学术投稿

双荧光蛋白报告基因分析系统在微小RNA研究中的应用

刘大全;刘涛;汤华

关键词:微小RNA, 荧光蛋白, 靶基因, miR-27a, prohibitin基因
摘要:目的:建立双荧光蛋白报告基因分析系统,并用来验证微小RNA的靶基因.方法:选取表达绿色荧光蛋白的质粒peDNA3/EGFP,将待验证微小RNA靶基因的一段特异性序列插入该质粒中,并与表达红色荧光蛋白质粒pDsRed2-N1共同转染细胞,转染后的细胞和提取的蛋白样品,分别用荧光显微镜和荧光分光光度计进行定性和定量检测.结果:通过对一特定小RNA(miR-27a)的可能靶基因prohibitin进行验证.终确定prohibitin是miR-27a的靶基因.结论:双荧光蛋白报告基因分析系统是一种验证微小RNA靶基因的可靠方法.
天津医科大学学报杂志相关文献
  • 2型糖尿病患者血清尿酸水平与尿酸排泄分数的相关性

    目的:分析2型糖尿病(T2DM)患者血清尿酸(SUA)水平与肾脏尿酸排泄分数(FEur)的关系及影响因素.方法:收集430例T2DM患者的临床资料,按其SUA水平分为低、中、高3组;根据相关生化指标计算尿酸清除率(Cur)、FEur和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果:高尿酸血症(HUA)者占12.6%;SUA水平越高,男性所占比例越大;SUA水平随体重指数(BMI)、甘油三酯(TG)和空腹胰岛素(FINS)水平的升高而升高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)和糖基化血红蛋白(HbAlc)则相反;24 h尿尿酸(UUA)定量随SUA水平的升高而升高,Cur和FEur则随SUA水平的升高而降低;相关分析显示:FEur与肌酐清除率(Cer)、BMI和SUA呈负相关,与HbAlc和HOMA-IR呈正相关.结论:T2DM患者尿酸代谢紊乱存在低尿酸血症和HUA两种形式:FEur可更全面、真实的反映肾脏处理尿酸的状况,对易合并肾损害的T2DM患者而言,关注其FEur、避免高尿酸尿对肾脏的损害更具意义.

    作者:李茂月;孙丽荣 刊期: 2009年第01期

  • 卵泡刺激素对体外培养大鼠颗粒细胞凋亡的影响

    目的:探讨FSH对体外培养大鼠颗粒细胞凋亡的影响.方法:分别将新鲜卵巢和冻融卵巢卵泡颗粒细胞分离出来.体外培养4 d.对比培养液中添加FSH与未添加FSH条件下的颗粒细胞凋亡率.结果:培养液中添加FSH后,冻融颗粒细胞凋亡率降低.结论:培养液中添加10 ng/ml FSH,可减少从新鲜和冻融卵泡分离的颗粒细胞在体外培养过程中发生凋亡的几率.

    作者:陶中娥;随笑琳;赵晓徽 刊期: 2009年第01期

  • 急性间质性肾炎半定量评分法病理特点分析及不同剂量激素治疗效果比较

    目的:采用半定量评分法研究急性间质性肾炎(AIN)病理和临床的关系及不同剂量糖皮质激素治疗对其预后的影响.方法:选择27例AIN患者,其中肾活检者18例,以炎症细胞浸润、间质水肿、小管损伤作为独立影响因素,采用半定量评分法研究其病理特点,并分析其与临床表现的关系;将患者随机分组给予半量(0.5 mg/kg)或足量(1.0 mg/kg)激素治疗,对两组的恢复情况进行比较.结果:AIN发病主要与药物相关,占96.3%,18例患者通过肾活检证实,除4例合并慢性肾脏疾病外,余血肌酐(Ser)>266 μmol/L者间质和小管损伤程度明显高于Ser<266 μmol/L者,两者病理炎症细胞浸润程度无区别,半量激素组与足量组相比治疗后肾功能恢复时间和恢复水平无差异.结论:AIN发病主要由药物引起,肾功能损伤水平与间质水肿和肾小管损伤程度有密切关系,而不取决于肾脏炎症细胞浸润程度,半量与足量激素治疗效果无差异.

    作者:刘建梅;林珊;徐鹏程;李莉娜 刊期: 2009年第01期

  • 急性肺栓塞严重程度的评价及其与血气指标相关性研究

    目的:探讨CT肺动脉阻塞指数评价急性肺栓塞(APE)严重程度的价值及其与血气指标之间的相关性.方法:收集经CT肺动脉造影(CTPA)检查确诊为APE患者(APE组)81例,50例CTPA显示正常者作为对照组.两组病例均行CTPA和血气分析.比较两组间动脉氧分压(PaO2)及动脉二氧化碳分压(PaCO2)的差异.分析APE组CT肺动脉阻塞指数与PaO2及PaCO2之间的相关性.对APE严重程度进行分级,得出各级APE的CT肺动脉阻塞指数参考值.结果:APE组PaO2及PaCO2均低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).CT肺动脉阻塞指数与PaO2或PaCO2之间呈负相关(r=-0.95或r:-0.94,P<0.01).轻、中、重度APE患者肺动脉阻塞指数参考值分别为2.50%~15.88%、15.89%~42.94%和42.95%~100%.结论:CT肺动脉阻塞指数可评价APE的严重程度,能为临床治疗和预后提供客观依据.

    作者:刘学焕;刘筠;钟进;郝彩仙;乔辉 刊期: 2009年第01期

  • 高通量血液透析与常规血液透析疗效比较

    随着透析技术的改进,慢性肾衰竭患者的生存时间延长,透析人群逐年增加,有关他们的生活质量日益受到重视.常规血液透析由于清除中、大分子物质受限,致远期并发症增多;而血液透析滤过因费用高,特别是在基层医院,患者难于普遍接受.

    作者:毕学青;姜埃利;魏芳;庞海燕 刊期: 2009年第01期

  • 茶多酚免疫药理作用研究

    目的:研究茶提取物-茶多酚(TP)对小鼠淋巴细胞免疫功能的影响.方法:采用MTT法测定TP在离体给药时对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞及小鼠巨噬细胞增殖反应的影响.结果:体外实验证明,TP对丝裂原诱导的小鼠脾淋巴细胞和小鼠巨噬细胞增殖反应具有明显的增强作用,可以显著增强ConA诱导的小鼠离体脾淋巴细胞及小鼠离体巨噬细胞增殖反应.结论:TP具有免疫增强作用.

    作者:郭春宏;李正翔 刊期: 2009年第01期

  • 乙型脑炎病毒E蛋白毕赤酵母表达系统的构建

    目的:构建乙型脑炎病毒E基因毕赤酵母表达系统.方法:应用RT-PCR法扩增乙型脑炎病毒E蛋白表达基因,定向克隆入载体pPICZαA,将重组质粒以Pme Ⅰ线性化并电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,用Zeoein筛选转化子进行鉴定.结果:PCR扩增产物约为1 350 bp,定向克隆获得pPICZαA-E表达载体.经测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性为100%,电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株GS115-E.提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符.结论:成功构建乙型脑炎病毒E基因毕赤酵母表达系统,为进一步进行E蛋白真核表达研究奠定基础.

    作者:张健;李一卿 刊期: 2009年第01期

  • 甲状腺滤泡癌131Ⅰ治疗后发生皮下转移癌1例报道

    甲状腺滤泡关腺癌是以滤泡状结构为主要组特征的一种分化好的甲状腺癌.约占甲状腺的10%-27.8%.

    作者:李玮;谭建;张桂芝 刊期: 2009年第01期

  • Leptin-肥胖影响免疫功能的重要桥梁

    在现今社会,肥胖(obesity)已经成为一个发病率迅速增加,人们普遍关注的问题.肥胖的发生主要是由于能量的摄入与消耗之间不平衡导致的,即维持机体能量平衡(energy homeostasis)的过程出现失调.根据世界卫生组织的统计,全球有超过10亿人超重,其中有3.1亿人属于肥胖,并且这个数字还在逐年上升.

    作者:魏中南;田德润 刊期: 2009年第01期

  • 痛风性关节炎416例临床分析

    目的:探讨痛风性关节炎的临床特点,减少漏诊及误诊.方法:收集并分析416例痛风性关节炎患者的发作特点、伴发病等临床资料.结果:男性388例(93.3%),女性28例(6.7%);平均发病年龄女性>男性[(58.04+10.80)岁vs(53.29+13.97)岁],差异有统计学意义(P<0.05).以第一跖趾关节肿痛为首发症状者298例(71.6%),因高嘌呤饮食诱发者148例(35.6%);习惯性饮酒及应用利尿剂者分别为201例(48.3%)、134例(32.2%);全部病例中伴发超重或肥胖、高甘油三酯血症者分别为269例(64.7%)、221例(占53.1%);病程对其伴发高血压病、2型糖尿病及代谢综合征(MS)有影响(P<0.05).结论:痛风性关节炎以男性多见,发病年龄女性大于男性,高嘌呤饮食、习惯性饮酒及利尿剂的应用是其主要危险因素,随着病程的延长,易伴发高血压病、2型糖尿病及MS.

    作者:贾伟;孙丽荣 刊期: 2009年第01期

  • 白藜芦醇对高糖高脂处理的原代人脐静脉血管内皮细胞E-选择素表达及NO分泌的影响

    目的:探讨白藜芦醇对高糖、高脂培养人原代脐静脉血管内皮细胞E-选择素mRNA表达及胰岛素刺激的一氧化氮(NO)分泌的影响.方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,以0.1 μmol/L白藜芦醇预处理4 h后,以高糖(33.3mmol/L葡萄糖)+高脂(棕榈酸0.5 mmol/L)DMEM培养基培养24 h,以RT-PCR法检测培养细胞E-选择素的表达,部分细胞经100 nmol/L胰岛素刺激25min后,以硝酸还原酶法检测培养上清NO的含量.结果:与正常对照组相比,高糖高脂培养使内皮细胞E-选择素的表达升高.同时胰岛素刺激的NO分泌降低.而白藜芦醇预处理可以明显降低E-选择素的表达,并明显促进胰岛素对内皮细胞NO分泌的刺激作用.结论:白藜芦醇可以改善高糖、高脂诱导的血管内皮细胞胰岛素刺激的NO分泌作用,并可降低E-选择素表达,保护内皮细胞的功能,从而可能在糖尿病动脉粥样硬化的防治中具有广阔的前景.

    作者:杨菊红;王楠;李京艳;张佼佼;冯凭 刊期: 2009年第01期

  • 纤维蛋白封闭剂封堵法在治疗小儿慢性窦道及瘘管中的应用

    目的:探讨应用纤维蛋白封闭剂封堵法治疗小儿慢性窦道及瘘管的效果.方法:回顾性分析15例慢性窦道或瘘管患儿,在行窦道或瘘管清理后应用纤维蛋白封闭剂封堵治疗.结果:在15例患儿中,14例封堵1次成功,1例封堵2次后治愈,治疗效果满意.结论:应用纤维蛋白封闭剂封堵法治疗小儿慢性窦道及瘘管,治疗时间短,痛苦小,效果好,可以作为治疗该病的方法之一.

    作者:陈子英;崔华雷;王晓晔;董亮;吴博;杨宏;田琪 刊期: 2009年第01期

  • HPLC法测定哈西奈德乳膏中哈西奈德的含量

    哈西奈德系人工合成的为高效含氟和氯的皮质类固醇,其特点为抗炎作用强,局部应用不易引起全身性副作用[1].临床应用证明对银屑病和湿疹性皮炎疗效突出,用于银屑病,具有疗程短、副作用少特点[2,3].

    作者:张志红;渠莉 刊期: 2009年第01期

  • 儿童自身免疫性甲状腺疾病120例临床诊治和相关因素分析

    目的:探讨儿童自身免疫性甲状腺疾病(AITD)包括Graves病(GD)和慢性淋巴细胞性甲状腺炎(HT)的患病特点、临床表现、缓解和复发趋势、诊治规律,为更好地指导临床.方法:收集1994年至2008年3月儿科内分泌门诊资料完整的病例120例,其中HT78例,GD42例,按TANNER分期将患病年龄分为青春前期和青春期,比较HT和GD不同时期的患病率.对HT组比较初发病时甲状腺激素水平,并按照不同发病年龄比较其抗体滴度水平,进行HT组甲状腺激素水平和抗体滴度的Pearson相关性分析.超声波测量HT和GD两组甲状腺肿体积比较大小.结果:78例HT病人中男女比例为1:5.HT组初发病时甲状腺激素水平明显不同.HT组病人TGAb和TMAb阳性滴度比较,青春前期患病者高于青春期患病者(P<0.01),有统计学意义.相关性分析显示HT组FT3与FT4水平呈正相关(P<0.01),TGAb和TMAb滴度水平呈正相关(P<0.01),均有统计学意义.GD组病人男女比例为1:1.6.HT青春前期患病率高于GD组(P<0.05),有统计学意义.全部患儿均有不同程度的甲肿,但甲肿体积两组比较无明显差别(P>0.05).结论:HT组病人患病率女明显高于男.青春期患病率高考虑与青春发育期内分泌容易紊乱有关.患病年龄越小儿童的病情越重,治疗时间越长,治愈越困难.

    作者:胡天一;刘戈力;杨箐岩;马咸成;刘国玉 刊期: 2009年第01期

  • 首诊抑郁症患者的认知功能障碍研究

    抑郁症是以显著而持久的心境低落为主要特点的精神障碍,虽然可以通过临床治疗得到有效控制,但大部分患者存在反复发作倾向[1].近年关于抑郁症患者抑郁情绪状态下认知功能改变的问题得到了社会的广泛关注[2].本研究主要针对此研究热点,探讨首诊抑郁症患者的认知功能损害状况.

    作者:田丽;刘娟;李红英 刊期: 2009年第01期

  • 不同通气模式对先心病患儿L呼吸力学的影响

    目的:比较不同通气模式对先心病患儿心内直视手术中呼吸力学的影响.方法:选择择期在体外循环(CPB)下行心脏直视手术的非紫绀型先心病患儿40例,心功能Ⅰ级或Ⅱ级,按年龄分为2组:A组(年龄<2岁)、B组(2岁<年龄<4岁).分别于切皮前(T1)、胸骨劈开后10min(T2)、鱼精蛋白中和后10min(T3)及缝皮后(T4)记录在定容(VCV)和定压(PCV)通气模式下的呼吸力学指标,分别作为体外循环前(T1、T2)和体外循环后(T3、T4)的数据,记录时使不同通气模式下的潮气量都维持在10ml/kg.结果:两组患儿CPB后(T3、T4)各模式下的气道峰压(Ppeak)、气道平台压(Pplat)均高于CPB前(T1、T2),动态肺顺应性(Cdyn)有所降低(P<0.05).A组患儿在定压通气模式下的Ppeak在各时间点均明显低于定容通气模式,Cdyn高于定容通气(P<0.05).B组患儿在CPB前的呼吸力学指标在不同通气模式下无差别,CPB后定压通气模式下的Ppeak低于定容通气组,Cdyn高于定容通气(P<0.05).结论:不同年龄先心病患儿在定容和定压通气模式下测定的呼吸力学指标有一定程度的差别,对2岁以下及体外循环后的婴幼儿定压通气更为合适.

    作者:王亚欣;薛玉良;程文莉 刊期: 2009年第01期

  • Survivin和CyclinD1在卵巢癌中的表达和相关性

    目的:检测Survivin和CyclinD1在卵巢癌组织中的表达情况,探讨其与卵巢癌之间的关系.方法:采用链霉素一过氧化物酶(S-P)免疫组化方法检测20例正常卵巢组织、15例良性卵巢上皮性肿瘤组织和40例卵巢癌组织中Survivin和CyelinD1的表达情况.结果:Survivin在卵巢癌组织中、良性卵巢上皮性肿瘤组织中、正常卵巢组织中的阳性表达率分别为67.5%、6.7%、0%,呈现显著下降的趋势(P<0.05).CyclinD1在卵巢癌组织、良性卵巢上皮性肿瘤组织、正常卵巢组织中的阳性表达率分别为72.5%、20%、10%,呈现显著下降的趋势(P<0.05).在卵巢癌中Survivin阳性表达随着临床分期和组织分级升高、有淋巴转移而增强,CyelinD1阳性表达随着组织分级升高、有淋巴转移而增强.CyelinD1表达与Survivin表达存在正相关性. 结论:Survivin和CyclinD1可能促进卵巢癌发生浸润、转移,两者可能在卵巢癌的形成和发展中起协同作用.

    作者:田冬艳;王德华;刘永红;齐广涛;邸丽双 刊期: 2009年第01期

  • 131Ⅰ治疗老年与中青年Graves病患者临床分析

    目的:分析老年与中青年Graves病(GD)患者临床特点及131Ⅰ治疗效果.方法:726例接受131Ⅰ治疗并且随访1年以上的GD患者中,老年组(年龄≥60岁)74例,中青年组(年龄<60岁)652例,对其临床特点及131Ⅰ治疗效果进行对比研究.结果:老年GD患者FT3、FT4、甲状腺重量、甲状腺高吸131Ⅰ率与中青年患者比较其差别有统计学意义(P<0.05),而有效半衰期无统计学意义(P>0.05);老年患者合并心房颤动、心力衰竭、肝功能损害、白细胞减少症、糖代谢异常等较为常见,结果显示两组比较差别有高度统计学意义(P<0.001);131Ⅰ治疗后1年老年组与中青年组GD患者临床痊愈率、好转率、无效及甲低发生率分别为66.2%、71.3%;14.9%、21.6%;5.4%、1.7%;13.5%、5.4%,其差别有统计学意义(P<0.05).结论:131Ⅰ治疗可作为老年GD患者的首选治疗方法.

    作者:刘雪辉;谭建 刊期: 2009年第01期

  • 7例胰腺浆液性囊腺瘤的诊治体会

    胰腺浆液性囊腺瘤(pancreatic serotls cystoadenomas,PSC)是胰腺常见原发性囊性肿瘤之一,占胰腺所有囊性肿瘤10%~15%,占胰腺所有肿瘤1%~2%,几乎都是良性.

    作者:李宝玉;陈剑秋 刊期: 2009年第01期

  • PPARγ激动剂对小鼠局灶性脑缺血再灌注中性粒细胞浸润和TNF-α表达的影响

    目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对小鼠局灶性脑缺血再灌注中性粒细胞浸润以及TNF-α表达的影响,探讨PPARγ激动剂是否对缺血再灌注脑损伤有保护作用.方法:制作小鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO/R),随机分为假手术组、模型组和治疗组,分别采用3%氯化三苯四唑(TTC)染色法、神经功能缺损评分法观察PPARγ激动剂对小鼠脑梗死体积和行为学的影响;紫外分光光度法检测脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法观察TNF-α.蛋白表达变化.结果:PPARγ激动剂罗格列酮能够显著降低小鼠脑组织的梗死体积(t=7.927,P<0.01)和行为学评分(t=4.540,P<0.01);减轻缺血脑组织MPO活性(t=4.502,P<0.05);减少炎性因子TNF-α蛋白表达水平(t9.826,P<0.01).结论:PPARγ激动剂罗格列酮能够减轻脑缺血再灌注脑损伤,其对脑保护作用与炎症抑制有关.

    作者:尚进林;孙莉;梁浩;程焱 刊期: 2009年第01期

天津医科大学学报杂志

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