学术投稿

NCTC11637外膜蛋白36ku基因的克隆及序列分析

郝渭滨;邵世和;王华;鞠小丽

关键词:幽门螺杆菌, 外膜微孔蛋白, 原核表达载体, 基因克隆
摘要:目的:对人幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H. pylori)36ku(OMP36)外膜蛋白进行基因克隆表达,探索研制H.pylori疫苗的新途径.方法:培养H. pylori菌株NCTC11637,采用酚:氯仿抽提和纯化基因组DNA.设计上下游引物,并以该基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片断.将目的基因和PET32a(+)同时经Hind Ⅲ和Kpn Ⅰ双酶切,纯化,连接后,转化含有目的基因的重组载体,酶切鉴定后进行序列分析.结果:经酶切,测序分析表明,插入的基因片断为987bp,与GenBank公布的H.pylori 26695、ATCC43504及J99序列相比较,同源性高达94%-96%,推测的氨基酸序列同源性为97%-99%,GenBank登录号059968.结论:成功克隆了H.pylori36ku的外膜蛋白的编码基因,其表达产物OMP36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H.pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了基础.
现代生物医学进展杂志相关文献
  • 大鼠Otos基因RNA干扰质粒体的构建

    目的:构建其基因Otos的RNA干扰质粒载体,为研究Otospiralin在内耳的生理功能奠定基础.方法:在GenBank中查到大鼠Otos基因的序列,输入到相应的设计软件中,以此设计引物序列,经过PCR扩增,酶切后,克隆于pAVU6+27载体并行酶切鉴定.结果:构建的鼠Otos shRNA载体经过测序鉴定,所得和预期相符.结论:重组质粒pAVU6+27-Otos的成功构建为下一步研究打下良好的基础.

    作者:卓贤露;鲁立;张学渊;姜振东;袁伟 刊期: 2007年第12期

  • MicroRNAs研究进展

    MicroRNAs是一组21-25 nt长的非编码蛋白质的短序列RNA,能通过碱基配对与mRNA分子的3'非翻译区相结合来降解mRNA或抑制靶基因的翻译.MicroRNAs的主要功能是调控基因的表达,在生物体的生长、发育及疾病发生中扮演着重要的角色.初绝大多数microRNA都是通过大量的克隆和测序发现的,信息学只用来验证克隆的序列是否具有发夹结构,然而这些方法无法检测低丰度或组织特异性的microRNAs.目前依赖计算机的精密的microRNAs预测技术和有效的生物学鉴定技术在microRNAs的识别及其功能的阐明方面起着极其重要的作用.本文主要对microRNAs的生物信息学预测及鉴定技术进行综述.

    作者:李广平;邱长春 刊期: 2007年第12期

  • 转化生长因子-β1通过促进结缔组织生长因子表达抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖

    目的:研究转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响.方法:首先利用MTT检测重组TGF-β1、CTGF及anti-CTGF抗体处理PANC-1细胞后,细胞的增殖状态,用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测转染pcDNA3.1(-)-CTGF后PANC-1细胞的凋亡情况,后利用RT-PCR检测TGF-β1作用PANC-1细胞后CTGF mRNA的表达.结果:TGF-β1和CTGF均呈浓度依赖性抑制PANC-1细胞增殖,加入anti-CTGF抗体可以取消TGF-β1对PANC-1细胞增殖的抑制作用;FCM结果显示pcDNA3.1(-)-CTGF质粒转染促进PANC-1细胞凋亡;RT-PCR则证明TGF-β1促进PANC-1细胞中CTGFmRNA表达.结论:TGF-β1可能通过促进CTGF表达来发挥抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖的作用.

    作者:苏燕;李宏伟;崔培林;王春玲;修瑞娟 刊期: 2007年第12期

  • 聚合酶链反应

    PCR是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术.它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出的优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定.过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成.PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑.

    作者: 刊期: 2007年第12期

  • 肺癌相关基因甲基化谱研究进展

    近年来,细胞基因组的表观遗传学(epigenetics)改变在肿瘤发生发展中的作用日益受到国内外学者的关注.基因启动子区域CpG岛的甲基化导致的基因表达的失活是表观遗传学改变的重要方式之一.大量的研究表明,肺癌中存在多种抑癌基因或促凋亡基因启动子甲基化,并证实这些基因的甲基化与肺癌的发生、发展相关.这些研究为原发性肺癌的早期诊断和疾病监测找到了新的分子标志物.现对与肺癌发生相关基因甲基化的研究现状作一综述.

    作者:徐新娟;丁文柏 刊期: 2007年第12期

  • 抗金黄色葡萄球菌卵黄抗体的制备及活性研究

    目的:制备金黄色葡萄球菌特异性卵黄抗体并考察其活性.方法:采用灭活的金黄色葡萄球菌免疫产蛋母鸡,通过水稀释法、硫酸铵和硫酸钠盐析及凝胶过滤法分离、纯化抗体.抗体效价测定及体外抑菌试验分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和液体培养基比浊法.结果:纯化所得抗体纯度达95.10%,回收率为20.08%.抗体对金黄色葡萄球菌具有特异性,效价高可达1:6400.体外抑菌试验表明,抗体抑菌活随IgY浓度的增加而增强,当特异性IgY的浓度为10mg/ml时,能完全抑制细菌生长.结论:抗体制备及纯化所述方法简便、可行,所制抗体具有特异性和抑菌活性.

    作者:郭洁;甄宇红;李小宇;王宇;金礼吉;徐永平 刊期: 2007年第12期

  • 血立停胶囊对早孕大鼠RU486药流后子宫收缩的实验研究

    目的:研究血立停胶囊对早孕大鼠RU486药物流产后对子宫平滑肌收缩频率、收缩幅度及活动力变化的影响,旨在探讨血立停胶囊治疗药物流产后出血的作用机制.方法:选择妊娠Wistar大鼠,随机分为6组,即对照组,米非司酮组,大剂量血立停组,小剂量血立停组,催产素组,止血敏组.于妊娠第7天,开始相应处理,妊娠第14天分别监测以下指标后处死:在体子宫平滑肌收缩力,收缩幅度、收缩频率.结果:大剂量血立停可明显增强大鼠在体子宫平滑肌活动力、提高子宫平滑肌收缩频率、收缩幅度,与对照组比较差异有显著性(p<0.05).结论:血立停胶囊可增强大鼠子宫平滑肌兴奋性,从而起到对药物流产后阴道出血的治疗作用.

    作者:赵旭晔;段水竹;张永洛 刊期: 2007年第12期

  • 营养性缺铁性贫血与注意缺陷多动障碍的临床关系研究——258例病例分析

    目的:通过对营养性缺铁性贫血与注意缺陷多动障碍的病例研究,探讨两者之间的关系.方法:对258例NIDA的病因、临床表现和治疗进行临床分析,包括其中的31例中重度ADHD.结果:本组NIDA患儿病因主要为未及时添加富铁辅食、饮食结构不合理、消化道疾病、鼻衄等,临床主要表现为头晕、乏力、注意力不集中、记忆力减退等,对患者进行病因治疗以及服用生血宁片;ADHD的病因不明,临床表现为注意力不集中、活动过度、行为冲动等,通过综合治疗可以改善症状.NIDA的患儿ADHD的发病率较正常儿童为高.结论:NIDA与ADHD的关系密切.

    作者:施卫萍;季加忠 刊期: 2007年第12期

  • 主要组织相容性抗原(MHC)在母胎界面免疫调控的研究进展

    母胎界面生物学与多种细胞形成的复合物及维持妊娠所必需的调节因子有关.目前被公认的调节因子是胎盘中的主要组织相容性复合体蛋白(MHC).MHC抗原在生殖过程中起到双重作用:首先,MHC在一些生物物种中可影响其杂交选择,对父母双方MHC抗原的匹配有一定的影响;其次MHC影响植入前期已经受精的卵子发育情况.MHC抗原表达对于胎儿逃避母体免疫排斥作用从而维持妊娠顺利进行是有利的.本文综述了MHC在母胎界面免疫调控的新研究进展.

    作者:李明;史远刚;彭景槝 刊期: 2007年第12期

  • 山楂籽油降血脂作用研究

    采用不同剂量山楂籽油对小鼠进行灌胃试验,研究其对血脂水平的影响.结果表明山楂籽油组小鼠的血清甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和动脉硬化指数(AI)均不同程度(P<0.05或P<0.01)低于高脂模型组,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)却明显(P<0.01)高于高脂模型组,说明山楂籽油确具显著(P<0.05)降低小鼠血脂作用.

    作者:范学辉;胡柏平;张清安 刊期: 2007年第12期

  • 骨折电流疗法的改良

    目的:针对电流治疗骨折等疾病时存在的问题,提出相应的改进方法.方法:分析以往使用电流对骨折等疾病进行治疗时存在的电化学副作用、创口易于感染、重复施术不便等问题,提出相应的诸如使用溶液导电、隔离电解物、使电极与创口闭合生长等改进方法;并提出将电流治疗与药物治疗相结合的骨科疾病电流疗法改良方案.结果:将电流与药物相结合治疗骨折等疾病是很有可行性的治疗方法,本法不仅克服了已往疗法存在的一些问题,还为骨伤药物直接进入病患部位提供了有效的平台,使骨折、骨不连等疾病能够快速愈合.今后应加强研究骨折愈合各阶段所需的直接注射药物及其配比,完善电流-药物复合电极使用方法,以便与本法尽快进入临床实践.结论:将电流与药物相结合治疗骨折等疾病是很有可行性的治疗方法.

    作者:谢明念 刊期: 2007年第12期

  • 酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素和顺铂所致肾小管上皮细胞损伤的保护作用

    目的:研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素(GM)和顺铂(DDP)引起的体外培养肾小管上皮细胞损害的保护作用.方法:大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养.经Cytokeratin 18抗体进行鉴定后,用GM、DDP建立损伤模型,观察aFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用.结果:①经形态学观察、GM或DDP组与对照组比较,CAT、SOD、GSH-Px、Na+-K+-ATP酶活性下降,而NAG活性和NO、MDA升高(P<0.01或P<0.05),提示肾小管上皮细胞的培养和GM、DDP损伤的建模成功.②aFGF+GM或DDP组与GM组或DDP组比较,大多数生化和酶学指标有显著或非常显著性差异(P<0.05或P<0.01);而aFGF+GM或DDP组与对照组比较,CAT、NAG、GSH-Px、Na+-K+-ATP酶活性无显著性差异,但SOD活性下降、NO、MDA升高尚有显著性差异(P<0.05).结论:aFGF对GM、DDP损伤的肾小管上皮细胞有明显的保护作用.

    作者:刘华钢;黄巨恩;刘丽敏;王慧杰;胡文娟;李校堃;肖健 刊期: 2007年第12期

  • glmU基因敲除后对分枝杆菌细胞壁中聚糖影响的初步分析

    应用已构建的glmU基因敲除的耻垢分枝杆菌作为实验模型,对细胞壁中的聚糖的组成成份和结构进行分析.气相色谱与高效液相Dionex的结果共同说明了在mc2155 glmU KOT菌株的细胞壁内,当缺失活性GlmU时,阿拉伯糖含量增加,且其增加是来自于具有分支的阿拉伯糖末端的增多.此结果将能更进一步地认识GlmU的功能以及当GlmU功能异常时对细菌造成的影响,这些都将为研究以GlmU为靶位点的药物对细菌的影响提供实验支持.

    作者:张文利;辛毅;张健;史丽滨;马郁芳 刊期: 2007年第12期

  • 单克隆抗体技术用于农兽药快速检测的研究进展

    单克隆抗体已广泛应用于农业、医学及其他生物领域中.本文阐述了农药单克隆抗体的制备、介绍了农药单克隆抗体种类,总结了农药残留常用的免疫分析方法,并就农药单克隆抗体在农兽药快速检测中的应用前景进行了展望.

    作者:马巍娜;贾雷立;刘雪林;宋宏彬 刊期: 2007年第12期

  • 沙井地区384例支原体药敏试验结果及分析

    目的:了解本地区社区感染支原体的药物敏感情况.方法:对门诊标本培养出的384例支原体进行药敏试验(微量肉汤法).结果:Uu对交沙霉素、克拉霉素及罗红霉素敏感性高,敏感率分别为98%、94%及93%;对环丙沙星、大观霉素耐药性高,敏感率分别为8%及11%.Mh对交沙霉素敏感率为89%、对大观霉素、多西环素、美满霉素的敏感率均为78%;对罗红霉素、红霉素耐药性高,敏感率分别为0%及11%.Uu合并Mh对交沙霉素、多西环素、美满霉素敏感性高,敏感率分别为85%、73%及69%,对红霉素、克拉霉素、大观霉素的敏感性均为0%,对罗红霉素、阿奇霉素、环丙沙星的敏感率均为4%.结论:支原体的敏感性存在时空差异,且不同类型的支原体对抗菌素的敏感性是不同的,应采用实验室结果而非经验指导用药.

    作者:吴雄君;窦宇红;童明华;熊远香;梁鸿 刊期: 2007年第12期

  • 原发性肠系膜肿瘤的诊断与治疗

    目的:探讨原发性肠系膜肿瘤的诊断及治疗方法.方法:对各种类型的原发性肠系膜肿瘤的临床表现、术前检查及诊断、治疗等进行对比分析.结果:原发性肠系膜肿瘤临床表现多样、复杂,缺乏特异性诊断依据,但在B超引导下细针穿刺等有助于其诊断.实性肿瘤多为恶性,手术切除率低.囊性肿瘤多为良性,手术切除率高.结论:手术是治疗本病的唯一有效手段.

    作者:陈少云;刘世德;向红 刊期: 2007年第12期

  • 大黄牡丹汤对实验性结肠炎小鼠血清细胞因子的影响

    目的:探讨大黄牡丹汤对TNBS诱导的小鼠实验性结肠炎的治疗作用及作用机理.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)法制作实验性结肠炎小鼠模型,给予大黄牡丹汤治疗,观察小鼠的一般状态和DAI评分、结肠组织学变化.采用Luminex液相芯片系统检测血清中白介素1β、白介素4和肿瘤坏死因子α的含量.结果:大黄牡丹汤对TNBS结肠炎小鼠的一般状况及DAI评分有改善作用、并能缓解结肠局部的炎症,可降低血清中白介素1β和肿瘤坏死因子α的含量的水平.结论:大黄牡丹汤具有一定地防治TNBS所诱导的小鼠结肠炎的作用,其机制可能与抑制白介素1β和肿瘤坏死因子α的分泌有关.

    作者:王青;周成梅;周联;曹柳英;梁瑞燕;王培训 刊期: 2007年第12期

  • 鱼类三叉神经节的形态及神经节细胞的分布

    目的:观察三叉神经节的形态结构及神经节细胞的分布.方法:用罗非鱼,进行40 g/L甲醛灌注固定,观察三叉神经节的位置及分支分布,取三叉神经节,根及分支进行连续切片制作三维立体图像,观察神经节细胞的分布.结果:①三叉神经根在菱脑高度进出脑.②三叉神经节位于眼眶与颅腔之间的骨组织中.③从神经节发出的第一支(眼神经)通过眼眶的背侧分布于吻侧部,第二支(上颌神经)通过眼眶的腹侧分布于上颌部,第三支(下颌神经)通过眼眶的腹侧分布于下颌部.④神经节细胞在神经节内背腹方向排列的一群细胞团.结论:罗非鱼三叉神经节是独立存在的,与其它鱼类的神经节有明显差异.

    作者:古丽尼沙·克力木;努尔买买提·巴哈夏尔 刊期: 2007年第12期

  • 兔海水淹溺型肺水肿组织NKA活性与动脉血气的相关性分析

    目的:观察兔海水淹溺型肺水肿组织钠-钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性变化与动脉血气变化的关系,探讨钠-钾ATP酶在海水淹溺肺水肿形成中的重要作用,为临床治疗提供实验依据.方法:将30只新西兰兔随机分为对照组(5只)及淹溺组(25只),淹溺组根据观察时间段分为10'、30'、60'、90'、120'组(每组5只),采用气管切开插入塑料导管、向气管内灌海水3 mL/kg、双肺自主通气的方法进行兔海水淹溺肺水肿模型复制.于各观察时间点进行血气分析,并采集肺组织标本,对肺组织匀浆钠-钾ATP酶进行测定.结果:兔海水淹溺肺水肿各时间点钠-钾ATP酶活性降低,动脉血气显示低氧和酸中毒,钠-钾ATP酶活性变化与动脉血气主要指标变化具有线性回归关系(P<0.01).结论:海水淹溺型肺水肿组织NKA活性与动脉血气的具有相关性,钠-钾ATP酶在海水淹溺肺水肿发生发展中具有重要作用.

    作者:李王平;金发光;楚东岭 刊期: 2007年第12期

  • 颧骨颧弓骨折的分类及诊治

    颧骨颧弓骨折是常见的面中部骨折之一,迄今为止,在其分类及诊治的选择上仍然存在一定争议,本文对目前颧骨颧弓骨折的分类及诊治的现状和进展作一综述,以期对临床工作提供参考.

    作者:张勇;刘磊 刊期: 2007年第12期

现代生物医学进展杂志

现代生物医学进展杂志

主管:黑龙江省卫生厅

主办:黑龙江省森工总医院 哈尔滨医科大学附属第四医院