    作者:刘光英;陈金富;温旺荣 刊期: 2001年第06期

  • 迟缓爱德华氏菌新的溶血活化基因功能的研究

    目的探讨新的迟缓爱德华氏菌溶血活化基因(eha)的功能.方法 PCR扩增部分溶血活化基因,制成地高辛探针和26株Et菌进行斑点杂交和Southern blot.结果新的迟缓爱德华氏菌(Et)溶血活化基因以单拷贝形式存在于一部分Et菌染色体上,且pED102菌的Vero细胞毒和溶血活性作用主要位于胞浆蛋白和胞隙蛋白中.将有溶血活化基因的pED102重组质粒电击入不溶血的Et菌和大肠杆菌(LE392、JM109),Et菌仍无溶血现象,大肠杆菌有溶血现象.结论 eha基因不是溶血素结构基因,而是溶血活化基因.

    作者:高大庆;黄锡全;阚飙;陆承平;刘延清;吴守一 刊期: 2001年第06期

中国人兽共患病学报杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中国微生物学会